婴幼儿配方乳粉中叶酸检测用鼠李糖乳杆菌定量菌株制备

为优化生物法测定婴幼儿配方乳粉中叶酸含量制备鼠李糖乳杆菌定量菌株。通过添加保护剂冻存菌株的方式制作适用检测条件的菌球,对菌球做运输条件模拟试验和贮存条件模拟实验验证菌球稳定性,随机抽取10瓶菌株做均匀性验证;应用鼠李糖乳杆菌定量菌株测试质控样品叶酸含量。结果表明,鼠李糖乳杆菌定量菌株在25℃和37℃条件下菌落数变动较小,在-20℃和4℃环境中复苏率均在80%以上,鼠李糖乳杆菌定量菌株稳定性良好;通过单因素方差分析方法分析结果表明鼠李糖乳杆菌定量菌株均匀性良好;测得质控样品叶酸含量结果准确。鼠李糖乳杆菌定量菌株具有检测结果准确,便于保存,简化实验步骤等优点,满足婴幼儿乳粉中叶酸检测需求。

鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平快速定量方法的建立及应用

目的应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qPCR),建立鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平的快速定量检测方法。方法通过比对鼠李糖乳杆菌HN001的近缘菌株的基因组,筛选出鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平的特异基因,以菌株水平的特异基因为靶标设计引物及探针,优化反应体系和条件,建立鼠李糖乳杆菌HN001株水平的qPCR检测方法。对方法的特异性、灵敏度、检出限进行验证,并采用已建立的qPCR方法进行模拟添加样品和实际样品的检测。结果所建立的方法特异性强,与近缘菌株无交叉反应,鼠李糖乳杆菌HN001纯培养液检出限为10^(2)CFU/mL,灵敏度可达到650 copies/μL,可在2 h内完成样品检测。对模拟添加样品以及实际样品检测中qPCR和平板计数法结果的对数值进行显著性分析检验,两种方法的测定值结果均无显著性差异(P>0.05)。结论本研究建立的qPCR检测方法可有效应用于益生菌产品中鼠李糖乳杆菌HN001菌株水平定量检测,具有快速、灵敏、准确的特点。

商业定量菌株用于药品微生物计数法建立的可行性探讨

目的:探索4家商业定量菌株(金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌和黑曲霉)用于建立药品微生物限度检查计数方法的适用性。方法:选取6种具有代表性的非无菌制剂作为样品,用工作菌株的新鲜培养物按照《中华人民共和国药典》(简称《中国药典》)2015年版微生物限度检查法进行计数方法建立,然后按照建立的方法用4个不同厂家的商业定量菌株作回收值比较。结果:与工作菌株新鲜培养物比较,商业定量菌株中的枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌和黑曲霉,这4种菌株中部分回收比值偏低,甚者不能达到0.5,而金黄色葡萄球菌则无明显区别。结论:商业定量菌株用于含抑菌成分的药品微生物计数法方法的建立时,应对其进行质量考察和风险评估。

定量标准菌株在药品微生物限度检查方法适用性试验中的应用

目的:考察5种定量标准菌株在药品微生物适用性试验中的应用。方法:采用标准菌株和新鲜菌液对8种药品进行方法适用性试验,配对t检验,比较回收结果。结果:5种标准菌株的两种菌液回收结果差异无统计学意义(P>0.05)。结论:定量标准菌株操作简便,工作效率高,可用于微生物限度方法适用性试验。

副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)N1115菌株定量PCR检测方法研究

通过对Lactobacillus paracasei种内的20株菌的全基因组序列进行了单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点分析,并结合糖代谢途径预测,序列比对,得到了分辨力可达菌株水平且遗传相对稳定的N1115菌株特异性位点。针对特异性位点所设计的N1115菌株特异性荧光定量PCR扩增引物及探针组,在51株常见益生菌株间具有特异性,所选特异性位点传代8代比较稳定,针对菌粉所建DNA提取方法的定量检出限为10^(3)~10^(9)CFU/mL,其间的线性拟合度较好(R2>0.98)。采用已知浓度标准菌粉做标准曲线可以对未知菌含量样品进行准确定量。

定量制备的细菌盲样在微生物室间质评中的应用

目的:为了保证微生物检测质量,了解微生物检测技术人员对肠道致病菌(沙门菌和志贺菌等)分离鉴定技术。方法:应用沙门菌、志贺菌、大肠埃希菌制备定量的混合菌株盲样。统一操作方法,发放统一培养基。结果:参加室间质控的9家单位对高、中、低浓度的三支混合菌盲样检测,特别是中、低浓度的混合菌盲样检测,结果差别较大。结论:盲样中有大量的干扰菌(大肠埃希菌)存在,沙门菌和志贺菌均被大肠埃希菌所掩盖,当微生物检测人员的技能不过硬时,就很难将盲样中低菌量的沙门菌和志贺菌分离出来,影响阳性检出率。因此,应加强微生物检测技术人员基础技能培训,进一步提高技术水平。