两种国产荧光定量PCR试剂与Roche定量试剂的比较

目的探讨两种国产荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)试剂以及Roche定量试剂检测乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)结果之间的相关性,分析各方法之间的差异性,比较两种国产试剂的临床应用性能,选择更适合该实验室的试剂。方法收集用Roche定量试剂检测过的71例乙型肝炎患者血清,分别采用A、B两种试剂进行平行检测,然后对各检测结果进行比较,分析3种试剂之间的相关性和差异性;并对A、B试剂的最低检测限、最低定量限、线性范围、重复性精密度、正确度等性能指标进行验证。结果A、B试剂的检出率均高于Roche试剂,B试剂的检出率最高,且两种国产试剂定量结果与Roche试剂比较,差异无统计学意义(P>0.05)。A试剂与Roche试剂的符合率高于B试剂;A、B试剂的定量结果与Roche试剂均有良好的相关性,相关系数分别为0.896、0.908,差异均有统计学意义(P<0.05);A试剂的最低检测限为20 IU/mL,最低定量限为100 IU/mL,线性方程为Y=-0.996 X+8.925(R^(2)=0.999),在1.0×10^(2)~1.0×10^(8) IU/mL范围内线性良好,高浓度值变异系数为2.99%,低浓度值变异系数为4.70%,与Roche试剂的偏倚绝对值为6.69%;B试剂的最低检测限为20 IU/mL,最低定量限为20 IU/mL,线性方程为Y=-0.985 X+8.575(R^(2)=0.999),在2.0×101~1.0×10^(8) IU/mL范围内线性良好,高浓度值变异系数为0.73%,低浓度值变异系数为3.64%,与Roche试剂的偏倚绝对值为6.08%。结论B试剂核酸提取率较高,灵敏度和准确度也较高,重复性更好,且具有更宽的线性范围,但是自动化程度相对较低;总体来说,近年来一些国产HBV-DNA定量试剂性能逐渐优化,可以满足乙型肝炎患者的抗病毒和治疗监测的基本要求,其定量结果与Roche定量试剂有良好的相关性。通过比较,B试剂更适合该实验室。

全自动(定量PCR)基因扩增诊断仪配套定量试剂的研制

目的 研制一种能用于仪器操作的灵敏、快速、特异的定量试剂 .方法 使用一个生物素标记的上游引物 ,对HBVDNA及其竞争模板DNA进行不对称PCR扩增 ,使扩增出的单链带有生物素 ,并可结合在固定有链亲合素的微孔板的表面 .用标有辣根过氧化物酶的待测模板探针和竞争模板探针分别与两个微孔中固定的相应单链PCR产物杂交 ,而后加底物显色 ,测定吸光度进行分级定量分析 .结果 该定量方法可以检测 10拷贝数的模板 ,而且对简便处理的标本适应性强 ;以分级定量的形式定量时 ,具有良好的重复性 .结论 该试剂适用于仪器操作 。

两种商品定量试剂盒分析性能的验证试验

目的验证甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)商品定量试剂盒的分析性能。方法根据"中华人民共和国卫生行业标准WS/T xxx-2008"的要求,对AFP、CEA商品定量试剂盒分析性能进行验证。结果 AFP、CEA定量试剂盒的批内、批间精密度CV值均小于厂家声称的相应CV值;正确度试验结果的平均偏倚值均低于厂家声称的偏倚值;各项目的测量区间验证值结果与预测值接近,相关系数(r)>0.975,线性理想(斜率b接近1)。结论本研究所验证AFP、CEA定量试剂盒的精密度、正确度和线性范围3个方面均达到了临床应用的实验要求。

商品定量试剂盒分析性能的验证试验

目的验证部分商品定量试剂盒的主要分析性能。方法根据我国卫生部"医疗机构临床实验室管理办法"和CLSI指南文件EP6的要求,对部分商品定量试剂盒进行精密度、正确度和可报告范围的验证试验。结果各商品定量试剂盒的批内、批间精密度CV值分别为0.51%～3.20%、0.61%～4.80%均小于厂家CV值;正确度试验结果的平均偏倚值(0.40%～5.36%)均低于厂家偏倚值及CLIA'88规定的允许误差的1/2;各项目的可报告范围试验测定值结果与预测值接近,相关系数r>0.975,线性理想(斜率b接近1)。结论本研究验证的商品定量试剂盒的精密度、正确度和可报告范围3方面均达到了临床应用的实验要求。

商品定量试剂盒分析性能的验证试验

目的验证部分商品定量试剂盒的主要分析性能。方法根据我国卫生部"医疗机构临床实验室管理办法"和NCCLS指南文件EP6-A的要求,对部分商品定量试剂盒进行精密度、正确度和可报告范围的验证试验。结果各商品定量试剂盒的批内、批间精密度CV值分别为0.51%～3.20%、0.61%～4.80%,均小于厂家CV值;正确度试验结果的平均偏倚值(0.40%～5.36%)均低于厂家偏倚值及CLIA'88规定的允许误差的1/2;各项目的可报告范围试验测定值结果与预测值接近,相关系数r>0.975,线性理想(斜率b接近1)。结论本研究验证的商品定量试剂盒的精密度、正确度和可报告范围3方面均达到了临床应用的实验要求。

两种不同乙肝病毒核酸定量试剂测定结果比较

目的:了解两种不同乙肝病毒核酸定量试剂测定结果的差异。方法:同时用两种不同乙肝定量试剂来检测乙肝患者病毒的含量,应用统计学方法对测定结果进行比较。结果:两种试剂的测定结果差异无统计学意义。结论:在日常工作中应选择曲线比较光滑、结果比较好判断的乙肝病毒核酸定量试剂。

两种乙肝病毒核酸定量试剂盒在临床检测中的评价

目的研究两种乙肝病毒核酸定量试剂盒在临床检测效果。方法选择从2014年10月感染肝病门诊收治的慢性乙型肝炎未行抗病毒治疗68例患者标本(实验组)与体检中心20例阴性标本(对照组)纳入此次研究工作,均接受A、B两种乙肝病毒核酸定量试剂盒检测。结果经比较,实验组A、B两种试剂盒在检测结果相关性良好,组间对比差异显著(P<0.05)。对照组B试剂阳性率比A试剂高,差异具备统计学研究意义(P<0.05)。结论A、B两种试剂盒特异性与抗干扰性能明显,与临床检测工作要求相吻合。同时,在低病毒载量与大样本量检测中应用B试剂优势明显,临床推广应用价值显著。

快速定量试剂盒与标准法测定尿碘结果对比分析

对快速定量试剂盒与标准法测定尿碘结果进行对比分析。方法 制作标准曲线,使用快速定量试剂盒与标准法分4d平行测定尿碘并分析精密度、准确度,取本地区165份送检尿样进行尿碘含量检测。结果 两种方法测定CV%标样1分别为2.7%、1.8%,标样2为3.3%、3.5%;浓度测定均值标样1 φ1.071<φ’1.419;标样2 φ0.513<φ’1.419,差异不显著;与标准值比较,仅有标样2中的快速定量试剂盒法结果偏低,不符合要求。结论 快速定量试剂盒测定尿碘更加快速简便,二者测定结果均具有较高的精密度和准确度。

乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂性能评价要点

目的阐述乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂的分析性能评价要点。方法结合体外诊断试剂现行法规和此类试剂自身的特点,对其标准品建立及分析性能评估中检测限、特异性、准确度、线性范围评估等方法进行了详细解析。结果与结论乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂的分析性能评估应从试剂本身的定量特点出发,重点针对试剂定量的检测限、准确性、特异性等性能进行科学合理的评估。

复合前列腺特异性抗原的单克隆抗体制备及化学发光法免疫定量检测试剂研究

目的：获得特异性检测复合前列腺特异性抗原（c-PSA）的单克隆抗体配对,建立基于化学发光c-PSA免疫定量试剂。方法：利用市购c-PSA抗原免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,间接法ELISA差异筛选抗c-PSA、游离前列腺特异性抗原（f-PSA）、总前列腺特异型抗原（t-PSA）的抗体,抗体配对后化学发光定量检测血清中c-PSA蛋白。结果：获得抗体配对1A10/7D6-SAE,经c-PSA标准品及临床血清样本初步筛选,该抗体配对适用于基于化学法发光的免疫反应定量检测试剂的开发;血清阳性样本与阴性样本检测结果显示具有统计学意义（P〈0.000 1）;阳性样本定量结果与Siemens公司复合前列腺特异性抗原测定试剂盒（直接化学发光法）的相关系数为0.97;线性范围为0.1~100 ng/ml;检测灵敏度为0.005 ng/ml。结论：成功筛选获得特异性检测c-PSA的抗体配对,并开发c-PSA化学发光免疫定量试剂,其检测能力与国际主流试剂相当。

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的单克隆抗体制备及化学发光免疫定量检测试剂研究

目的获得中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（NGAL）的单克隆抗体,并对其应用于化学发光定量试剂进行研究。方法利用原核表达系统表达的NGAL重组抗原,经过Ni2＋-金属螯合层析纯化后用于免疫6~8周龄的雌性BALB/c小鼠,完成免疫程序后将其脾脏细胞与杂交瘤细胞进行融合,通过间接法ELISA筛选抗NGAL的单克隆抗体,并结合Western blot鉴定抗体与天然NGAL的反应性。结果获得了由原核表达系统表达的NGAL重组抗原,具有较高的纯度,可形成二硫键交联的二聚体形式;重组抗原具有较好的免疫原性,免疫小鼠多抗血清效价达10^6以上;筛选获得30株单克隆抗体,其中单抗23C12、38D10的EC50分别为0.034、0.022 g/mL;经NGAL标准品及临床尿液样本初步筛选,由38D10/23C12-SAE组成的抗体配对能够很好的适用于基于化学法发光的免疫反应定量检测试剂的开发;尿液阳性样本与阴性样本检测结果显示具有显著的统计学差异（P〈0.001）;对病患组定量结果与Abbott公司的尿NGAL测定试剂盒（化学发光微粒子免疫检测法）的相关系数大于0.97,线性范围为10~1500 ng/mL,检测灵敏度为0.63 ng/mL。结论本研究成功制备了NGAL重组抗原,获得了NGAL特异单克隆抗体,并开发了NGAL化学发光免疫定量试剂,该试剂检测能力与国际主流试剂相当。

硫酸脱氢表雄酮化学发光微粒子免疫法定量测定试剂的研制

目的研制硫酸脱氢表雄酮化学发光免疫定量检测试剂。方法利用硫酸脱氢表雄酮人工完全抗原免疫小鼠,通过杂交瘤技术制备特异性抗硫酸脱氢表雄酮单克隆抗体,采用竞争抑制法建立硫酸脱氢表雄酮化学发光免疫定量检测试剂。结果筛选获得了27株稳定分泌抗硫酸脱氢表雄酮的单克隆抗体细胞株,建立了化学发光微粒子免疫法定量测定硫酸脱氢表雄酮的试剂盒雏形,与雅培公司的硫酸脱氢表雄酮定量检测试剂在检测临床标本上的相关系数r达0.99以上。结论本研究为国产化硫酸脱氢表雄酮化学发光微粒子免疫法定量测定试剂盒的研发奠定了基础。

定量检测体外诊断试剂的线性评价方法介绍及其在肿瘤标志物试剂盒检验中的应用

目的建立和评价定量体外诊断试剂注册检验中评价数据线性的方法。方法参考CLSI指南EP6-A并结合注册检验工作中的实际情况和相关规定,提出了线性评价的建议方法,并应用该方法从试剂盒校准品和样品两个方面对某企业糖类抗原19-9（CA19-9）定量检测试剂盒进行了线性评价。结果试剂盒校准品回归方程相关系数r的绝对值为0.9989,符合相应要求。线性评价用样品检测结果的最优回归方程为直线方程,测定值在10~500U·mL-1范围内呈现线性,符合企业声明的线性范围。结论被评价试剂盒线性符合相应要求;本文提出的建议方法在肿瘤标志物定量检测试剂盒注册检验线性评价中显示出较好的适用性,可供从事该类工作的检验人员参考。

尿碘快速定量检测试剂在基层卫生机构推广应用研究

目的:研究在农村基层卫生机构应用尿碘快速定量检测试剂的可行性。方法:在吉林省蛟河市计划生育服务站应用尿碘快速定量检测试剂对90例小学生进行尿碘检测。结果:尿碘中位数为163μg/L,碘摄入适宜,碘营养理想,与地方病监测结果相符。结论:尿碘快速定量检测试剂适宜在基层卫生机构应用。

硫酸去氢表雄酮定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法)的研制及性能评价

目的研制硫酸去氢表雄酮定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法),并对其试剂盒性能进行评价。方法利用竞争抑制法,对原料进行筛选,建立硫酸去氢表雄酮定量测定试剂盒。并分别对本试剂盒的准确性、最低检测限、线性、重复性、特异性、参考范围及样本对比方面进行评价。结果经过筛选,选用反应模式:磁微粒包被羊抗鼠Ig G-鼠抗硫酸去氢表雄酮单克隆抗体-吖啶酯标记DHEAS-BSA;对此方法建立的试剂盒进行方法学评价,最低检测限可达1.84μg/d L,线性在0~1 500μg/d L之间,相关系数r=0.999 8,准确度的回收率为105.38%,重复性均小于8%;建立了健康人参考范围(女性:47.9~407.5μg/d L,男性97.1~522.5μg/d L),与西门子ADVIA Centaur测定结果显著相关,线性方程为y=1.078 13+0.992 16x,相关系数r=0.994 7,2种试剂盒的测定结果具有较高的一致性。结论本研究建立的硫酸去氢表雄酮定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法)各项性能均达到了临床检验的要求,为国产化66硫酸去氢表雄酮定量测定试剂盒(化学发光免疫分析法)的研发奠定了基础,有望用于临床血清硫酸去氢表雄酮的检测。

氧化型α1抗胰蛋白酶定量检测试剂盒研制及对吸烟男性的检测分析

目的介绍一种血清氧化型α1抗胰蛋白酶(Ox-AT)的定量检测方法,并分析吸烟男性血清Ox-AT的表达水平。方法构建一种以Ox-AT特异性单抗为检测抗体的双抗夹心ELISA法,用纯化的Ox-AT作为标准品定量;分析我国吸烟与非吸烟男性血清中Ox-AT的水平。结果所建立的双抗夹心ELISA试剂盒检测限为2.58μg/L,在0～500μg/L浓度范围内R2值0.995 5,批间差为11.27%,准确度为88.19%,试剂盒4℃保质期超过6个月;对20对吸烟与非吸烟男性血清Ox-AT进行检测,吸烟组为55.43±49.94μg/L,显著高于非吸烟对照组的11.01±12.15μg/L(P<0.001),两组间α1-AT无显著差异。结论所建立的ELISA法能用于血清Ox-AT的定量检测;血清Ox-AT可能比α1-AT更适合作为我国COPD的评价指标。

国产HBV DNA定量检测试剂盒(磁珠法)与COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HBV DNA检测法2.0的性能评价

目的比较国产乙型肝炎病毒核酸(HBV DNA)定量检测试剂盒(磁珠法)(简称对比试剂)与COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HBV DNA检测法2.0(简称COBAS试剂)在溯源性准确度、精密度和临床应用质量方面的差异。方法用两种定量试剂分别对世界卫生组织(WHO)的HBV DNA标准品(稀释至19 975、1 998、200、60 IU/mL)进行溯源性分析,确定定量试剂检测的可靠性。然后,用两种定量试剂平行检测不同病毒载量(<20、20~100、100~200、200~2 000 IU/mL)的HBV DNA阳性临床血浆样本各25份,并评价两种定量试剂的一致性(符合率)和相关性。结果经溯源性分析,COBAS试剂组在上述4个检测节点的实测对数值与理论对数值的绝对偏差在0.001 g^0.05 lg IU/mL,在可接受范围之内(±0.3 lg IU/mL),而对比试剂组在上述4个检测节点的实测对数值与理论对数值的绝对偏差在-0.61^-0.35 lg IU/mL,均超出了可接受范围。两种试剂检测25份HBV DNA阳性血浆样本相关性较差,总符合率仅62.67%。结论COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan HBV DNA检测法2.0在溯源性方面一定程度优于对比HBV DNA定量检测试剂盒(磁珠法),两者在检测临床样本时的检测结果相关性较差,且临床一致性方面存在一定差距,对比HBV DNA定量检测试剂盒(磁珠法)在60~2 000 IU/mL病毒载量范围内对临床样本的判读需进一步探讨。

水体亚硝酸氮的试剂盒定量测定方法

采用分光光度法确定试剂盒的最佳吸收波长、优化试剂用量,拟合标准曲线,推测测量下限和上限,计算回收率和相对偏差,应用卡方检验估计测定的准确性,并分析其他含氮物质的干扰。结果显示,最佳吸收波长为540 nm,试剂用量为200μL,亚硝酸氮浓度和吸光度相关系数为0.999 8,回归方程极显著(P<0.01),测量下限0.04 mg/L,上限4.32 mg/L,回收率99%以上,相对偏差4.54%,测量值与真实值差异不显著(P> 0.05),氨氮、硝酸氮和有机氮等含氮物质对测定的干扰均不显著(P> 0.05)。研究表明,测量结果准确性高,偏差在质量控制范围之内,为亚硝酸氮的快速定量测定提供了新的手段。