定量ELISA法检测蜂蜜中氯霉素残留量研究

目的 :检测深圳市市售蜂蜜中氯霉素的残留量 ,以掌握蜂蜜中氯霉素污染的情况。方法 :氯霉素定量酶联免疫检测法 ,利用抗体与抗原间免疫化学反应 ,酶标氯霉素结合体与样品检体中氯霉素残留物同时竞争固定在酶标孔的氯霉素抗体 ,待检体中氯霉素的含量愈高 ,显色反应愈浅 ,待检体中氯霉素的含量愈低 ,显色反应愈深。结果 :经检测 46个国内不同地方生产的在深圳销售的蜂蜜样品 ,检出含有氯霉素的有 1 3个样品 ,有 33个样品未检出。结论 :此氯霉素残留量检测方法快速可靠、敏感性高、特异生强 。

大白菜中拟除虫菊酯类农药残留半定量ELISA免疫检测方法的建立

为建立适合蔬菜中拟除虫菊酯类农药的半定量ELISA免疫检测方法,以实验室自制的针对拟除虫菊酯类农药的广谱性抗体为材料,以间苯氧基苯甲酸(PBA)为半抗原,分别用活性酯法、混合酸酐法和6-氨基己酸法偶联鸡卵清蛋白(OVA)制备3种包被抗原,开展了半定量酶联免疫分析法(ELISA)免疫检测试验。结果表明,采用6-氨基己酸法合成包被抗原效果最优;检测时无需将抗原抗体过夜提前预混,抗原抗体反应时间以45 min较佳;无净化步骤的大白菜基质对检测结果影响较小,该方法对63个大白菜样品的假阳性检出率和假阴性检出率分别为9.3%和2.7%,表明该方法具备对大量大白菜样品快速初筛的应用潜力。

定量ELISA检测小鼠血清中抗LDH-C4IgG2b抗体的水平

用定量ELISA的方法检测背部携带分泌抗LDH -C4IgG2b抗体杂交瘤小鼠的血清中IgG2b抗体浓度 ,结果表明 :本法稳定 ,批间变异系数为 7 0 4%～ 13 30 % ,批内变异系数为 3 6 1%～ 10 2 0 % ;标准曲线相关性良好 ,相关系数从 0 96 2 884～ 0 996 795 ;灵敏度较高 ,最低检出浓度为 0 0 1mg/L ;

定量ELISA中标准曲线平移的应用

目的:研究平移标准曲线法在ELISA定量测定中的应用。方法:甲亢患者14例、甲减患者11例和体检正常者15例,取静脉血标本,分别使用fT4试剂盒、采取多标准法和平移标准法,进行5次质控血清、试验对象血清测定。结果:吸光度变化范围在0.15以内,同一浓度标准液吸光度间无显著性差异(P>0.05);多标准法和平移标准法测定质控血清、试验对象血清,结果无显著性差异(P>0.05);平移标准法的重复性、准确性均符合试验要求。结论:平移标准法可以在多种ELISA定量测定中应用,结果准确可靠,并能节约成本。

定量ELISA竞争抑制法测定屋尘螨变应原点刺液生物活性

目的建立一种稳定的屋尘螨点刺液生物活性测定方法,以替代现用的放射性吸附抑制测定方法(radio allergosorbent test,RAST)。方法建立定量ELISA竞争抑制法,对屋尘螨点刺液进行生物活性测定,并对该法进行精密性、准确性、适用性验证,确定线性测定范围。应用RAST和定量ELISA竞争抑制法平行测定3批屋尘螨点刺液生物活性,对结果进行比较。结果定量ELISA竞争抑制法测定屋尘螨点刺液制品生物活性,其最佳测定范围为0.052~0.125 HEP/m L;高、中、低3个浓度的日内精密性≤10.3%,日间精密性≤11%,回收率为87%~106%,表明该方法具有较好的精密性;低、中、高3个加标样本的回收率均在73.18%~99.02%之间,表明该方法具有较好的准确性;3批屋尘螨点刺液生物活性最佳测定范围的稀释度为1/48~1/192,所有测定样本的相对活性在80%~110%范围内,表明该方法适用于屋尘螨点刺液生物活性检测。两种方法测定屋尘螨点刺液生物活性,结果差异无统计学意义(P>0.05),且均符合质量标准规定。结论定量ELISA竞争抑制法测定屋尘螨点刺液的生物学活性,重复性好,准确性高,操作简便,可作为现用生物活性测定RAST法的替代方法。

人IL-35单克隆抗体制备及其在定量ELISA检测方法中的应用

为了建立人白细胞介素-35 (IL-35)的定量ELISA检测方法,RT-PCR克隆了人IL-35的IL-27EBI3亚基和IL-12p35亚基的编码基因,在大肠杆菌中实现了2个亚基的高效表达。以大肠杆菌表达的IL-27EBI3和IL-12p35重组蛋白作为免疫原,免疫BaLb/c小鼠,选取阳性血清小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合,用间接ELISA和有限稀释法进行单克隆杂交瘤细胞的筛选和克隆,获得了稳定分泌抗IL-27EBI3和抗IL-12p35单克隆抗体的杂交瘤细胞株。在效价测定和特异性鉴定的基础上,进一步筛选出一株能稳定分泌抗IL-27EBI3单克隆抗体的杂交瘤细胞株3B11和一株能稳定分泌抗IL-12p35单克隆抗体杂交瘤细胞株3A10,亚类鉴定两株单抗均为IgG1。应用单抗3B11和3A10建立了IL-35双抗夹心定量ELISA检测方法,借助生物素-亲和素放大效应,该方法检测IL-35线性范围为3.12–200pg/mL,最低检测限为1.26pg/mL,与多种其他抗原的交叉反应率为0.1%,批内相对标准偏差(RSD)为5.1%–5.6%,批间RSD为5.6%–7.2%,添加回收率为89%–103%,达到定量分析的要求,为进一步组装IL-35定量ELISA检测试剂盒打下了基础。

吖啶酯直接化学发光法和ELISA定量检测CCP抗体作用分析

目的分析对CCP抗体采用吖啶酯直接化学发光法和ELISA定量检测的临床作用。方法方便选择2017年1月—2018年1月来该院检验科进行CCP抗检测的272例患者,所有患者均采用吖啶酯直接化学发光法与ELISA定量检测,对各组检测结果进行分析比较。结果采用吖啶酯直接化学发光法的CCP抗体诊断中,特异性为96.69%,敏感性为69.49%,阳性预测值与阴性预测值为87.13%、91.91%。采用ELISA定量检测法的CCP抗体诊断中,特异性为97.06%,敏感性为68.01%,阳性预测值与阴性预测值为92.28%、86.03%;在类风湿性关节炎患者中,活动期CCP抗体含量(141.11±93.96)IU/m L,非活动期CCP抗体含量(45.15±10.56)IU/m L,由此可见类风湿性关节炎活动期CCP抗体含量明显高于非活动期(t=8.369,P=0.000);采用吖啶酯直接化学发光法与ELISA检测的CCP抗体,阴性符合率为100.00%,阳性符合率为94.44%,总符合率为98.53%。结论针对CCP抗体,吖啶酯直接化学发光法与ELISA定量检测具有良好的符合率,吖啶酯直接化学发光法适合在仪器自动化中应用,易标准化,操作简单,与临床要求相符合。CCP抗体作为类风湿性关节炎诊断的一种新血清学标志物,对类风湿性关节炎病情监测有利。

单抗体夹心ELISA定量检测人神经生长因子试剂盒的研制

目的制备抗人神经生长因子（h NGF）单克隆抗体,并开发一种检测h NGF含量的ELISA试剂盒。方法以重组人神经生长因子抗原与弗氏完全佐剂混合免疫BALB/c小鼠,并采用杂交瘤技术制备抗h NGF的单克隆抗体,然后建立快速检测h NGF含量的ELISA检测试剂盒。结果获得1株可分泌抗h NGF单克隆抗体的杂交瘤细胞株。建立1种检测h NGF含量的ELISA试剂盒,该检测方法的回收率为85%-105%,灵敏度为0.63 ng/ml,变异系数〈10%,且特异性良好。结论成功制备了抗h NGF的单克隆抗体,并建立了一种可快速检测h NGF含量的ELISA试剂盒。

定量检测破伤风类毒素酶联免疫吸附法的建立及初步应用

目的:建立定量检测破伤风类毒素(TT)抗原的双抗体夹心ELISA法,并探索其初步应用。方法:以TT抗毒素为包被抗体,大鼠抗TT多抗为检测抗体,采用相应酶标抗体检测TT抗原含量,建立双抗体夹心ELISA法,并进行方法学验证。结果:TT含量在0~0.062 5 Lf/ml范围内线性关系良好(r>0.99)。该方法与白喉类毒素、百日咳类毒素、百日咳丝状血凝素及百日咳黏附素无明显交叉反应,重复性好,特异性较强,精密度及准确度验证均符合常规质控要求。该法准确检测范围为0.000 625~0.040 000 Lf/ml,定量限度为0.000 625 Lf/ml。采用该方法对TT抗原进行吸附率检测,分别采用该法和絮状单位测定法测定6批TT的絮状含量,2种检测方法高度相关(r=0.94)。结论:建立的定量检测TT的双抗体夹心ELISA法为破伤风疫苗生产过程中TT质量控制提供了有效技术手段。

大肠癌患者血清VEGF水平的临床研究

目的：探讨血管内皮生长因子（ VEGF）在大肠癌患者血清中的水平及其临床意义。方法：应用 ELISA法，对 82例大肠癌患者血清的 VEGF水平进行测定，并同期检测 30名健康人的血清 VEGF水平作为对照。结果：大肠癌患者血清 VEGF水平明显高于正常人； VEGF水平与大肠癌肿瘤大小、血管侵犯、淋巴结受累及肝脏转移密切相关；随着临床病理分期（ Dukes分期）的上升， VEGF水平亦明显升高。 VEGF水平与肿瘤部位、组织学类型及患者的性别、年龄等因素无关。结论：血清 VEGF水平与大肠癌的浸润、转移密切相关，术前检测血清 VEGF水平，对预测大肠癌的侵袭和转移具有重要的临床意义。

口蹄疫病毒非结构蛋白定量检测ELISA方法的建立

目的:利用口蹄疫病毒非结构蛋白3B单克隆抗体建立液相阻断ELISA检测方法,进行定量检测口蹄疫病毒培养液中的非结构蛋白含量。方法:首先将工作浓度的3B单抗与待测病毒培养液过夜结合反应,然后取结合液转移至用3B蛋白包被好的酶标板上,用标准3B蛋白做12个梯度做对照,同时设阴性对照和空白对照。通过回归分析算出口蹄疫病毒培养液中的非结构蛋白3B含量。结果:回归曲线呈典型的S形,符合4参数logit曲线拟合,相关系数R=0.99,检测范围为5～1500ng/ml,半数抑制浓度(Ic50)为130ng/ml。结论:该方法能特异、敏感的检测到病毒培养液中的非结构蛋白3B成分,并进行定量。

大肠癌患者血清血管内皮生长因子的检测及临床意义(英文)

目的 探讨血管内皮生长因子 (VEGF)在大肠癌患者血清中的水平及其临床意义。方法 采用ELISA法检测 82例大肠癌患者和 30例正常对照者血清中VEGF的含量。结果 大肠癌患者血清VEGF水平明显高于正常对照组 ,大肠癌有远处转移患者血清VEGF水平明显高于无转移患者。结论 血清VEGF水平的检测对大肠癌的诊断具有一定的临床意义 ,可反映疾病的进展情况 ,血清VEGF水平与大肠癌的浸润和转移密切相关 ,术前检测血清VEGF水平 ,对预测大肠癌的侵袭和转移具有一定的临床意义。

结肠癌患者血清血管内皮生长因子的表达及其临床意义

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)在结肠癌患者血清中的表达及临床意义。方法采用ELISA法检测56例结肠癌患者和23例正常对照者血清中VEGF的含量。结果结肠癌患者血清VEGF表达水平显著高于正常对照组,且远处转移患者血清VEGF水平明显高于无转移患者。结论血清VEGF表达的检测对结肠癌的诊断具有一定的临床意义,有助于反映结肠癌的进展和预后判断,且血清VEGF水平与结肠癌的浸润和转移密切相关。

静注COVID-19人免疫球蛋白(pH4)原料血浆筛选用试剂盒(ELISA)的确定及其定量检测方法的建立、验证及应用

目的通过比较特异性、敏感度、线性范围对目前市售的5家新型冠状病毒IgG抗体检测试剂盒(厂家A、B、C、D、E)进行筛选,建立定量检测方法并验证,用于静注COVID-19人免疫球蛋白(pH4)所需原料血浆的检测。方法将已知有中和活性的新型冠状病毒康复者恢复期血浆作为内控标准品,进行2倍系列稀释共7个稀释度(S1~S7),按照5个厂家试剂盒说明书操作,比较最高浓度S1的吸光值,用四参数拟合曲线比较5家试剂盒的线性范围;用候选的3家试剂盒初步建立定量检测方法并检测部分有代表性的阴性和阳性样本,比较结果的相关性;综合考虑选定一家试剂盒,将内控标准品进行系列稀释检测,确定其稀释度赋值,拟合标准曲线建立定量检测方法,并验证其线性范围、准确度和精密度,用于建立血浆筛查的模式。结果内控标准品的线性范围显示,厂家A可用倍比6个稀释度,S1吸光值为2.8;厂家B可用5个倍比稀释度,S1吸光值为2.4;厂家C可用5个倍比稀释度,S1吸光值为1.4;厂家D可用倍比3个稀释度,S1吸光值为3.3;厂家E可用5个倍比稀释度,S1吸光值为3.3。线性范围相近的厂家A、B、E试剂盒利用内控标准品建立了定量检测方法,曲线的决定系数R^(2)和各稀释度的回收率均符合要求,厂家A检测有代表性的阴性样本本底较高,特异性不好;3家试剂盒与中和试验检测有代表性的阳性样本结果的相关性均>0.9。选定用厂家B试剂盒,用其3个批次试剂盒4次检测的内控标准品的稀释度赋值为32,四参数拟合曲线线性成立,稀释度的线性范围为1~16,R^(2)>0.99,准确度、精密度符合要求。建立了单孔检测的筛浆模式,确定了复测样品的稀释度。结论厂家B试剂盒优化为定量检测试剂盒,经验证后可用于静注COVID-19人免疫球蛋白原料血浆的筛选。

定量检测百日咳黏附素的ELISA法建立及初步应用

目的:建立定量检测吸附无细胞百白破(组分)联合疫苗(DTaP)生产过程中黏附素(pertactin,PRN)含量的方法。方法:以高效价兔抗PRN多克隆抗体为包被抗体,羊抗PRN多抗为检测抗体,采用辣根过氧化物酶标记的兔抗羊抗体,建立双抗体夹心间接酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定PRN抗原的含量并进行方法学验证。结果:建立的ELISA法在3.906 25~500 ng·mL^(-1)PRN浓度区间有最佳线性,相关系数r> 0.95;该法对PRN检测有良好的特异性;实验内和实验间检测250,60,15 ng·mL^(-1)浓度下PRN含量,变异系数为1.987%~9.785%、回收率为93.1%~103.5%。该法精密度和准确度较好,该法的定量限度为15 ng·mL^(-1)。同时探讨了建立的双抗体夹心ELISA法的初步应用,测定了PRN纯化步骤的回收率以及联合疫苗中PRN组分的含量和吸附率。结论:建立的ELISA法可有效检测百日咳疫苗纯化过程中PRN的含量,为DTaP生产过程的质量控制奠定了重要基础。

血液恶性疾病患者D-二聚体的测定及其意义

用酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法检测65例血液恶性疾病患者的血浆D-二聚体含量,并与正常对照组相比。急性白血病组的D-二聚体的增高具有显著差异,M3型患者尤为显著[(8.54±5.70mg/L,P<0.001]。在淋巴瘤及慢性粒细胞白血病患者,其升高不显著。24例急性髓性白血病完全缓解(CR)后其D-二聚体值达到正常[(0.31±0.10)mg/L]。5例复发者的D-二聚体值再度升高[(7.71±2.31)mg/L],与CR期比较,差异显著。动态观测血浆D-二聚体水平的变化,有助于对白血病病情的判断和观察疗效。

用硫氰酸胍处理检测牛海绵状脑病特异性PrP^(SC)

一种普遍存在的细胞蛋白(PrPSC)转化成与致病性有关的异构体PrPSC是传染性海绵状脑病如牛海绵状脑病（BSE）的一个特点,人们已经用蓄积PrPSC诊断BSE。瑞士研究人员介绍了一种定量ELISA法,这种方法通过PrP分子抗蛋白酶的核心内抗表位抗体测定患BSE动物正常对照动物脑组织PrP的数量。这种ELISA可以区分牛脑匀浆中的BSE—特异性PrPSC和PrPSC。

口蹄疫病毒非结构蛋白3AB双抗体夹心ELISA方法的建立

抗原纯净度是口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)灭活疫苗质量检验的一项重要内容,一般采用疫苗2–3次免疫动物后,检测非结构蛋白(Non-structural protein,NSP)抗体是否阳转,判断疫苗抗原的纯净度。文中旨在建立定量检测FMD灭活疫苗抗原中NSP 3AB含量的ELISA方法,为疫苗质量控制提供参考方法。利用口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)NSP 3A单克隆抗体和辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,HRP)标记的3B单克隆抗体,建立定量检测NSP 3AB含量的双抗体夹心ELISA检测方法。采用原核表达并纯化的3AB蛋白作为标准品,标准品系列稀释,绘制标准曲线,以标准品与未加抗原的阴性对照吸光值(OD)的比值大于2.0的标准品最低浓度为最低检测限。标准品浓度介于4.7–600.0 ng/mL之间时,测得的OD值与浓度呈线性相关,回归曲线呈直线,相关系数R2=0.99,确定最低检测限为4.7 ng/mL。检测12份未纯化灭活抗原中3AB蛋白含量介于9.3–200.0 ng/mL之间;而纯化后的病毒抗原中3AB蛋白残留量低于最低检测限;33份来自不同厂家的成品疫苗抗原中9份疫苗抗原3AB蛋白含量在9.0–74.0 ng/mL之间,其余24份疫苗抗原中3AB蛋白残留量低于最低检测限。检测3AB蛋白含量的双抗体夹心ELISA方法能够特异、敏感地检测疫苗抗原中的3AB蛋白含量,为疫苗质量控制与纯净度检验提供了一种可供选择的检测方法。

用两种方法对HBsAg阳性和阴性标本检测结果分析

通过用两种方法对HBsAg阳性和阴性标本结果检测和对比,使临床对HBsAg阴性患者的重视,并在确定乙型肝炎时应以乙肝两对半为参考,其传染性及疗效可参考乙肝病毒定量。