鱼藤酮对果蝇运动行为及果蝇头部多巴胺合成相关酶基因表达的影响

为了探讨鱼藤酮对黑腹果蝇Drosophila melanogaster运动行为的影响与其头部多巴胺水平之间的关系,我们测定了鱼藤酮对黒腹果蝇成虫运动行为、头部多巴胺水平及酪氨酸羟化酶和多巴脱羧酶基因表达的影响。结果表明:与取食未加入药剂饲料的果蝇相比,雌成虫用0.2～0.8mmol/L、雄成虫用0.1～0.8mmol/L浓度药液配制的饲料连续饲养6d后运动能力显著下降,在0.8mmol/L浓度下雌、雄成虫的运动能力分别仅为对照的55.6%和49.1%。取食用0.8mmol/L浓度药液配制饲料6,12和21d的果蝇雌、雄成虫头部多巴胺水平均显著下降,雌成虫头部多巴胺水平分别为对照雌成虫的83.2%,72.3%和59.8%;雄成虫头部多巴胺水平分别为对照雄成虫的79.3%,66.8%和53.2%。用0.8mmol/L浓度鱼藤酮处理6,12和21d,雌成虫头部酪氨酸羟化酶基因(pale)的表达水平分别为对照的76.3%,51.4%和37.3%,多巴脱羧酶基因(Ddc)的表达水平分别为对照的87.1%,78.2%和63.5%,均显著下降。结果提示,鱼藤酮可干扰果蝇成虫头部酪氨酸羟化酶和多巴脱羧酶基因的表达,导致果蝇头部多巴胺水平下降,进而影响了果蝇的运动行为。

转基因水稻种子核酸提取方法的比较研究

以转基因水稻克螟稻2号及其受体水稻秀水11的种子为试验材料,将水稻种子脱壳磨成粉末后,称取100mg粉末分别用传统CTAB法和5种核酸提取试剂盒进行水稻基因组DNA的提取,其中试剂盒A和试剂盒B为磁珠法,其余为硅胶过柱法,将提取的基因组DNA通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计、荧光定量PCR等3种检测方法比较其提取效果,并结合提取时间和提取成本的比较,以期找到性价比最佳的提取方法。结果表明,试剂盒A和试剂盒B提取的基因组DNA完整性最好、纯度和提取效率最高,综合提取效果、耗时及成本等因素考虑,试剂盒B的性价比最佳。本研究为转基因水稻种子的检测和研究奠定了基础。

非综合征型耳聋患者mtDNA A1555G异质性突变比例与临床表型的关系

目的定量检测非综合征型耳聋患者线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)1555突变型/野生型的拷贝数,探讨突变型/野生型比例与临床表型之间的关系。方法建立实时定量PCR技术和扩增阻滞突变系统(Real-time quantitative PCR和Amplification refractory mutation system,RT-ARMS-qPCR系统)对含突变型和野生型mtDNA 1555位点的拷贝数进行定量检测并计算比例。共检测散发组12例、家系组7例异质性突变患者,结合耳聋患者的临床资料,分析突变型与野生型的比例与耳聋严重程度的关系。结果散发组mtDNA A1555G异质性突变的患者中,突变型mtDNA所占的比例与耳聋轻重程度相关(r=0.771,P=0.003);家系组患者中,突变型mtD-NA所占的比例亦与耳聋轻重程度相关(r=0.850,P=0.015)。结论突变型mtDNA占所有mtDNA的比例与耳聋的严重程度密切相关,是非综合征型耳聋临床表型多样性的分子基础。

TAB3、CEBPD在卵巢癌组织和卵巢癌细胞中的表达及其相关性

目的探讨TAB3、CEBPD在卵巢癌组织和卵巢癌细胞中的表达及其相关性。方法收集51例临床卵巢癌病理标本和对应的癌旁组织标本,采用qRT-PCR及western blot方法检测卵巢癌组织及对应的癌旁组织中TAB3、CEBPD的表达情况,同时采用qRT-PCR及western blot方法检测正常卵巢细胞和卵巢癌细胞株中TAB3、CEBPD的表达,分析TAB3、CEBPD的相关性。结果荧光定量PCR结果发现,卵巢癌组织中TAB3 mRNA的表达明显高于癌旁组织(P<0.001),而CEBPD mRNA的表达明显低于癌旁组织(P<0.05);Western blot结果发现TAB3蛋白在62.74%(32/51)的卵巢癌组织中呈过表达,CEBPD蛋白在60.78%(31/51)的卵巢癌组织中呈低表达(P<0.05)。卵巢癌细胞株中的TAB3 mRNA及蛋白表达均明显高于正常卵巢细胞株,CEBPD mRNA及蛋白表达明显低于正常卵巢细胞株。TAB3、CEBPD在卵巢癌组织中的表达呈负相关(γ=-0.2853,P<0.05;γ=-0.3091,P<0.05)。结论在卵巢癌组织及细胞中TAB3基因呈高表达,而CEBPD基因呈低表达。在卵巢癌组织中TAB3、CEBPD基因的表达存在负相关性。

胃癌组织中基质分解素-1基因表达的研究

目的 了解基质分解素-1(MMP_3)基因在胃癌组织的表达水平。方法 43例胃癌患者胃镜下取癌组织及正常胃粘膜,提取组织总RNA,用逆转录共扩增定量PCR方法测定MMP_3基因表达水平。结果 胃癌组织MMP_3,基因表达水平(2.02±0.34)明显高于正常胃粘膜组织(0.63±0.10,P<0.01),局部淋巴结受累者MMP_3基因表达水平(2.46±0.39)明显高于局部淋巴结未受累者(1.60±0.30,P<0.01)。结论 基质分解素-1在胃癌的浸润、转移中可能起重要作用。

革胡子鲶干扰素α基因对维氏气单胞菌感染的应答分析

应用实时荧光定量PCR技术分析了革胡子鲶感染维氏气单胞菌前后其脾脏、肾脏、头肾、鳃、肠道、皮肤中干扰素α基因的表达谱。结果显示:该基因在健康(对照组)革胡子鲶的6种组织中均有表达,但以脾脏表达量最高,显著高于除肾脏和皮肤以外的其他组织;感染病原菌后3~96 h,该基因在上述6种组织中的时序表达模式相似,即:表达水平首先显著上调、之后回到对照组水平,但到达峰值的时间不同;此外,在感染病原菌后的相同时间点,该基因的表达水平有组织差异性。

大肠癌金属蛋白酶组织抑制因子-1基因表达的研究

目的 了解大肠癌患者金属蛋白酶组织抑制因子 1基因表达的情况。方法 5 0例大肠癌术中取癌组织及正常大肠组织 ;提取组织总RNA ;用逆转录共扩增定量PCR方法测定其金属蛋白酶组织抑制因子子 1(TIMP 1)基因表达水平。结果 大肠癌组织金属蛋白酶组织抑制因子 1基因表达水平明显高于正常大肠组织。局部淋巴结受累者TIMP 1基因表达水平明显低于局部淋巴结未受累者。结论 金属蛋白酶组织抑制因子 1在阻止大肠癌的浸润、转移中可能起重要作用。

ICC-qPCR病毒灭活验证方法的建立及其应用

目的:建立细胞培养-核酸扩增荧光定量PCR(integrated cell culture quantitative PCR,ICC-qPCR)病毒灭活验证方法;结合传统细胞病变效应(cytopathic effect,CPE)法,考察ICC-qPCR方法的适用性;利用这2种方法验证复用电生理导管环氧乙烷病毒灭活工艺的有效性。方法:通过制备指示病毒(伪狂犬病毒,PRV)质粒DNA作为定量标准品,用PRV特异性引物建立定量PCR方法;再用PRV病毒侵染宿主细胞,同时用热灭活PRV作为对照,确定PRV活病毒全部进入宿主细胞但不扩增的最佳样本收获时间,通过检测细胞中活病毒,建立ICC-qPCR活病毒检测方法;确立CPE法测定滴度与ICC-qPCR法检测DNA拷贝数之间的线性关系。最后,模拟临床使用的最坏情况对一次性电生理导管进行含指示病毒(PRV)生物污染物负载,模拟环氧乙烷病毒灭活工艺,通过ICC-qPCR和CPE法验证病毒灭活工艺的有效性。结果:本研究中建立的ICC-qPCR方法的标准曲线线性关系r2>0.99;定量下限为104 copies·μL^(-1),约相当于2 logs·mL^(-1),检测下限为103copies·μL^(-1),约相当于-1 logs·mL^(-1);特异性结果表明只能检测到PRV的扩增曲线,无非特异性扩增;重复性试验的RSD<5%。确定ICC-qPCR方法中PRV最佳收获时间为宿主细胞染毒后1～2 h。ICC-qPCR检测拷贝数与病毒滴度间具有良好的线性关系(r2>0.99)。ICC-qPCR法病毒灭活工艺验证结果表明:经环氧乙烷灭活后病毒负载导管其病毒滴度降低>9.0 logs;阴性对照组(负载不含PRV生物污染物)和空白导管样品均未检出病毒DNA。CPE法的病毒滴定结果表明,经环氧乙烷灭活后病毒负载导管其病毒滴度降低≥8.5 logs·mL^(-1);阴性对照组和空白导管样品均未检出PRV。结论:本研究建立的ICC-qPCR方法应用于PRV病毒灭活验证,可以有效检测活病毒,比传统CPE法(-0.5 logs·mL^(-1))灵敏度高。将此方法应用于复用电生理导管的环氧乙烷病毒灭活工艺验证,同时与CPE法进行比较,验证了ICC-qPCR方法的适用性以及环氧乙烷灭活电生理导管负载的PRV病毒的工艺有效性。