实心核颗粒色谱结合UPLC-MS/MS法快速检测中药制剂及保健食品中非法添加13种降糖类化学药物成分

目的利用实心核颗粒色谱分离技术,建立快速,准确测定降糖类中药制剂及保健食品中非法添加的13种化学药物成分的UPLC-MS/MS检测方法。方法应用实心核颗粒色谱柱ZORBAX Eclipse Plus C18(50mm×2.1mm,1.8μm)分离,超高效液相色谱仪串联三重四级杆质谱仪,以甲醇-10mmol/L乙酸铵水溶液为流动相,梯度洗脱,流速为0.3m L/min,柱温35℃,进样量5μL,选择ESI离子源,正离子扫描,MRM方式进行定性定量分析,样品以80%甲醇为溶剂提取,检测样品中添加的盐酸二甲双胍、盐酸丁二胍、盐酸苯乙双胍、甲苯磺丁脲、格列齐特、格列吡嗪、马来酸罗格列酮、格列波脲、盐酸吡格列酮、格列本脲、格列美脲、格列喹酮、瑞格列奈等13种降糖类化学药物成分。结果在以上色谱条件和质谱条件下,13种化学药物成分在10分钟内得到快速分离,且分离度较好,线性范围宽,在1ng/mL^100ng/mL的线性范围内相关系数r均大于0.995,回收率在88.1%~108.8%,精密度RSD为0.85%~3.24%。结论本方法通用性强,操作简单,快速,检测结果精准,可作为降糖类中药制剂及保健食品非法添加13种化学药物成分的快速定性定量的检测方法。

柱前衍生-高效液相色谱法测定特殊配方食品中的牛磺酸

目的建立实心核颗粒技术-柱前衍生-高效液相色谱法测定氨基酸配方及蛋白水解配方等特殊配方食品中牛磺酸的分析方法。方法样品加水溶解提取后沉淀蛋白,上清液与足量丹磺酰氯衍生反应;采用实心核颗粒C18色谱柱分离,流动相为乙腈-乙酸钠溶液,梯度洗脱,高效液相色谱荧光检测器测定,外标法定量。结果牛磺酸峰型良好,与杂质基线分离,在0~40.0μg/mL范围内线性良好(r^(2)>0.999),方法检出限和定量限分别为0.04mg/100g、0.10mg/100g;在低、中、高3个浓度水平下的平均回收率范围为90.5%~105.4%,相对标准偏差为0.5%~8.1%。结论该方法准确度高、重复性和稳定性好,适用于氨基酸配方及蛋白水解配方等特殊配方食品的检测,解决了国标方法检测氨基酸配方及深度水解蛋白乳粉等特殊配方食品中牛磺酸方法的不足。

基于实心核颗粒色谱技术结合HPLC法快速测定保健食品中非法添加13种降糖化学成分

目的建立保健食品中非法添加13种降糖性化学成分(甲苯磺丁脲、格列本脲、格列齐特、格列吡嗪、格列喹酮、格列美脲、马来酸罗格列酮、瑞格列奈、盐酸吡格列酮、盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍、盐酸丁二胍、格列波脲)的HPLC快速检测方法。方法以高色谱性能的实心核颗粒色谱柱CORTECS-C18(100 mm×4.6 mm,2.7μm)快速分离,二极管阵列检测器(PDA)检测,进行定性定量检测分析,样品以甲醇为溶剂超声提取,在10 min内同时检测添加在保健食品中的甲苯磺丁脲、格列本脲、格列齐特、格列吡嗪、格列喹酮、格列美脲、马来酸罗格列酮、瑞格列奈、盐酸吡格列酮、盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍、盐酸丁二胍、格列波脲13种化学成分。结果 13种降糖化学成分色谱检测的分离度好,线性范围宽,相关性好,r2≥0.998 7;方法精密度以6次测定值的RSD表示,为0.6%~1.5%;方法回收率用3个质量浓度进行添加实验,回收率为95.9%~104.7%;定量限为1.1~3.3μg/m L;日间精密度的RSD为0.5%~1.6%(n=9)。86批降糖类保健食品中检出17批添加化学药,检出率为20%;样品中检出了格列本脲、盐酸苯乙双胍、马来酸罗格列酮、格列美脲、盐酸二甲双胍、盐酸吡格列酮。结论本方法通用性强,操作简单、快捷,可作为保健食品中非法添加13种降糖化学成分的有效检测方法。

实心核颗粒色谱分离-HPLC-MS/MS法同时测定性保健品中非法添加15种壮阳类化学成分

目的建立了性保健品中非法添加15种壮阳类化学成分的实心核颗粒色谱分离-HPLC-MS/MS检测方法。方法以高色谱性能的实心核颗粒色谱柱CORTECS-C18(150 mm×4.6 mm,2.7μm)分离,串联四级杆质谱仪检测,MRM模式进行定性定量分析,样品以甲醇为溶剂超声提取,检测添加在性保健品中的甲磺酸酚妥拉明、那红地那非、红地那非、伐地那非、西地那非、羟基豪莫西地那非、豪莫西地那非、氨基他达拉非、他达拉非、硫代艾地那非、伪伐地那非、那莫西地那非、甲睾酮、司坦唑醇和达那唑共15种化学成分。结果 15种壮阳类化学成分质谱检测的分离度较好,线性范围宽,相关性好,r2≥0.995 4;方法精密度以6次测定值的RSD表示,为0.9%~3.3%;方法回收率用3个质量浓度进行添加实验,回收率为88.3%~109.5%,RSD为0.9~5.2%;定量限范围为0.015~0.30μg/m L;日内精密度和日间精密度的RSD分别为0.9%~4.2%和1.0%~4.5%;25批次性保健品中检出阳性样品20批次,检出成分均为西地那非,不合格率达80%。结论本方法通用性强,操作简单,可作为性保健品中非法添加15种壮阳类化学成分的有效检测方法。

保健食品中非法添加降糖药物的测定方法研究

目的探讨实心核颗粒色谱技术与反相高效液相色谱法在保健食品中非法添加降糖药物的测定效果。方法分别采用实心核颗粒色谱技术与反相高效液相色谱法对90批保健食品中非法添加的盐酸二甲双胍、盐酸苯乙双胍、甲苯磺丁脲、格列吡嗪、格列齐特、马来酸罗格列酮、盐酸吡格列酮、格列本脲、格列美脲、格列喹酮及瑞格列奈11种化学药品含量进行测定。实心核颗粒色谱技术与反相高效液相色谱法在降糖类保健食品非法添加降糖药物的测定中的分离度均较好,线性范围均较宽。结果实心核颗粒色谱技术平均回收率在96.8%~104.6%之间,RSD在0.52%~1.92%之间;反相高效液相色谱法平均回收率在96.4%~101.5%之间,RSD在0.43%~2.48%之间。实心核颗粒色谱技术检出19批保健食品存在非法添加降糖药物,检出率21%;反相高效液相色谱法检出18批保健食品存在非法添加降糖药物,检出率20%;两种方法检出率差异不明显。结论实心核颗粒色谱技术与反相高效液相色谱法均具有操作简便、准确及重现性好等优点,且实心核颗粒色谱技术不会受到高浓度盐酸影响从而避免管路堵塞问题,适用性更高。

脊髓灰质炎病毒颗粒分离纯化方法学评价

目的比较3种不同密度梯度离心方法对脊髓灰质炎病毒空心颗粒、实心颗粒的分离效果。方法选择蔗糖密度梯度离心、氯化铯密度梯度离心、Optiprep(碘克沙醇溶液)密度梯度离心方法,对脊髓灰质炎病毒进行纯化,抽取离心之后的蛋白条带,通过计算蛋白回收率、SDS-PAGE分析、病毒颗粒透射电镜观察,评价其对病毒空心颗粒、实心颗粒的分离效果。结果病毒液经蔗糖、氯化铯和Optiprep 3种介质超速离心,均能分离空心颗粒和实心颗粒。氯化铯密度梯度离心法蛋白回收率优于Optiprep及蔗糖密度梯度离心法;Optiprep密度梯度离心法蛋白纯度优于氯化铯及蔗糖密度梯度离心法。结论通过蛋白回收率、SDS-PAGE分析、病毒颗粒透射电镜观察初步评价了3种方法对脊髓灰质炎病毒空心颗粒和实心颗粒的分离效果,为脊髓灰质炎病毒分离纯化提供了参考。

柯萨奇病毒A6型空心和实心病毒抗原检测系统的建立和应用

目的建立和应用柯萨奇病毒A6型(Coxsackievirus A6,CV-A6)空心和实心病毒抗原检测系统。方法利用蔗糖密度梯度分离CV-A6空心和实心病毒颗粒,采用CV-A6病毒纯化液免疫Balb/c小鼠,筛选出特异性强的CV-A6空心和实心病毒单克隆抗体,进行效价测定;CV-A6单克隆抗体与多克隆抗体进行酶联免疫吸附试验双抗夹心系统匹配,建立病毒抗原检测系统,验证其线性、灵敏度、结合能力和特异性;应用其检测CV-A6疫苗研发过程中的抗原含量。结果本研究获得了特异性强的CV-A6空心和实心病毒颗粒单克隆抗体,效价分别为10^(7)和10^(6);分别与CV-A6兔多克隆抗体匹配出ELISA双抗夹心病毒抗原检测系统。该系统与其他肠道病毒无交叉反应,与CV-A6空心和实心病毒抗原含量存在明显的剂量效应关系,对CV-A6疫苗研究过程中的各工序段样品含量的检测结果准确。结论本研究建立的CV-A6空心和实心病毒抗原检测系统符合定性和定量检测需求,为CV-A6疫苗研究提供了一种快捷和准确的抗原含量检测方法。

连铸保护渣技术的发展方向

本文论述了连铸保护渣技术的发展历史,保护渣技术进步与连铸技术发展的关系,我国连铸保护渣生产现状、存在问题和解决的办法,并介绍了国外先进的连铸保护渣最新的技术。

柯萨奇病毒A组2型生物化学特性及免疫原性分析

柯萨奇病毒A组2型(Coxsackievirus A2,CV-A2)每年引起的手足口病病例数不断增加,甚至导致死亡病例[1]。因此,急需对CV-A2的生化特性及免疫原性进行分析,顺利研制出CV-A2的手足口病疫苗。通过细菌表达结构蛋白全长或部分片段的GST融合蛋白,纯化CV-A2病毒颗粒;将纯化的病毒颗粒免疫动物后制备兔抗CVA2 VP1-VP4抗体及CV-A2病毒抗血清,通过免疫印染法(Western Blot,WB)、SDS-PAGE电泳法对CsCl密度梯度纯化的CV-A2的空心颗粒(EP)与实心颗粒(FP)的蛋白组分、纯度、多聚蛋白酶剪切进行分析。WB和间接免疫荧光法证明了抗体具有良好的特异性。EP由VP0、VP1、VP3构成,而FP的VP0被剪切,故由VP1-VP4构成。EP和FP比例为33%和67%,密度分别为.29、1.32 g/cm3,纯度分别为94.7%和97.3%。中和试验结果显示,兔抗全病毒抗体具有中和作用,而兔抗CV-A2 VP1-VP4抗体不具有中和作用。本研究建立了CV-A2纯化病毒结构蛋白的分析方法,研究了重组病毒蛋白及病毒颗粒的免疫原性及持久性,对包括CV-A2的手足口病多价疫苗研究质量控制提供数据支持。

柯萨奇病毒A组4型生物化学特性及免疫原性分析

对引起手足口病的肠道病毒A组4型进行生物化学特性及免疫原性的研究。利用大肠杆菌表达结构蛋白全长或部分片段的GST融合蛋白,纯化CV-A4病毒颗粒,制备兔抗CV-A4 VP1~VP4蛋白及抗CV-A4病毒颗粒抗血清。以免疫印迹法(Western blotting,WB),结合SDS-PAGE电泳法,对CsCl密度梯度纯化的CV-A4的空心颗粒(EP)与实心颗粒(FP)的蛋白组分、纯度、多聚蛋白酶剪切进行分析。以微量中和法测定以上6种抗原免疫的兔或小鼠血清中和抗体效价,评估免疫原性。WB和间接免疫荧光法证明了抗体特异性。EP由VP0、VP1和VP3构成,而FP的VP0被剪切,故由VP1-VP4构成。EP和FP比例分别为41%和59%。CsCl密度分别为1.26 g/cm^(3)和1.34 g/cm^(3),纯度分别为70.5%和96.3%。中和试验显示,兔抗全病毒抗体具有中和作用,而兔抗CV-A4VP1~VP4结构蛋白抗体不具有中和作用。免疫原性强弱为:FP>EP>VP1-VP4。本研究建立了CV-A4纯化病毒结构蛋白的分析方法,研究了重组病毒蛋白及2种病毒颗粒的免疫原性及免疫持久性。对包括CV-A4的手足口病多价疫苗的研发策略以及质量控制具重要意义。