实时无标记细胞分析系统与传统MTT法在测定乳腺癌细胞增殖中的比较

目的:通过实时无标记细胞分析法与传统MTT法对乳腺癌细胞增殖进行监测以对比确定研究细胞增殖的最佳实验方法手段。方法:采用MTT法、实时无标记细胞分析法测定瘦素刺激乳腺癌MCF-7细胞增殖的效果。结果:MTT法和实时无标记细胞分析法结果均表明瘦素作用浓度为0.625 nmol/L、作用时间为24 h的条件下对乳腺癌MCF-7细胞有诱导生长的效果。但实时无标记细胞分析法能够实时监测细胞生长和增殖的动态生物学反应过程,观察效果更加直观、准确。结论:实时无标记细胞分析法可较好地弥补MTT法的缺点,成为一种新的研究细胞增殖的实验方法。

RTCA技术检测NK细胞联合西妥昔单抗对结直肠癌细胞的杀伤效应

目的:利用实时无标记细胞分析技术(RTCA)检测NK细胞介导的抗体依赖细胞介导的细胞毒(ADCC)作用。方法:采用Ficoll密度梯度离心法分离正常外周血的单个核细胞(PBMC),PBMC在体外经K562工程细胞及细胞因子诱导活化扩增为NK细胞(14 d),采用流式细胞仪检测NK细胞表面分子及分析其纯度,采用RTCA技术及乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测NK细胞毒作用,RTCA检测NK细胞联合西妥昔单抗对结直肠癌细胞株杀伤作用。结果:流式细胞结果显示,经过14 d体外扩增培养后NK细胞的纯度可达86.2%;NK细胞毒作用结果显示,随着效靶比的增加(1∶1、5∶1、10∶1),LDH和RTCA检测NK细胞的杀伤作用趋势基本一致;RTCA结果显示NK细胞联合西妥昔单抗对结直肠癌细胞株杀伤作用明显高于单一的NK细胞组。结论:RTCA技术为检测NK细胞介导的ADCC作用提供了一种简便、动态及灵敏的新方法。

RTCA法用于医疗器械细胞毒性检测的研究

目的通过实时无标记细胞分析法(real time cell analysis,RTCA)与MTT法的比较研究,探讨RTCA法用于医疗器械细胞毒性常规检测的可行性。方法首先,通过筛选细胞接种密度建立基于L929细胞的RTCA细胞毒性检测方法。然后,使用不同浓度的DMSO稀释液、标准对照材料浸提液、56批真实世界的医疗器械产品,从简单到复杂分别比较RTCA法与MTT法用于细胞毒性检测结果的一致性,并且汇总多次试验的阴性对照和阳性对照结果,比较两种方法的可重复性。结果RTCA法检测不同浓度的DMSO稀释液没有剂量效应关系,检测标准对照材料浸提液与MTT法结果完全一致并高度相关(R=0.9898),检测56批医疗器械产品与MTT法结果一致率为80.4%,仅中度相关(R=0.6183)。RTCA法的可重复性不比MTT法好。结论RTCA法能有效检测医疗器械细胞毒性,但是部分产品可能因溶出物干扰检测结果而不适用。RTCA法作为一种新型的医疗器械细胞毒性检测方法的适用性还需要进一步研究。

基于RTCA技术研究抗体偶联药物的旁观者效应的检测方法

目的 利用实时无标记细胞分析(RTCA)系统评估抗体偶联药物(ADC)的旁观者效应。方法 采用RTCA系统监测抗原阳性细胞(Ag^(+))和抗原阴性细胞(Ag^(-))的共培养状态,观察Ag^(-)的细胞存活情况;采用重复实验验证结果的可靠性和一致性,并采用单因素方差分析比较不同细胞比例培养组在单个时间点的Ag^(-)存活率。结果 加入抗体偶联药物后,随着共培养时间的延长,Ag^(-)存活率下降;此外,在单个时间点(96 h)上,与0%Ag^(+)细胞的Ag^(-)细胞存活率相比,10%Ag^(+)细胞的Ag^(-)细胞存活率为89.07%(P=0.156),25%Ag^(+)细胞的Ag^(-)存活率为68.93%(P=0.0026),50%Ag^(+)、75%Ag^(+)和90%Ag^(+)细胞的Ag^(-)存活率分别为35.28%、13.99%和12.02%(P<0.0001)。在 Ag^(+)细胞比例为25%~90%时,旁杀伤效果显著;重复性结果显示不同Ag^(+)细胞的旁杀伤率的相对标准偏差(RSD)均小于30%。结论 结合RTCA技术和共培养方式的方法,可以更准确地模拟旁观者效应的生物学过程,为后续的抗体偶联药物开发提供有价值的参考。

实时无标记细胞分析系统(RTCA)在药物心肌毒性检测和生物活性研究中的应用

实时无标记细胞分析系统(Real timexCELLigence analysissystem,RTCA)是一种新型细胞检测技术,能够连续监测、记录及分析细胞活动产生的各种信息,在药物研究中的心肌毒性评估和细胞生物活性考察方面都可以发挥重要作用。文中首先对RTCA的原理与特点进行了介绍,然后分别对RTCA在心肌毒性和细胞生物活性研究中的应用现状进行了综述,为了解和使用RTCA提供了参考。RTCA技术具有实时无标记、非侵入性、高通量、准确性高等特点,不仅有助于药物研究和新药开发,在其他一些领域也有着广阔良好的应用前景。

慢病毒转导敲低Smad7表达对大鼠原代心肌成纤维细胞增殖、迁移、细胞表型分化和Ⅰ型胶原蛋白表达的影响

目的探讨Smad7敲低后对原代心肌成纤维细胞增殖、迁移、胶原分泌和细胞表型转化的影响。方法原代培养10只SD大鼠乳鼠的心肌成纤维细胞,免疫组织化学染色鉴定细胞。采用慢病毒转染方法敲低心肌成纤维细胞Smad7的表达,Western blotting验证Smad7蛋白敲低效率,实时无标记细胞仪检测心肌成纤维细胞的增殖情况,细胞划痕实验检测细胞的迁移情况,Western blotting检测Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)和细胞表型转化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况。结果成功培养心肌成纤维细胞,并进行细胞鉴定。慢病毒转染的心肌成纤维细胞感染复数(MOI)值为100,转染后88.33%的细胞表达绿色荧光蛋白,慢病毒敲低组Smad7的蛋白表达明显下调(P<0.05)。慢病毒敲低Smad7后细胞增殖明显下降(P<0.01),细胞迁移率明显减少(P<0.01)。与对照组相比,慢病毒敲低组细胞ColⅠ表达明显下降(P<0.01),α-SMA表达明显升高(P<0.01)。结论Smad7表达敲低后,心肌成纤维细胞的细胞功能发生明显改变,这些改变可能与Smad7下调导致心肌纤维化程度加重有关。

罗氏-ACEA非标记实时细胞分析技术专题讨论会在京举行

5月9日北京翠宫饭店，罗氏应用科学公司和ACEA Biosciences公司联袂举行了“非标记、实时细胞分析技术专题讨论会”。会议旨在通过对创实时细胞检测技术的介绍，及其在先进的基因分析平台上的应用讨论，提升整个生命科学研究及药物研发产量和质量。尽管基于细胞的检测技术目前已经被广泛应用；但由于实验过程中使用的标记和报告基因有可能会干扰研究状态下的多个生物学过程，

蜕膜巨噬细胞调控滋养细胞侵袭力的研究

目的探讨蜕膜巨噬细胞对滋养细胞侵袭力的调控。方法取20~35岁女性正常早孕(6~7+6周)行人工流产的蜕膜组织15~20 g。将蜕膜组织充分清洗后使用Collagenase和Dnase消化2次,每次30 min,细胞悬液过滤后通过CD14+免疫磁珠分选,并行免疫荧光鉴定。流式细胞仪分析巨噬细胞M1型(CD80+和CD86+)和M2型(CD163+和CD206+)。获得的巨噬细胞置于6孔板培养,24 h后收集细胞上清。巨噬细胞上清与滋养细胞系HTR-8/SVneo共培养24 h,实时定量PCR检测HTR-8/SVneo的水通道蛋白1(AQP 1)mRNA相对表达量变化,以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9 mRNA相对表达量的变化。应用实时无标记细胞分析技术(RTCA)检测人早孕蜕膜巨噬细胞上清对人滋养层细胞系HTR-8/SVneo侵袭力的影响。结果成功建立人类早孕蜕膜巨噬细胞体外培养体系。流式细胞检测显示,人类正常早孕蜕膜组织中巨噬细胞以M2型为主,约占全部巨噬细胞的87%。巨噬细胞上清使HTR-8/SVneo的AQP 1和MMP-9 mRNA相对表达量升高(P均<0.001)。RTCA结果显示巨噬细胞上清明显增强HTR-8/SVneo的侵袭力(P <0.001)。结论体外培养条件下,蜕膜巨噬细胞可能通过介导AQP1表达升高而增强滋养细胞的侵袭力。

临床常用中药制剂对OVCAR3细胞的药效学比较

目的比较临床常用中药制剂对OVCAR3细胞OVCAR3的药效学。方法以采用实时无标记细胞分析(RTCA)检测榄香烯注射液、参芪扶正注射液、艾迪注射液、复方苦参注射液、消癌平注射液、康艾注射液、康莱特注射液对OVCAR3细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用,JC-1检测上述药物对肿瘤细胞线粒体膜电位的影响,CCK8法检测它们对正常细胞系MRC-5的毒性作用。结果榄香烯注射液、消癌平注射液、复方苦参注射液、艾迪注射液抑制OVCAR3细胞增殖的IC_(50)值分别为(44.98±0.13)μg/mL、(258.78±6.53)mg/mL、(121.73±1.23)mg/mL、(51.73±0.51)mg/mL,中、高剂量榄香烯注射液有明显抑制OVCAR3细胞迁移的作用;除康莱特注射液外,其他药物都有一定程度抑制OVCAR3细胞侵袭的作用。榄香烯注射液、消癌平注射液在IC_(50)剂量下作用24 h后,可检测到线粒体膜电位的改变。榄香烯注射液、艾迪注射液IC_(50(MRC⁃5))/IC_(50(OVCAR3))均大于1。结论以OVCAR3细胞为对象时,榄香烯注射液抗肿瘤作用最好,其次是艾迪注射液。

多壁碳纳米管致人肝癌细胞HepG2毒性及代谢酶表达变化

采用实时无标记细胞分析系统研究多壁碳纳米管(MWCNTs)对人肝癌细胞HepG2毒性作用,确定MWCNTs是否会影响肝脏代谢酶谷胱甘肽S转移酶P1(GSTP1)和细胞色素P450亚酶CYP1A1的表达。利用0.12、0.25、0.5、1和2 mg/mL的MWCNTs处理HepG2细胞24、48和72h后,采用噻唑蓝比色法(MTT)测定MWCNTs对肝癌细胞HepG2增殖的抑制作用。利用实时无标记动态细胞分析(RTCA)系统动态监测不同剂量(0.25、0.5、1 mg/mL)MWCNTs对HepG2细胞生长的影响。细胞经MWCNTs处理48 h后,实时定量荧光PCR(RT-PCR)和蛋白质印迹法(Western Blot)检测肝脏代谢酶GSTP1和CYP1A1的mRNA水平和蛋白水平的变化情况。结果显示MWCNTs可以抑制HepG2细胞的增殖,且呈一定的剂量和时间依赖性。实时无标记细胞分析法能够准确监测MWCNTs对细胞增殖的过程,并且能避免多壁碳纳米管材料对数据的干扰。经MWCNTs处理后的细胞中肝脏代谢酶GSTP1mRNA水平和蛋白水平上调,而CYP1A1的mRNA水平和蛋白水平显著下降。

脐血来源NK细胞的体外扩增及其抗肿瘤细胞活性的研究

目的研究脐血单个核细胞来源NK细胞的培养方法及其对不同类型肿瘤细胞的杀伤活性。方法自脐静脉消毒后全封闭采集脐血,肝素抗凝,分离单个核细胞,用NK细胞培养基培养14 d,流式细胞仪检测其表面标志,并使用RTCA实时无标记细胞分析技术检测细胞增殖曲线,观察NK效应细胞按效靶比1:1、5:1与10:1对肿瘤细胞的杀伤作用。结果培养14 d的脐血单个核细胞,细胞总数扩增294倍,其中NK细胞扩增5580倍。NK细胞CD3^(-)CD56^(+)阳性率为97.93%,与杀伤功能相关的重要分子CD16、NKG2D、NKp30、NKp44的表达阳性率均在95%以上。对A549肺癌细胞株作用6 h的杀伤活性,在1:1~10:1效靶比范围内,随着效靶比增加,杀伤活性从(78.16±2.41)%逐渐增强到(95.71±3.21)%;并且在效靶比1:1的情况下,随着作用时间从6 h延长到24 h,杀伤活性也从(78.16±2.41)%逐渐增强到(96.33±2.15)%。结论建立了无需分选细胞、无需滋养层细胞、操作简单、通用性强的脐血NK细胞培养方法,获得的NK细胞纯度高,对肿瘤细胞的杀伤作用强。

基于实时无标记细胞分析系统的气道平滑肌细胞收缩舒张效应检测方法的建立

该研究利用实时无标记细胞分析系统(xCELLigence real-time cell analysis system,RTCA)建立气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)收缩舒张效应检测方法。筛选适宜细胞接种密度,接种于RTCA检测板中监测细胞动态生长曲线;利用组胺刺激细胞收缩,并计算组胺半数抑制浓度(IC50);在适宜组胺刺激浓度的基础上,利用特布他林模拟细胞舒张效应,并计算半数有效浓度(EC50)。结果显示,ASMCs为4000个/孔接种密度培养于(16±4)h区间内,符合后续实验需求;组胺作用ASMCs 2 h后的IC50为8.07 mmol/L,故选择8 mmol/L组胺刺激ASMCs可见较为明显的收缩效应;特布他林作用ASMCs 2 h后的EC50为8.08×10–8 mol/L,故浓度为10μmol/L和20μmol/L的特布他林可检测到明显舒张效应(P<0.05)。利用RTCA可以稳定、有效、可靠地检测ASMCs收缩舒张效应,为以ASMCs为主要研究对象的呼吸系统疾病提供参考数据和准确的检测方法。

罗氏xCELLigence系统：实时、无标记细胞分析检测技术

目前，大部分细胞检测方法采用的仍是传统的终点法——仅仅给实验定格了一个最终结果，而且经常需要标记和破坏细胞。这就是当前细胞分析方法的最大局限性，因为细胞是活体，其生物学和细胞效应过程应该是动态而非静态的。因此，为了更充分的了解和测量生物学和细胞效应，最理想的选择应当是使用一种对细胞无侵入性的系统，并能检测到细胞对某些刺激（如药物处理或某种生长因子刺激）应答产生的全过程动态反应信息。

罗氏xCELLigence：非标记的、动态实时细胞分析检测技术

目前，大部分细胞检测方法采用的仍是传统的终点法——仅仅给实验定格了一个最终结果，而且经常需要标记和破坏细胞。这就是当前细胞分析方法的最大限制，因为细胞是活体，其生物学和细胞进程是动态而非静态的。因此，为了更充分的了解和测量生物学和细胞进程，应当使用一种非侵入性的系统，来记录细胞应答某些刺激（如药物处理或某种生长因子刺激）时所产生的动态变化。

实时细胞分析技术与Alamar Blue法用于测定纳米氧化铜细胞毒性的比较研究

目的通过比较研究实时细胞分析技术(real time cell analyze,RTCA)及Alamar Blue法测定纳米氧化铜体外作用于人胚肺成纤维细胞MRC-5及人正常肺上皮细胞BEAS-2B的毒性作用,探讨RTCA实时细胞分析技术用于测定纳米材料体外细胞毒性的可行性。方法分别将MRC-5及BEAS-2B细胞接种于RTCA配套16孔板中及普通96孔板中,96孔板中细胞用于Alamar Blue法测定细胞毒性。分别用剂量为0.75g/L、0.38g/L、0.19g/L、0.094g/L、0.047g/L的纳米氧化铜混悬液进行染毒。选择12h、24h、36h、48h、60h时间点计算两种方法测得的IC50值。采用SPSS 16.0分析软件,利用配对t检验,对两种方法所得相同时间点的IC50值进行统计分析,判断其相关性及是否存在差异。结果 MRC-5细胞用RTCA法测定染毒后12 h、24 h、36 h、48 h、60 h的IC50值分别为391 mg/L、249 mg/L、185 mg/L、165mg/L、147mg/L;Alamar Blue法所得相同时间点的IC50值分别为507 mg/L、206 mg/L、172 mg/L、154mg/L、95.2mg/L。两种方法所测得IC50值进行统计分析,差异无统计学意义。BEAS-2B细胞用RTCA法测定染毒后12h、24h、36h、48h、60h的IC50值分别为131 mg/L、83.78 mg/L、65.37 mg/L、53.98mg/L、51.23 mg/L;Alamar Blue法所得相同时间点的IC50值分别为148 mg/L、104 mg/L、77.3mg/L、42.5mg/L、39.2mg/L。两种方法所测得IC50值进行统计分析,差异无统计学意义。结论RTCA实时监测法与Alamar Blue法在相同时间点测定纳米氧化铜体外细胞毒性得IC50值差异无统计学意义,说明RTCA实时监测法测定体外细胞毒性结果可靠,适用于纳米材料的体外毒性研究。

基于实时细胞分析技术评价注射用益气复脉(冻干)类过敏反应

目的建立中药注射剂体外类过敏反应评价方法,快速评价不同批次注射用益气复脉(冻干)类过敏反应表现。方法体外培养嗜碱性白血病细胞株RBL-2H3细胞,选择Compound 48/80为阳性药,采用实时细胞分析(real-time cell analysis,RTCA)系统检测药物干预后引起的细胞指数(CI)值变化,并利用甲苯胺蓝、鬼笔环肽染色观察细胞形态、骨架变化,以及检测组胺和β-已糖苷酶释放量验证RBL-2H3细胞的脱颗粒情况。选择20个批次的注射用益气复脉(冻干,100μg/m L)作用于RBL-2H3细胞,进行基于RTCA技术的类过敏反应评价。结果阳性药Compound 48/80(20μg/m L)能够使RBL-2H3细胞的CI值在加药后30 min内呈先快速上升后下降趋势;形态学研究发现,Compound 48/80使细胞形态和细胞骨架均发生明显改变,发生明显的脱颗粒现象;组胺和β-己糖苷酶释放实验进一步证实Compound 48/80导致炎症介质的释放,引起了明显的脱颗粒现象;提示RTCA系统可以用于快速敏感的评价RBL-2H3细胞脱颗粒。不同批次的注射用益气复脉(冻干)对RBL-2H3细胞CI值无明显影响,提示所选批次为合格批次,无类过敏反应现象的发生。结论建立了一套基于RTCA系统的类过敏反应体外快速评价技术,可用于注射用益气复脉(冻干)等中药注射剂类过敏反应的体外快速评价。

基于实时细胞分析技术验证人诱导多能干细胞分化的心肌细胞毒性评价模型

目的:利用人诱导多能干细胞分化的心肌细胞(hiPSC-CMs)联合实时细胞分析(RTCA)技术,建立hiPSC-CMs体外心脏毒性评价模型,并选用阳性化合物进行验证。方法:研究选用商业化来源的hiPSC-CMs,选用不同作用机制的心脏毒性药物:蒽环类抗癌药阿霉素(0.3、1、3μmol·L^-1)、K+通道阻滞剂多非利特(0.03、0.1、0.3μmol·L^-1)和E-4031(0.1、0.3、1μmol·L^-1)、Na+通道阻滞剂美西律(3、10、30μmol·L^-1)、多离子通道阻滞剂维拉帕米(0.1、0.3、1μmol·L^-1)和苄普地尔(0.3、1、3μmol·L^-1)、抗组胺药物特非那定(0.3、1、3μmol·L^-1)和西沙必利(3、10、30μmol·L^-1),分别给予hiPSC-CMs作用48 h,采用RTCA技术连续监测心肌细胞搏动的频率、振幅、细胞指数、搏动图谱等指标在给药前后的变化。结果:阿霉素对心肌细胞的抑制作用呈现时效和量效依赖性特点;多非利特显著降低心肌细胞搏动幅度及频率;E-4031为1μmol·L^-1时显著降低心肌细胞搏动频率,缩短振幅,而0.1、0.3μmol·L^-1时则对心肌细胞无影响;30μmol·L^-1美西律作用2 h内心肌细胞搏动频率相对空白对照组降低了66.4%,振幅缩短了60.7%,并导致心肌细胞搏动周期延长;苄普地尔浓度低于1μmol·L^-1时对心肌细胞无影响,3μmol·L^-1苄普地尔作用2 h导致心肌细胞搏动间歇性停搏,并伴随细胞活力轻微下降;维拉帕米作用2 h内各剂量组心肌细胞搏动频率分别增强了12.2%、13.1%、52.3%,而振幅分别降低了20.0%、61.7%、67.6%。0.3μmol·L^-1以上浓度的维拉帕米导致心肌细胞搏动骤停(3/9);特非那定浓度≥1μmol·L^-1时短时间内即导致心肌细胞间歇性搏动骤停;西沙必利短期作用2 h内显著降低心肌细胞搏动频率和幅度,10μmol·L^-1以上浓度的西沙必利持续抑制心肌细胞搏动频率。结论:hiPSC-CMs结合RTCA技术可用于预测药物的心脏毒性风险。

当归多糖改善大鼠急性心肌缺血损伤作用的研究

目的:确定当归多糖(ASP)对急性心肌梗死后心肌缺血损伤的作用。方法:在H9c2细胞中建立氧糖剥夺(OGD)的体外缺血模型。运用实时无标记细胞分析技术(RTCA)分析ASP对细胞指数(CI)的影响。采用冠状动脉左前降支结扎术在SD大鼠上建立体内缺血模型,通过HE染色观察不同浓度ASP(100 mg/kg,200 mg/kg,400 mg/kg)对心肌缺血损伤面积的影响。结果:RTCA分析显示:与OGD组相比,ASP干预显著增加心肌CI(P<0.05)。HE染色结果显示:与模型组相比,ASP处理降低了心肌缺血损伤面积,且呈剂量依赖性(P<0.05)。结论:ASP在急性心肌梗死中具有改善心肌缺血损伤程度的作用。

Cas9蛋白对亲骨转移人乳腺癌细胞株生物学性质和超微结构的影响

目的:构建表达Cas9蛋白的亲骨转移人乳腺癌细胞株,并研究Cas9蛋白的表达对细胞生物学性质和超微结构的影响,为利用CRISPR/Cas9技术研究乳腺癌骨转移分子机制提供实验基础。方法:通过慢病毒载体介导Cas9蛋白基因转染亲骨转移人乳腺癌细胞株MDA-MB-231BO,通过G418筛选转染细胞,采用流式细胞术、Western blot、免疫细胞化学验证Cas9基因转染是否成功;运用实时无标记动态细胞分析技术和细胞划痕实验检测Cas9蛋白表达对细胞增殖及迁移的影响;透射电镜观察Cas9蛋白表达对细胞超微结构的影响。结果:成功构建稳定表达Cas9蛋白的亲骨转移人乳腺癌细胞株MDA-MB-231BO-Cas9,Cas9蛋白的表达对细胞的增殖、迁移和超微结构无明显影响。结论:MDA-MB-231BO-Cas9细胞可用于CRISPR/Cas9技术进一步研究。

脂多糖刺激多能干细胞诱导人源心肌细胞与大鼠心肌细胞的体外模型比较

目的比较脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)对多能干细胞诱导的人源心肌细胞(human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes,hiPS-CMs)及原代新生大鼠心肌细胞(cardiomyocytes,CMs)的影响。方法不同浓度LPS处理hiPS-CMs和原代新生大鼠CMs 24~48 h,通过实时无标记细胞分析技术(xCELLigence Real-Time Cell Analyser Cardio system RTCA)观察hiPS-CMs和原代新生大鼠CMs的电生理变化;qRT-PCR方法检测NPPB mRNA表达水平和qPCR阵列法检测炎性基因表达水平。结果不同浓度LPS刺激后,原代新生大鼠CMs的电生理变化为搏动频率增加和搏动幅度减少(P<0.01),NPPB mRNA表达水平增加(P<0.01)。在hiPS-CMs中,相对应的LPS浓度刺激未能引起搏动幅度和搏动频率显著变化(P>0.05),NPPB mRNA表达水平未显著增加(P>0.05)。进一步增加浓度(2.5μg/mL~40μg/mL),hiPS-CMs的搏动幅度和搏动频率仍未发生明显变化(P>0.05),NPPB mRNA在高浓度LPS(5μg/mL~40μg/mL)发生差异性改变(P<0.01)。最后,在炎症相关基因表达方面,原代新生大鼠CMs表现为C3、Gpnmb、Atf3、Il6r和Ly96基因水平上调至1.5倍,hiPS-CMs表现为AK4、TOLLIP、SPP1、FABP1、IL6R、LY96和C3基因水平上调至1.5倍。结论与原代新生大鼠CMs相比,hiPS-CMs受到LPS的损伤明显减轻,表现出不同的炎症基因表达模式。