鸳鸯鸭恒定链两异构体组织转录模式研究

为探索鸳鸯鸭恒定链(MDIi)两种异构体MDIi-1和MDIi-2在不同组织或器官中的转录模式,建立了检测MDIi-1和MDIi-2组织转录的实时相对定量PCR方法,检测并分析了MDIi-1和MDIi-2在不同组织或器官中的转录特点。结果显示MDIi-1在法氏囊底部的转录水平为各组织或器官中最低(设为校正器);和校正器比较,MDIi-1在脾和小肠黏膜呈最高水平转录,而法氏囊颈部、肝、肾、胸腺和血液也呈较高水平转录,其他器官均低水平转录;MDIi-2在脾、法氏囊颈部和小肠黏膜也呈超过校正器的高水平转录,胸腺、肺和肾的转录水平仅略低于校正器,其他组织或器官转录水平都远低于校正器,呈极低水平转录。同一组织或器官中MDIi-1转录水平远高于MDIi-2,但MDIi-1和MDIi-2在所有被检组织或器官中转录具有很高的相关性,相关性系数达0.850 7。MDIi-1和MDIi-2共转录于所有被检组织或器官中,每一组织或器官中MDIi-1是主要转录形式,在所有被检组织或器官中两异构体均高转录于具有免疫防御功能的器官或组织,MDIi-1和MDIi-2差异性转录的试验结果为后续两异构体功能机制和基于MDIi的基因疫苗研究提供了基础资料。

胃癌患者外周血单个核细胞HLA基因表达研究

目的探讨胃癌患者外周血单个核细胞(PBMC)HLA-A、HLA-B、HLA-DP、HLA-DR、HLA-G基因的表达水平及对胃癌的临床应用价值。方法设计HLA-A、HLA-B、HLA-DP、HLA-DR、HLA-G基因引物和实时荧光PCR相对定量法反应体系,在ABI7500实时荧光定量PCR仪上检测43例胃癌患者和22例健康人PBMC内基因表达水平并分析其差异。结果(1)胃癌患者HLA-A、HLA-B、HLA-DP、HLA-DR、HLA-G的mRNA相对表达量分别为0.71±0.26、0.61±0.37、0.91±0.33、0.90±0.38、0.77±0.27。健康组分别为1.23±0.60、1.17±0.60、1.07±0.68、1.12±0.55、0.98±0.37。与健康组相比,胃癌患者HLA-A、HLA-B、HLA-G表达水平降低,差异有统计学意义。HLA-DP和HLA-DR则无明显差异。(2)在不同分化的胃癌患者中,HLA-A、HLA-B、HLA-DP、HLA-DR和HLA-G的mRNA表达水平无明显差异。胃癌Ⅰ期+Ⅱ期的HLA-G表达水平高于Ⅲ期+Ⅳ期,差异有统计学意义。不同分期的HLA-A和HLA-B的表达水平无明显差异。结论胃癌患者PBMC的HLA-A、HLA-B、HLA-G的基因表达水平下调且HLA-G不同分期间存在差异。检测PBMC的HLA-A、HLA-B、HLA-G基因表达水平有助于胃癌的诊断和研究。

肝癌患者血清端粒酶逆转录酶mRNA表达研究

【目的】探讨肝癌患者血清端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)mRNA表达水平及对肝癌的临床应用价值。【方法】设计人端粒酶逆转录酶基因引物和实时荧光PCR相对定量法反应体系,在ABI7500实时荧光PCR仪上检测45例肝癌患者,52例病毒性肝炎患者,29例肝硬化患者和58例健康人血清端粒酶逆转录酶mRNA表达水平并分析其差异。【结果】肝癌患者血清hTERT mRNA水平明显高于肝炎、肝硬化患者及健康人。肝癌患者血清hTERT mRNA相对表达量与肿瘤大小和分化等级及分期明显相关,与年龄、性别、以及肿瘤数量无明显关联。【结论】肝癌患者血清hTERT基因表达上调,其升高程度与肿瘤分化与进展相关,检测血清hTERT基因表达水平有助于肝癌的诊断和研究。

2型糖尿病患者外周血有核细胞糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）基因表达研究

目的探讨糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）基因在2型糖尿病患者和健康人外周血有核细胞中表达水平的差异性及其对2型糖尿病发生机制的研究价值。方法设计GSK-3β基因引物，实时荧光RT—PCR相对定量法检测40例2型糖尿病患者和40例健康人PBMC内基因表达水平并分析其差异。结果2型糖尿病患者组GSK-3β的mRNA相对表达量为0．94±0．34，健康组为0．92±0．19，两者比较差异无明显统计学意义（P〉o．05）。结论在2型糖尿病患者外周血有核细胞中GSK-3β的基因相对表达量与健康人相比无明显差异。该结果尚待进一步通过联合检测和扩大样本量来确认。

淋巴瘤患者外周血单个核细胞FOXp3与HLA-B基因表达研究

目的探讨淋巴瘤患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)FOXp3与人白细胞抗原B(human leukocyte antigen,HLA-B),的基因表达水平及对淋巴瘤的临床应用价值。方法设计FOXp3和HLA-B基因引物和实时荧光PCR相对定量法反应体系,在实时荧光定量PCR仪上检测69例淋巴瘤患者和30例健康人外周血单个核细胞内基因表达水平并分析其差异。结果淋巴瘤患者FOXp3和HLA-B的mRNA相对表达量分别为1.46±0.45和0.74±0.22,健康组分别为1.15±0.30和1.05±0.28,两组差异均有统计学意义。在淋巴瘤患者组中,Ⅰ期+Ⅱ期的HLA-B相对表达量高于Ⅲ期+Ⅳ期,差异有统计学意义,而FOXp3未见区别。结论淋巴瘤患者外周血单个核细胞的FOXp3基因表达水平上调,HLA-B的基因表达水平下调且HLA-B不同分期间存在差异。检测PBMC的FOXp3、HLA-B基因表达水平有助于淋巴瘤诊断和研究。

淋巴瘤患者外周血单个核细胞FOXp3与HLA-B基因表达研究

目的探讨淋巴瘤患者外周血单个核细胞（PBMC）FOXp3与HLA—B的基因表达水平及对淋巴瘤的临床应用价值。方法设计FOXp3和HLA—B基因引物和实时荧光PCR相对定量法反应体系，在AP17500实时荧光定量PCR仪上检测69例淋巴瘤患者和30例健康人外周血单个核细胞内基因表达水平并分析其差异。结果（1）淋巴瘤患者FOXp3和HLA—B的mRNA相对表达量分别为1．46±0．45和0．74±0．22，健康组分别为1．15±0．30和1．05±0．28，与健康组相比，淋巴瘤患者外周血PBMC的FOXp3表达水平高于正常人，而HLA—B低于正常人，差异均有统计学意义。（2）在淋巴瘤患者组中，Ⅰ期＋Ⅱ期的HLA—B相对表达量高于Ⅲ期＋Ⅳ期，差异有统计学意义，而FOXp3未见明显区别。结论淋巴瘤患者外周血单个核细胞的FOXp3基因表达水平上调，HLA—B的基因表达水平下调且HLA—B不同分期间存在差异。检测PBMC的FOXp3，HIA—B基因表达水平有助于淋巴瘤诊断和研究。

基于转录组测序的铝胁迫下甘蓝型油菜新内参基因的发掘与引物开发

为了研究甘蓝型油菜在铝胁迫条件下内参基因的稳定性,在受到主要铝毒害的根组织内发掘新内参基因,以甘蓝型油菜耐铝品种赣油杂7号和铝敏感品种蓉油18的苗期根组织为研究材料,对营养液培养的试验材料分别设置对照组(0 h)和2个时间梯度(3,24 h)的铝胁迫(100μmol/L AlCl_(3),pH值4.5)处理组。首先,采用有参考基因组的转录组测序技术(RNA-seq)及FPKM值差异基因表达分析,筛选出符合持家基因特征的5个候选内参基因(Actin7、ARFA1E、SAP5、UXS3、UBC9)。随后,依次进行实时荧光相对定量PCR分析,扩增曲线和熔解曲线分析,LinRegPCR扩增效率分析,geNorm、NormFinder和BestKeeper基因表达稳定性分析,REST 2009相对表达量分析等分析步骤。结果表明,新设计开发的5对候选内参基因引物特异性高。从转录组测序数据中筛选出的4个候选内参基因(Actin7、ARFA1E、SAP5、UXS3)的表达稳定性获得了验证。按表达稳定性的综合排名由高至低排序依次为UXS3、SAP5、ARFA1E、Actin7,其中最优组合为SAP5和UXS3。综上所述,本研究开发的候选内参基因引物特异性高,可以提高铝胁迫试验体系实时荧光相对定量PCR试验的准确性,新发掘的内参基因(Actin7、ARFA1E、SAP5、UXS3),可以作为铝胁迫试验体系实时荧光相对定量PCR试验的新内参基因。