酶联免疫吸附测定法和实时荧光定量PCR法对乙型肝炎的诊断价值比较

目的比较酶联免疫吸附测定法和实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法在乙型肝炎诊断中的应用价值。方法选取120例疑似乙型肝炎患者作为本次研究对象,分别进行酶联免疫吸附测定法以及实时荧光定量PCR法检验。以病理检查为金标准,分析酶联免疫吸附测定法和实时荧光定量PCR法的检查结果,对比两种检查方法的诊断效能,包括特异度、灵敏度以及准确度。结果120例疑似患者经病理检查确诊75例为乙型肝炎。酶联免疫吸附测定法检出阳性74例,阴性46例;实时荧光定量PCR法检出阳性75例,阴性45例。实时荧光定量PCR法检测乙型肝炎的特异度、灵敏度以及准确度分别为93.33%、96.00%、95.00%,均明显高于酶联免疫吸附测定法的73.33%、82.67%、79.17%,差异有统计学意义(χ^(2)=6.4800、6.9963、13.3724,P<0.05)。结论采用实时荧光定量PCR法进行乙型肝炎的检测具有较高的准确率,可以为医生诊断和治疗方案的制定及调整提供良好的依据。

细菌培养法、免疫层析法及实时荧光定量PCR法在孕晚期B族链球菌筛查中的应用对比研究

目的:研究细菌培养法、免疫层析法及实时荧光定量PCR法在孕晚期B族链球菌(Group B Streptococcus,GBS)筛查中的应用价值。方法:选取2021年3月至2023年5月在我院接受产检的孕晚期孕妇154例。以病理活检为金标准,分析GBS筛查结果;对比细菌培养法、免疫层析法及实时荧光定量PCR法单独及联合诊断孕晚期GBS的效能;分析细菌培养法、免疫层析法及实时荧光定量PCR法单独及联合筛查与病理筛查结果的一致性。结果:154例孕晚期孕妇中,经病理活检检出39例孕妇GBS为阳性;三者联合诊断GBS的灵敏度、特异度、准确率、阳性预测值以及阴性预测值均高于细菌培养法、免疫层析法与实时荧光定量PCR法单独检测(P<0.05);三者联合检测与病理结果的Kappa值为0.936,均高于细菌培养法、免疫层析法、实时荧光定量PCR法单独检测。结论:在筛查孕晚期孕妇GBS中,实时荧光定量PCR法联合细菌培养法、免疫层析法诊断效能高于单独检测,可通过三者联合检测为早期诊断孕妇是否感染GBS提供依据。

SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR法测定猴免疫缺陷病毒(SIV)前病毒DNA拷贝数方法的建立

目的建立SYBR GreenⅠ荧光染料实时定量PCR方法,测定猴免疫缺陷病毒(SIV)前病毒DNA。方法巢式RT-PCR扩增SIVmac251病毒RNA gag基因上1360-1837之间的长度为477 bp的片段,将该片段克隆到pGEM T载体上,构建pGEM-SIVgag477质粒。该质粒经大量扩增纯化后定量,10倍系列稀释后,做出标准曲线,作为SIV前病毒DNA荧光定量检测的外标准品。结果应用Roche公司FastStart DNA Master SYBR GreenⅠKit,该标准品可精确定量到10 copies/μL。结论制备的pGEM-SIVgag477质粒外标准品纯度高,SYBR GreenⅠ荧光染料实时定量PCR法特异性、敏感性高,稳定性好,可用于定量测定猴免疫缺陷病毒(SIV)前病毒DNA载量。

猴免疫缺陷病毒(SIV)实时荧光定量PCR检测方法的建立

目的建立快速、敏感、特异的猴免疫缺陷病毒(SIV)TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法,对SIV病毒核酸进行定量检测。方法 RT-PCR扩增SIVmac251保守gag基因序列796 bp片段,进行TA克隆,构建标准品质粒pMD-SIVgag。通过对SIV定量外标准品的定量分析,优化反应体系,检测TaqMan探针实时荧光定量PCR方法的灵敏度、特异性和重复性。结果所建立的SIV QPCR检测方法,质粒DNA模板在107～102拷贝之间表现较好线性和相关性,标准曲线所得斜率为-3.26,相关系数为0.999。检测灵敏度达到200拷贝,方法重复性测试,检测25份临床样品CV%均小于1%。结论建立的SIV QPCR检测方法特异性、敏感性高,稳定性好,可用于定量测定猴免疫缺陷病毒(SIV)核酸拷贝量。

甲基化DNA免疫沉淀-荧光实时定量PCR检测人精浆游离DNA睾丸和附睾特异性甲基化启动子

目的:建立检测精浆游离DNA(cfsDNA)启动子甲基化水平的甲基化DNA免疫沉淀-荧光实时定量PCR(MeDIP-qPCR)方法。方法:提取精液参数正常(6例)和输精管结扎(6例)男性的cfsDNA,将两组不同个体的cfsDNA分别进行混合,超声处理后形成DNA片段,通过MeDIP分离甲基化DNA片段,然后用qPCR方法检测启动子甲基化水平。结果:精液参数正常组的PRAME、PEG10、MORC1、GML、HOXA5、DNMT3L、SNURF、MSH4、DAZ1和CLPB启动子甲基化水平分别为14.93%、2.64%、0.69%、2.66%、17.50%、21.10%、5.98%、2.28%、13.50%和3.86%,明显低于输精管结扎组的121.25%、73.62%、16.25%、42.90%、76.74%、112.40%、59.79%、25.85%、91.90%和64.53%。其中,PRAME、MORC1、GML、HOXA5、DNMT3L、SNURF、MSH4和DAZ1等8个启动子MeDIP-qPCR的检测结果与启动子甲基化芯片结果一致。结论:通过MeDIP-qPCR方法可以定量检测到cfsDNA中的特异性启动子甲基化,为确定cfsDNA中睾丸和附睾特异性甲基化启动子提供了有效途径。

实时荧光定量酶联免疫吸附试验检测HBV-DNA的临床意义

目的:探讨实时荧光定量PCR检测HBV- DNA在乙型肝炎的诊断、治疗及判断病情、预防等方面的临床应用价值。方法:运用实时荧光定量PCR和EL ISA法同时检测了乙型肝炎180例和正常献血员5 6例血清中HBV - DNA的含量及其免疫标志物,并对结果进行对比分析。结果:乙肝大三阳95例HBV - DNA阳性达95例(10 0 .0 0 % ) ,显著高于其它各组(P<0 .0 5 ) ,HBV- DNA含量为4 .8×10 7copies·ml- 1 ;小三阳患者HBV- DNA阳性率低于大三阳组(P<0 .0 5 ) ,但平均病毒含量与大三阳组差异无显著性(P>0 .0 5 ) ,高达2 .1×10 7copies·ml- 1 ;单独HBs Ag阳性和单独HBs Ab阳性组HBV- DNA阳性率分别为5 3.85 %、33.33% ,平均病毒含量分别为5 .6×10 5copies·ml- 1、3.8×10 4 copies·ml- 1 ;献血员5 6例血清HBV- DNA阳性3例,其病毒含量低于其它组。结论:实时荧光定量PCR检测HBV- DNA含量比EL ISA法具有更好的灵敏度和特异性,能准确反映HBV在体内的复制情况,这对临床上抗病毒药物的选择和判断疾病的预后意义重大。

实时荧光定量-PCR和酶联免疫吸附法检测巨细胞病毒-IgM抗体的比较

目的:比较实时荧光定量-PCR和酶联免疫吸附法检测巨细胞病毒-IgM抗体水平的敏感性及准确率。方法:收集108例孕前筛查妇女,同时采用实时荧光定量-PCR和酶联免疫吸附法检测外周血巨细胞病毒-IgM抗体水平,并对这两种检测方法的阳性率进行比较。结果:实时荧光定量-PCR法阳性率为74%,酶联免疫吸附法为57%,两者差异有统计学意义(P<0.05);18例荧光定量-PCR法阳性的妇女血清巨细胞病毒-IgM拷贝数低于10-4/ml。结论:实时荧光定量-PCR与酶联免疫吸附法相比,对巨细胞病毒-IgM抗体检测具有较高的敏感性和准确率,值得临床推广使用。

直接竞争实时荧光定量免疫PCR法测定环境样品中的多溴联苯

多溴联苯（PBBs）作为一种优良的阻燃剂被添加于各种塑料制品和电子产品中,在此类产品后处置过程中PBBs成为一类新的有机污染物流入环境.由于具有与多氯联苯类似的化学结构和难降解毒理特性,现在被很多国家限制使用.对已进入环境中的微量PBBs,建立简便、灵敏的检测方法对于其在环境中的分布调查研究和迁移变化追踪具有重要的实际意义.

HIV阴性免疫力低下患者痰液中耶氏肺孢子的实时荧光定量PCR检测

目的探讨实时荧光定量PCR对HIV阴性免疫力低下合并肺孢子肺炎(PCP)患者的诊断价值。方法选取71例临床存在肺部感染并不能排除PCP的HIV阴性免疫力低下患者的痰液标本,分别运用ITS-巢式PCR法和ITS-实时荧光定量PCR法检测标本中耶氏肺孢子。结果 71例患者中,18名临床诊断为PCP。巢式PCR检测阳性结果 25例,假阳性率为36.00%,灵敏度、特异度、阳性预测值分别为88.89%、83.01%和64.00%。若阈值为103copies/mL,实时荧光定量PCR的特异度和阳性预测值均显著高于巢式PCR。PCP患者中,实时定量PCR检测出耶氏肺孢子的基因载量显著高于非PCP患者。结论在HIV阴性免疫力低下患者中,RT-PCR较巢式PCR能更准确、快速地诊断PCP,并可区分耶氏肺孢子定植与感染。

实时荧光定量PCR法在儿童巨细胞病毒感染诊断中的应用分析

目的分析实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法在人巨细胞病毒(Human cytomegalovirus,HCMV)感染诊断中的应用价值。方法选取2021年1月至2023年3月我院收治的88例疑似HCMV感染患儿,于清晨采集患儿空腹静脉血5ml及新鲜晨尿的中段尿5ml,采用ELISA法测定HCMV-IgM,采用FQ-PCR法测定HCMV-DNA。统计病毒培养法诊断结果;以病毒培养法诊断结果作为金标准,计算HCMV-IgM、HCMV-DNA诊断HCMV感染结果,并计算诊断HCMV感染结果与病毒培养法诊断结果的一致性。结果88例疑似HCMV感染患儿中经病毒培养法诊断HCMV感染60例;以病毒培养法诊断结果作为金标准,HCMV-IgM诊断阳性34例,阴性54例,其中漏诊28例,误诊2例,HCMV-IgM诊断结果与病毒培养法诊断结果一致性差(Kappa=0.370,P=0.000);HCMV-DNA诊断阳性52例,阴性36例,其中漏诊9例,误诊1例,HCMV-DNA诊断结果与病毒培养法诊断结果一致性极好(Kappa=0.757,P=0.000);HCMV-DNA诊断灵敏度、准确度均高于HCMV-IgM,差异有统计学意义(P<0.05);HCMV-DNA与HCMV-IgM诊断特异度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论FQ-PCR法诊断HCMV感染灵敏度、准确度及特异度均较高,FQ-PCR法诊断结果与病毒培养法结果一致性较为理想,能够降低误诊、漏诊风险。

实时荧光定量聚合酶链反应对乙型肝炎病毒DNA的检验效果

目的探讨实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)对乙型肝炎(乙肝)患者进行乙肝病毒(HBV)DNA检验的效果。方法选择2020年9月—2022年10月在菏泽市第三人民医院进行健康体检的1000名受检者作为研究对象,其中500名纳入对照组,依托酶联免疫吸附法(ELISA)法对HBV-DNA开展检测操作;其余500名纳入观察组,运用实时荧光定量PCR法对HBV-DNA开展检测操作,比较两组HBV标志物[包括乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝表面抗体(HBsAb)、乙肝e抗原(HBeAg)、乙肝炎e抗体(HBeAb)、乙肝核心抗体(HBcAb)]的检出率,分析不同阳性组合分布情况。结果观察组的HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb检出率均明显高于对照组(HBsAg:1.40%比0.20%,HBsAb:1.80%比0.40%,HBeAg:1.80%比0.20%,HBeAb:1.20%比0.00%,HBcAb:1.40%比0.00%,均P<0.05)。观察组的大三阳(HBsAg、HbeAg、HbcAb均阳性)、小三阳(HBsAg、HbeAb、HbcAb均阳性)检出率均明显高于对照组(大三阳:1.60%比0.20%,小三阳1.40%比0.20,均P<0.05)。对照组和观察组HBsAg及HBcAb均阳性、HBsAg及HBeAg均阳性、五项均阳性的检出率比较差异均无统计学意义(HBsAg及HBcAb均阳性:0.20%比0.20%,HBsAg及HBeAg均阳性:0.00%比0.20%,五项均阳性:0.20%比0.40%,均P>0.05)。结论应用实时荧光定量PCR法开展对HBV-DNA的检测效果较为突出,有较高的准确度,与ELISA相比应用价值理想。

联合免疫磁化分选技术和实时荧光定量RT-PCR检测结直肠癌外周血肿瘤细胞及其临床意义

目的建立联合应用免疫磁化分选技术和实时荧光定量RT-PCR检测循环肿瘤细胞的方法,并探讨定量检测结直肠癌患者外周血肿瘤细胞的临床意义。方法体外培养结肠癌HCT-116细胞,与5 ml健康人外周静脉血混合,采用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞。分离后的标本分为免疫磁珠富集组(A组)和非富集组(B组),比较实时荧光定量RT-PCR方法检测其中人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达水平。抽取22例初治的结直肠癌患者和22例健康人外周静脉血,标本分为免疫磁珠富集组(C组)和非富集组(D组),健康者标本设为E组,比较三组hTERT-mRNA的表达水平,并探究与临床病理参数的关系。结果 A组hTERT-mRNA表达水平显著高于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。22例结直肠癌患者中,C组hTERT-mRNA表达水平显著高于D组(P<0.05)。结直肠癌患者C组hTERT-mRNA表达水平显著高于健康对照E组(P<0.05)。结直肠癌患者hTERT-mRNA表达水平与患者性别、年龄、肿瘤大小、部位和肿瘤浸润深度无显著相关(P>0.05),与患者淋巴结有无转移和TNM分期呈显著相关(P<0.05)。结论联合应用免疫磁化分选技术和RT-PCR的检测方法 ,通过测定hTERT-mRNA表达水平可定量检测外周血肿瘤细胞,检测灵敏度优于单纯RT-PCR检测方法。结直肠癌患者外周血hTERT-mRNA的表达水平与淋巴结转移和TNM分期显著相关。

实时荧光定量聚合酶链反应与酶链免疫法检测儿童疱疹病毒感染的临床评价

目的：比较实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）与酶链免疫法（ELISA）两种不同方法检测传染性单核细胞增多症儿童及正常儿童疱疹病毒（EBV）感染与临床符合情况。方法：应用实时荧光定量PCR与ELISA法同步平行检测我院2006年1月至6月期间125例被临床诊断为传染性单核细胞增多症的儿童发烧第7天及50例门诊体检健康的儿童血标本中EBV的检出率。结果：125名传染性单核细胞增多症儿童中，其中l周岁以下20名，4周岁～10周岁105名，PCR法检出124例，阳性符合率99．2％。ELISA法检出107例阳性符合率85．6％，但1周岁以下的20名儿童，PCR法检出19例，阳性符合率95％，而ELISA法检出10例，阳性符合率仅为50％；50例健康儿童。PCR法检出49例，阴性符合率98％，ELISA法检出42例，阴性符合率84％。结论：PCR法与ELISA法比较，前者的阳性及阴性检出率均明显优于后者，特别是对于1周岁以下的儿童。与ELISA法相比PCR法是一个快速、敏感、特异的检测方法，可帮助临床明确诊断及早治疗。

实时荧光定量和免疫组化法检测直肠癌微转移的价值

目的探讨术中应用实时荧光定量法和快速免疫组化法检测直肠癌前哨淋巴结微转移的价值。方法收集笔者所在医院术前经影像学或直肠活检被诊断为直肠癌的患者27例,术中在直肠癌标本取下后,寻找肠旁淋巴结作为前哨淋巴结,术中应用实时荧光定量法和快速免疫组化法检测前哨淋巴结微转移的状况,并与术后常规病理学检测的结果进行比较。结果常规病理分析与CEA快速IHC及CK20快速IHC比较,差异无统计学意义(P>0.05);常规病理分析与CEA及CK20实时荧光定量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论实时荧光定量和快速免疫组化法检测前哨淋巴结的微转移可用于术中对直肠癌前哨淋巴结微转移的检测,但样本量尚小,值得进一步扩大样本进行研究。

酶联免疫吸附法和实时荧光定量PCR法检验EB病毒的效果比较

EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)为具传染性单核细胞增多症病原体,与鼻咽癌、儿童淋巴瘤发生发展密切相关[1]。该病主要通过唾液传播,一般发生于幼儿,经口咽上皮细胞增殖后,引发B淋巴细胞感染,后进入血液循环引发全身性感染,急性期主要表现为咽炎、发热、淋巴结炎等上呼吸道感染症状,急性期后会持续发生低热、疲劳等症状,尤其免疫缺陷者感染EB病毒后死亡风险较高,因此需尽早鉴别诊断,并实施针对性治疗,以快速改善患者临床症状,保障其生命安全[2-3]。

检测B细胞成熟抗原的噬菌体展示单链抗体实时荧光定量免疫PCR方法建立

目的建立检测B细胞成熟抗原(BCMA)的噬菌体展示单链抗体实时荧光定量免疫PCR(PDRT-IPCR)方法。方法采用无缝克隆技术将抗体ANTI-BCMA片段连接入噬菌体M13KO7中,构建重组噬菌体质粒M13KO7-ANTI-BCMA,保存于E.coli DH5α感受态细胞中,通过PEG/NaCl溶液低温沉降后获得重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA。采用Western Blotting法鉴定重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA是否展示抗BCMA单链抗体。以不同浓度的BCMA包被96孔高吸附酶标板,加入重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA,热裂解后,以裂解噬菌体的DNA作为扩增模板,进行实时荧光定量PCR,观察不同浓度BCMA的实时荧光定量PCR扩增曲线。运用OriginPro2021软件进行四参数Logistic拟合曲线,根据相关系数R^(2)确定线性范围,计算最低检测限。以重组噬菌体M13KO7-ANTI-CD19和噬菌体M13KO7为对照,验证PDRT-IPCR方法检测BCMA的特异性。结果抗BCMA单链抗体成功展示在重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA表面。随着BCMA包被浓度的降低,对应扩增曲线的CT值逐渐变大,PDRT-IPCR检测BCMA的线性范围为0.1 ng/mL~1000 ng/mL,R^(2)为0.9993,最低检测限为0.077 ng/mL。重组噬菌体M13KO7-ANTI-BCMA与BCMA的结合是特异性的。结论本研究建立了检测BCMA的PDRT-IPCR方法,该检测方法具有检测限灵敏、线性范围宽、特异性高等特点。

实时荧光定量PCR在测定艾滋病患者肠道菌群量变化中的应用及意义

目的:应用实时荧光定量PCR观察艾滋病患者肠道菌群量的变化,研究艾滋病对肠道微生态的影响及其在发病中的作用。方法:分别设计双歧杆菌属、乳酸杆菌属、大肠杆菌、粪肠球菌及屎肠球菌的特异性引物。收集艾滋病患者粪便标本30份及正常对照标本30份,提取细菌基因组DNA,应用实时荧光定量PCR反应测定5种细菌的数量。结果:艾滋病患者组双歧杆菌属、乳酸杆菌属的数量较正常对照组明显减少;大肠杆菌、粪肠球菌、屎肠球菌数量明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:艾滋病患者肠道微生态发生了明显变化,提示艾滋病患者肠道微生态紊乱。

鸡三种天然免疫相关受体和配体荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为建立检测鸡天然免疫相关受体(Ch-MDA5、Ch-TLR3和Ch-TLR7)及其相应配体(MAVS、TRIF和MyD88)的荧光定量PCR方法并评价其应用效果,设计和筛选特异性PCR引物,制备各基因的质粒标准品,绘制荧光定量PCR的标准曲线,并对方法的灵敏度、重复性和特异性进行检验。结果表明,所建立的检测方法敏感度高、特异性强、检测线性范围广、重复性好。应用建立的方法检测新城疫油乳剂灭活苗免疫SPF鸡后上述基因表达的变化,发现免疫后6h各基因的表达水平达到峰值,表明疫苗免疫迅速有效地激活了机体的天然免疫应答。建立了与鸡抗病毒感染天然免疫相关的3种细胞受体和相应配体的定量检测方法,可应用于病毒致病机制、鸡用新型疫苗、免疫增强剂以及抗病毒药物的研究与开发。

实时荧光定量聚合酶链反应在丙型肝炎诊断中的临床应用价值

目的探讨丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)和丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)荧光定量检测在丙型肝炎诊断中的临床应用价值。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测358例血清中HCV RNA载量及抗-HCV。结果 358例慢性丙型肝炎患者抗-HCV和HCV RNA检出率分别为78.8%和54.2%,经χ2检验差异有统计学意义(P<0.05),HCV RNA的平均载量为4.85×105 copies/mL。结论FQ-PCR检测血清中HCV RNA的载量,是判定HCV感染的直接证据,它反映HCV的活动性和复制程度,有利于抗病毒治疗的疗效观察。抗-HCV和HCV RNA联合检测对丙型肝炎病毒的早期诊断有重要临床应用价值。

酶联免疫吸附法和实时荧光定量PCR法检验EB病毒的效果比较

研究对EB病毒患者应用实时荧光定量PCR法和酶联免疫吸附法(ELISA)的检验结果。方法 于我院感染EB病毒的患者中随机抽取95例,分别进行PCR检验以及ELISA检验,对比两种检验结果。结果 经过PCR检验,检出EB病毒阳性检出49例(51.58%),其中活动性感染检出18例(18.95%),潜伏期感染检出31例(32.63%)。在活动性感染患者中,ELISA检出EB-VCA-IgM患者18例(100.00%),而EB-VCA-IgG患者13例(72.22%),EB-NA1-IgG患者12例(66.67%),EB-EA-IgG患者13例(72.22%),显著少于PCR检出率。组间对比,差异显著(P<0.05)。在潜伏期感染患者中,ELISA检出EB-VCA-IgM患者24例(77.42%),EB-VCA-IgG患者26例(83.87%),EB-NA1-IgG患者26例(83.87%),EB-EA-IgG患者25例(80.65%),显著少于PCR检出率。组间对比,差异显著(P<0.05)。结论 在EB病毒活动性感染患者中,ELISA检验EB-VCA-IgM患者具有较高检出率,和PCR检验结果相符。在EB病毒潜伏期患者,使用ELISA检验检出率较低,存在漏诊风险。在临床上建议使用PCR和ELISA检验两种检验方法结合的方式,以保证阳性检出率符合临床要求。