实时荧光技术在鸭坦布苏病毒RT-LAMP检测方法中的应用

由鸭坦布苏病毒(DTMUV)引起的蛋鸭产蛋急剧下降给我国的养鸭业造成了巨大的经济损失。针对DTMUV E基因保守区域设计一套LAMP引物,利用实时荧光技术建立了DTMUV的实时RT-LAMP病原检测方法。该方法检测RNA的最低检测极限可达到7.8 copies,其灵敏度是普通RT-PCR的100倍,且只能特异性扩增DTMUV的RNA,对其他常见鸭源病毒核酸均无特异性扩增。该方法简单快速、特异性强和灵敏度高,判定结果只需要观察扩增曲线,适用于DTMUV早期感染的诊断、分子流行病学调查和疫情监测。

RNA实时荧光核酸恒温扩增检测技术在儿童支原体肺炎早期诊断及疗效判断中的价值

目的 考察实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)在儿童肺炎支原体肺炎(MPP)早期临床诊断中的价值及其在评价MPP转归以及判断药物疗效中的作用。方法 选取社区获得性肺炎(CAP)住院患儿451例,所有患儿在入院24 h内采集血清标本,采用被动凝集试验检测肺炎支原体(MP)特异性抗体[MP抗体检测(MP-Ab)],并采集咽拭子标本提取MP-RNA(MP-SAT法)。对MPP患儿在完成大环内酯类药物治疗第1疗程、完成大环内酯类药物治疗第3疗程时复查MP-Ab和MP-RNA。根据MPP诊断标准将其分为MPP组(n=183)和非MPP组(n=268)。比较MP-SAT和MP-Ab诊断MPP的准确性(敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值)。对病程<7 d入院前未使用大环内酯类药物的MPP患儿进行动态观察,考察在大环内酯类药物(阿奇霉素)治疗MP不同时间点(入院时、完成第1疗程和完成第3疗程时)MP-SAT和MP-Ab的阳性率以及患儿临床和影像学表现(咳嗽、发热、肺部体征和CT表现)变化情况。结果 MP-SAT和MP-Ab诊断MPP的准确性比较差异无统计学意义(P>0.05);病程<7 d患儿组中MP-SAT诊断MPP的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均优于MP-Ab(P<0.001或P<0.05或P<0.01)。病程<7 d入院前未使用大环内酯类药物治疗的MPP患儿共42例,该组患儿在入院时、完成阿奇霉素治疗第1疗程和完成阿奇霉素治疗第3疗程时,MP-SAT检测阳性率分别为88.09%(37/42)、88.09%(37/42)和9.52%(4/42);MP-Ab检测阳性率分别为26.19%(11/42)、100.00%(42/42)和100.00%(42/42),在不同时间点MP-SAT和MP-Ab阳性率比较差异有统计学意义(P<0.001,P<0.05,P<0.001)。该组患儿完成第3疗程时MP-SAT阳性率较入院时明显下降(P<0.001),临床症状(咳嗽、发热)、肺部体征及肺部CT表现较入院时明显好转(均P<0.001),MP-SAT结果与临床症状、肺部体征及肺部影像学表现变化趋势相一致。结论 SAT检测MP-RNA可作为儿童MPP的早期诊断依据,同时也可作为评价MPP转归及判断临床治疗效果的指标。

叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应-高通量测序技术鉴定冷链食品中多种病原菌

目的 应用叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应-高通量测序技术鉴定冷链食品中多种病原菌,构建病原菌分子进化树。方法 以冷链食品中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽胞杆菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特氏菌5种病原菌作为研究对象,应用叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应技术作为冷链食品中病原菌检测初筛手段,应用微生物培养法以及生化鉴定仪器法进行方法比对与结果验证,运用高通量测序以及分子进化树构建作为冷链食品中所分离病原菌的种属地位确证方法。结果 叠氮丙啶-实时荧光聚合酶链式反应技术成功扩增了冷链食品中生活状态病原菌的特征性核酸片段,排除了死亡细菌以及阴性对照菌的干扰,病原菌检出限可达到1×10^(3)CFU/mL,一次反应可检测42份试样,可以在18 h内完成检测工作。在冷链食品中病原菌抽样检测调查中,随机采集的751份冷链食品,共检出62株病原菌,病原菌总体检出率为8.3%(62/751)。通过后续的16S rRNA测序以及葡萄球菌属、弧菌属以及李斯特菌属分子进化树的构建,成功溯源了金黄色葡萄球菌的污染来源并完成病原菌种属定位。结论 本方法特异性好、灵敏度高、检测通量高,为冷链食品及相关食品中病原菌的精确检测与溯源分析提供新的思路与方法。

吲哚菁绿荧光实时成像技术在肝细胞癌腹腔镜根治术中的应用效果

目的探讨吲哚菁绿(ICG)荧光实时成像技术在肝细胞癌腹腔镜根治术中的应用效果。方法将118例肝细胞癌患者随机分为观察组和对照组,各59例。对照组采用开腹根治术治疗,观察组采用ICG荧光实时成像引导下的腹腔镜根治术治疗。比较两组患者手术相关指标(手术时间、术中出血量、术中输血量、术后住院时间)、术后并发症(肺部感染、胆瘘、切口感染、尿路感染)发生率及生存时间。结果观察组患者的手术时间、术中出血量、术中输血量、术后住院时间均短于或少于对照组,术后并发症总发生率低于对照组(均P<0.05)。两组患者的生存时间差异无统计学意义(P>0.05)。结论将ICG荧光实时成像技术应用于肝细胞癌腹腔镜根治术可有效减少术中血管损伤,缩短手术时间,降低术后并发症发生率,利于患者术后恢复,其远期疗效与开腹根治术相似。

基于多重实时荧光定量PCR技术检测高危型人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA的临床研究

目的 研究基于多重实时荧光定量PCR技术检测高危型人乳头瘤病毒(HPV)E6/E7 mRNA的价值。方法 选择2022年1月至2022年7月我院进行宫颈癌筛查的患者60例,分别采取多重实时荧光定量PCR技术测定高危型人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA情况,并将病理学检查结果作为金标准,分析基于多重实时荧光定量PCR技术检测高危型人乳头瘤病毒E6/E7 mRNA的价值。结果 HPV 16、18、31、33等九类型的最低检测为10 copies/μL,但HPV 51、52、56、58等五类型最低检测是100 copies/μL。另外通过多重实时荧光定量PCR检测高危HPV E6/E7 mRNA和生殖道内常见病原菌例如大肠埃希菌、取淋病奈瑟菌、梅毒螺旋体、金黄色葡萄球菌等,其结果均显示阴性,且检测结果的特异性良好。薄层液基细胞学的检查结果与病理学检查并无差别(P>0.05)。多重实时荧光定量PCR技术的符合率91.67%(55/60),灵敏度83.33%(15/18),特异度95.24%(40/42)。结论 基于多重实时荧光定量PCR技术在HPV E6/E7 mRNA检测中意义重大,存在较高的灵敏度及特异度,可成为宫颈病变筛查的主要方式。

荧光定量PCR技术在猪病防治中的应用

生猪感染疾病时会直接对养殖场或养殖户的经济造成巨大损失,因此,做好生猪疾病预防工作显得尤其重要。利用实时荧光定量PCR技术(FQ-PCR技术)能有效利用微量的DNA进行扩增,提高检测精度,对猪病诊治和防治具有重要作用。一、猪病的诊断和防治现状猪病预防成效能直接影响养殖效益,在我国农村有大量的个体户进行生猪养殖,但个体农户往往缺乏足够的养殖经验,文化水平普遍偏低.

实时荧光PCR检测技术在沙门菌血清鉴定中的应用

目的 探究实时荧光PCR检测技术在沙门菌血清分型中的应用。方法 选取2010—2015年无锡市健康从业人员肠道分离得到的144株沙门菌,分别采用传统玻片凝集法和实时荧光PCR法进行血清分型,以前者为金标准,比较两种方法的一致性。结果 144株沙门菌利用传统玻片凝集法均可分型,共鉴定出28个型别。两种方法鉴定结果一致的有134株菌,符合率为93.06%,Kappa值为0.68,具有高度一致性。结论 实时荧光PCR法对沙门菌进行血清分型与玻片凝集法鉴定结果一致性高,且检测时间较短,操作简单;对不常见血清型或存在交叉情况时,建议两种方法联合使用,可提高沙门菌血清分型检测效率。

实时荧光PCR技术在高危型人乳头瘤病毒检测中的价值

目的 分析实时荧光PCR技术在高危型人乳头瘤病毒(HPV)检测中的价值。方法 选取本院行病理诊断检查的66例高危型HPV感染者及68例健康女性为研究对象,均实施实时荧光PCR技术和第二代杂交捕获试验(HC-Ⅱ)技术行HPV检测,比较两种检测技术的诊断效能。结果 以病理检验结果为金标准,实时荧光PCR技术的准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、诊断符合率分别为94.03%、96.97%、91.18%、91.43%、96.88%、94.03%,高于HC-Ⅱ技术的76.12%、81.82%、70.59%、72.97%、80.00%、76.12%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 高危型HPV检测中应用实时荧光PCR技术,能够保证疾病检测结果的准确性和可靠性,进而为后续的临床治疗提供支持,应用价值较高。

实时荧光PCR技术质量控制影响因素探讨

实时荧光PCR技术在分子生物学研究和临床诊断中发挥着重要作用。然而,实时荧光PCR结果的准确性和可靠性受到多种因素的影响。本文旨在探讨实时荧光PCR技术质量控制的影响因素,并提供相应的控制策略。首先讨论了实时荧光PCR技术的质量控制指标和方法。接下来,详细分析了影响实时荧光PCR技术质量的因素,包括实验设计与操作技巧、样本质量与处理方法、试剂与仪器选择与使用、反应条件与参数设置。通过案例研究和讨论,验证了这些影响因素对实时荧光PCR结果的影响,并提出了相应的控制策略。

实时荧光RNA恒温扩增技术在活动性肺结核诊断方面的效能

目的探讨实时荧光RNA恒温扩增检测技术(SAT)在活动性肺结核诊断方面的效能。方法选取2021年8月1日至2022年8月1日该院收治入院的活动性肺结核患者114例,比较荧光染色法、固体培养、GeneXpert MTB/RIF,SAT在活动性肺结核诊断方面的效能。结果以固体培养为标准,SAT的Kappa值为0.846,受试者工作特征曲线下面积为0.706。结论SAT的灵敏度最高,与固体培养法一致性极好,预测活动性肺结核诊断价值高,可用作筛查传染源的快速手段。

实时荧光定量PCR技术在转基因食品检测领域中的实践分析

当前,随着我国科技的不断发展,科研领域创新不断增加,使我国食品工程技术进入到了一个新的阶段,在当前时代背景下,食品工程科技创新催生了转基因工程等一系列高精尖技术体系,使我国食品产业发展规模不断壮大。随着近几年我国转基因食品种植面积不断扩大,食品质量控制难度也明显提高,如果不能实现对转基因食品具体质量情况的有效检测,会对人体健康产生较为负面的影响。而实时荧光定量PCR技术则是当前我国转基因食品检测过程中经常应用的技术,因此,想要实现对转基因食品质量的有效确定,应该灵活应用此项检测技术。基于此,本文对实时荧光定量PCR技术在转基因食品检测领域中的应用进行了分析。

实时荧光定量PCR技术在肉及肉制品中的运用

文章首先介绍了实时荧光定量PCR的技术原理,随后选取83份肉及肉制品的样品,设计了对照试验。对照组采用常规的细菌培养法,实验组采用了实时荧光定量PCR技术,测定样品中沙门菌、金黄色葡萄球菌等4种致病细菌的数量。结果表明,实验组检测出沙门菌17株,阳性率为20.48%,明显高于对照组(阳性率7.23%);其他3种细菌方面,实验组的检出率也明显超过了对照组,说明实时荧光定量PCR技术在肉及肉制品的污染物检测中有着更高的特异性和灵敏度。在应用这一技术时,还要注意做好肉及肉制品的前处理,以及正确选用Real-time Q-PCR检测试剂盒,才能保证检测结果的可靠性。

实时荧光核酸恒温扩增技术检测泌尿生殖道生殖支原体感染的价值研究

探讨实时荧光核酸恒温扩增技术检测泌尿生殖道生殖支原体感染的价值。方法 此次研究期间,对于所有的泌尿生殖道生殖支原体感染检测患者500例均以随机原则抽选自我院;选择时间下限为2021年4月,选择时间上限为2022年5月;其中230例为女性标本;270例为男性标本;对于所有患者有无呈现出支原体感染情况合理开展实时荧光核酸恒温扩增技术检测工作。之后就淋病奈瑟菌检测结果、沙眼衣原体检测结果以及解脲脲原体结果合理实施分析。结果 对于所有的泌尿生殖道生殖支原体感染检测患者500例均以随机原则抽选自我院;其中230例为女性标本;270例为男性标本。500例样本中,最终显示为阳性结果共计35例;其中男性标本共计23例,女性标本共计12例;同女性标本阳性率展开比较,男性标本阳性率存在有意义的差异(P<0.05)。对于本次研究的500例患者,进行尿液标本采集患者305例,对具体情况展开分析,25例所得结果为阳性;对于190例患者临床合理采集其分泌物标本,对结果展开分析,9例为阳性;5例患者同时对其展开尿液标本采集以及分泌物采集工作;1例获得阳性结果;阳性支原体感染患者共计35例,分别为23例男性以及12例男性。对应的单纯支原体感染例数分别为15例以及3例。男性单纯支原体感染患者比例较于女性单纯支原体感染患者比例更高(P<0.05);而对于阳性支原体感染患者共计35例,对于年龄≤20岁患者呈现出最高的感染率。以>20~30岁年龄段次之。在年龄逐渐增长后,对应的支原体感染率呈现出明显降低,存在有意义的差异(P<0.05)。结论 临床对于泌尿生殖道生殖支原体感染在实施诊断期间,实时荧光核酸恒温扩增技术呈现出较高的一致性,获得的临床效果较好。

利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术对涂阴肺结核诊断价值的评价

观察利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)在涂阴肺结核诊断中的使用价值。方法 采纳门诊2021.03-2022.03的22例涂阴肺结核病例(涂阴肺结核组)、肺结核确诊病例13例(肺结核确诊者) 、其他肺结核病例15例划分到其他肺病组,依据检测手段不足分组。对患者开展痰液涂片金胺O荧光染色、Xpert MTB/RIF检测、痰固体培养以及结核菌素皮肤试验,观察Xpert MTB/RIF检测结果,观察其在涂阴肺结核诊断中的效果。结果 涂阴肺结核组XpertMTB/RIF检测阳性情况比其他肺病组高,且其TST检测阳性情况比Xpert MTB/RIF检测阳性低。涂阴肺结核组Xpert MTB/RIF检测阳性例数比痰培养检测高。Xpert MTB/RIF检测在肺结核组中检出阳性例数比其他肺病组高,组间对比存在差异(P<0.05)。结论 Xpert MTB/RIF检测阳性率较高,将其用于涂阴肺结核早期诊断中可发挥重要作用。

实时荧光定量PCR技术在转基因玉米检测中的应用研究

采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对玉米中的内源基因Invertase和转基因玉米Mon810、Event 176中的外源基因进行了定量检测 ,建立了商业化转基因玉米Mon 810 (YieldGard)和Event 176 (Maximizer)的定量PCR检测方法。该方法的检测灵敏度小于 0 .0 1% ,是国际上设定的转基因最低限量的 10

实时荧光定量PCR技术检测转基因大豆方法的建立

采用实时荧光定量PCR技术 ,通过使用特异的引物和探针 ,对大豆中的内源基因Lectin和转基因大豆中的外源基因EPSPS进行了定量检测 ,建立了Monsanto公司生产的商业化转基因大豆Roundup Ready○R的定量PCR检测方法。该方法的检测灵敏度 <0 0 1% ,是国际上设定的转基因最低限量的 10

EMA实时荧光PCR技术检测食品中单核增生李斯特活菌方法研究

目的利用叠氮溴化乙錠(EMA)实时荧光PCR技术,建立直接检测食品中单增李斯特活菌的方法。方法根据单核李斯特菌inlA基因设计特异性引物和探针。用不同EMA浓度、不同光照次数优化样品前处理条件。用平板计数法验证该方法的检出限及对死菌的抑制率。用35株单增李斯特菌、25株非单核李斯特菌、92株非李斯特菌验证该方法特异性。用添加了不同剂量的单增李斯特死菌、活菌及金黄色葡萄球菌的15件饮料,15件熟肉制品进行模拟实样检测。结果单增李斯特活菌EMA实时荧光PCR方法的Ct=(38.46-3.30)×log(菌量)(R2=0.999)。最低检测的活菌浓度为55cfu/反应。对死菌DNA抑制效率≥99.98%。35株单增李斯特菌Ct值最低16.21,最高29.38,而25株非单单增李斯特菌、92株非单增李斯特菌的Ct值均大于35或无Ct值。重复试验Ct值变异系数小于5%。30件模拟实样单增李斯特菌的检测结果与常规方法完全一致。且EMA实时荧光PCR方法检出时间仅需10h左右,而常规分离培养方法需要5~7d。结论 EMA实时荧光PCR检测技术是一种快速、简便、特异性强、灵敏度高、仅检测单增李斯特菌活菌的有效方法,可作为食品中检测单增李斯特活菌的方法推广使用。

实时荧光定量PCR技术在男性不育患者Y染色体微缺失检查中的应用

目的探索实时荧光定量PCR技术在检测男性不育患者Y染色体微缺失中应用的可行性。方法利用实时荧光定量PCR技术对2015年3-10月于我院就诊的443例男性不育患者的Y染色体长臂AZFa、AZFb、AZFc和AZFd 4个区域的8个位点进行检测,并用多重PCR方法对检测出的存在Y染色体微缺失的标本进行验证。结果共检测出3例男性不育患者发生Y染色体微缺,并通过多重PCR方法得到验证。3例Y染色体微缺病例均发生于非梗阻性无精症患者,其中2例为AZFc+d区缺失,1例为AZFb+c+d区缺失,占非梗阻性无精症的10.3%。结论实时荧光定量PCR技术可用于Y染色体微缺失的检测,且对筛查不育症患者具临床价值。

实时荧光定量PCR技术的类型、特点与应用

实时荧光定量PCR技术是一种利用不同的荧光检测方法来定量核酸的技术,具有高度的灵敏性、特异性和精确性。该技术根据荧光作用方式分为:SYBR荧光染料法、TaqMan技术、分子信标和复合探针等类型,依据其各自优缺点可将各技术方法分别应用于畜牧兽医领域不同方面的科研工作中,以期得到最优的定量检测效率。

实时荧光定量PCR技术在植物中的应用

实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光染料或荧光探针,利用荧光信号积累来实现实时监测整个PCR反应进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析。该技术实现了PCR从定性到定量的转变。介绍了实时荧光定量PCR技术的原理、分类及优缺点,综述了近年来实时荧光定量PCR技术在植物中的应用概况及其研究进展,旨在为该技术的进一步开发应用提供理论参考。