实时荧光核酸恒温检测技术(SAT)在甲型流感病毒动物模型检测中的应用

评价实时荧光核酸恒温检测技术（SAT）对H1N1和H3N2两种甲型流感病毒小鼠模型肺组织匀浆液的检测效能。小鼠滴鼻感染不同浓度H1N1、H3N2病毒液30μL，感染96h后取肺组织匀浆液分别进行SAT检测及抗原血凝效价测定。结果表明，SAT检测的病毒拷贝数基本与抗原血凝效价测定结果一致，但灵敏度提高10^4倍。与血凝实验比较，SAT检测具有灵敏度高、特异性强、结果准确、高通量自动化的优势，有利于甲型流感动物模型的建立，为实验室筛选抗甲型流感病毒药物奠定基础。

RNA实时荧光核酸恒温扩增检测技术在儿童支原体肺炎早期诊断及疗效判断中的价值

目的 考察实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)在儿童肺炎支原体肺炎(MPP)早期临床诊断中的价值及其在评价MPP转归以及判断药物疗效中的作用。方法 选取社区获得性肺炎(CAP)住院患儿451例,所有患儿在入院24 h内采集血清标本,采用被动凝集试验检测肺炎支原体(MP)特异性抗体[MP抗体检测(MP-Ab)],并采集咽拭子标本提取MP-RNA(MP-SAT法)。对MPP患儿在完成大环内酯类药物治疗第1疗程、完成大环内酯类药物治疗第3疗程时复查MP-Ab和MP-RNA。根据MPP诊断标准将其分为MPP组(n=183)和非MPP组(n=268)。比较MP-SAT和MP-Ab诊断MPP的准确性(敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值)。对病程<7 d入院前未使用大环内酯类药物的MPP患儿进行动态观察,考察在大环内酯类药物(阿奇霉素)治疗MP不同时间点(入院时、完成第1疗程和完成第3疗程时)MP-SAT和MP-Ab的阳性率以及患儿临床和影像学表现(咳嗽、发热、肺部体征和CT表现)变化情况。结果 MP-SAT和MP-Ab诊断MPP的准确性比较差异无统计学意义(P>0.05);病程<7 d患儿组中MP-SAT诊断MPP的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均优于MP-Ab(P<0.001或P<0.05或P<0.01)。病程<7 d入院前未使用大环内酯类药物治疗的MPP患儿共42例,该组患儿在入院时、完成阿奇霉素治疗第1疗程和完成阿奇霉素治疗第3疗程时,MP-SAT检测阳性率分别为88.09%(37/42)、88.09%(37/42)和9.52%(4/42);MP-Ab检测阳性率分别为26.19%(11/42)、100.00%(42/42)和100.00%(42/42),在不同时间点MP-SAT和MP-Ab阳性率比较差异有统计学意义(P<0.001,P<0.05,P<0.001)。该组患儿完成第3疗程时MP-SAT阳性率较入院时明显下降(P<0.001),临床症状(咳嗽、发热)、肺部体征及肺部CT表现较入院时明显好转(均P<0.001),MP-SAT结果与临床症状、肺部体征及肺部影像学表现变化趋势相一致。结论 SAT检测MP-RNA可作为儿童MPP的早期诊断依据,同时也可作为评价MPP转归及判断临床治疗效果的指标。

结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测对菌阴空洞肺结核的诊断效能分析

目的探讨结核分枝杆菌/利福平耐药实时荧光定量核酸扩增(Xpert)检测对菌阴空洞肺结核的诊断效能。方法选取河北省胸科医院2021年4月至2022年10月期间行手术治疗的124例肺部空洞疾病患者相关病历资料,其中菌阴空洞肺结核86例(观察组),非结核肺部空洞疾病38例(对照组)。收集患者手术标本Xpert检测和外周血结核感染T细胞斑点(T-SPOT)试验结果,分析二者对菌阴空洞肺结核的诊断效能。结果Xpert检测和T-SPOT试验诊断菌阴空洞肺结核的敏感度为68.6%、75.6%,特异度为97.4%、68.4%。Xpert检测的敏感度低于T-SPOT试验(χ^(2)=5.832,P<0.001),特异度高于T-SPOT试验(χ^(2)=21.469,P<0.001)。2种方法在观察组中的阳性检出率均高于对照组[Xpert检测:68.6%(59/86)比2.6%(1/38);T-SPOT试验:75.6%(65/86)比31.6%(12/38)](均P<0.001)。受试者工作特征曲线分析结果显示,Xpert检测诊断菌阴空洞肺结核的曲线下面积为0.830,T-SPOT试验的曲线下面积为0.729,Xpert检测的准确度高于T-SPOT试验(P<0.001)。结论Xpert检测对菌阴空洞肺结核有比较可靠的诊断效能。

实时荧光定量PCR检查在献血者乙型肝炎病毒核酸检测中的应用

目的探究献血者乙型肝炎病毒(HBV)核酸检测中,实时荧光定量PCR检查的应用价值。方法选取2022年10月至2023年9月宁德市中心血站10403份献血者标本,对其进行乙型肝炎病毒检测。ELISA检测用A、B两种不同试剂进行初检、复检,对检测阴性的血液标本进一步行核酸检测。结果经ELISA检测,A试剂初检乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性率为0.57%(59/10403);B试剂复检HBsAg阳性率为0.65%(68/10403)。对阴性血液标本进一步核酸检测,A试剂初检HBsAg阴性标本的阳性率为0.261%(27/10344);B试剂复检HBsAg阴性标本的阳性率为0.174%(18/10335)。结论献血者HBV检测使用核酸检测有助于提高血液筛查的准确性,保障用血安全。

实时荧光多酶恒温扩增技术检测小鼠细小病毒核酸的方法建立

目的旨在建立基于实时荧光多酶恒温扩增(exo-MIRA)技术的小鼠细小病毒(MVM)核酸检测新方法。方法收集2021年1月至2022年1月南京大学医学院附属金陵医院实验动物室共75份小鼠肠道内容物标本。针对MVM VP2基因的保守区域设计4对引物,琼脂糖凝胶电泳分析扩增产物以筛选最优引物对,并设计特异性荧光探针,构建exo-MIRA检测法。通过检测梯度稀释模拟样本,进行检出限评价。检测其他小鼠病毒,包括仙台病毒(SV)、小鼠肝炎病毒(MHV)、小鼠鼠痘病毒(Ect)、小鼠肺炎病毒(PVM)、呼肠孤病毒(Reo),分析exo-MIRA法的交叉反应性。采用qPCR法和exo-MIRA法同时检测收集的75份标本,统计分析两种方法的一致性。以qPCR法为参比方法,评估该法的敏感度和特异度,进行诊断效能评价。结果采用exo-MIRA技术建立MVM核酸检测方法,该方法检测MVM的检出限为10 copies/μL,且与其他五种小鼠病毒无交叉反应,可特异性检出MVM。75份标本检出结果显示,exo-MIRA法和qPCR法高度一致,Kappa值为0.921(P<0.05),exo-MIRA法的敏感度为100.0%,特异度为96.7%。结论建立了一种基于实时荧光MIRA恒温扩增技术的MVM核酸检测方法,具有简单快速、实验要求低、敏感特异等优点。该方法可应用于现场复杂环境的即时检测,在实验动物质量检测应用上有一定前景。

实时荧光核酸恒温扩增技术检测泌尿生殖道生殖支原体感染的价值研究

探讨实时荧光核酸恒温扩增技术检测泌尿生殖道生殖支原体感染的价值。方法 此次研究期间,对于所有的泌尿生殖道生殖支原体感染检测患者500例均以随机原则抽选自我院;选择时间下限为2021年4月,选择时间上限为2022年5月;其中230例为女性标本;270例为男性标本;对于所有患者有无呈现出支原体感染情况合理开展实时荧光核酸恒温扩增技术检测工作。之后就淋病奈瑟菌检测结果、沙眼衣原体检测结果以及解脲脲原体结果合理实施分析。结果 对于所有的泌尿生殖道生殖支原体感染检测患者500例均以随机原则抽选自我院;其中230例为女性标本;270例为男性标本。500例样本中,最终显示为阳性结果共计35例;其中男性标本共计23例,女性标本共计12例;同女性标本阳性率展开比较,男性标本阳性率存在有意义的差异(P<0.05)。对于本次研究的500例患者,进行尿液标本采集患者305例,对具体情况展开分析,25例所得结果为阳性;对于190例患者临床合理采集其分泌物标本,对结果展开分析,9例为阳性;5例患者同时对其展开尿液标本采集以及分泌物采集工作;1例获得阳性结果;阳性支原体感染患者共计35例,分别为23例男性以及12例男性。对应的单纯支原体感染例数分别为15例以及3例。男性单纯支原体感染患者比例较于女性单纯支原体感染患者比例更高(P<0.05);而对于阳性支原体感染患者共计35例,对于年龄≤20岁患者呈现出最高的感染率。以>20~30岁年龄段次之。在年龄逐渐增长后,对应的支原体感染率呈现出明显降低,存在有意义的差异(P<0.05)。结论 临床对于泌尿生殖道生殖支原体感染在实施诊断期间,实时荧光核酸恒温扩增技术呈现出较高的一致性,获得的临床效果较好。

实时荧光核酸恒温扩增检测技术在肺炎支原体肺炎早期诊断中的价值及影响因素分析

目的评估实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)在儿童肺炎支原体肺炎(MPP)早期诊断中的应用价值及影响因素分析。方法选取2016年12月至2017年12月住院治疗的社区获得性肺炎患儿526例,采用颗粒凝集法检测MP血清学抗体(MP-Ab),并以此结果为参照,评价SAT用于诊断MPP的价值。结果以血清MP-Ab检测结果确诊MPP患儿165例,MP-SAT诊断MPP的敏感度为90.9%(150/165)、特异度为97.9%(368/376),准确性高(约登指数为0.89),两者的一致性好(Kappa=0.90)。MP-SAT在短病程患儿中的诊断敏感度明显高于长病程患儿(P=0.031);MP-SAT诊断敏感度明显高于单次血清MP-Ab(P=0.018),两者的一致性差(Kappa=0.039);MP-SAT与双份血清MP-Ab一致性好(Kappa=0.91)。多因素logistic回归分析结果显示:病程(≥7 d)、院外应用大环内酯类药物治疗是影响MP-SAT检出结果的主要因素(P<0.05)。结论 MP-SAT在MPP的早期诊断中应用价值高,可以有效弥补急性期单份血清MP-Ab检测的不足,辅助临床进行早期诊断;尽可能在病程早期(<7 d)和大环内酯类药物应用前进行MP-SAT检测。

实时荧光核酸恒温扩增技术检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染

目的评价实时荧光核酸恒温扩增技术(simultaneous amplification and testing,SAT)检测沙眼衣原体(CT)核酸试剂盒(RNA恒温扩增)的敏感性和特异性。方法对229例临床疑似患者的尿样及拭子标本同时进行SAT检测和"金标准"沙眼衣原体细胞培养检测,检测结果有差异的标本采用PCR方法对拭子标本进行复测,根据实验结果评估SAT技术在尿样及拭子标本检测中的敏感性和特异性。结果结合细胞培养和PCR的实验结果作为"扩大金标准",得出SAT技术对临床拭子标本的检测敏感性为97.1%,特异性为100%;对尿样标本检测的敏感性为89.4%,特异性为99.2%。拭子和尿样标本检测结果的符合率为95.2%,经卡方检验,差异无显著性(χ2=3.27,P>0.05)。结论 SAT技术检测CT试剂盒对拭子及尿样标本敏感性及特异性均较好,适用于临床实验室对CT的检测。

实时荧光核酸恒温扩增技术检测泌尿生殖道生殖支原体感染临床观察

目的:了解核酸实时荧光恒温扩增技术(SAT)检测泌尿外科、妇科、性病科门诊就诊患者生殖支原体(MG)感染情况。方法:回顾杭州市第三人民医院、绍兴市人民医院及东部战区总医院2018年1月至2018年12月在泌尿外科、男科、妇科、性病科门诊就诊的疑似泌尿生殖道感染的初诊患者5 711例,年龄16~73(38.77±11.32)岁,其中男性3 425例,女性2 286例;共采集尿液标本3 666例,泌尿生殖道分泌物标本2 095例,其中有50例患者同时采集了尿液及分泌物标本。以SAT检测检测患者MG感染,并同时行解脲脲原体(UU)、沙眼衣原体(CT)、淋病奈瑟菌(NG)检测。结果:5 711例患者中,294例患者MG阳性,阳性率5.15%;其中男性阳性率5.96%(206/3 425),女性阳性率3.85%(88/2 286),男性患者阳性率显著高于女性(P<0.05)。50例同时采集了尿液及泌尿生殖道分泌物标本其检测结果一致性为100%。294例MG感染的患者中单纯MG感染患者占比52.04%,206例男性MG感染患者中,单纯MG感染占比63.11%,88例女性MG感染的患者中,单纯MG感染26.13%,男性单纯感染概率明显高于女性(P<0.05)。混合感染中,男女均以MG合并UU感染占比最高,且女性MG合并UU感染占比高于男性(P<0.05),按年龄分组比较,男女性均为≤20岁组MG阳性率最高,其中男性8.65%(9/104),女性5.13%(4/78),各年龄组MG阳性率有显著性差异(χ^2=32.74,P<0.05)。结论:在门诊怀疑泌尿生殖道感染的就诊者中,男性MG感染阳性率高于女性, MG最常见的混合感染是MG合并UU感染,随着年龄增加,MG感染的阳性率逐渐降低;尿液与分泌物作为检测标本来进行SAT检测,其结果一致性较高。

实时荧光核酸恒温扩增技术在解脲脲原体检测中的应用

目的应用实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)对不孕不育症患者的泌尿生殖道拭子及尿液进行解脲脲原体(UU)检测,并评价其敏感性和特异度。方法对452例不孕不育症患者的泌尿生殖道拭子标本,采用SAT检测法、培养法、荧光定量聚合酶链反应(PCR)进行UU检测,同时再对同一患者的尿液标本进行SAT检测,根据实验结果评估SAT在拭子及尿液标本UU检测中的灵敏度和特异度;同时UU培养阳性的标本经过临床UU规范治疗后,仍采用上述方法对患者进行UU复查,根据实验结果评估SAT在UU检测中的判断预后效果。结果初检时与UU培养结果作比较,UU-SAT拭子标本的检测灵敏度为97.1%(170/175),特异度为97.8%(271/277),差异无统计学意义(χ2=0.010 2,P=0.919 7);UU-SAT尿液标本的检测灵敏度为96.0%(168/175),特异度为98.9%(274/277),差异无统计学意义(χ2=0.163 5,P=0.686 0)。结论 SAT检测泌尿生殖道患者拭子及尿液UU检测具有很高的灵敏度和特异性,同时又有很好的判愈效果,为UU的临床实验室诊断提供了新的检测手段。

实时荧光核酸恒温扩增检测技术在泌尿生殖道淋病中的应用

目的探讨实时荧光核酸恒温扩增检测技术(SAT)检测泌尿生殖道淋病的灵敏度、特异度以及监测疗效的实用性。方法回顾性分析12 816例因怀疑泌尿道淋球菌感染需行淋球菌检测受试者临床资料,其中淋球菌培养检测6 323例,基于SAT开发的淋球菌核酸检测试剂盒(NG-SAT)检测7 107例,比较2种检测方法的阳性率;再以淋球菌培养法为金标准,计算同时行以上2种检测的614例患者NG-SAT检测尿液样本的灵敏度和特异度;对2种检测结果有差别的标本,进行荧光定量DNA杂交及聚合酶链反应法(FQ-PCR)复测与分析;对检测结果阳性的患者进行头孢曲松治疗,待症状消失后3d再次行以上2种检测。结果 NG-SAT检测尿液标本的灵敏度为100.0%,特异度为98.2%。2种检测结果有差别的标本7份,均为SAT检测阳性、淋球菌培养阴性;FQ-PCR复测结果显示6份阳性、1份阴性。179例患者经头孢曲松治疗后,NG-SAT检测阳性15例,淋球菌培养阳性7例。结论 NG-SAT检测尿液中淋球菌简便、准确,且能准确判断预后,值得临床推广应用。

实时荧光核酸恒温扩增技术在解脲脲原体检测中的临床应用价值

目的初步探讨利用实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)检测解脲脲原体(UU)RNA的临床应用价值。方法对200例捐精体检者采集尿道拭子,分别采用SAT检测UU RNA和实时荧光定量聚合酶链反应(qRTPCR)检测UU DNA,并采用培养法检测UU病原体;对UU阳性者进行抗菌药物治疗后,再次采用qRT-PCR和SAT进行病原体检测,并对结果进行比较分析。结果培养法、qRT-PCR和SAT检测UU的阳性率分别为20.0%(40/200)、23.0%(46/200)和22.5%(45/200);三者间一致性比较显示,Kappa值>0.75。对于首次筛查UU DNA阳性者进行抗菌药物治疗,15 d后qRT-PCR和SAT的阳性率分别为39.1%(18/46)和32.6%(15/46),2种方法阳性率差异尽管不具有统计学意义,但有用药后SAT检测UU的阳性率低于qRT-PCR的趋势。结论 UU培养法、SAT和qRT-PCR均可以用于UU的筛查,但用SAT检测UU RNA在判断治疗是否有效上具有更高的临床应用价值。

实时荧光核酸恒温扩增技术检测尿液中淋球菌的分析

目的评价实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)检测淋球菌(NG)的特异性和敏感性。方法对218例疑似患者生殖道拭子行SAT,PCR和NG培养检测,同时对对应的218份尿液标本行SAT检测。结果 SAT平行检测同一来源的拭子标本和尿液标本,检测结果完全一致。与NG培养法相比,SAT对尿液/拭子标本的检测灵敏度为100.00%,特异性为99.27%;与PCR法相比,SAT对尿液/拭子标本的检测灵敏度为100.00%,特异性为97.08%。SAT法对拭子标本和尿液标本检测结果的符合率为100.00%,经卡方检验,差异无显著性(χ2=0,P>0.05)。结论 SAT技术检测拭子及尿液中的NG具有很高的灵敏度和特异性,与NG培养相比耗时短,与PCR相比其可用于判愈,防止过度治疗。为NG的实验室诊断提供新的检测方法。

实时荧光核酸恒温扩增技术和液体培养法检测解脲脲原体的比较

目的:对实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)和液体培养法检测解脲脲原体(UU)的结果进行评估,以选择更为快速、准确、实用的临床检测方法。方法:共采集180例疑似泌尿生殖道感染患者的尿液及2份拭子样本,一份拭子样本用于液体培养,另一份拭子和尿液样本用于SAT检测。结果:液体培养和尿液SAT检测阳性率均为61.1%,拭子SAT检测阳性率为63.3%,其中16例拭子培养和拭子SAT检测结果不一致,18例拭子培养和尿液SAT结果不一致,但与拭子培养比较,拭子和尿液SAT结果均无统计学意义(P>0.05,kappa>0.75)。结论:SAT检测UU可以尿液为样本,检测效能与液体培养和拭子SAT基本相当,但尿液SAT法取样方便,检测快速,适于临床实验室对UU的检测。

实时荧光核酸恒温扩增技术检测泌尿生殖道生殖支原体感染的临床效果

目的探讨进行泌尿生殖道生殖支原体感染的患者,采用实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)检测的临床效果。方法选取2019年1-12月在该院男科、妇科、性病科进行泌尿生殖道生殖支原体感染检查的患者5189例为研究对象。其中采集女性患者标本2561例,男性患者标本2628例。采用SAT检测是否患有支原体感染,并进行沙眼衣原体、淋病奈瑟菌、解脲脲原体等病原体的检测。结果在5189例研究对象中有267例泌尿生殖道生殖支原体检查结果呈阳性,阳性率为5.14%,其中男性患者阳性率为7.19%(189/2628),女性患者阳性率为3.05%(78/2561),男性患者阳性率明显高于女性患者(P<0.05)。在5189例研究对象中,采集尿液标本患者3162例,检查结果为阳性192例,阳性率为6.07%;采集分泌物标本患者1967例,检查结果为阳性74例,阳性率为3.76%;采集尿液和分泌物共同标本60例,所有检测结果均一致,其中阳性患者1例,一致性为100%。在267例检查结果呈阳性的支原体感染患者中,男性患者189例,其中有121例为单纯支原体感染患者,女性患者78例,其中有19例为单纯支原体感染患者,男性单纯支原体感染率大于女性率(P<0.05)。支原体与解脲脲原体合并感染率最高,且女性感染率高于男性(P<0.05)。在支原体感染的患者中,年龄≤20岁的患者感染率最高,其次是>20~30岁,随着年龄的增长,支原体感染率也随之降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论SAT检测泌尿生殖道生殖支原体感染的一致性较高,有较好的临床效果。

面向核酸现场快速检测的多重实时荧光检测系统

核酸现场快速检测具有便捷、操作简单、无需专用实验室、报告快速等优点,能在机场、社区医院、海关、野外等各种复杂环境中进行检测。建立了一种可应用于核酸现场快速检测仪器的荧光检测系统,包括非共聚焦式的正交光路与多通道检测集成结构。前者信噪比高、小型便捷;后者切换效率高,能满足多重检测,其嵌合结构极大降低了通道间的荧光串扰。实验证明,系统的检测下限低于1.6μg/mL,荧光检测梯度性R2值(确定系数)均大于0.99,重复性测试的CV(coefficient of variance)值不超过1.27%。通道间荧光串扰测试表明,通道间无串扰问题,巨细胞病毒培养液的扩增实验准确性与稳定性较好,表明该系统能够针对多重检测进行有效荧光激发与采集。

恒温实时荧光法快速检测婴幼儿辅助食品中胡萝卜成分的研究

为建立婴幼儿辅助食品中胡萝卜成分的恒温实时荧光快速检测方法,根据胡萝卜ITS1-5.8SRNA-ITS2基因序列设计合成恒温实时荧光法(LAMP)的特异性引物,以常见农产品及不同胡萝卜质量分数的白萝卜DNA分别验证方法的特异性和灵敏度,选取不同品系胡萝卜种子验证方法的适用范围,并通过预包装食品检测其实用性。结果表明:所建方法与其他物种无交叉反应,特异性强,能在1 h内检测低至质量分数为0.01%的胡萝卜成分,灵敏度高,适用于不同品系胡萝卜的检测。适用范围广,通过实际样本的检测验证,结果快速、准确。该方法操作简单、成本较低、数据智能判读实时同步、结果准确快速,可用于婴幼儿辅助食品中胡萝卜成分的快速检测,为婴幼儿食品标签管理及食品安全监管提供技术依据。

实时荧光核酸恒温扩增技术检测结核分枝杆菌的价值

目的:探讨实时荧光核酸恒温扩增技术(SAT)检测肺结核患者结核分枝杆菌(TB)的价值分析。方法:取265例临床确诊的肺结核患者痰标本,分别进行涂片抗酸染色、罗氏培养、液体培养及SAT检测结核分枝杆菌。结果:265例肺结核患者痰标本中,SAT阳性率51.7%(137/265)高于抗酸染色涂片阳性率31.3%(83/265)(χ~2=22.67,P﹤0.05);高于罗氏培养阳性率38.9%(103/265)(χ~2=8.80,P﹤0.05);高于液体培养阳性率液体培养43.7%(116/265)(χ~2=3.34,P﹥0.05);其中痰涂片阴性的标本中,SAT-TB法阳性率为39%(71/182),高于罗氏培养法阳性率为29%(53/182)(χ~2=3.96,P﹤0.05)。结论:SAT是快速、简便、准确的的结核分枝杆菌检测方法,是较有优势的实验室辅助诊断方法。

核酸扩增实时检测荧光染料的研究进展

核酸扩增反应能够在短时间内将特定DNA模板的数量增加106~109倍,显著提高微量核酸检测的灵敏度,但同时扩增产物的遗漏极易造成交叉污染,影响后续检测。扩增反应通过添加荧光染料实现的实时闭管检测,不仅可以避免反应结束后开管操作所导致的交叉污染,还可以通过反应动力学对样品中模板的起始拷贝数定量,以及通过熔解曲线分析鉴别多种靶标来源、进行基因突变扫描和基因分型检测。目前常用的商业化实时检测荧光染料,如SYBR Green I、Eva Green等,其精确结构信息尚未披露,因此只能通过实验“试错法”选取合适染料,无法从根本上获知染料结构和分析性能之间的关系。本文将通过对目前常用的核酸实时检测荧光染料性质和应用进行总结,为其优化选择、设计和开发提供参考依据。

实时荧光PCR法检测新型冠状病毒核酸单靶标阳性结果分析

目的分析新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测中出现的单靶标阳性结果,为临床实验室检测和结果判断提供参考。方法收集分析2021年5月至2023年4月在该院进行的新冠病毒核酸检测结果,对检出的单靶标阳性结果及双试剂复测情况进行统计分析,并进一步追踪出现单靶标阳性结果的样本后续新型冠状病毒核酸检测情况。结果使用核酸提取仪加PCR仪及全自动工作站两种检测系统出现单靶标阳性的比率差异无统计学意义,单采标本中单靶标阳性出现频率显著多于混采标本中单靶标阳性出现频率,单靶标阳性中N基因阳性显著多于ORF1ab基因阳性。ORF1ab基因单靶阳性组Ct值与N基因单靶阳性组Ct值差异无统计学意义,两组在双试剂复检结果表现上差异无统计学意义。初检单靶Ct值按照复检最终结果判定分为阴性和阳性组,两组间Ct值差异无统计学意义。追踪69例经双试剂复查后仍为单靶阳性的样本后续新型冠状病毒核酸检测情况,单采单靶阳性人员下一次新型冠状病毒核酸检测结果为双靶阳性的有41例,其中37例Ct值为35以下;下一次核酸检测结果为阴性的有16例,其中11例为之前一个月内感染过新型冠状病毒的患者。12例混采单靶阳性标本均为一人阳性混管,单采Ct值中位数ORF1ab基因为33.229,N基因为33.732。结论对新冠核酸检测中遇到的单靶标阳性结果需要谨慎对待,复测后方可报告。实验室应加强对不同试剂,不同检测系统的评估,准备1~2种备用试剂作为可疑结果的补充验证试剂以利于对新型冠状病毒核酸检测结果的合理分析,提高对异常检测结果的判断能力。