ABI 7300实时荧光定量PCR仪的性能评估

目的为参加医学实验室认可和评价仪器性能,对ABI 7300实时荧光定量PCR仪的性能进行评估。方法参照美国临床实验室标准化委员会（CLSI）文件对ABI 7300荧光定量PCR仪检测HBV-DNA定量结果的精密度、正确度、灵敏度及线性进行评价。结果精密度：批内变异系数（CV批内）为2.38%-4.61%,批间变异系数（CV批间）为3.87%-5.33%,达到《医学实验室质量和能力认可准则》中基因扩增检验项目分析性能标准（CV批内〈4.8%,CV批间〈6.4%）。正确度：参加2011年卫生部室间质评结果总体平均偏倚为2.14%,符合卫生部质评要求（偏倚不超过8%）;功能灵敏度：100IU/mL检测限浓度的CV值最接近于20%,与试剂盒检出下限相符;线性：相关系数（r2）为1.0,线性关系符合要求。结论 ABI 7300实时荧光定量PCR仪各项性能指标精确,可以为临床提供快速、准确的报告。

iQ^(TM)5多重实时荧光定量PCR仪应用及使用方法

实时定量PCR(real-time quantitative PCR)通过连续监测PCR扩增指数期间荧光信号强弱变化反应特异性的表达量,并据此计算出目的基因的表达量。此方法不需要分离PCR产物并作为极有效的实验方法,目前已被广泛地应用于分子生物学研究的各个领域。本文主要介绍iQ^(TM)5型荧光定量PCR仪的原理及组成并以植物材料为例,分析介绍仪器的性能、使用方法及操作过程中的注意事项。

ABI7300实时荧光定量PCR仪性能评价

目的评价ABl7300实时荧光定量PCR仪的性能。方法按照学实验室质量和能力认可准则（CNAs）》，分别对临床血清、质控物进行HBV—DNA定量检测，分析评价其精密度、灵敏度、准确度、线性和仪器可比性。结果精密度：c批间：3．7％～4．4％、CV批内：2．1％～3．7％和CV总：2．9％～4．1％；准确度：其测量值与预测值的相对偏差均〈3％；灵敏度：其检测1000IU／mL的检出率为98％；线性：直线回归方程为Y=1．275X～0．07，相关系数为r=0．998；与德国罗氏Lightercylcer1．2实时荧光定量PCR仪的可比性：r=0．997，Y=0．824X＋0．416。结论ABl7300实时荧光定量PCR仪各项性能指标均良好，与德国罗氏LightCyclerl．2检测系统有较高的相关性，值得实验室应用及临床推广。

地方院校实时荧光定量PCR仪的购置与使用管理

为了充分掌握地方院校实时荧光定量PCR仪实际情况,为设备主管部门制定管理对策,提供基础参考依据,重点对单价10万元及以上实时荧光PCR仪进行了调研。从设备购置、管理人员、设备管理和使用效益4个方面,详细分析了该设备在地方院校中的实际状况,找出了该设备的优势和薄弱环节,得出了相应的结论。

实时荧光定量PCR仪用于流感病毒检测的效果分析

目的:探讨流感病毒检测中应用实时荧光定量PCR仪的价值。方法:选取2022年1月~2023年12月本中心采集检测的129份急性上呼吸道感染者的咽拭子标本展开研究,采集标本后实施实时荧光PCR仪、胶体金法测定标本中流感病毒核酸,分析两种方案检出情况、诊断效能。结果:实时荧光定量PCR仪阳性率19.38%,胶体金法阳性率为14.73%,实时荧光定量PCR仪检测阳性率高于胶体金法(P<0.05)。实时荧光定量PCR仪特异度(99.02%)、灵敏度(92.59%)、准确率(97.67%)高于胶体金法(P<0.05)。结论:在流感病毒检测中应用实时荧光定量PCR仪准确率、敏感度较高,且该方案可以迅速且有效检测出流感病毒核酸,为迅速地采取有效的疫情防控措施提供依据。

不同实时荧光定量PCR仪对外周血中EB病毒DNA检测结果的影响

目的:应用同一种商品化EB病毒核酸定量检测试剂盒在2款实时荧光定量PCR仪同时检测外周血标本中EB病毒载量,探讨不同类型的实时荧光PCR仪对EBV DNA定性和定量检测结果的影响。方法:提取179例外周血标本(包括102例全血和77例血浆)的DNA后,应用EB病毒核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)分别在2款实时荧光PCR仪Cobas z480和LightCycler 480Ⅱ上同时检测EBV DNA,定性结果采用配对χ^(2)检验和Kappa一致性检验,定量结果采用配对t检验、Spearman相关分析和线性回归分析以及Bland-Altman图分析。结果:(1)应用Cobas z480和LightCycler 480Ⅱ检测179例血标本中EBV DNA的阳性检出率分别为49.72%(89/179)、48.60%(87/179),Kappa值为0.955 3,一致性较好;两者的阳性符合率为98.85%、阴性符合率为96.74%,总符合率为97.77%。(2)在定量范围内的56例EBV阳性血样本,Cobas z480和LightCycler 480Ⅱ的检测值分别为3.943±0.913、3.726±0.980 log_(10)copies/mL,差异有统计学意义(P<0.05);进一步进行Spearman相关性以及线性回归分析,相关系数r=0.962 6,回归方程为Y=1.065 6X-0.475 4(r^(2)=0.985 3);2款实时荧光PCR仪检测的差值平均值为0.216 log_(10)copies/mL,差值标准差为0.133 log_(10)copies/mL,95%一致性界限为(-0.045,0.478) log_(10)copies/mL,96.43%(54/56)的点在95%一致性界限以内,界外点数为2(3.57%)。结论:2款实时荧光定量PCR仪Cobas z480和LightCycler 480Ⅱ检测外周血样本中EBV DNA,结果具有可比性,但Cobas z480上的检测结果平均比LightCycler 480Ⅱ上的高,可能是由于2款PCR仪所使用的光源和滤光片组合不同所致。

6种不同实时荧光定量PCR仪对新型冠状病毒核酸检测性能的影响探讨

目的:探讨6种不同型号的实时荧光定量PCR仪(分别为CFX96 DeepWell、GENTIER 96E、Cobas z480、LightCycler 480Ⅱ、ABI 7500、QuantStudio 5,依次标为A、B、C、D、E、F)对新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测性能的影响,以便选择分析性能佳的检测系统用于临床检测。方法:应用2019-nCoV阴性混合鼻咽拭子样本将商品化2019-nCoV RNA液体室内质控品(假病毒)先10倍稀释接着2.5倍梯度稀释至1∶10、1∶25、1∶62.5、1∶156.25、1∶390.63、1∶976.56、1∶2 441.41和1∶6 103.52八个不同浓度,连续3 d内每天每个浓度做5个复孔,共计15个复孔,磁珠法提取核酸后应用同一种2019-nCoV扩增试剂在6种不同实时荧光定量PCR仪上进行扩增以评价其检出限;将1∶10和1∶25两个稀释度的质控品样本,连续5 d内每天每个浓度做5个复孔,共计25孔,磁珠法提取核酸后应用同一种2019-nCoV扩增试剂在6种不同实时荧光定量PCR仪上进行扩增以评价靶基因循环阈值(Ct)的重复性和实验室内精密度。结果:(1)6种实时荧光定量PCR仪对1∶10、1∶25和1∶62.5三个稀释度的质控品样本中ORF1ab和N基因的检出率均为100.0%;而对1∶156.25稀释样本中ORF1ab和N基因的检出率:仪器A为100.0%和100.0%,B为66.7%和86.7%,C为100.0%和100.0%,D为93.3%和93.3%,E为93.3%和93.3%,F为100.0%和100.0%;对1∶390.63稀释样本中ORF1ab和N基因的检出率:仪器A为60.0%和86.7%,B为60.0%和80.0%,C为66.7%和73.3%,D为73.3%和93.3%,E为66.7%和53.3%,F为73.3%和93.3%;1∶976.56、1∶2 441.41和1∶6 103.52三个稀释度的质控品样本中靶基因的检出率分别为4.00%~60.00%、6.67%~20.00%和0~20.00%。(2)6种不同实时荧光定量PCR仪对1∶10和1∶25两个稀释度的质控品样本中Ct的重复性和实验室内不精密度均<5.00%。结论:不同的实时荧光定量PCR仪对2019-nCoV核酸检测性能存在影响,该2019-nCoV扩增试剂在仪器C、F上的分析灵敏度优于另外4种实时荧光定量PCR仪。

HBV-DNA检测试剂的性能评估与室内质控数据评价

参照美国临床实验室标准化委员会(CLSI)文件,对临床检验使用的实时荧光定量PCR扩增检测试剂盒定量结果的精密度、正确度、定量限、线性范围及抗污染性进行评价。同时用乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)试剂盒检测2016年3月~8月两个批号的质控血清HBV-DNA,并计算质控结果、标准曲线斜率、截距和相关系数的均值()、标准差(SD)和变异系数(CV)。其中批内、批间精密度CV分别为1.08%~4.41%、2.17%~2.74%,达到核酸检测试剂盒的国家标准及《医学实验室质量和能力认可准则》中基因扩增检验项目分析性能标准(CV≤5%)。参加2016年卫生部室间质评结果总体平均偏倚为2.03%,准确度符合卫生部质评要求。相关系数r=0.999 9,>0.98,线性关系符合要求。定量限结果符合±0.5个对数数量级的要求(评价中至少22次为阳性)。本室2016年3月~8月测定的室内质控物结果对数的累积均值(±2s)为4.34(4.20~4.44),符合参考范围要求。经验证,实时荧光定量PCR HBV-DNA检测试剂盒的各项性能指标以及室内质控结果满足《医学实验室质量和能力认可准则》要求,可以为临床提供快速、准确的报告。

一种国产乙型肝炎病毒核酸定量检测试剂不同检测平台上的验证情况分析

目的将圣湘公司乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)在不同荧光定量PCR系统进行性能验证,以给出该试剂盒在不同检测平台上的性能评价。方法依据美国临床和实验室标准化协会(CLSI)颁布的EP系列文件和《医学实验室质量和能力认可准则》相关文件,应用Roche LightCycler~480 II实时荧光定量PCR系统及美国ABI 7500型实时荧光定量PCR系统对圣湘公司乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)进行临床样本精密度、正确度、可报告范围和检测下限的性能验证实验。结果 LightCycler~480 II实时荧光定量PCR系统:2×10~6IU/mL浓度水平批内精密度为1.38%,批间精密度为0.25%;2×10~4IU/mL浓度水平批内精密度为0.35%,批间精密度为0.79%。正确度验证可溯源标准品,偏倚均小于7.5%,符合厂家说明及文件要求。HBV DNA定量结果在2.1×10~2IU/mL至2.1×10~7IU/mL浓度水平范围内线性关系良好(R^2=0.9994),临床可报告范围为2.1×10~2IU/mL^2.1×10~8IU/mL。该系统检测下限为148 IU/mL。ABI 7500型实时荧光定量PCR系统:2×10~6IU/mL浓度水平批内精密度为0.70%,批间精密度为1.34%。2.5×10~4IU/mL浓度水平批内精密度为1.18%,批间精密度为3.01%。正确度验证可溯源标准品,偏倚均小于7.5%,符合厂家说明及文件要求。HBV DNA定量结果在2×10~2IU/mL至2×10~8IU/mL浓度水平范围内线性关系良好(R^2=0.9991),临床可报告范围为2×10~2IU/mL^2×10~9IU/mL。该系统检测下限为203 IU/mL。结论圣湘公司乙型肝炎病毒(HBV)核酸定量检测试剂盒(PCR-荧光探针法)在Roche LightCycler~480 II实时荧光定量PCR系统及美国ABI 7500型实时荧光定量PCR系统上的性能验证结果均符合试剂说明书性能范围,检测结果无明显差异,均可准确快捷的对HBV DNA定量检测,为后续超敏定量工作奠定基础。

肉制品中牛源性成分的快速定性检测研究

文章通过选用磁珠法组织核酸提取试剂盒对畜肉制品中的DNA进行提取,使之适用于PCR检测技术,依据标准《畜肉制品中牛成分定性检测方法实时荧光PCR法》(SN/T 2557—2010)检测其中是否含有牛特异性基因序列,同时在提取时加入猪源作为干扰,并进行灵敏度试验,为验证提取、扩增过程及方法准确性,加做核酸提取空白、扩增空白对照、扩增阴性对照和扩增阳性对照。该方法选用的磁珠法组织核酸提取试剂盒提取效率高,抗干扰能力强,且该方法在检测结果分析中增加了质量控制,可排除假阴性结果,检测时间可缩短为4 h以内,可用于市售新鲜、冷冻畜肉和肉干、肉酱等畜肉制品中的牛成分快速定性检测。从而为打击不法商家和企业用低价猪肉代替或非肉冒充牛肉提供了有力的技术保障,维护了消费者权益。