中国流行株HIV-1Gag与IFN-α2b重组质粒的构建与实验免疫研究

目的探讨中国流行株 ＨＩＶ－ １Ｇａｇ与 ＩＦＮ－ α２ｂ共表达重组核酸疫苗质粒的免疫效果。方法以 核酸疫苗质粒ｐＩＲＥＳ１ｎｅｏ为表达载体，构建重组核酸疫苗质粒ｐＩＲＥＳ１－Ｇａｇ、ｐＩＲＥＳ１－Ｇａｇ－ＩＦＮ，通过间接免疫荧光 试验、ＤｏｔＥＬＩＳＡ检测Ｃａｇ／ｈＩＬ－２／ｈＩＬ－６基因的表达产物。另将此重组核酸疫苗质粒免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，进行淋巴细 胞转化试验、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋Ｔ淋巴细胞数量测定、细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）特异性杀伤作用检测及血清抗体检测。 结果构建的重组质粒转染ＢＨＫ细胞后可表达目的基因，免疫小鼠后可有效地刺激淋巴细胞增殖，诱导特异性 ＣＴＬ反应，当和 ＩＦＮ－α２ｂ共表达时免疫效果更加显著。结论与 Ｇａｇ蛋白共表达的 ＩＦＮ－ａ２ｂ能够进一步提高细胞 免疫与体液免疫水平，构建的重组质粒为ＨＩＶ－１ＤＮＡ疫苗的研究奠定了一定实验基础。

HIV-1中国流行株gp120基因在痘苗病毒中的表达及其与核酸疫苗的实验免疫研究

将HIV 1中国流行株 gp12 0基因在痘苗病毒中进行表达 ,以期获得重组痘苗病毒 ,与核酸疫苗混合免疫 ,评价免疫效果 ,为艾滋病疫苗开发研制打下基础。将HIV 1中国流行株 gp12 0基因片段插入到 pJ38载体启动子下游 ,经同源重组和血凝素阴性空斑筛选重组痘苗病毒 ,SDS PAGE、Westernblot检测目的蛋白。以重组病毒和核酸疫苗免疫BALB/c小鼠 ,进行淋巴细胞转化实验、CTL、CD4 +、CD8+T细胞数目及血清抗体等细胞免疫和体液免疫指标检测。结果获得的重组痘苗病毒vJ38gp12 0能够表达Gp12 0蛋白并诱导机体产生细胞免疫和体液免疫 ,具有良好的免疫原性 ,其免疫效果以 2rVV DNA混合方式为最好。重组痘苗病毒vJ38gp12

Ⅱ型犬腺病毒自然弱毒YCA18株的实验免疫研究

应用 YCA1 8株第 8代细胞培养物 (YCA1 8- 8)经口鼻和静脉接种犬腺病毒 (CAV) SN抗体 <1∶ 2的易感犬作安全试验 ,结果未见任何 CAV临床症状与病理解剖学改变 ;用不同剂量的YCA1 8- 8分组免疫 CAV易感犬 ,经 SN抗体测定与用 CAV强毒攻击试验 ,结果 SN抗体达 1∶ 1 6以上的犬 95%以上可获得免疫保护 ,最低免疫量为 1 0 4 TCID50 ;应用 YCA1 8- 8分别免疫母源抗体达 1∶ 4和 1∶ 8的两组试验犬 ,第一次免疫 1 4d后 SN抗体均未有升高 ,追加 2～ 3次免疫后 SN抗体才逐渐上升至 1∶ 1 6以上的免疫保护水平 ;用 CAV易感犬和 MDCK分别将 YCA1 8连续传 8代和 2 0代 ,结果对犬仍然安全 ,对犬的免疫原性未见下降 ,最低免疫量仍为 1 0 4 TCID50 ;与 CDV和CPV弱毒作免疫互扰试验 ,结果与各弱毒的单独免疫结果未见差异 ;将 YCA1 8- 8冰冻保存于 -30℃ ,6个月内 TCID50 仍不低于 1 0 -4 /0 .1 ml,经加明胶 -蔗糖低温真空冻干后 ,4℃和 - 30℃保存 1年 ,TCID50 均仍维持在 1 0 -4 /0 .1 ml以上 ;经 YCA1 8- 2 0 3次免疫的试验犬 ,1年后 SN抗体仍在最低抗体保护值 1∶ 1 6以上。

猪2型圆环病毒核酸疫苗的接种Balb/c小鼠实验免疫研究

为了筛选得到较理想的核酸疫苗,用pVAX1真核表达载体,以猪白介素18基因、猪2型圆环病毒内蒙株的衣壳蛋白和与复制相关蛋白基因为目的基因,构建了4个重组质粒,分别是pVAX1-ORF2、pVAX1-UL18ORF2、pVAX1-ORF2ORF1和pVAX1-IL18ORF2ORF1。用它们免疫6-8周龄Balb/c小鼠,进小鼠后一周首免,每隔19d免1次,共免3次;每10d采血1次,三免后10d杀鼠取脾。用ELISA方法检测小鼠血清抗体效价,流式细胞仪检测脾T淋巴细胞亚类CD4+、CD8+数量。统计学分析发现:4个核酸疫苗实验免疫组均是从最后一次采集的小鼠血清中,获得最高的抗体效价,与对照组PBS和空载体pVAX1相比都能产生一定的体液免疫反应,且以pVAx1-IL18ORF2ORF1核酸疫苗免疫小鼠产生的血清抗体效价最高;脾T淋巴细胞亚类数量测定发现,免疫实验组的CD4+与CD8+的T细胞亚类总数显著高于对照组(P<0.05),并以pVAX-1-IL18ORF2ORF1数值较高。结论是核酸疫苗pVAX1-IL18ORF2ORF1既能较好地刺激细胞免疫又能产生一定的体液免疫反应,相对较好,将作为候选核酸疫苗进行下一步本体动物免疫实验研究。

PBL、CBL与TBL联合教学法在临床免疫检验学实验课教学中的应用

为了探讨PBL、CBL与TBL联合教学法在临床免疫检验学实验课教学中的应用效果,文章以广西中医药大学2021—2022级医学检验专业本科学生76人为研究对象,采用随机数字表法将76个学生划分为对照组和观察组,分别采用传统教学方法和PBL、CBL与TBL联合教学法对两组学生进行为期8周的授课,授课结束后对两组学生的期末成绩和教学满意情况进行评估,结果显示,观察组学生的期末成绩和教学满意情况得分显著高于对照组学生(P<0.05)。

黄芪甲苷对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠T细胞免疫调节的影响

背景:多发性硬化初始阶段,中枢免疫细胞激活并释放大量炎症因子,引起白质脱髓鞘甚至累及灰质神经元。CD4^(+)T细胞不同亚群之间的分化平衡在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的病程进展中发挥着重要作用。课题组前期研究结果表明黄芪内有效成分黄芪甲苷能够调节EAE小鼠体内免疫反应,其是否对T细胞亚群分化具有调节作用尚未明确。目的:探究黄芪甲苷对EAE小鼠治疗效果及其对T细胞的免疫调控机制。方法:将C57BL/6雌性小鼠分为正常对照组、EAE疾病模型组和黄芪甲苷治疗组,每组8只,后2组使用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55)制备EAE模型,免疫后第10-28天,黄芪甲苷治疗组以40 mg/(kg·d)灌胃给药。免疫当天至第28天,记录各组小鼠的体质量及临床评分;免疫后第28天取小鼠脊髓制成冰冻切片行苏木精-伊红染色、固蓝染色观察脊髓病理改变,流式细胞术检测脾脏T细胞亚群百分比,Western blot法检测脊髓组织中γ干扰素、白细胞介素17、白细胞介素6的蛋白表达,ELISA检测脾细胞上清液中γ干扰素、白细胞介素17、白细胞介素6、白细胞介素4水平。结果与结论:(1)与EAE疾病模型组相比,黄芪甲苷治疗能够减少EAE小鼠体质量丢失(P<0.05),缓解临床症状(P<0.05),减轻脊髓炎症细胞浸润及髓鞘脱失病理改变(分别为P<0.01和P<0.05);(2)与EAE疾病模型组相比,黄芪甲苷治疗可抑制表达γ干扰素和白细胞介素17的CD4^(+)T细胞亚群比例(分别为P<0.001和P<0.001),上调表达白细胞介素10和转化生长因子β的CD4^(+)T细胞亚群百分比(分别为P<0.001和P<0.01);(3)黄芪甲苷可下调脊髓和脾脏中γ干扰素(分别为P<0.05和P<0.01)、白细胞介素17(分别为P<0.05和P<0.05)、白细胞介素6(分别为P<0.05和P<0.05)的表达,上调脾脏中抑炎因子白细胞介素4的表达(P<0.01);(4)结果说明,黄芪甲苷可以减轻EAE小鼠的临床症状,其机制与调节脾脏免疫细胞亚群进而抑制炎症细胞向中枢浸润、减少髓鞘脱失有关。

基于氧化应激及肠道菌群探讨逍遥补肾方对实验性自身免疫性甲状腺炎模型大鼠作用机制的影响

目的通过观察逍遥补肾方对实验性自身免疫性甲状腺炎模型(experimental autoimmune thyroiditis,EAT)大鼠氧化应激及肠道菌群的影响,探讨逍遥补肾方的疗效机制。方法将65只大鼠随机分为正常组10只,造模组55只。造模组采用高碘水喂养联合甲状腺球蛋白皮下注射复刻EAT大鼠模型,造模成功的EAT大鼠随机分为模型组、硒酵母组及逍遥补肾组,每组17只。硒酵母组予25.2 mg/(kg·d)硒酵母片水溶液,逍遥补肾组予11.79 g/(kg·d)逍遥补肾方溶液,正常组、模型组灌胃给予等体积的蒸馏水。连续灌胃8周后,采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测各组大鼠血清游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine3,FT3)、游离甲状腺素(free thyroxine,FT4)、促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)、甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin antibody,TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(thyroid peroxidase antibody,TPOAb)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malonic dialdehyde,MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPx)水平,采用免疫荧光检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。收集各组大鼠的粪便进行16S rDNA高通量测序,分析肠道菌群多样性和物种丰度的变化,通过相关性分析筛选逍遥补肾方改善EAT大鼠的相关菌群。结果与正常组相比,模型组大鼠血清TSH、SOD、SOD/MDA、GPx明显下降,TPOAb、TGAb、MDA水平明显升高,ROS的免疫荧光强度明显增强(P<0.01)。给予治疗药物后,逍遥补肾组及硒酵母组的上述指标均较模型组有一定改善(P<0.01或P<0.05)。16S rDNA测序结果显示,逍遥补肾方能够调节厚壁菌门、拟杆菌门等相对丰度调节EAT大鼠的肠道菌群紊乱。脱硫弧菌属及粪球菌属是逍遥补肾组的优势菌群。结论逍遥补肾方能够调节EAT大鼠血清TSH及甲状腺双抗体水平,改善氧化应激状态,其作用机制可能与调节多种肠道菌群失调有关。

基于CiteSpace的医学免疫学实验教学研究现状、热点及发展趋势的可视化分析

医学免疫学是连接基础医学和临床医学的重要桥梁课程,也是医学生基础医学理论学习中的重点和难点。医学免疫学实验可将基础知识进行系统串联,并融入学生实际操作、主动观察和积极思考的过程中,有助于学生系统地理解和掌握免疫学基本概念和原理。医学免疫学实验教学研究现状、热点及发展趋势已成为教师们关注的重点话题。本文通过运用CiteSpace软件对2010至2021年间中国知网收录的医学免疫学实验教学研究文献的发文量、作者合作网络、关键词共现网络、关键词聚类图谱、关键词时间线图谱以及关键词突现图谱6个方面进行可视化分析。结果显示,该领域近10年发文量较为平稳;已初步形成内部合作关系紧密的代表性研究团队;关键词共现图谱中具有较高中介中心性的关键词包括实验教学、免疫学、教学改革、实验课及医学生。同时,该领域研究内容已较为成熟,涵盖医学免疫学实验教学改革的整体研究,具体包括教学方法的实践探究、教学实践中特定学生及教师群体的研究3个方面。值得注意的是,“以学生为中心”的教育理念在实验教学方法的改革创新研究中得到各类医学高校专业教师的重视,注重培养学生科研思维、创新精神、自主学习能力以及综合素质的教学模式正日趋成型。本研究将有助于广大教师把握该领域的现状、热点及发展趋势,为提升课堂教学质量与开展后续教学改革提供理论支持和参考。

纳米抗体多聚化测略提升间接竞争性酶联免疫吸附实验检测黄曲霉毒素M_(1)的灵敏度

酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)具有高通量、操作简单、检测结果明显等优点,是一种较为理想的检测食品中真菌污染物的免疫分析技术。然而,传统的ELISA方法具有较大的局限性,比如使用时抗体易受温度影响,容易变性,贮存期短,易受到检测环境中其他物质干扰而造成假阳性或假阴性等。该实验使用实验室前期获得的抗黄曲霉毒素M_(1)(aflatoxin M_(1),AFM_(1))纳米抗体(nanobody-M4,Nb-M4)与C4结合蛋白(recombinant C4 binding protein alpha,C4BPa)C端片段融合形成自组装七聚体融合蛋白(Nb-M4-C4 bpα),并基于该七聚体开发应用于乳制品中AFM_(1)的间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)。在最佳实验参数下,AFM_(1)的IC_(50)为0.038 ng/mL,检测限为0.009 ng/mL,较单体Nb-M4的提高了8.63倍和5.56倍。与AFM_(1)类似物和其他常见真菌毒素的交叉反应可忽略不计,且在加标乳样中获得了良好的回收率和可重复性。此外,将所开发的方法应用于实际样品中AFM_(1)的分析,结果与HPLC的结果具有很好的相关性(R^(2)=0.995)。该研究表明,自组装的七聚化纳米抗体是改善亲和力和信号放大的有效策略,今后可用于灵敏、选择性和快速检测食品中的霉菌毒素和其他小分子污染物。

雷公藤红素在实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)小鼠眼组织中的抗炎作用及其对小胶质细胞极化的影响

目的探讨雷公藤红素在实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)小鼠眼组织中的抗炎作用及其对小胶质细胞极化的影响。方法取健康6~8周龄B10.RIII小鼠36只,随机分为正常对照组、EAU溶剂对照组、雷公藤红素干预组,每组12只。将光感受器间维生素A类结合蛋白161-180和完全弗氏佐剂充分乳化混合后,注射于EAU溶剂对照组和雷公藤红素干预组小鼠双侧大腿和尾部皮下,总体积200μL,每只小鼠注射光感受器间维生素A类结合蛋白161-180的量为50μg。免疫后第7-14天,雷公藤红素干预组小鼠每天接受0.5 mg·kg^(-1)雷公藤红素腹腔注射治疗,EAU溶剂对照组小鼠注射同等剂量的无菌PBS缓冲溶液。免疫后第14天,通过裂隙灯显微镜观察各组小鼠眼前节表现及行组织切片HE染色,并参照Caspi分级标准对各组小鼠进行临床评分及组织病理学评分;免疫荧光染色观察小鼠眼内小胶质细胞活化情况;Western blot检测小鼠视网膜中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶-1(Arg1)蛋白表达水平;qRT-PCR检测小鼠视网膜中炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6 mRNA相对表达量。采用Graphpad Prism 9.0统计软件进行数据分析。结果免疫后第14天,通过裂隙灯显微镜观察发现,EAU溶剂对照组小鼠眼前节可见虹膜血管扩张充血明显、角膜水肿、前房渗出;而雷公藤红素干预组小鼠眼前节炎症明显减轻,可见虹膜血管轻度充血。与正常对照组相比,EAU溶剂对照组与雷公藤红素干预组小鼠临床评分均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。雷公藤红素干预组小鼠临床评分低于EAU溶剂对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示,免疫后第14天,EAU溶剂对照组小鼠出现严重的视网膜皱褶和脱离,炎症细胞弥漫浸润;而雷公藤红素干预组小鼠视网膜结构破坏轻微,可见少量炎症细胞浸润。与正常对照组相比,EAU溶剂对照组与雷公藤红素干预组小鼠组织病理学评分均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。雷公藤红素干预组小鼠组织病理学评分低于EAU溶剂对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。正常对照组、EAU溶剂对照组、雷公藤红素干预组小鼠眼内Iba1+细胞密度分别为(1.00±0.12)%、(36.07±4.57)%、(1.83±0.36)%,与正常对照组相比,EAU溶剂对照组及雷公藤红素干预组小鼠眼内Iba1+细胞数增加,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与EAU溶剂对照组相比,雷公藤红素干预组小鼠眼内Iba1+细胞数明显减少,差异有统计学意义(P<0.05)。与正常对照组相比,EAU溶剂对照组小鼠视网膜中iNOS、Arg1蛋白表达水平均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.01);与EAU溶剂对照组相比,雷公藤红素干预组小鼠视网膜中iNOS蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与正常对照组相比,EAU溶剂对照组小鼠视网膜中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA相对表达量均升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);与EAU溶剂对照组相比,雷公藤红素干预组小鼠视网膜中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA相对表达量均下降,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论雷公藤红素可抑制M1型小胶质细胞活化,减少EAU小鼠视网膜炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6的产生,减轻炎症反应。

IgG受体FcγRⅡB调节实验性自身免疫性脑脊髓炎致神经元损伤及Th17/Treg免疫平衡的作用研究

目的:探究IgG受体FcγRⅡB对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)模型小鼠神经元损伤与Th17/Treg失衡的作用。方法:C57BL/6小鼠随机分组为对照组、EAE组、FcγRⅡB组、EAE+FcγRⅡB组,每组15只,皮下注射MOG35-55肽诱导EAE模型,并给予FcγRⅡB慢病毒液处理;造模后每日称量小鼠体质量,进行神经功能评分,持续30 d;30 d后处死小鼠,HE染色观察脑组织病理形态学变化,LFB染色评估脊髓髓鞘结构变化,免疫荧光染色检测脊髓大脑皮质神经元核抗原(NeuN)和Caspase-3表达,TUNEL染色检测神经元细胞凋亡,ELISA检测血清IL-6、IL-17、IL-10及TGF-β水平,流式细胞术分析脾脏Th17、Treg细胞比例分布,Western blot测定脊髓组织维甲酸相关孤儿受体γt(RORγt)与Forkhead家族转录因子3(Foxp3)蛋白表达。结果:与对照组比较,EAE组小鼠体质量下降,神经功能评分升高,脑组织内炎症细胞浸润明显,脊髓中出现脱髓鞘迹象,NeuN荧光表达强度减弱而Caspase-3荧光表达强度增强,TUNEL阳性着色细胞多,细胞凋亡数增加,血清中IL-6和IL-17水平升高,IL-10和TGF-β水平降低,脾脏内Th17细胞比例升高,Treg比例降低,脊髓组织内RORγt蛋白表达上调,Foxp3蛋白表达下调(P<0.05);与EAE组比较,EAE+FcγRⅡB组小鼠体质量增加,神经功能评分降低,脑组织内炎症细胞浸润减轻,脊髓脱髓鞘现象得到改善,NeuN荧光表达强度增强,Caspase-3荧光表达强度减弱,TUNEL阳性着色细胞较少,细胞凋亡数减少,血清中IL-6和IL-17水平降低,而IL-10和TGF-β水平升高,同时脾脏内Th17细胞比例降低,Treg比例升高,脊髓组织内RORγt蛋白表达下调而Foxp3蛋白表达上调(P<0.05)。结论:FcγRⅡB对EAE小鼠具有神经保护作用,可减轻其脑组织炎症细胞浸润及脱髓鞘现象,作用机制可能与调节细胞因子水平及Th17/Treg细胞免疫平衡有关。

lncRNA 5033413D16Rik对实验性自身免疫性葡萄膜炎Th17细胞活性的抑制作用

目的探讨长链非编码RNA 5033413D16Rik(lncRNA 5033413D16Rik)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)中光感受器间维生素A类结合蛋白1-20(IRBP_(1-20))特异性辅助性T17(Th17)细胞活性的影响。方法选取SPF级8~10周龄C57BL/6雌性小鼠12只,采用随机数字表法分为EAU组和正常对照组,每组各6只。正常对照组小鼠不接受任何处理,将IRBP_(1-20)和完全弗氏佐剂充分乳化后主动免疫EAU组小鼠。免疫后13 d,行眼底检查并进行炎症评分,苏木精-伊红染色观察视网膜组织病理学改变;分离EAU小鼠脾脏及淋巴结中T细胞,实时荧光定量PCR检测lncRNA 5033413D16Rik相对表达量。将分离培养的T细胞分为短发夹RNA(shRNA)-5033413D16Rik转染组和shRNA-阴性对照(NC)转染组,分别转染相应shRNA,实时荧光定量PCR验证shRNA-5033413D16Ri的敲低效率。将2个组细胞分别与骨髓源性树突状细胞在Th17极化条件下共培养,实时荧光定量PCR检测2个组共培养细胞中转录因子维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、白细胞介素17(IL-17)、IL-23受体(IL-23R)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)mRNA相对表达量;ELISA试剂盒检测2个组共培养细胞上清中IL-17质量浓度;流式细胞仪检测2个组共培养细胞中Th17细胞百分比。结果成功建立小鼠EAU模型。实时荧光定量PCR检测结果显示,与正常对照组相比,EAU组小鼠T细胞中lncRNA 5033413D16Rik相对表达量显著降低,差异有统计学意义(t=-13.332,P<0.001)。与shRNA-NC转染组相比,shRNA-5033413D16Rik转染组T细胞中lncRNA 5033413D16Rik相对表达量显著降低,差异有统计学意义(t=-6.338,P<0.01)。shRNA-5033413D16Rik转染组共培养细胞中RORγt、IL-17、IL-23R和GM-CSF mRNA相对表达量分别为1.61±0.13、1.51±0.13、1.85±0.33和1.45±0.11,明显高于shRNA-NC转染组的1.00±0.01、1.00±0.01、1.00±0.01和1.00±0.01,差异均有统计学意义(t=-6.839、-8.221、-4.538、-4.189,均P<0.05);ELISA检测结果显示,shRNA-5033413D16Rik转染组共培养细胞上清中IL-17质量浓度为(2350.39±367.02)pg/ml,明显高于shRNA-NC转染组的(1513.31±310.37)pg/ml,差异有统计学意义(t=-3.016,P=0.039);流式细胞仪检测结果显示,shRNA-5033413D16Rik转染组共培养细胞中Th17细胞比例为(17.20±0.44)%,明显高于shRNA-NC转染组的(14.10±0.84)%,差异有统计学意义(t=-3.264,P=0.031)。结论lncRNA 5033413D16Rik可以抑制抗原特异性Th17细胞致病性相关基因的表达,负向调控IRBP_(1-20)特异性Th17细胞反应。

衣康酸二甲酯对树突状细胞分泌促炎因子以及实验性自身免疫性葡萄膜炎小鼠辅助性T细胞17的影响

目的探究衣康酸二甲酯(DMI)对树突状细胞(DCs)分泌促炎因子的作用,并初步研究其对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)小鼠光感受器间维生素A类结合蛋白1-20(IRBP_(1-20))特异性辅助性T细胞17(Th17)的影响。方法分离C57BL/6J小鼠双侧股骨和胫骨得到骨髓细胞,利用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素(IL)-4将其定向诱导分化为骨髓来源的DCs。诱导分化6 d,将细胞分为DMI组和PBS组,分别用250μmol·L^(-1)DMI及等量的磷酸盐缓冲液(PBS)预处理3 h后,每组加入100μg·L^(-1)脂多糖(LPS)刺激24 h。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测两组DCs中促炎因子IL-6、IL-1β和IL-23 mRNA相对表达量。采用IRBP_(1-20)、弗氏不完全佐剂及结核分枝杆菌H37RA主动免疫小鼠构建EAU模型,免疫后13 d,将分离的EAU小鼠脾脏及淋巴结T细胞与PBS或DMI处理的DCs在含有IRBP_(1-20)的培养基中共培养,并向Th17方向极化。流式细胞仪检测共培养细胞中Th17细胞比例。ELISA检测共培养上清液中IL-17水平。qRT-PCR检测共培养细胞中维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、IL-17、IL-23R和GM-CSF mRNA相对表达量。结果qRT-PCR检测结果显示,DMI组DCs中IL-6、IL-1β和IL-23 mRNA相对表达量均明显低于PBS组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,DMI组共培养细胞中Th17细胞比例明显低于PBS组,差异有统计学意义(P<0.05)。ELISA检测结果显示,DMI组共培养上清液中IL-17水平明显低于PBS组,差异有统计学意义(P<0.05)。DMI组共培养细胞中IL-17、RORγt、IL-23R和GM-CSF mRNA相对表达量均明显低于PBS组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论DMI能够抑制DCs中促炎因子IL-6、IL-1β和IL-23的表达,进而负向调控IRBP_(1-20)特异性Th17细胞反应。

以岗位胜任力为导向的医学免疫学实验教学模式研究

目的推动教学改革适应新医科发展,补足医学生思政素养和实践能力短板。方法本课题以岗位胜任力为导向,构建了一体化的医学免疫学实验课程教学模式。该模式将医学免疫学设计性实验“急性呼吸窘迫综合征的免疫学诊治”作为专业主体,以“课程思政”和“劳动素养”为两翼,通过思政引领、科学探究和劳动提升三环节联动强化学生的临床能力、职业素养和实践能力。结果学生的专业知识水平明显提高,学习兴趣、劳动积极性、创造性被激发,团队合作和探究辨析能力进一步提高。结论该医学免疫学实验课程教学模式有效提升了医学生的临床岗位胜任力。

莱鲍迪甙B通过线粒体凋亡途径对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的保护作用

目的探讨莱鲍迪甙B在实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)模型中的保护作用及相关机制。方法培养BV2细胞,将细胞按完全随机法分为正常对照组、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)炎症细胞模型组、莱鲍迪甙B干预组。给予BV2细胞1μg/mL LPS培养24 h制备LPS炎症细胞模型。莱鲍迪甙B干预组于造模前给予10μmol/L莱鲍迪甙B干预4 h。利用流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,采用免疫荧光法观察细胞形态学变化,采用Western blot检测细胞抗活化半胱氨酸蛋白酶蛋白-3抗体(Caspase-3)、抗Bcl-2相关X蛋白抗体(Bax)和抗B细胞淋巴瘤因子-2抗体(Bcl-2)表达情况。选取6~8周龄雌性C57BL/6小鼠30只,随机分为正常对照组、EAE模型组、莱鲍迪甙B干预组,每组各10只。利用MOG_(35-55)多肽皮下注射法构建EAE动物模型。莱鲍迪甙B干预组小鼠于造模后第8天给予腹腔注射莱鲍迪甙B(按体重1 mg/kg),持续15 d。采用HE染色观察小鼠脊髓组织病理学变化,采用Western blot检测脊髓组织Caspase-3、Bax和Bcl-2表达情况,采用透射电镜观察小鼠脑组组织内凋亡小体。结果(1)细胞实验结果:与正常对照组相比,LPS炎症细胞模型组的细胞S期比例下降,细胞核染色质固缩明显,细胞凋亡率上升,Caspase-3表达水平增加,Bax/Bcl-2比值升高(均P<0.01)。与LPS炎症细胞模型组相比,莱鲍迪甙B干预组细胞S期比例上调,细胞核染色质固缩现象改善,细胞凋亡率下降,Caspase-3表达水平降低及Bax/Bcl-2比值降低(均P<0.01)。(2)动物实验结果:与正常对照组相比,EAE模型组小鼠脊髓组织炎症细胞浸润增多,Caspase-3表达水平增加及Bax/Bcl-2比值升高(均P<0.01),小鼠脑组织的细胞形态异常,出现凋亡小体。与EAE模型组小鼠相比,莱鲍迪甙B干预组小鼠脊髓组织Caspase-3表达水平下降及Bax/Bcl-2比值下降(均P<0.01),小鼠脑组织细胞形态基本正常。结论莱鲍迪甙B对EAE模型小鼠具有神经保护作用,其作用机制与莱鲍迪甙B抑制细胞凋亡途径有关。

医学免疫学实验教学改革实践与探索

医学教育的关注点不仅在于传授知识和解答问题,更应着重于培养学生的综合能力。医学免疫学是高等医学院校的重要课程之一,主要研究机体免疫系统与疾病发生的关系。然而,传统的免疫学实验教学存在一些问题,包括教学内容缺乏更新、仪器设备陈旧、跨学科整合不足、学生参与度低以及评估方式单一等。这些问题导致实验教学与科研实践、临床应用之间的脱节,进而影响了教学效果。近年来,越来越多的教学方法被引入到实验教学中,包括整合实验课、科研早接触、翻转课堂、以问题为基础的教学法(problem-based learning,PBL)和虚拟仿真等,以弥补传统教学模式的不足。文章总结并思考了免疫学实验教学中的问题和改革措施,期望通过持续的探索和改革来提高教学质量,以培养更多具备综合能力的医学人才。

“病原生物学与免疫学实验”课程思政建设探索与实践

高校落实立德树人的关键措施是课程思政建设,不同类型课程的思政建设要求需要具体问题具体分析。本文以病原生物学与免疫学实验课程为例,深入挖掘病原生物学与免疫学实验课程思政教育内涵和实施路径。通过问卷调查学生对实验课融入思政教育的看法和教学反馈,深入分析实验课程的思政融入实际效果并提出建议,以促进医学类实验课程思政教育的不断深入发展。

病原生物与免疫学实验教学体系的整合

病原生物与免疫学是现代医学领域中的重要学科。传统上,这两个学科在实验教学中被分开进行,而没有进行充分的整合。本文旨在探讨病原生物与免疫学实验教学体系的整合,并提出一种基于综合实验的教学模式。

《口腔临床免疫学实验技术》出版发行

书籍名称:口腔临床免疫学实验技术主编:陈万涛出版日期:2023年11月出版社:人民卫生出版社内容简介:本书主要介绍口腔免疫学领域,根据近年来国内外免疫学及口腔免疫学的基础和临床研究的最新成果编写而成。全书编写内容循序渐进,分别为口腔免疫学基础知识,口腔及口腔颌面部常见的免疫反应性疾病的免疫机制及特点。

功能化外泌体对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠治疗的研究

目的:探究负载髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)的293F细胞来源的外泌体(EXO)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的治疗效果。方法:利用Western印迹、透射电子显微镜以及Nanosight对超速离心分离的293F细胞上清EXO进行表征;利用流式细胞术和共聚焦显微镜检测细胞摄取EXO的生物学功能;利用EXO特异性锚定肽EXP将MOG抗原肽修饰于EXO表面,流式细胞术检测EXO与MOG抗原肽的结合效率(EXO_(MOG));活体成像检测EXO_(MOG)的体内分布;利用小鼠的临床评分、体重变化以及收样时小鼠脾细胞中调节性T细胞变化和脊髓染色,评估EXO_(MOG)对EAE小鼠的治疗效果;利用组织形态学染色检测EXO_(MOG)治疗对各组小鼠不良反应。结果:超速离心可成功分离EXO,且分离的EXO具有被细胞摄取的生物学功能;EXP外泌体锚定肽介导MOG抗原肽高效负载于EXO表面,且不影响EXO的体内分布;在EAE小鼠上测试结果显示:与未治疗组和MOG组相比,EXO_(MOG)组小鼠治疗后第24天的体重显著增加(P<0.05),行为学评分显著降低(P<0.05),且治疗后小鼠脾脏中CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞显著增高(P<0.05);病理染色结果表明:EXO_(MOG)组小鼠的各组织器官未见明显病理学改变。结论:EXO_(MOG)能够有效缓解小鼠EAE疾病进展且未检测到相关不良反应。