英夫利昔治疗实验性免疫性肌炎实验研究

目的观察英夫利昔对实验性免疫性肌炎(EIM)的治疗效果。方法建立EIM动物模型,分别应用英夫利昔0.125 mL(1次/周)、地塞米松1 mg(1次/d)及生理盐水(NS)1 mL(1次/周)治疗EIM,并通过临床症状评分及病理改变评价其对EIM的疗效。结果地塞米松组治疗后临床症状评分下降1.1,有效率75%;英夫利昔组治疗后临床症状评分下降1.5,有效率94%;地塞米松组与英夫利昔组治疗前后临床症状评分差异有统计学意义(P<0.01);与对照组相比,地塞米松组与英夫利昔组治疗后临床症状评分差异均有统计学意义(均P<0.05);非参数Riddit分析表明,两组治疗后病理分级明显优于对照组(均P<0.01);经组织学评价,英夫利昔组和地塞米松组与对照组相比有效率更高(均P<0.05)。结论英夫利昔治疗EIM疗效明显。

调节性T细胞与Th17细胞相关因子在实验性自身免疫性肌炎小鼠淋巴结中的表达及意义

目的研究调节性T细胞(Treg)、Th17细胞的相关细胞因子在实验性自身免疫性肌炎小鼠淋巴结中表达的作用及意义。方法雌性BALB/c小鼠12只,随机分为正常对照组和模型组,模型组采用肌球蛋白诱导实验性自身免疫性肌炎(EAM)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组小鼠淋巴结中与Treg和Th17细胞分化及功能相关的细胞因子Foxp3、IL-10、TGF-β、RORγt、IL-6、IL-17、IL-23的mRNA表达。结果与正常小鼠相比,肌炎组小鼠淋巴结中Treg的转录因子Foxp3表达降低,相关的细胞因子IL-10、TGF-βmRNA表达水平增高;Th17的转录因子RORγt及相关的细胞因子IL-6、IL-17、IL-23 mRNA表达有不同程度的升高(P<0.05)。结论实验性自身免疫性肌炎中Treg表达降低,而Th17及其相关因子表达升高,提示Treg和Th17之间的失衡在肌炎发病机制中起一定作用。

TLR4、MyD88、NF-κBmRNA在实验性自身免疫性肌炎小鼠淋巴结中的表达及意义

目的:研究TLR4、MyD88、NF-κB mRNA在实验性自身免疫性肌炎小鼠淋巴结中的表达情况,探讨TLR4在肌炎发病中的作用。方法:将30只雌性BALB/c小鼠随机分为5组(每组6只):第1组为正常对照组,其它4组分别为肌炎模型1周处理组、2周处理组、3周处理组和4周处理组,后4组均应用肌球蛋白诱导实验性自身免疫性肌炎模型(EAM)。采用实时荧光定量PCR方法检测各组小鼠淋巴结TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达水平。结果:(1)与正常小鼠相比,肌炎各组小鼠淋巴结中TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达均有统计学差异,表现为不同程度升高(P<0.01),第3组升高最为显著(P<0.01),第4组较第5组升高(P<0.01);(2)各组淋巴结中TLR4 mRNA表达水平与MyD88 mRNA、NF-κBmRNA表达水平均呈正相关(r=0.906,r=0.967,P<0.01),MyD88 mRNA表达水平与NF-κB mRNA表达水平呈正相关(r=0.919,P<0.01)。结论:TLR4在自身免疫性肌炎发生发展过程中发挥重要作用,且以MyD88依赖型信号途径为主,并通过激活NF-κB促进炎性因子释放。

雷公藤多甙对CD28在实验性自身免疫性肌炎发病中作用的影响

目的 :观察 CD2 8在实验性自身免疫性肌炎 (EAM)发病中的作用 ;从 CD2 8核因子 κB(NFκB)信号传导通路探讨雷公藤多甙 (TWP)治疗多发性肌炎 (PM)的分子免疫学机制。方法 :用兔肌匀浆加等量完全福氏佐剂在大鼠背部肌肉和皮下组织多点注射制作 EAM动物模型。应用双色免疫荧光法流式细胞仪检测大鼠外周血 CD+ 4 和 CD+ 8T细胞上 CD2 8分子的表达 ;蛋白质免疫印迹 (Western blot)法检测 NFκB蛋白表达。结果 :EAM组外周血淋巴细胞以 CD+ 8T细胞为主 ,CD2 8及 NFκB表达明显增加。TWP组 CD+ 4 和 CD+ 8T细胞减少 ,CD2 8和 NFκB表达受抑制 (P<0 .0 5 )。结论 :EAM表现为 CD+ 8T细胞介导的细胞免疫反应异常 ,CD2 8在 EAM的发病中起重要作用 ,通过激活核转录因子使免疫反应进一步加强。 TWP可能通过抑制CD2 8NFκB这一信号传导通路从而抑制免疫反应。

实验性自身免疫性肌炎中MMP-2,MMP-9,TIMP-1的表达及甲基强的松龙的影响

目的 :探讨基质金属蛋白酶 (MMP 2 ,MMP 9)及基质金属蛋白酶抑制剂 (TIMP 1)在实验性自身免疫性肌炎 (EAM)发病中的作用 ,以及甲基强的松龙对MMP 2 ,MMP 9,TIMP 1基因mRNA和蛋白表达的影响。方法 :应用RT PCR及免疫组织化学技术 ,研究MMP 2 ,MMP 9及TIMP 1在EAM组、甲基强的松龙治疗组 (EAMM组 )和对照组 (NS组 )大鼠外周血、脾脏、肌肉组织中的表达水平。结果 :EAMM组大鼠发病程度低于EAM组 ,炎症细胞浸润和肌纤维坏死程度减轻。MMP 2 ,MMP 9mRNA在EAM大鼠外周血、脾脏淋巴细胞中的表达上调 ;MMP 2 ,MMP 9蛋白在EAM组大鼠肌肉组织表达增加 ,与对照组相比差异有显著性。EAMM组MMP 2 ,MMP 9mRNA的表达及蛋白的表达均受到抑制 ,与EAM组比较差异有显著性。EAMM组TIMP 1基因mRNA及蛋白的表达上调 ,与EAM组相比差异有显著性。结论 :MMP 2 ,MMP 9表达增加可能与EAM发病有关 ;TIMP 1可能参与了抑制免疫反应 ;甲基强的松龙能减轻EAM发病程度 ,其作用机制可能与MMP 2及MMP 9的表达下调、TIMP

实验性自身免疫性肌炎动物模型制备

目的:制备实验性自身免疫性肌炎(EAM)动物模型,观察白介素-6(IL-6)在EAM模型肌肉组织中的表达。方法:豚鼠20只,随机分为模型组12只和对照组8只,模型组采用纯化兔骨骼肌肌球蛋白+弗氏完全佐剂(CFA)免疫注射,对照组给予CFA+PBS免疫注射,2组均每周免疫1次,连续6周,并同时给予2次百日咳菌液腹腔注射。观察2组临床表现、血清肌酶水平及肌肉病理,并采用免疫组织化学方法检测IL-6在肌肉组织中的表达。结果:模型组豚鼠血清中肌酸激酶、乳酸脱氢酶、谷草转氨酶水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。注射免疫第6周末,2组临床评分差异有统计学意义(P<0.05),模型组血清肌酶水平与临床评分呈正相关(r=0.853,P<0.05)。模型组的肌束膜、肌内膜和坏死肌纤维处均有IL-6阳性表达,对照组肌肉标本几乎无IL-6表达。结论:EAM模型制备成功,IL-6在其发病过程中可能起重要作用。

实验性自身免疫性肌炎动物模型的制作

目的探讨实验性自身免疫性肌炎(EAM)动物模型制作方法。方法实验动物选用健康雌性英国短毛豚鼠20只,分为正常组5只、佐剂对照组5只、EAM组10只。正常组不予任何处理;佐剂对照组采用完全弗氏佐剂(CFA)0.25mL加等量PBS;EAM组采用CFA 0.25mL加等体积浓度为10mg/L的兔纯化肌球蛋白悬液,分别于0、7、14、21d进行分次皮下注射,并在0、7d同时联合腹腔注射百日咳杆菌原液。评价实验动物的临床症状、血肌酶及病理改变。结果正常组及佐剂对照组动物的临床症状、血肌酶及病理改变未见异常。EAM组动物血肌酶升高,临床症状与病理改变与人类多发性肌炎类似,模型成功率为80%。结论应用纯化肌球蛋白制作实验性自身免疫性肌炎动物模型死亡率低,成功率高,为研究人类发性炎性肌病发病机理和治疗提供较好的工具,肌球蛋白可能是诱发自身免疫反应的候选成分之一。

调节性T细胞在小鼠实验性自身免疫性肌炎模型中的表达及意义

目的 探讨调节性T细胞（Treg）与实验性自身免疫性肌炎（EAM）的关系.方法 将20只BALC/c小鼠完全随机分为EAM组和刘照组,各10只.EAM组皮下注射0.25 ml弗氏完全佐剂＋0.25 ml20 μg/μl骨骼肌匀浆,对照组皮下注射0.25 ml弗氏完全佐剂＋0.25 ml磷酸盐缓冲液,观察2组小鼠肌肉组织形态学变化和CD45表达.流式细胞仪检测2组小鼠外周血及脾脏单个核细胞中CD4＋CD25＋ Foxp3＋ Treg所占CD4＋T细胞的比例.结果 EAM组小鼠肌肉组织HE染色可见大量炎性细胞浸润,伴有肌纤维萎缩、坏死、吞噬,CD45表达阳性.对照组未见炎性细胞浸润.EAM小鼠外周血单个核细胞中CD4＋CD25＋Foxp3Treg所占CD4 T细胞的比例低于对照组小鼠[（8.0±4.O）％比（15.5±6.9）％],脾脏单个核细胞中CD4＋CD25 Foxp3＋ Treg所占CD4 T细胞的比例低于对照组小鼠[（4.7±2.2）％比（8.6±4.0）％],差异均有统计学意义（均P＜0.05）.结论 Treg细胞群在维持机体免疫平衡中起重要作用,为特发性炎性肌病免疫机制的研究及治疗提供了新思路.

他克莫司下调实验性自身免疫性肌炎小鼠肌组织中IL-17和IL-23 mRNA水平

目的研究白细胞介素17(IL-17)、IL-23 mRNA在实验性自身免疫性肌炎(EAM)小鼠肌组织表达情况,探讨他克莫司(TAC)处理对IL-17、IL-23 mRNA水平的影响及对EAM小鼠的治疗效果。方法 15只雌性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、EAM模型组和TAC处理组;HE染色观察肌组织炎症程度;实时荧光定量PCR检测小鼠肌组织IL-17、IL-23 mRNA水平;Pearson法分析二者间的相关性。结果与正常组相比,EAM组小鼠肌组织IL-17、IL-23 mRNA水平显著升高,给予TAC处理后均明显降低。二者表达水平与肌组织炎症评分呈正相关。与EAM组比较,TAC处理组小鼠肌组织炎症评分也有所下降。结论 TAC可下调EAM小鼠IL-17、IL-23 mRNA水平。

MMP-9、TIMP-1在实验性自身免疫性肌炎中的表达及甲基强的松龙的影响

目的探讨MMP-9在实验性自身免疫性肌炎(EAM)发病中的作用,以及甲基强的松龙对MMP-9、TIMP-1基因mRNA和蛋白表达的影响。方法应用RT-PCR及免疫组织化学技术,检测MMP-9、TIMP-1在EAM组、甲基强的松龙治疗组(EAMM组)和对照组大鼠外周血、脾脏、肌肉组织中的表达水平。结果(1)EAMM组大鼠发病程度低于EAM组,炎症细胞浸润和肌纤维坏死程度减轻。(2)MMP-9mRNA在EAM大鼠外周血、脾脏淋巴细胞中的表达上调;MMP-9蛋白在EAM组大鼠肌肉组织表达增加,与对照组比较,差异有显著性。EAMM组MMP-9mRNA及蛋白的表达均受到抑制,与EAM组比较差异有显著性。(3)与EAM组比较,EAMM组TIMP-1基因mRNA表达明显增加,同时TIMP-1蛋白表达上调更明显,差异有显著性。结论MMP-9表达增加可能与EAM发病有关;甲基强的松龙能减轻EAM发病程度,其作用机制可能与抑制MMP-9有关。

实验性自身免疫性肌炎动物模型研究简况

实验性自身免疫性肌炎(experimental autoimmune myositis,EAM)是一种人工诱导的类似人类多发性肌炎(poly myositis,PM)的动物模型。目前主要以大鼠、豚鼠、小鼠为实验对象,采用EAM模型复制、中医病症结合建模方法。通过实验研究选取效果明确、操作简单、模型稳定,成本较低的EAM造模方法。

耳针治疗实验性自身免疫性肌炎的研究概况

多发性肌炎(PM)和皮肌炎(DM)是累及全身骨胳肌的慢性炎症疾病,是一种较少见的自身免疫性结缔组织病。PM和 DM 病因迄今不明,现多认为与免疫功能紊乱有关,根据 Bo-han 等人的意见,临床上将PM/DM病谱分为5种类型。

诱导实验性肌炎模型并观察调节性T细胞的表达及意义

目的:观察实验性自身免疫性肌炎(EAM)小鼠脾细胞中调节性T细胞(Tregs)表达情况,并探讨相关免疫学机制。方法:雌性BALB/c小鼠随机分为肌球蛋白免疫的EAM模型组和生理盐水对照组,采用苏木精-伊红染色(HE)进行组织病理学评分,使用流式细胞术(FCM)检测小鼠脾细胞中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞表达比例。结果:EAM模型组小鼠肌组织出现大量炎细胞浸润;FCM检测EAM模型组小鼠脾细胞中CD4+CD25+Foxp3+Treg较对照组明显升高(P<0.01)。结论:CD4+CD25+Foxp3+Treg参与调控EAM的病理过程。

尿激酶型纤溶酶原激活物及其Ⅰ型抑制剂mRNA在实验性肌炎肌肉组织中的表达和意义

目的探讨尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase type plasmin-ogen activator,uPA)及其Ⅰ型抑制剂(plasminogenactivator inhibitor,PAI-1)mRNA在豚鼠实验性自身免疫性肌炎(experimental autoimmune myositis,EAM)肌肉中的表达及其意义。方法利用兔骨骼肌肌球蛋白加完全弗氏佐剂多次免疫豚鼠,同时联合腹腔注射百日咳毒素,制成EAM模型,观察其临床表现、血CK、肌肉病理的改变;用RT-PCR方法检测11例EAM组模型成功豚鼠肌肉uPA和PAI-1基因mRNA的表达,以10例正常豚鼠的肌肉作为对照组。结果 (1)EAM组肌肉中uPA、PAI-1基因mRNA的表达均较正常组显著增高(P<0.01);(2)肌肉中uPA与PAI-1基因mRNA表达的比例在正常组和EAM组无统计学差异(P<0.01)。结论 uPA、PAI-1可能参与了EAM的发病机制。

实验性肌炎肌肉组织中MMP-2,MMP-9 mRNA的表达和意义

目的探讨MMP-2、MMP-9基因mRNA在豚鼠实验性自身免疫性肌炎(EAM)肌肉组织中的表达和意义。方法实验分为正常组和EAM组。利用兔骨骼肌肌球蛋白加完全弗氏佐剂多次免疫豚鼠,同时联合腹腔注射百日咳毒素,制成EAM模型,观察其临床表现、血CK、肌肉病理的改变;用RT-PCR方法检测10例EAM豚鼠肌肉中MMP-2和MMP-9基因mRNA的表达,以10例正常豚鼠的肌肉组织作为对照组。结果 (1)MMP-2、MMP-9基因mRNA在EAM组肌肉中的表达较正常组显著增高(P<0.01)。(2)EAM组血CK的含量与MMP-2、MMP-9基因mRNA在肌肉中的表达程度呈正相关(P<0.01)。结论 MMP-2和MMP-9可能参与了EAM的发病。

特发性炎性肌病动物模型中肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其受体的表达

目的:分析肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体在实验性自身免疫性肌炎(EAM)动物模型骨骼肌组织中的表达情况,研究TRAIL系统在特发性炎性肌病(IIM)发病机制中的作用和意义。方法:用异种骨骼肌匀浆免疫诱导的方法建立EAM大鼠模型,10例健康SD大鼠作为正常对照,采用连续切片免疫组织化学染色方法,计算机图像分析检测TRAIL及其受体在EAM动物模型组和正常对照组骨骼肌组织中的表达及其变化情况。结果:TRAIL及其受体DR4,DR5,DCR1,DCR2在EAM动物模型组和正常对照组的骨骼肌细胞上均有表达。DR5、DCR1和DCR2在EAM动物模型组阳性表达面积比明显减少,以1+～2+级为主,正常对照组则以3+～4+级为主,两组间差异具有显著性(P<0.05)。结论:EAM动物模型组骨骼肌细胞上死亡受体DR5和诱骗受体DCR1、DCR2表达减少,而局部浸润的炎性细胞则表达了TRAIL、DCR1和DCR2,提示TRAIL及其受体可能参与了IIM骨骼肌损伤的发生和发展。

NADPH氧化酶介导的ROS在特发性炎性肌病动物模型骨骼肌组织中的表达及意义

目的探讨NADPH氧化酶中的NOX2和NOX4介导的活性氧(ROS)在特发性炎性肌病(IIM)发病机制中的作用及意义。方法将14只健康雌性BALB/c小鼠随机分为对照组(n=6)和EAM组(n=8),EAM组小鼠采用豚鼠骨骼肌匀浆蛋白免疫诱导实验性自身免疫性肌炎动物模型。观察小鼠的体重变化、临床表现,测定其血清肌酶水平、四肢肌力及骨骼肌组织病理改变;并采用免疫组织化学法、分光光度法和ELISA法分别检测各组小鼠骨骼肌组织中NOX2、NOX4、NADPH及ROS的表达情况或含量。结果与对照组相比,末次免疫后1周EAM组小鼠体重下降,差异有统计学意义(P<0.05)。HE染色结果显示,对照组小鼠骨骼肌纤维大小、形态、结构基本正常,有少量炎性细胞浸润,未见肌纤维萎缩、变性、坏死;EAM组小鼠骨骼肌纤维大小不一、粗细不等,有大量炎性细胞浸润,可见不同程度的萎缩、变性、坏死;EAM组小鼠骨骼肌组织HE染色病理学评分显著高于对照组(P<0.05)。与对照组相比,EAM组小鼠骨骼肌组织中NADPH含量降低、ROS含量升高(P<0.05)。免疫组化染色结果显示,NOX2和NOX4在EAM组小鼠骨骼肌组织中的表达均高于对照组(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,EAM组小鼠骨骼肌组织中ROS的含量与NOX2、NOX4的免疫组化评分均呈正相关(P<0.05),而与NADPH的含量呈负相关(P<0.05);EAM组小鼠骨骼肌组织HE染色病理学评分与NOX2、NOX4的免疫组化评分及ROS的含量均呈正相关(P<0.05),而与NADPH的含量呈负相关(P<0.05)。结论NADPH氧化酶中的NOX2和NOX4可能通过消耗NADPH产生大量的ROS,导致组织细胞氧化性损伤并诱导铁死亡反应来参与IIM的发病;NADPH、NOX2、NOX4和ROS有望成为新的评价IIM肌肉组织损伤程度的指标。

T细胞亚群在特发性炎性肌病动物模型骨骼肌中的表达

目的分析T细胞亚群在实验性自身免疫性肌炎(EAM)动物模型骨骼肌组织中的表达情况,研究T细胞亚群在特发性炎性肌病(IIM)发病机制中的作用和意义。方法用异种骨骼肌匀浆免疫诱导的方法建立EAM大鼠模型,10例健康大鼠作为正常对照,采用连续切片免疫组织化学染色方法,计算机图像分析检测CD_3、CD_4、CD_8在EAM动物模型组和正常对照组骨骼肌组织中的表达及其变化情况。结果 CD_3、CD_4、CD_8在肌炎模型的横纹肌、血管周围的炎细胞表达,两组间差异具有显著性(P<0.05)。结论 EAM模型制备成功,提示CD_3、CD_4、CD_8可能参与了EIM骨骼肌损伤的发生和发展。

活性维生素D_3对肌炎模型小鼠脾脏中调节性T细胞相关因子的影响

目的通过观察活性维生素D3对实验性自身免疫性肌炎小鼠是否有抑制作用,通过测量调节性T细胞(Treg)转录因子Foxp3和其相关的IL-10和TGF-β的mRNA表达,探讨其可能的作用及机制。方法将10只BALB/c小鼠随机分为模型组5只及活性维生素D3干预组(干预组)5只,均制备肌炎模型;干预组小鼠行活性维生素D3腹腔注射,同期模型组腹腔注射等体积生理盐水。在第十四天处死并取材,采用实时荧光定量PCR法检测二组脾脏组织中的Foxp3、IL-10和TGF-βmRNA表达。结果与模型组比较,干预组小鼠脾脏中的IL-10、TGF-βmRNA的表达增加(P<0.01);Foxp3 mRNA的表达无区别(P>0.05)。结论活性维生素D3可能通过增加Treg细胞相关因子IL-10和TGF-β的表达对肌炎小鼠发挥免疫保护作用。

IL-1α在EAM模型中的表达及环孢菌素A的影响

目的探讨细胞因子IL-1α在实验性自身免疫性肌炎模型发病中的作用;观察环孢菌素A对实验性自身免疫性肌炎模型的疗效以及对IL-1α表达的影响。方法分别应用环孢菌素A 5mg/(kg·d)和强的松5mg/(kg·d)口服,治疗实验性自身免疫性肌炎模型动物,并通过临床症状评分和病理改变来评价环孢菌素A的疗效。检测1L～1α在环孢菌素A组、强的松组和对照组EAM动物血液中的浓度,评价IL-1α在EAM中的作用。结果环孢菌素A治疗多发性肌炎模型具有明显疗效。IL-1α的浓度在实验性自身免疫性肌炎模型动物中明显增加,治疗组(强的松组和环孢菌素A组)和对照组之间IL-1α的浓度的变化值经t检验具有统计学意义(P<0.05),而治疗组之间IL～1α的浓度差异无统计学意义。结论环孢菌素A治疗实验性自身免疫性肌炎有明显疗效。环孢菌素A能减轻实验性自身免疫性肌炎发病程度,其机制可能与IL-1α的抑制有关。