实验性自身免疫性内耳病耳蜗热休克蛋白70的表达

目的 探讨自身免疫性内耳病模型动物耳蜗热休克蛋白的表达。方法 利用同种异体内耳抗原免疫豚鼠 ,以建立自身免疫性内耳病 (autoimmuneinnereardisease ,AIED)动物模型 ,并应用免疫组织化学及原位杂位技术 ,研究热休克蛋白 (heatshockprotein ,hsp) 70在正常对照组及AIED模型动物实验组耳蜗中的表达情况。结果 对照组豚鼠螺旋神经节细胞中存在hsp70样蛋白基础表达 ;实验组 2 8耳中 10耳 (35 7% )听阈提高≥ 10dB ;此组动物螺旋神经节细胞和血管纹、螺旋韧带hsp70及其mRNA表达明显增强。结论 以粗制膜迷路抗原免疫豚鼠 ,听阈提高动物hsp70在螺旋神经节细胞和血管纹、螺旋韧带合成增加。

凋亡及其相关基因在实验性自身免疫性内耳病小鼠内耳组织中的表达

目的探讨凋亡及其相关基因在自身免疫性内耳病形成和发展中的作用。方法选用近交系C57BL/6小鼠随机数字表法分为正常对照组和免疫7、14、21、28d组,每组16只。提取豚鼠内耳膜迷路组织为抗原,与等量完全弗氏佐剂,百日咳杆菌一次免疫实验组动物,制备自身免疫性内耳病动物模型,应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediatedd-UTPnickend-labing,TUNEL)检测内耳中的细胞凋亡,应用免疫组化和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测Fas、FasL及bcl-2在内耳的表达。结果正常小鼠内耳组织中,TUNEL染色阳性细胞极为少见,偶尔在Corti器或球囊斑的支持细胞发现。免疫7d后,内毛细胞和少量的血管纹边缘细胞TUNEL染色阳性,14d后TUNEL染色阳性的细胞数量及种类显著增加,但外毛细胞、螺旋神经节细胞与前庭神经节细胞免疫前后均未见凋亡表达。免疫组化染色显示,正常小鼠内耳中Fas表达广泛,FasL在部分螺旋神经节细胞与前庭神经节细胞表达,bcl-2仅在螺旋神经节细胞、前庭神经节细胞有较强表达。免疫后FasL在各种组织均有较强表达,bcl-2在外毛细胞出现表达,在耳蜗神经元细胞的表达增加。RT-PCR检测正常小鼠内耳组织的FasmRNA、FasLmRNA、bcl-2mRNA均为阳性,FasLmRNA低水平表达,免疫后升高,在2周达到高峰后逐渐下降;bcl-2mRNA在免疫后进行性升高。结论Fas/FasL信号系统介导的凋亡与自身免疫性内耳病的发生、发展过程关系密切,bcl-2对内耳中Fas/FasL介导的凋亡有重要的调节作用。

纯化内耳P0蛋白诱发实验性自身免疫性内耳病动物模型

目的:用从内耳组织中纯化的P0蛋白免疫豚鼠,建立P0蛋白诱发的自身免疫性内耳病动物模型,研究其在自身免疫性内耳病中的作用。方法:采用制备性SDS-PAGE从内耳组织中分离、纯化P0蛋白。以纯化的豚鼠内耳P0蛋白作为抗原免疫豚鼠,观察其听性脑干反应阈,血清中抗体水平和内耳形态学的改变,并用免疫组织化学法确定P0蛋白在耳蜗的分布情况。结果:SDS-PAGE结果显示纯化的蛋白质只在分子量为30 000的位置上出现单一的蛋白染色带,Western blot结果示该蛋白即为P0蛋白。免疫后有22%豚鼠的听性脑干反应阈升高,对照组动物无变化。实验组血清IgG显著升高(F=6.48,P<0.01),反应阈提高豚鼠的螺旋神经节细胞均有不同程度的数目减少,蜗轴小血管周围有炎性细胞浸润。P0蛋白在耳蜗仅分布于螺旋神经节、蜗轴神经纤维的髓鞘上。结论:用制备性SDS-PAGE能够成功地从内耳纯化P0蛋白,用于自身免疫性内耳病的研究。P0蛋白在部分豚鼠能够诱发自身免疫性内耳病,可能是自身免疫性内耳病的自身抗原之一。

自身免疫性内耳病的实验研究

用同种异体内耳抗原免疫豚鼠，观察听阈、血清免疫学、形态学及免疫病理学的改变，结果发现部分豚鼠ＡＰ（Ｎ＿１）反应阈明显升高、血清中出现抗内耳自身抗体，且表现有膜迷路积水、蜗轴血管炎、螺旋神经元细胞空泡变性、细胞数减少，特别是部分动物蜗轴血管和血管纹毛细血管内皮有ＩｇＧ沉积。提示通过这种实验方法可在部分动物成功地建立实验性自身免疫性内耳病动物模型。此外，就该模型与该病临床表现的相似性进行了比较。

实验性自身免疫性灰质病大鼠脊髓病理学、Bcl-2和Bax蛋白表达的研究

目的:观察实验性自身免疫性灰质病大鼠脊髓的病理改变及Bcl-2和Bax蛋白的表达。方法:利用猪脊髓前角匀浆作为抗原,免疫Lewis大鼠,观察大鼠行为学、肌电图、脊髓前角运动神经元的组织学改变,应用免疫组化方法,研究免疫介导的神经元损伤过程中Bcl-2和Bax表达的变化。结果:所有被免疫的大鼠均未出现肢体无力、明显的肌肉萎缩,肌电图表现有失神经改变,组织学证实脊髓运动神经元有不同程度的变性丢失,有卫星、噬节及墓穴现象形成。在实验性自身免疫性灰质病(experi mental autoi mmune gray matter disease EAGMD)大鼠的脊髓前角运动神经元中抗凋亡基因Bal-2的表达减少;促凋亡基因Bax的表达增加。结论:免疫可导致Lewis大鼠脊髓前角运动神经元的变性丢失,与细胞凋亡密切相关的基因蛋白Bcl-2和Bax参与了EAGMD的发病过程。

腺病毒介导的白细胞介素-10治疗自身免疫性内耳病的实验研究

目的研究以重组复制缺陷型腺病毒为载体的白细胞介素-10(IL-10)对豚鼠自身免疫性内耳病的治疗作用。方法采用同种内耳组织抗原加弗氏佐剂免疫豚鼠,制作自身免疫性内耳病动物模型20只,随机分为3组,采用圆窗膜微量注射的方式,A组(10只)注入携带IL-10因子的重组腺病毒(Ad-IL-10),B组(5只)注入等量的携带黄色荧光蛋白标记的腺病毒(Ad-EYFP),C组(5只)注入等量人工外淋巴液(对照组),7天后行ABR测试,然后取豚鼠耳蜗制做石蜡切片,行HE染色和光镜观察,并行免疫荧光和酶免疫组织化学试验,检测豚鼠内耳基因产物IL-10表达。结果免疫组化显示携带IL-10的腺病毒可以转染耳蜗血管纹、螺旋韧带、Corti器、螺旋神经节、蜗轴小血管周围及其耳蜗的骨壁等部位的细胞,并产生相应的蛋白产物(IL-10)。造模后各组豚鼠ABR反应阈较造模前升高,差异有统计学意义(P<0.05),内耳注射后A组ABR反应阈明显低于B组和C组。光镜检查示A组内耳组织的免疫炎性反应亦明显较B组和C组轻。结论腺病毒可以携带IL-10因子转导入豚鼠内耳,并在内耳表达基因产物,可在一定程度上减轻内耳组织免疫炎性损伤和听损伤。

免疫性内耳病的相关研究进展

免疫性内耳病是一种由免疫介导而导致的疾病,临床表现之一为感音神经性听力损失。本综述主要目的是比较影响听力的系统性自身免疫病和器官特异性内耳疾病的临床特征,并讨论最新的发病机制及诊疗方法。

自身免疫性内耳病的实验研究现状

以标准的临床免疫学方法研究人的内耳非常困难 ,至今我们对内耳免疫学的了解绝大部分来自动物实验。自身抗体的检测是自身免疫疾病诊断的重要指标 ,自身抗原的确定是该病确实存在的最有力的证据。对自身免疫性内耳病 ,尚未确定免疫系统攻击的内耳特异性抗原。本文对近年有关动物模型及内耳自身抗原、抗体方面的研究进展作一综述。

仓鼠头部切片在自身免疫性内耳病中的实验观察

目的含有组织抗体的内耳病患者血清与未固定及未脱钙的仓鼠头部冰冻切片反应可避免抗原性的改变,而且在同一张切片上耳蜗以外的组织可以用来对照。方法66份前庭听觉功能障碍或听力正常的患者血清和一份正常人的血清与仓鼠头部切片进行反应,结果抗血管内皮抗体、抗核抗体以及抗线粒体抗体阳性的血清和仓鼠头部切片上的内耳以及其它组织呈现阳性反应。表明患者血清中的这些抗体对内耳来说不是器官特异性的。50例前庭听觉功能障碍的患者血清中只有2例有耳硬化的患者血清在免疫发病机理上可以看作是半器官特异性的。抗内膜抗体和抗平滑肌抗体阳性的血清对内耳组织反应阴性。对头皮肌和镫骨动脉壁及内耳动脉壁有反应。Corti氏器的盖膜显示出非特异性的自身绿色荧光。结论头部切片对于区分器官特异性抗体以及诊断自身免疫性内耳病是一种新的、方便的且安全的技术。单纯的免疫组化测定并没有对内耳疾病的单因素病因学给出一个提示。在使用患者血清中的组织抗体时,其它的额外因素也应该被考虑在内,因为前庭听觉功能障碍在病因学可能是多因素的。

自身免疫性内耳病动物模型的建立

目的 建立一种自身免疫性内耳病的动物模型 ,其具有可重复性高 ,适于进行深入免疫学分析的特点。方法 提取豚鼠内耳膜迷路组织为抗原 ,与等量完全弗氏佐剂 ,百日咳杆菌一次免疫C5 7BL/6小鼠。检测反应阈、血清免疫学、内耳形态学及免疫组织化学的改变。结果 免疫后小鼠听性脑干反应阈显著提高 ,内耳中出现显著的炎性细胞浸润、内淋巴积水和螺旋神经节细胞变性、数量减少等形态学改变 ,血清中可检测到抗内耳自身抗体 ,鼓阶内浸润细胞中的淋巴细胞主要为CD4 + T细胞。结论 应用这种方法在C5

周围血清P0蛋白抗体表达对快速进展性自身免疫性内耳病和梅尼埃病的诊断价值

目的探讨周围血清P0蛋白(myelin protein zero,MPZ)抗体水平对快速进展性自身免疫性内耳病(autoimmune inner ear diseases,AIED)和梅尼埃病的诊断价值。方法 40例AIED患者(研究组)包括快速进展性AIED 14例、梅尼埃病11例和遗传性聋15例,通过酶联免疫标记法,分别定量检测患者周围血清MPZ抗体IgG和IgM浓度,结果与对照组(其他自身免疫性疾病40例,听力损伤者除外)比较。结果研究组周围血清MPZ抗体浓度(IgG:61.53±13.55ng/L和IgM:60.34±13.96ng/L)明显高于对照组(IgG:30.77±9.80ng/L和IgM:20.82±12.29ng/L)(P<0.01),MPZ抗体浓度由高至低依次为快速进展性AIED、梅尼埃病、遗传性聋,双侧梅尼埃病患者周围血清MPZ抗体浓度接近快速渐进性AIED患者(P>0.05),检测IgM浓度更具临床诊断意义。结论周围血清MPZ抗体的表达特别是IgM的表达,在诊断快速进展性AIED与双侧梅尼埃病方面,有较高的敏感性和特异性。

自身免疫性内耳病3例报告并文献复习

目的探讨自身免疫性内耳病患者的临床表现及听力特点。方法回顾3例自身免疫性内耳病患者的临床资料,分析其临床表现、免疫学指标、听力特征及其应用激素和免疫抑制剂治疗的疗效。结果3例患者均有全身性免疫性疾病,分别被确诊为类风湿关节炎、复发性多软骨炎、免疫球蛋白G4(immunoglobulin G4,IgG4)相关疾病,其中病例1抗核抗体及抗环瓜氨酸肽抗体阳性,病例3抗核抗体阳性;3例均表现为双耳听力下降,纯音听阈图显示为感音神经性听力损失,以高频下降为主;给予激素及免疫抑制剂治疗后听力有不同程度的恢复。结论自身免疫性内耳病多表现为感音神经性听力下降,可累及双耳,患者可伴有全身免疫性疾病,血清中存在非特异性自身抗体及抗内耳组织特异性抗体;激素及免疫抑制剂治疗有效,病程短、听力损失轻的患者听力恢复较好。

免疫性内耳病模型的建立及其内耳干扰素-γ的表达

目的:建立免疫性内耳病(IMIED)模型,并检测内耳干扰素-γ(IFN-γ)表达的变化情况。方法:将20只豚鼠按配对设计方法分为实验组和对照组。实验组采用钥孔戚血蓝蛋白(KLH)在已致敏的豚鼠圆窗龛局部免疫,对照组用PBS代替KLH免疫豚鼠;观察血清中特异性KLH抗体水平、听觉功能及内耳病理形态变化,并行酶免疫组化试验观察内耳IFN-γ的表达。结果:实验组免疫前后ABRⅢ波阈值的均值差异有统计学意义(P<0.05),免疫后实验组有7只动物(12耳)出现听损,且血清中特异性KLH抗体水平较免疫前明显升高(P<0.05);对照组免疫前后ABRⅢ波阈值的均值和血清KLH抗体水平的差异均无统计学意义(P>0.05);免疫后实验组ABRⅢ波阈值的均值和血清KLH抗体水平均高于对照组(P<0.05)。实验组免疫后内耳组织中有炎症细胞浸润,部分豚鼠内耳有迷路积水。对照组豚鼠内耳组织中无明显IFN-γ表达,实验组IFN-γ表达主要分布在血管纹、螺旋韧带、螺旋神经节、Corti器及蜗轴小血管周围。结论:在已致敏的豚鼠圆窗龛局部免疫,诱导并造成IMIED模型的成功率较高。正常豚鼠内耳中几乎没有IFN-γ表达,而在IMIED豚鼠内耳中IFN-γ有显著表达,提示IMIED发生发展可能与IFN-γ表达有关。

内耳注入携带IL-4基因的骨髓间充质干细胞对豚鼠免疫性内耳病基因治疗的研究

目的：研究内耳局部植入白细胞介素4（IL -4）基因修饰骨髓间充质干细胞（bone-marrow mesen-chymal stem cells ，BMSCs）对免疫性内耳病豚鼠内耳病理损伤和听功能的调节与治疗作用。方法采用钥孔嘁血蓝蛋白（KLH）抗原在已致敏的豚鼠圆窗龛局部免疫，制成豚鼠免疫性内耳病模型55只，分为五组：A组（BMSCs载体组）、B组（BM SCs空载体对照组）、C组（重组慢病毒IL -4基因组）、D组（慢病毒空载体对照组）及E组（模拟手术对照组），每组11只，各组均将相应的悬液20μl[BMSCs悬液中含BMSCs（1．5～2．0）×106，慢病毒浓缩液浓度为0．5×108 pfu]经鼓阶开窗植入内耳。采用免疫荧光组织化学试验法、免疫酶组织化学试验法观察IL -4基因产物在内耳组织结构中的分布和表达情况，酶联免疫吸附试验观察血清抗KLH特异性抗体水平，ABR测试听功能变化。结果与免疫前相比，免疫后A、B、C组ABR波Ⅲ阈值不同程度降低，A组阈值降低更明显，差异有统计学意义（P＜0．05）；免疫组织化学染色显示BMSCs荧光反应阳性细胞主要分布在鼓阶、前庭阶；内耳光镜观察A、B、C组仅在鼓阶内有絮状物，注射部位有少量红细胞和白细胞，D、E组可见不同程度的膜迷路积水，螺旋神经节和蜗轴小血管周围有单个核细胞浸润。结论重组IL -4基因的慢病毒载体可在体外成功转染BM SCs ，经鼓阶途径植入内耳后可在内耳迁移并产生基因产物IL -4，可明显减轻免疫性内耳病动物的内耳免疫炎性反应和听功能损伤，而BMSCs可以作为细胞载体把携带有目的基因的治疗因子迁移到损伤部位而发挥治疗作用。

一种筛选自身免疫性疾病患者抗内耳抗体的新方法

目的 探讨用一种新建立的外加电场固定液相分子快速斑点免疫分析 (rapidelectricfieldimmobilizingliquidphasemoleculedotblot,REILMD)法检测自身免疫性疾病患者抗内耳抗体的临床意义。方法 收集 11种确诊的自身免疫性疾病患者共 71例 ,突发性聋 2 1例 ,非免疫性疾病患者 48例 (对照组 )。检测内容包括一般免疫指标及自身抗体如抗smoothmuscle (Sm)、抗ribonucleoprotein(RNP)、抗Sj¨ogren’ssyndromeA (SSA)、抗Sj¨ogren’ssyndromeB (SSB)、抗DNAtopoisomeraseI (Scl) 70、抗histidyl tRNAsynthetase (Jo 1)、抗核糖体、抗双链DNA、抗组织和抗内耳抗体。抗内耳抗体检测先用REILMD筛选 ,再用免疫转印方法确定相对分子质量。结果 类风湿性关节炎 (rheumatoidarthritis,RA)和系统性红斑狼疮 (systemiclupuserythematosus ,SLE)主要表现为血沉加快 ,类风湿因子阳性 ,C 反应蛋白、IgG、循环免疫复合物升高 ,少数IgA、IgM及C4 升高。在RA中 2 / 16抗双链DNA和抗线粒体及 4/ 16抗核抗体阳性。在SLE中 11/ 16抗核抗体、7/ 13抗RNP抗体、抗SSA抗体和抗双链DNA抗体 ,3/ 13抗Sm抗体、1/ 13抗ScL70抗体、抗横纹肌和抗胃壁细胞抗体阳性。强直性脊柱炎 (ankylosingspondylitis,AS)均为阴性。经REILMD法筛选共?

自身免疫性内耳病的药物治疗

内耳免疫损伤可引起自身免疫性内耳病 (autoimmuneinnereardisease ,AIED) ,本文就治疗AIED的各种药物以及给药方式进行了综述 ,以期为AIED的治疗和研究提供帮助。

Caspase-3在Ⅱ型胶原所致大鼠自身免疫性内耳病的表达

目的研究Caspase-3在Ⅱ型胶原所致大鼠自身免疫性内耳病的表达,探讨自身免疫性内耳病发病机制。方法选用耳廓反射灵敏的健康雌性SD大白鼠60只,随机分成实验组(30只,皮下注射Ⅱ型胶原与弗式佐剂),佐剂组(15只,皮下注射弗氏佐剂),对照组(15只,予以等量生理盐水)。免疫6周后,观察两周,于首次给药前一天和末次给药后一天行畸变产物耳声发射检测(DPOAE);处死动物,取耳蜗行基底膜铺片光学检查和切片免疫组织化学检测。结果实验组Caspase-3在Corti器、螺旋神经节细胞、血管纹和螺旋韧带表达呈阳性,同时大鼠DPOAE幅值在1、2、4、6、8kHz时较佐剂组和对照组明显下降(P<0.01),并且毛细胞铺片可见毛细胞肿胀,结构混乱,排列不整齐,有多处散在空位,而佐剂组和对照组未见明显改变。结论II型胶原所致大鼠自身免疫性内耳病中有Caspase-3的表达。