实验性IgA肾病模型的改进

【目的】对以往的实验性IgA肾病模型的制作方法加以改良,建立一种更加可靠、稳定、成功率高的模型。【方法】清洁型雄性SD大鼠12只,质量220￣260g,按随机数字表随机分为正常对照组、改良造模组。改良组造模方法:口服免疫原牛血清白蛋白(BSA)剂量较常用剂量增加1倍,为400mg/kg,隔天1次灌胃,四氯化碳(CCl4)注射方式由既往的腹腔注射改为皮下注射,用诱导肝纤维化剂量的1/3(皮下注射蓖麻油0.5mL+CCl40.10mL,每周1次,持续9周),并联合运用脂多糖(LPS),第6,8周予以0.05mg尾静脉注射。【结果】改良造模组的6只大鼠均出现蛋白尿,其中4只出现肉眼血尿,2只出现镜下血尿,免疫荧光显示肾组织IgA强度(2+￣3+),光镜高碘酸-希夫染色(PAS)染色显示有弥漫性的轻中度系膜区增生,血白蛋白(ALB)水平较正常对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),转氨酶较正常对照组没有升高。【结论】运用改良的造模方法BSA+LPS+CCl4建立IgA肾病模型效果良好,病理、临床指标均与人类IgA肾病较为相似。

益肾汤对实验性IgA肾病模型小鼠肾组织转化生长因子β_1表达的影响

【目的】观察益肾汤对实验性IgA肾病(IgAN)模型小鼠肾组织转化生长因子β1(TGFβ-1)表达的影响。【方法】选用BALB/c小鼠,采用口服牛血清白蛋白联合尾静脉注射葡萄球菌肠毒素B方法复制小鼠IgAN模型,抽样检测造模小鼠24 h尿蛋白定量、肾组织过碘酸雪夫反应(PAS)染色及免疫荧光检查,确定造模成功后随机分为模型组,益肾汤高、低剂量组(剂量分别为0.1、0.05.gkg-1.d-1),并设正常对照组;采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测各组小鼠肾组织TGFβ-1mRNA表达,免疫组化法检测各组肾组织TGFβ-1含量。【结果】模型组肾组织TGFβ-1mRNA表达及TGFβ-1含量均显著升高(P<0.05);益肾汤高、低剂量组肾组织TGFβ-1mRNA表达及TGFβ-1含量均显著降低(P<0.05)。【结论】益肾汤治疗IgAN的作用与抑制肾组织中TGFβ-1的分泌及其mRNA表达有关。

IgA肾病病证结合预后风险预测模型的构建及评价

目的分析影响IgA肾病患者预后的危险因素,构建并评价IgA肾病患者预后风险预测模型。方法收集2017年10月-2022年10月北京市昌平区中西医结合医院肾病科经肾活检确诊的452例IgA肾病患者的临床资料,通过采集临床资料、实验室指标、病理指标、中医证候及其要素等,以初始血肌酐(SCr)较基线水平增倍或初始估算肾小球滤过率(eGFR)较基线降低超过50%,或进入终末期肾病(ESRD)期为联合终点事件指标,Cox单因素和多因素回归分析筛选影响IgA肾病预后的危险因素,应用R4.1.1构建列线图模型,评估模型的预测水平和区分度。结果根据Cox多因素回归分析结果,最终纳入24h尿蛋白定量、时间平均尿蛋白定量(TA-UP)、新牛津病理分型T评分、新牛津病理分型C评分、气阴两虚5个因子。根据上述预测因子建立预后风险预测模型,结果显示其一致性指数为0.810(95%CI:0.673~0.815,P<0.001)。校正曲线显示模型拟合度较好;3年受试者工作特征曲线下面积为0.757(95%CI:0.739~0.823),表明该模型的预测概率较好。结论基于中医证候学的IgA肾病列线图模型能较准确地预测IgA肾病患者预后风险,可为临床预测IgA肾病风险提供参考依据。

利用联合模型动态预测IgA肾病患者进入终末期肾病的概率

目的:建立一个工具能够根据每次访视IgA肾病(IgAN)患者的病情变化,动态预测患者进入终末期肾病(ESKD)的概率。方法:选取1997—2007年在国家肾脏疾病临床医学研究中心长期随访的IgAN患者。利用联合模型(Joint model)分析IgAN患者所有访视点的产生纵向数据,实现动态预测患者ESKD的概率,以达到个体化动态预测的目标。我们首先以肾活检时刻为基准建立了临床模型(模型A)和临床病理模型(模型B)。模型A的生存子模型部分引入了年龄、性别、尿蛋白定量(Log转换)、估算的肾小球滤过率(eGFR)、eGFR下降斜率、血白蛋白水平等指标;纵向子模型部分引入了年龄、尿蛋白定量、eGFR、eGFR下降斜率以及血清白蛋白水平。模型B在模型A的基础上生存子模型上增加了牛津病理分类指标。模型C是以首次访视时间为基准重新拟合了模型A并评估了其性能。所有的纵向子模型采用访视时间t的非线性混合模型拟合。结果:本研究纳入了866例IgAN患者,以首次门诊就诊为基线,平均随访时间为12.2±5.5年,共访视22 533人次,平均每个患者访视26次。随访中260例(30.0%)患者进入ESKD,其末次随访平均eGFR为9.1±3.0 mL/(min·1.73m^(2))。将所有患者按照3∶1的比例,随机分为建模组(650例)和测试组(216例)。以肾活检时刻为基线,模型A与模型B的性能基本一致,二者均表现出较高的预测性能,纳入或者剔除病理学变量并未明显增加联合模型对ESKD风险预测的准确性。随着随访时间的增加,模型A的预测性能持续提升,在肾活检后第5年左右达到最佳性能。AUC值由肾活检时的0.864增至肾活检后第5年的0.956;Brier评分由肾活检时的0.124降至活检后第5年的0.058。以首次访视时刻为基线的模型C也取得了类似的结果。为方便临床实践,我们利用Shiny包实现了动态预测,并将相关模型R对象、源代码公布在网络上。结论:联合模型可以用于IgAN患者访视点产生的纵向数据,高性能动态预测IgAN患者尿毒症的概率,实现个体化动态预测的目标。

丹芍丸对实验性大鼠IgA肾病模型的治疗作用

目的观察丹芍丸对IgA肾病大鼠的治疗作用。方法使用口服牛血清白蛋白和葡萄球菌肠毒素B感染的复合方法,复制大鼠IgA肾病模型,并分别给予丹芍丸和雷公藤多甙片治疗,进而观察各组大鼠的尿蛋白、尿红细胞计数、血清尿素氮、血清肌酐和肾组织的病理变化。结果丹芍丸能明显降低IgA肾病模型大鼠的尿蛋白、尿红细胞计数、血清尿素氮和血清肌酐的含量,减轻肾组织病理改变。结论丹芍丸对IgA肾病大鼠具有显著的治疗作用。

实验性IgA肾病动物模型的研究进展

IgA肾病(IgA Nephropathy,IgAN)为临床最常见的原发性肾小球肾炎,亚洲为该病的高发病区域。IgAN的发病机制仍未被阐述清楚,其临床治疗策略和相应的治疗药物仍有待深入研究。IgAN动物模型在IgAN病理和药物开发研究中具有重要的作用,选择一个理想的IgAN动物模型是研究者首先需解决的问题。通过查阅、整理和分析目前国内外实验性IgAN动物模型研究文献发现,当前常用的IgAN动物模型主要包括3种,即免疫诱导型、继发病变型和自发病变型。免疫诱导型中异种蛋白诱导的IgAN动物模型具有与人类IgAN患者非常相似的临床和病理学特征,为国内学者所常用;自发病变型因发病机制与人类IgAN患者发病机理类似,为国外学者所常用。

IgA肾病肾小球硬化实验动物模型及其病理改变的研究

通过切除一侧肾脏,反复尾静脉注射较大剂量葡萄球菌肠毒素B(SEB)的方法,制作比较接近人类IgA肾病肾小球硬化病变发展过程的大鼠实验动物模型,并进行光镜、电镜等的观察比较,以期为进一步的研究提供依据。

Leflunomide对实验性IgA肾病大鼠肾脏病理及MCP-1表达的影响

目的观察leflunomide对实验性IgA肾病(IgAnephropathyIgAN)大鼠肾脏病理及肾组织单核细胞趋化因子(monocytechemoattractivepeptide1,MCP-1)表达的影响,了解其作用机制。方法建立IgAN大鼠模型,随机分成leflunomide组,强的松组,模型对照组,并同时设立正常对照组。行免疫荧光、光镜检查,并用免疫组化和RT-PCR方法分别检测肾组织MCP-1蛋白和基因水平的表达。结果与模型对照组相比,leflunomide组免疫复合物在肾脏的沉积明显减少,系膜区基质增生程度显著减轻(P<0.01);Leflunomide在基因和蛋白水平均能够有效抑制MCP-1在肾组织的表达(P<0.05)。结论Leflunomide能够减少免疫复合物在肾脏的沉积,减轻系膜区基质增生,并且下调MCP-1在肾脏的表达,减少局部炎症反应,减轻肾脏损害,保护肾脏。

大肠杆菌致IgA肾病的实验动物模型

大肠杆菌致ＩｇＡ肾病的实验动物模型韩庆烽范敏华邹万忠△（北京医科大学第三医院肾脏内科，北京１０００８３△北京医科大学病理学系）ＩｇＡ肾病是世界范围内的一种常见的肾小球疾病，特别是包括中国在内的远东地区具有较高的发病率。有报道认为泌尿系统感染与ＩｇＡ肾...

MIF和COX-2在实验性IgA肾病肾组织中的表达

目的探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)和环氧化酶2(COX-2)在实验性IgA肾病肾组织中的表达及其相关性。方法应用葡聚糖G200和大肠杆菌外膜总蛋白(OMPs)提取物分别免疫小鼠,诱导IgA肾病模型,设立葡聚糖组和大肠杆菌外膜蛋白组,同时建立空白对照组。用免疫组化方法检测MIF和COX-2在实验性IgA肾病肾组织中的表达与分布。结果MIF和COX-2在葡聚糖组和大肠杆菌外膜蛋白组肾小管上皮细胞中的表达显著上调,在两组的表达显著高于空白对照组(P<0.01)。MIF和COX-2在实验性IgA肾病肾组织的表达与肾组织损伤的程度呈正相关。结论MIF和COX-2在IgA肾病肾组织的表达比较高,提示MIF和COX-2在IgA肾病的发生、发展中发挥一定的作用。

IgA肾病研究模型的最新进展

IgA肾病(IgA nephropathy,IgAN)是导致终末期肾脏病的主要病因之一。目前IgAN的病因及发病机制仍未明确,但基于不同发病机制已经建立了细胞研究模型和多种动物研究模型,有助于我们对临床疾病的理解。这些模型均表明,IgA免疫复合物可以沉积在肾小球中,并引发IgA肾病。现就不同发病机制阐述多种研究模型,为研究人员提供参考,进一步揭示IgAN发病机制,寻找安全有效的治疗方法。

基于随机生存森林构建中医药干预的IgA肾病蛋白尿风险预测模型

目的基于随机生存森林算法构建中医药干预的IgA肾病蛋白尿风险预测模型,筛选IgA肾病蛋白尿预后风险因素。方法回顾性收集129例确诊为IgA肾病的临床资料,按照60%、40%的比例随机划分成训练集与测试集,在训练集中运用随机生存森林算法构建中医药干预的IgA肾病蛋白尿风险预测模型,利用VIMP法筛选预后风险因素,并在测试集中采用time-dependent ROC曲线(tdROC)对模型预测性能进行验证。结果据VIMP值表明IgA肾病蛋白尿预后风险因素依次为eGFR、高血压、中医药干预、24 hUPRO>1 g、肾小球硬化比例、Lee分级、肥胖、血脂异常、高尿酸血症、低蛋白血症、贫血、年龄、性别。eGFR与发生持续蛋白尿风险率呈非线性负相关。肾小球硬化比例>0.3时与持续蛋白尿风险率呈近似线性正相关。结论该中医药干预的IgA肾病蛋白尿风险预测模型具有一定的预测性能,可判断经中医药干预的IgA肾病患者蛋白尿预后,有助于临床随访监测及制定个体化治疗方案。

由实验模型看IgA肾病发病机理

从1986年到现在,IgA肾病已成为许多国家原发性肾小球肾炎中最常见类型。最初认为,IgA肾病预后良好,目前已认识到,20～25％的患者20年后可逐渐导致肾功能衰竭。

基于TLR4信号通路探讨补肾利咽方治疗IgA肾病作用机制

目的探讨补肾利咽方对IgA肾病模型大鼠的疗效及调节TLR4信号通路的作用机制。方法SD大鼠随机分组后,复制IgA肾病大鼠模型。给药后观察各组大鼠尿RBC、UTP、血清SCr、BUN、肾组织TLR4、MyD88、NF-κB、MCP-1表达、外周血C1GALT1及Cosmc mRNA表达、血清TLR4、NF-κB、IL-6含量。结果①与空白组比较,模型组大鼠尿RBC、UTP及肾组织TLR4、MyD88、NF-κB、MCP-1表达、外周血C1GALT1及Cosmc mRNA表达、血清TLR4、NF-κB、IL-6含量均增高(P<0.05);②与模型组比较,补肾利咽方各组大鼠UTP、尿RBC、肾组织TLR4、MyD88、NF-κB、MCP-1表达、外周血C1GALT1及Cosmc mRNA表达、血清中TLR4、NF-κB、IL-6含量均降低(P<0.05);肾功能未见明显变化。结论①补肾利咽方可有效减轻IgA肾病大鼠血尿、蛋白尿;②补肾利咽方通过改善黏膜感染诱发的TLR4信号转导系统介导的免疫反应,调整IgA1糖基化过程中的关键酶C1GalT1及分子伴侣Cosmc,减少异常糖基化的IgA1,减轻肾损伤。

宣痹汤对实验性IgA肾病大鼠肾脏MCP-1表达的影响

目的:观察宣痹汤对实验性IgA肾病(IgA nephropathy IgAN)大鼠肾脏病理及肾组织单核细胞趋化因子(monocyte chemoattractive peptide1,MCP-1)表达的影响,了解其作用机制。方法:建立IgAN大鼠模型,随机分成正常对照组、模型组、雷公藤多苷组、宣痹汤低剂量组、宣痹汤中剂量组、宣痹汤高剂量组。用免疫组化和RT-PCR方法分别检测肾组织MCP-1蛋白和基因水平的表达。结果:与模型组相比,宣痹汤各治疗组对降低大鼠尿红细胞较雷公藤多苷治疗组明显(P<0.05);宣痹汤在基因和蛋白水平均能够有效抑制MCP-1在肾组织的表达(P<0.05)。结论:宣痹汤能降低IgA肾病大鼠尿红细胞和尿蛋白,下调MCP-1在肾脏的表达,这可能是宣痹汤治疗IgA肾病的作用机制之一。

运用两种BSA剂量建立IgA肾病大鼠模型观察

目的:目前IgA肾病(IgAN)动物模型并无经典造模方法,本实验选择国内较常用方法建立大鼠IgAN模型,分两个时间点观察不同剂量牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)灌胃联合注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)+四氯化碳(carbon terachloride,CCL4)方法建立IgA肾病模型效果。方法:将SPF级健康雄性SD大鼠60只(平均体重200～240g)随机分为3组,每组20只。低剂量组(A组):BSA400mg/kg(100g/L)隔天灌胃,持续12周;皮下注射蓖麻油0.3ml+CCL40.10ml,每周1次持续12周,第8周LPS0.05mg尾静脉注射。高剂量组(B组):BSA增加至600mg/kg(100g/L),余干预同低剂量组。对照组(C组)生理盐水4ml/kg灌胃,0.4ml皮下注射。建模后第8周、12周每组各处死10只大鼠,留取血、尿、肾组织标本检测。观察指标:一般情况、蛋白尿、血尿、肝肾功能、肾组织病理。结果:模型组大鼠血肌酐、尿素氮及尿蛋白均明显增高(P<0.05),高剂量组显著高于低剂量组(P<0.05),且肾组织病理8周后均出现轻中度系膜细胞及系膜基质的增生,12周末显著伴肾间质轻度纤维化,高剂量组病变较重;12周末均有荧光出现,均强于第8周,低剂量组荧光表达不典型,高剂量组表达强于低剂量组(P<0.05)。电镜报告与病理表现一致。结论:运用BSA+LPS+CCL4联合造模方法在12周左右可建立快速IgA肾病动物模型,而且高剂量BSA(600mg/kg)组肾组织病变更显著,模型更典型。此模型的建立及运用可以为IgA肾病临床及基础研究提供良好动物模型基础。

IgA肾病湿热证模型的研制

目的:探讨大鼠IgA肾病中医湿热证模型的建立方法。方法:在口服牛血清白蛋白(BSA)并定时尾静脉注射BSA、葡萄球菌肠毒素B(SEB)的基础上,施以高糖高脂饮食、高温高湿环境,利用综合因素制成IgA肾病湿热证大鼠模型,并利用生物学方法、放射免疫法、光学显微镜、荧光显微镜等手段进行对比观察。结果:增加湿热因素能升高大鼠的体温,加重大鼠尿血、水肿及血清总胆固醇、甘油三酯、IL-6、血肌酐水平,使其湿热表现更为突出。结论:此模型无论其发病条件、发病机制,还是主要症状、体征及病理表现,都更近似于临床IgA肾病中医湿热证型。

两种IgA肾病大鼠模型的比较

目的探讨快速建立IgA肾病大鼠模型的方法。方法雌性SD大鼠被随机分为3组。A组采用口服牛血清白蛋白(BSA)+葡萄球菌肠毒素B(SEB)方法,B组采用口服BSA+SEB+皮下注射CCl4方法,C组为正常对照组。分别于10、14周处死后取动脉血、肾脏,检测血生化指标,检查组织病理及IgA免疫荧光。于第10、12、14周收集24h尿检测尿蛋白。结果与空白对照组相比,A组和B组血肌酐、尿素氮和尿蛋白均显著增高(P<0.05),有中度肾小球系膜扩张伴系膜细胞增生,A组和B组之间无明显差异(P>0.05)。但B组出现血尿、蛋白尿早于A组,且IgA免疫荧光强于B组。结论口服BSA+SEB法与口服BSA+SEB+皮下注射CCl4方法均能诱发SD大鼠IgA肾病模型,后者更早出现血尿、蛋白尿,肾脏IgA免疫荧光更强,是更为省时的制模方法。

补肾健脾解毒利咽法对IgA肾病模型大鼠血清TNF-a、IL-6的影响

目的探讨补肾健脾、解毒利咽法治疗Ig A肾病(Ig AN)的作用机制。方法将72只Wistar大鼠随机分为空白组,模型组,洛丁新组,补肾健脾、解毒利咽法高、中、低剂量组。采用口服BSA和尾静脉注射LPS方法建立Ig AN大鼠模型。观察给药8周后大鼠各时相尿红细胞计数、24 h尿蛋白定量(UTP)、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的含量变化。结果与模型组相比,各组大鼠24 h UTP均有所下降,其中中药中剂量组下降最为显著(P<0.05);中药各治疗组尿红细胞计数明显减少(P<0.05),以中药中剂量组减少显著(P<0.01);洛丁新组尿中红细胞计数无下降(P>0.05)。与空白组比较,模型组大鼠血清中TNF-α、IL-6均明显升高,P<0.05)。与模型组比较,治疗组大鼠血清中TNF-α、IL-6明显减少(P<0.05),以中药中剂量组疗效最显著(P<0.01)。结论补肾健脾、解毒利咽法能降低Ig AN模型大鼠血尿、蛋白尿,减少血清中TNF-α及IL-6的含量。

健肾片对IgA肾病模型大鼠肾组织LNFN局部沉积的影响

目的 :探讨健肾片治疗IgA肾病的机理。方法 :采用口服牛血清白蛋白和葡萄球菌肠毒素B感染的复合方法 ,复制大鼠IgA肾病模型 ,并分别给予健肾片和雷公藤多甙片治疗 ,根据染色程度半定量分析各组肾组织内LN、FN的含量。结果 :健肾片对IgA肾病模型肾组织中LN、FN的沉积具有明显的抑制作用。结论 :健肾片可明显抑制IgA模型肾组织中LN。