“半衰期^(+)”室内质控频率新策略在化学发光免疫检测项目中的应用

目的通过对化学发光免疫检测项目室内质控失控数据进行分析,探讨“半衰期^(+)”室内质控实施频率模式在化学发光免疫检测项目检测中的应用。方法回顾性分析重庆市人民医院检验科2021年1月至2023年12月化学发光免疫检测项目室内质控的失控数据、失控原因及处理措施,建立并评估“半衰期^(+)”室内质控实施频率模式。结果3年内化学发光免疫检测项目失控总次数为326项次,质控品原因(92.33%)为最主要失控原因,但该类原因所致失控不影响临床标本检测结果准确度;试剂原因(3.37%)、校准原因(2.76%)和其他原因(1.53%)导致的失控会影响临床标本检测结果准确度。“半衰期^(+)”室内质控新策略可明显减少室内质控失控频率(0.38%vs.0.16%),且有效识别影响临床标本检测结果准确度的失控。结论在化学发光免疫检测项目中,“半衰期^(+)”的室内质控频率新策略在保证检测系统质量可靠的同时,可大幅降低室内质控频率及“假失控”次数,节约人力、物力成本,提升实验室质量管理水平。

自制输血相容性检测室内质控品保存条件的研究

本研究目的是利用输血相容性检测实验室现有血液标本资源,建立自制室内质控品技术。随机选取24名A型RhD阳性的健康献血者,分别采集静脉血4ml,采用析因设计方法,根据使用抗凝剂种类、是否添加红细胞保存液以及标本每日室温存放时间,将24个标本随机平均分成8组,将所有盛装标本的试管盖帽后4℃保存,每天在室温放置l小时或2小时。分别在保存的0、7、14、21、28、35天测定所有标本的ABO、RhD血型(记录正反定型的凝集强度)、IgM抗B抗体效价和上清液中游离血红蛋白浓度并计算其增量值。结果表明:使用ACD.B抗凝剂并添加MAP红细胞保存液,每天室温放置1小时(A282C1)组标本的红细胞损伤最小,各时间点FHb浓度及其增量值均最低(P<0.01),35天时FHb浓度仅为(245.1±84.5)mg/L。保存过程中A抗原、D抗原及IgM抗B抗体反应活性无明显变化(P>0.05)。结论:在输血相容性检测实验室现有条件下,可以利用本研究建立的A282C1方案制备出性能相对稳定、可有效保存的能够满足室内质控要求的改良全血室内质控品。

临床检验室内质量控制规则设计新工具-Westgard西格玛规则

临床检验室内质量控制正确的质控方法对提高报告患者结果的质量水平是十分重要的。为了继续寻求更快捷简单的工具来帮助实验室选择适合于他们自己应用的正确的室内质控规则，Westgard最近推出了一种更新的室内质量控制规则设计工具。它比之前的工具更快捷且易使用，称之为“Westgard西格玛规则”。通过使用 Westgard西格玛规则，实验室很容易得到正确的质控方法。该文介绍了经典的 Westgard多规则、西格玛度量图的特点和用法，并重点说明了 West-gard西格玛规则的运用方法和实践。该工具是经典 Westgard多规则与西格玛度量图的结合，只要实验室确定他们试验和方法的西格玛（σ）水平，就能通过它直观的获得正确的质控规则和质控测定值个数。

ISO 15189:2012与室内质量控制

室内质量控制(质控)是保证检验质量的重要措施。ISO 15189:2012对室内质控部分内容作了相应的规定。定量检测应规定允许总误差,选择合适的质控材料,根据检测性能设计合理的质控程序,包括质控规则和频率;定性检测每批应包括阴性和阳性质控品,根据质控品阴性、阳性结果判断是否在控。出现失控现象时,应仔细分析误差类型,积极查找失控原因,采取纠正措施,并做详细记录。

输血相容性检测室内质控品制备技术优化与性能评价

目的优化自制输血相容性检测室内全血质控品制备技术,检测其保存过程中综合性能指标的变化,确定合理的处理流程、保存期限并评价其应用价值。方法选择多人份采集时间≤10 d的B型RhD阴性健康献血者标本,将其混合后离心留取上清血浆,再将混合浓缩红细胞分成2组,MAP组:使用MAP红细胞保养液洗涤2次;Saline组:使用生理盐水洗涤2次。将2组洗涤后的红细胞分别与MAP红细胞保存液、对应混合血浆按照1∶2∶3的体积比混合。选择商品化IgG抗-D试剂做抗-D效价测定,确定出现最后1个2+凝集强度的稀释倍数,并按照此稀释倍数分别在2组质控品中填加相应体积的IgG抗-D。将2组混合悬液分装在硬质塑料试管中盖帽4℃保存,每天在室温放置1 h,分别在保存的0、35、42、49 d检测质控品标本红细胞与标准抗-B的凝集强度、IgM抗-A与反定A细胞的凝集强度、IgG抗-D与RhD阳性O型红细胞的凝集强度、上清液中Na+、K+、LDH、乳酸、FHb浓度、红细胞形态变化以及质控品中细菌繁殖情况。结果保存过程中2组质控品红细胞B抗原、IgG抗D抗体反应活性均无明显变化(P>0.05),IgM抗A抗体反应活性虽出现波动(P<0.01),但凝集强度变化均在1+范围内;2组质控品K+、乳酸浓度均随保存时间延长明显增高(P<0.01),但保存35、42d时2组各指标之间无明显差异(P>0.05);2组质控品FHb浓度均随保存时间延长而增高,但相同保存时间2组之间比较无明显差异(P<0.01)。保存49 d时MAP组和Saline组FHb浓度分别为(857.1±301.5)mg/L和(595.3±334.9)mg/L,与保存0d相比均明显升高(P<0.01),MAP组部分质控品FHb浓度已经超过中度溶血标准(1 000 mg/L);2组质控品保存末期(≤42 d)红细胞都会出现一定程度的皱缩并形成棘突,但2组之间无明显差异;2组质控品保存过程中都未见细菌生长。结论本室采用2种方法自制的全血质控品质量无明显差异,保存期都能达到42 d,且管间差异小、抗原抗体反应活性稳定,能够满足输血相容性检测室内质控的相关要求,适合在输血相容性检测实验室推广。

尿液定量生化检验项目室内质量控制变异系数调查与分析

目的：评估尿液定量生化项目的室内质量控制（internal quality control，IQC）变异系数（coefficient of variation， CV）质量水平，并为实验室提供改进建议。方法采用基于 Web的室间质量评价（external quality assessment，EQA）软件系统，收集参加全国尿液定量生化室间质评计划实验室2014年4月的 IQC数据。依据1／3室间质量评价限（total allowa-ble error，TEa）和1／4TEa对 IQC不精密度进行评价，计算各实验室室内质控CV通过率。并按照是否使用配套检测系统分别统计。结果研究中，上报尿液定量生化项目各项目IQC相关数据的实验室数量从71到111不等。不同项目的当月和累积在控CV各不相同，其中K，Na和Cl的当月在控CV通过率高达100％，质量水平较高。Mg，Cre，Urea和 mAlb则相对较低（75.68％～93.51％），需要改进。不同实验室各项目使用仪器、试剂、校准品的配套情况各不相同，配套检测系统累积CV中位数大于不配套检测系统。结论不同实验室不同项目的CV情况各不相同，实验室应该根据自身的情况选择适当的允许不精密度质量规范，将注意力更多地投入到CV不合格的项目中，不断地提升自己，这样才能提供更加准确的结果和更加优质的服务。

血液核酸筛查利用室内质控品Ct值建立质控图方法初探

目的使用已知浓度的HBV DNA、HCV RNA WHO标准品作为室内质控品,检测质控品的Ct值,利用Excel表格进行质控图的绘制,探索聚合酶链反应的室内质控方法。方法将WHO标准品HBV DNA、HCV RNA分别稀释至30 IU/m L、200 IU/m L,作为室内质控品,与献血员标本一同进行核酸提取、扩增检测,连续测定20 d,记录Ct值,分别计算Ct值的均值(x珋)、标准差(SD)和变异系数(CV),以x珋±2s为警告限,x珋±3s为失控限,绘制Levey-Jennings质控图。同时使用试剂盒提供的阴性对照作为阴性质控样本。结果连续测定20 d,HBV DNA室内质控品Ct值的均值是30.86,标准差是0.49,变异系数为1.59%。HCV RNA室内质控品Ct值的均值是34.02,标准差是0.66,变异系数为1.94%。绘制出Levey-Jennings质控图,结合Westgard多规则质控方法,判断每批实验的有效性。阴性对照为无反应性结果时,该批次实验有效。结论弱阳性质控样本反映了核酸提取和扩增检测的有效性,阴性质控样本的扩增测定结果可以判断核酸提取过程中是否发生污染。弱阳性和阴性质控样本可以监控核酸扩增实验的有效性。

我国新生儿遗传代谢病串联质谱筛查室内质控变异系数分析

目的了解我国串联质谱筛查新生儿遗传代谢病的室内质量控制的变异系数。方法采用基于Web的室间质量评价软件系统,收集于2016年4月参加新生儿遗传代谢病串联质谱筛查全国室间质评项目的 79家实验室的室内质控数据,包括2016年4月2个水平(批号1和批号2)当月和累积的室内质控在控数据的变异系数(CV)。根据1/3室间质量评价限(TEa)和1/4 TEa这2个标准,计算各个项目2个批号质控品的室内质控CV的通过率。结果氨基酸类项目批号1中70%以上实验室的当月在控CV都能满足≤1/3TEa,约50%实验室的当月在控CV能满足≤1/4TEa。批号2中除甲硫氨酸外,其他氨基酸项目满足≤1/3TEa的实验室均超过90%。酰基肉碱类项目批号1中约80%实验室的当月在控CV和70%以上实验室的累积在控CV能满足≤1/3TEa,半数以上实验室的当月在控CV和累积在控CV都能满足≤1/4TEa。批号2中,当月在控CV和累积在控CV满足≤1/3TEa的实验室分别约为90%和80%,满足≤1/4TEa的实验室分别约为80%和60%。结论大多数新生儿遗传代谢病筛查实验室室内质控CV可以满足1/3TEa,但满足1/4TEa的实验室仍相对较少,新生儿遗传代谢病筛查实验室应继续加强室内质量控制,进一步提高其检测质量水平。

HBV-DNA检测试剂的性能评估与室内质控数据评价

参照美国临床实验室标准化委员会(CLSI)文件,对临床检验使用的实时荧光定量PCR扩增检测试剂盒定量结果的精密度、正确度、定量限、线性范围及抗污染性进行评价。同时用乙型肝炎病毒核酸(HBV-DNA)试剂盒检测2016年3月~8月两个批号的质控血清HBV-DNA,并计算质控结果、标准曲线斜率、截距和相关系数的均值()、标准差(SD)和变异系数(CV)。其中批内、批间精密度CV分别为1.08%~4.41%、2.17%~2.74%,达到核酸检测试剂盒的国家标准及《医学实验室质量和能力认可准则》中基因扩增检验项目分析性能标准(CV≤5%)。参加2016年卫生部室间质评结果总体平均偏倚为2.03%,准确度符合卫生部质评要求。相关系数r=0.999 9,>0.98,线性关系符合要求。定量限结果符合±0.5个对数数量级的要求(评价中至少22次为阳性)。本室2016年3月~8月测定的室内质控物结果对数的累积均值(±2s)为4.34(4.20~4.44),符合参考范围要求。经验证,实时荧光定量PCR HBV-DNA检测试剂盒的各项性能指标以及室内质控结果满足《医学实验室质量和能力认可准则》要求,可以为临床提供快速、准确的报告。

血站核酸筛查混样和拆分单检室内质控方法的建立和评价

目的:建立核酸检测技术(NAT)用于血液筛查的室内质量控制(QC)方法。方法:将浓度为60 IU/ml HBV-DNA质控标准品,以6个混样常规筛查浓度稀释至10.0 IU/ml,接近检测下限的2倍。如出现混样结果阳性,则需进行拆分单检,以同管HBV-DNA质控品(浓度为60 IU/ml)作为拆分单检质控品,与需拆分样品同时单检。分别通过平行检测各20份同一批次质控品的方式,所得结果用即刻法分析其核酸扩增循环数,计算Ct值的均值()、标准差(SD)和变异常数(CV),以±2SD为警告限,超过±3SD为失控限,输入Excel后绘制LeveyJennings质控图,并以此分别建立核酸筛查混样和拆分单检室内质控图框架。结果:混样和拆分单检连续20次检测结果,其±2SD分别为33.03±1.47和30.08±0.98;±3SD分别为33.03±2.20和30.08±1.47;CV分别为2.22﹪和1.63﹪。t检验计算其P值分别为0.08和0.17。在此质控标准下,在同等条件下混样检测60份、拆分单检13份质控品,检测结果为混样检测59次结果在控,1次失控;拆分单检13次全部在控。阴阳性对照物结果均符合实验要求,结果有效。结论:核酸筛查时混样检测和拆分单检采用不同浓度的质控品,混样时以接近试剂检测限的弱阳性血清作为核酸筛查的质控品,拆分单检时的浓度是混样检测浓度的6倍。此质控方法可保证检测核酸提取和扩增的有效性,提高实验结果的稳定性。

HIV抗体检测“即刻法”室内质控存在的有关问题探讨

目的 改良“即刻法”质控统计方法 ,并应用于抗 HIV抗体检测的质量监控。方法 采用ELISA法进行抗 HIV抗体检测。每次检测过程中均加入定值血清作为对照。按常规“即刻法”统计处理定值血清的S/CO值。同时采用“综合方法”统计处理定值血清的S/CO值 ,即舍弃累加测定值 x± 2s范围之外的数据后 ,再按常规“即刻法”统计处理定值血清的S/CO值。结果 常规“即刻法”处理数据 ,可能导致应为“在控”的数值被误判为“告警”状态。采用“综合方法”处理数据可纠正常规“即刻法”导致的误判。结论 对于监控抗 HIV抗体检测质量 ,“综合方法”优于常规“即刻法”。

B型钠尿肽和N末端B型钠尿肽原室内质量控制变异系数调查与分析

目的了解目前我国检验科B型钠尿肽（BNP）和N末端B型钠尿肽原（NT-pro BNP）开展室内质量控制（internal quality control,IQC）工作的情况。方法采用基于Web方式的室间质量评价（EQA）软件系统,收集参加全国BNP和NT-pro BNP EQA的70和233家实验室的室内质控数据,包括2014年4月和长期累积室内质控在控数据的变异系数（CV）。依据1/3室间质量评价限（TEa）和1/4TEa这2个评价标准,计算BNP和NT-pro BNP各2个批号质控品的室内质控CV的通过率。统计BNP和NT-pro BNP参加EQA的实验室使用的仪器,然后按照2个评价标准计算各仪器组的通过率。结果有70和233家实验室上报了BNP和NT-pro BNP第1个浓度水平（批号1）的数据,其中有25和98家上报了第2个浓度水平（批号2）的数据。BNP批号1当月在控CV和累积在控CV满足1/3TEa和1/4TEa标准的实验室分别有90.00%、75.71%、81.43%和64.29%,CV%中位数分别为4.55、4.41、5.25和4.4;批号2通过率比批号1高,分别为80.00%~96.00%,CV%中位数也比批号1低,分别为3.69~4.75;NT-pro BNP批号1当月在控CV和累积在控CV满足1/3TEa和1/4TEa标准的实验室分别有93.99%、85.41%、85.84%和78.11%,CV%中位数分别为4.11、3.9、4.61和4.42;批号2通过率与批号1相近,CV%中位数都低于批号1（3.22~3.67）。检测BNP使用的检测系统主要为雅培（33/70）、西门子（18/70）和贝克曼（8/70）,NT-pro BNP的检测系统主要为罗氏（117/233）、生物梅里埃（19/233）、乐普（19/233）、雷度米特（15/233）和强生（10/233）。各检测系统通过率间的差异不大。结论大多数实验室室内质控CV可以满足1/3TEa,甚至1/4TEa评价标准,但应该继续加强室内质量控制,进一步提高其检测质量水平。

多标记室内质控品在血液核酸筛查的应用分析

目的探讨HCV RNA、HBV DNA和HIV RNA多标记室内质控品在罗氏COBAS s201核酸血筛系统应用的可行性和有效性。方法用已知浓度HCV RNA、HBV DNA和HIV RNA室内质控标准品与核酸检测阴性血浆按1∶2∶5∶22的体积比配制成多标记室内质控品,同时配制相同浓度的单项目质控品作为对照组,配制当天(d1)用COBAS s201核酸检测系统单检模式分别检测4次,此后每天检测多标记质控品4次,连续检测7 d,分析多标记室内质控品与单项目质控品Ct值的差异以及4℃条件下不同保存时间Ct值的变化。统计分析本室2015年1-8月使用多标记室内质控品的质控数据,评价该室内质控模式的可行性和有效性。结果多标记室内质控品各项目与相同浓度的单项目质控品检测Ct值比较无差异(P>0.05);在4℃条件下,HCV RNA和HIV RNA 7 d后的Ct值分别为(37.15±0.29)、(36.05±0.24)高于d1(P<0.05),HBV DNA 6 d后的Ct值为(33.40±0.62)高于d1(P<0.05)。各项目Ct值的均值和标准差(x±s),HCV RNA为36.41±0.77、HBV DNA为33.16±0.61、HIV RNA为35.37±0.54;3项目的 CV%分别为2.11%、1.86%和1.53%,均在允许范围内。结论核酸检测多标记室内质控品不会发生基质效应或被扩增抑制,配制后多标记室内质控品在4℃条件下可稳定保存至5 d;多标记室内质控品配制简便,节省试剂,可推广应用于血液核酸筛查室内质量控制。

ELISA定性试验的室内质控

ＥＬＩＳＡ定性试验室内质控方法一般沿用生化的Ｌ－Ｙ图进行。但由于ＥＬＩＳＡ的高灵敏度和特异性，ＣＶ较大，用Ｓ来界定是否在控不易操作，加上质控物和试验盒的批号频换，实验周期较长（医院检验科需很长时间才做够分析用的次数）而显得不实用。该文介绍用临界值血清界定法进行室内质控，即以试剂盒中的对照作为内对照，指示反应；另设临界值质控血清，高值质控血清和正常人血清为外对照，控制临界值（灵敏度）和“ＨＯＯＫ”现象，阴性正常值（特异性），以每次实验外对照的Ｓ／ＣＯ值原始记录作为室内质控资料备案。在日常工作中既简便易行又符合ＥＬＩＳＡ特性。

荧光定量PCR法检测HBV-DNA室内质控物的制备及质控图的应用

目的制备HBV-DNA荧光定量PCR检测室内质控物,建立室内质控管理体系,利用Excel表格进行质控图的绘制。方法取单一浓度HBV-DNA阳性血清,稀释至一定浓度后,分装数管,-70℃保存。连续检测20次,计算均值、标准差和变异系数,绘制质控图,进行室内质控动态监测。结果HBV-DNA室内质控均值的对数值为5.573,标准差为0.244,变异系数为4.4%,稳定性很好,有临床应用价值,质控图利用Excel表格标示出警告限和失控限,有利于动态监控。结论荧光定量PCR方法进行HBV-DNA检测的质控物制备简单,稳定性良好,质控图操作方便,一目了然,适合临床实验室应用和推广。

应用“双质控法”、加强“即刻法”室内质控

目的应用“双质控法”,加强、完善“即刻法”室内质控,并用于抗-HIV抗体检测的质量监控。方法采用ELISA法进行HIV抗体检测。每次更换试剂时,使用原试剂和新批号试剂同板检测3次,并采用同一质控血清。原试剂的质控结果参与原数据组按“即刻法”分析,新试剂的质控结果参与原试剂数据组按“即刻法”分析,3次均不向负值偏移至告警或失控时,从第3次开始新数据组用“即刻法”分析。更换质控血清时,两种质控血清同板检测3次,即在同一试剂板中分别加入原质控血清和新质控血清;原质控血清的检测结果参与原数据组按“即刻法”分析,新质控血清的检测结果从第3次开始新数据组用“即刻法”分析。结果采用“双质控法”较好地解决了“即刻法”开始几次检测结果无法控制的状况。结论“双质控法”进一步加强、完善了“即刻法”在ELISA检测中的质量监控作用。

患者数据均值法用于凝血试验的室内质量控制

目的探讨患者数据均值法在凝血试验室内质量控制中的应用。方法采用正态均值法。计算术前患者血浆4项检测数据(PT、APTT、TT、Fib)的均值(x-)及标准差(s),确定患者数据接受限及均值控制限,据此将每日位于接受限内的患者数据以20例为一组计算均值,分别称为均值1、均值2、均值3、…。结果1周中PT及Fib分别有3次及1次均值超出了均值控制限,1月中4项检测患者均值的日间变异系数低于室内质控血浆。结论患者数据均值法较室内质控血浆具有更好的"敏感性"和"即时性",适用于对分析前及分析中的质量控制,但不能代替室内质控,两者应互为补充。