雌激素和孕酮对犬子宫内膜基质细胞增殖和孕酮受体表达的影响

本试验应用不同消化分离途径获取犬子宫内膜基质细胞,调节培养液中雌激素(E2)和孕酮(P4)的浓度,采用MTT法测定E2和P4浓度水平对犬子宫内膜基质细胞体外增殖的影响,利用细胞免疫组织化学法鉴定细胞并测定细胞孕酮受体(PR)表达与激素浓度水平的相关性。结果表明,E2浓度变化(15、30、100pg/mL)对犬子宫内膜基质细胞的增殖和PR的表达均没有显著的调节作用(P>0.05);P4(15、30ng/mL)对犬子宫内膜基质细胞的增殖有显著促进作用(P<0.05),P4(3、15、30ng/mL)对犬子宫内膜基质细胞PR的表达具有显著的抑制作用(P<0.05),其影响程度与浓度和作用时间关系密切。

熊果酸通过JAK2/STAT3信号通路对子宫内膜基质细胞铁死亡的影响

目的探究熊果酸(ursolic acid,UA)对异位子宫内膜基质细胞(ectopic endometrial stromal cells,EESCs)增殖、迁移和铁死亡的影响及其作用机制。方法构建子宫内膜异位症小鼠模型,并分离原代EESCs,使用不同浓度(0、2.5、5、10、20、40、50、80、100、200 μmol/L)的熊果酸处理细胞;并将细胞分为Control组(正常培养)、2.5 μmol/L UA组(2.5 μmol/L熊果酸处理)、5.0 μmol/L UA组(5.0 μmol/L熊果酸处理)、10.0 μmol/L UA组(10 μmol/L熊果酸处理)、和UA+DUSP19组(10 μmol/L熊果酸+50 μmol/L的JAK2/STAT3信号通路激活剂DUSP19处理)。使用CCK-8法检测细胞存活率;使用平板克隆法检测细胞增殖;使用Transwell小室实验检测细胞迁移能力;使用试剂盒检测各组细胞Fe2+水平以及丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量;使用蛋白免疫印迹检测各组细胞Ki67、PCNA、CyclinD1、p-JAK2、p-STAT3、JAK2、STAT3蛋白表达水平。结果 Control、2.5 μmol/L UA、5.0 μmol/L UA、10.0 μmol/L UA组克隆数分别为:(152.22±15.47)、(121.22±11.54)、(92.00±5.54)、(66.44±6.88)个;Ki67蛋白表达量分别为:1.08±0.10、0.73±0.07、0.61±0.06、0.45±0.02;PCNA蛋白表达量分别为:0.85±0.07、0.64±0.05、0.41±0.03、0.31±0.05;CyclinD1蛋白表达量分别为:0.98±0.11、0.65±0.06、0.51±0.05、0.42±0.07;迁移数目分别为(92.78±6.27)、(62.22±2.20)、(50.22±4.59)、(39.11±4.33)个;Fe2+水平分别为:(1.06±0.07)、(1.21±0.11)、(1.33±0.08)和(1.47±0.09)μmol/g;MDA含量分别为:(0.48±0.06)、(0.65±0.07)、(0.85±0.08)和(1.03±0.11)μmol/g;ROS含量分别为(19.85±1.21)%、(24.83±2.79)%、(29.04±1.86)%、(33.87±2.45)%;SOD含量分别为:(36.41±3.56)、(31.03±2.81)、(25.63±2.84)和(19.62±1.67)U/mg;p-JAK2蛋白表达量分别为:0.85±0.10、0.75±0.06、0.53±0.05、0.31±0.03;p-STAT3蛋白表达量分别为:1.08±0.11、0.79±0.06、0.63±0.07、0.42±0.03。UA组和UA+DUSP19组的p-JAK2蛋白含量分别为:0.38±0.05、0.75±0.08;p-STAT3蛋白表达量分别为:0.46±0.04、0.80±0.03;细胞存活率分别为:(52.55±2.44)%、(82.18±4.72)%;Fe2+水平分别为:(1.57±0.06)和(1.21±0.13)μmol/g。以上指标,Control组与2.5 μmol/L UA组、5.0 μmol/L UA组、10.0 μmol/L UA组之间差异均具有统计学意义(P<0.05);2.5 μmol/L UA组、5.0 μmol/L UA组、10.0 μmol/L UA组之间差异均具有统计学意义(P<0.05);UA组和UA+DUSP19组之间p-JAK2、p-STAT3、细胞存活率和Fe2+水平差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论熊果酸可通过调控JAK2/STAT3信号通路抑制EESCs细胞增殖、迁移,并诱导铁死亡,进而发挥对子宫内膜异位症的保护作用。

Isolation, Cuture and Biological Characteristic Analysis of Stromal and Glandular Epithelial Cells of Buffalo (Bubalus bubalis) Endometrium

[Objective] The experiment aimed to set up a method for isolating and culturing endometrial stromal cells (BESC) and endometrial glandular epithelial cells(BEGEC) of buffalo as well as laid foundation for studying biological mechanism of embryo implantation and uterine diseases. [Method] The enzymatic digestion method, scraping method, serial filtration and differential velocity adherent technique were used to isolate BESC and BEGEC, then immunocytochemical method and TRYPAN-Blue assay were used to determine the purity and survival rate of isolated cells. [Result] The BESC and BEGEC were successfully isolated and cultured while immunocytochemical method and cell count method demonstrated that the purity was over 90%. The result of TRYPAN-Blue assay shown that survival rate of BESC and BEGEC was 91% and 78% respectively. [Conclusion] The enzymatic digestion method, scraping method, serial filtration and differential velocity adherent technique could isolate BESC and BEGEC with high purity.