异位子宫内膜细胞增殖及增殖动力学研究

目的 探讨异位内膜细胞的增殖特性及增殖动力学。 方法 对 1 0例异位内膜组织 (试验组 )及 1 0例正常内膜组织 (对照组 )进行原代培养 ,采用免疫细胞化学检测两组内膜 ki-67表达 ,采用流式细胞术检测两组细胞的细胞周期。 结果 ( 1 )异位内膜腺上皮细胞的 ki-67积分 ( 4.2 0± 0 .55)与正常内膜腺上皮细胞 ( 3 .90± 0 .70 )相当 ( P>0 .0 5)。异位内膜间质细胞 ki-67积分 ( 2 .92± 0 .58)与正常内膜间质细胞 ( 2 .60± 0 .3 7)相当 ( P>0 .0 5)。( 2 )异位内膜 G0 / G1、G2 / M、S期的比例分别为 ( 78.1 4± 3 .51 ) %、( 1 1 .53±2 .1 8) %、( 1 0 .3 2± 1 .72 ) %与正常内膜 ( 79.2 7± 2 .49) %、( 1 1 .53± 1 .43 ) %、( 9.2 0±1 .66) %相似 ( P>0 .0 5)。 结论 ( 1 )异位内膜细胞并非高度增殖 ;( 2 )

异位子宫内膜细胞中整合素α_5的表达及其性激素调控

目的:探讨异位子宫内膜细胞中整合素α5的表达及性激素对其的影响。方法:对18例卵巢子宫内膜异位症(EM)患者的异位子宫内膜组织行体外细胞培养并传代。传代培养中细胞分为非药物干预组(对照组)、雌二醇(E2)组、安宫黄体酮(P)组、米非司酮(RU486)组、三苯氧胺(TAM)组5组,细胞收获后用逆转录-聚合酶链反应技术检测各细胞组中整合素α5mRNA的表达。结果:整合素α5在E2组及P组的表达水平分别为1.415±0.286及1.304±0.170,与对照组的1.082±0.069相比,差异具有统计学意义(P<0.05),而TAM组及RU486组中整合素α5表达水平(分别为0.882±0.013及1.304±0.170)明显低于对照组(P<0.05)。结论:整合素α5表达受雌、孕激素调控,E2、P可能通过上调整合素α5的表达而促进EM粘附的发生,TAM、RU486可能通过拮抗E2、P或抑制异位内膜细胞分泌整合素5α分子而延缓EM的发展,从而起到治疗作用。

内异停对离体培养的子宫内膜异位症的异位子宫内膜细胞的直接抑制作用

家兔4只,分别以0 8g/mL内异停10mL/kg·d和0 0 8g/mL达那唑10mL/kg·d灌胃,每日一次,连续7d后,制备含药血清研究对内异症患者子宫内膜细胞生长的影响。发现内异停血清0 0 5g/mL ,0 0lg/mL和0 0 2 g/mL ,能显著抑制离体培养的内异症患者异位子宫内膜细胞的生长。而达那唑血清0 0 1g/mL无明显抑制作用。结论:内异停对人异位子宫内膜细胞的生长具有直接抑制作用。

兔子宫内膜干细胞的鉴定

目的:研究兔子宫内膜是否存在干细胞。方法:流式细胞术检测兔子宫内膜中上皮细胞及间质细胞的特异性标记分子,干细胞培养基培养出富含干细胞的集落,运用RT-PCR方法检测分化前后相关分子的表达,MTT法检测集落细胞分化前后增殖能力变化,流式细胞术检测分化前后的相关分子表达变化及细胞的凋亡情况。结果:兔子宫内膜存在上皮细胞及间质细胞两种细胞,干细胞培养基可培养出富含干细胞的集落,且分化前的细胞具有更高的增殖潜能,表现出更多的干细胞源性,具有更低的细胞凋亡比例。结论:兔子宫内膜存在富含干细胞的集落,提示存在子宫内膜干细胞。

宫内膜干细胞治疗失代偿期肝硬化疗效观察

目的探讨宫内膜干细胞移植治疗失代偿期肝硬化的临床疗效。方法选择肝硬化失代偿期患者23例,宫内膜干细胞经静脉输注方法移植入肝脏,分别在治疗后第1周、2周、1个月、3个月、6个月、12个月复查肝脏功能(TBIL、ALT、AST)、甲胎蛋白(AFP)、胆碱酯酶(CHE)、肝纤维化等实验室指标,分析临床症状及不良反应情况。结果治疗后23例临床症状及体征明显改善。移植治疗后,在各观察点复查肝功能TBIL、ALT、AST、AFP较治疗前均降低,但差异无统计学意义;ALB(34.8 g/L)和CHE(4386 U/L)较治疗前显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。肝纤维化指标LN、HA、PC-Ⅲ、Ⅳ较治疗前均减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论宫内膜干细胞移植治疗可明显改善肝硬化失代偿期患者肝脏功能及临床症状,短期结果安全可靠,不良反应少,值得临床进一步研究。

莪术醇对子宫腺肌症异位子宫内膜间质细胞增殖、凋亡及迁移的影响

目的探讨莪术醇对子宫腺肌症异位子宫内膜间质细胞(EESCs)细胞增殖、凋亡及迁移的影响,为临床治疗子宫腺肌症提供理论依据。方法对EESCs进行分离、纯化培养及细胞鉴定。将传至第2—3代的EESCs细胞随机分为5组:Control组(加入质量浓度为10 mg·L-1的无水乙醇作用于EESCs)和莪术醇1、2、3、4组(分别加入质量浓度为12.50、25.00、50.00、100.00 mg·L-1的莪术醇作用于EESCs)。采用CCK-8法检测EESCs的细胞存活率,细胞划痕实验检测EESCs的细胞迁移率,流式细胞术联合FITC-Annexin V/PI双染色法检测EESCs的细胞凋亡率。结果分别用鼠抗人vimentin、cytokine抗体鉴定EESCs显示细胞纯度在95%以上,成功分离培养出原代EESCs细胞。与Control组比较,莪术醇1、2、3、4组24、48 h时EESCs细胞增殖率、24 h EESCs细胞迁移率均降低,EESCs细胞凋亡率均升高,差异有统计学意义(P<0.05)。莪术醇1、2、3、4组24、48及72 h时EESCs细胞增殖率均低于96 h,莪术醇3、4组EESCs细胞凋亡率均较莪术醇1、2组升高,莪术醇4组EESCs细胞凋亡率较莪术醇3组升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论莪术醇在体外能显著抑制子宫腺肌症EESCs细胞增殖和迁移,诱导细胞凋亡,具有潜在的治疗子宫腺肌症作用。

米非司酮与利洛司酮对异位子宫内膜间质细胞凋亡的影响

目的 探讨米非司酮和利洛司酮对异位子宫内膜间质细胞凋亡形态学和凋亡率的影响。方法 应用光学显微镜观察细胞生长状态 ;应用电子显微镜观察凋亡细胞的超微结构 ,应用 TUNEL法观察细胞凋亡率。结果 两种抗孕激素以浓度 1× 10 - 6 mol/ L、培养 4 8小时 ,异位子宫内膜间质细胞开始出现早期细胞凋亡变化 ,随作用时间延长和浓度增加 ,细胞凋亡形态学变化更趋明显 ,细胞凋亡率增加 ,利洛司酮诱导细胞凋亡作用大于米非司酮。结论 抗孕激素米非司酮和利洛司酮以时间和剂量依赖性方式促进异位子宫内膜间质细胞的凋亡 ;

经血源性子宫内膜干细胞及其修复外周神经损伤的应用前景

外周神经损伤带给患者长期病痛的同时严重影响了患者的生活质量,目前临床上除显微外科手术外,移植施万细胞(SC)也成为有效的治疗方法。然而SC移植的先天不足限制了其在临床上的大规模使用,因此,干细胞治疗神经损伤逐渐成为近年来的研究热点。而近来发现的经血源性子宫内膜干细胞(Men ESCs)凭借其丰富的来源,无创伤的分离方式以及较高的增殖活性和分化潜能等方面的优势获得广泛关注,并在成骨、心肌、肝脏、子宫内膜及中风等疾病的治疗过程中显示了良好的效果。因此,我们在明确外周神经损伤发生机制的基础上,着重阐明Men ESCs的生物学特性及其在治疗外周神经损伤的机制,以期为Men ESCs在外周神经损伤的治疗提供借鉴。

上皮细胞及间质细胞表面分子在兔子宫内膜中的表达

目的探讨兔子宫内膜中上皮细胞及间质细胞表面分子的表达。方法应用流式细胞术检测上皮细胞表面标记分子EpCAM、EMA,及间质细胞表面标记分子CD90(Thy-1)和Collagen typeⅠ,RT-PCR分析上述表面分子的mRNA表达,同时对Sox2及Oct4的mRNA进行检测。结果在兔子宫内膜中,可以检测到EpCAM、EMA、CD90及Collagen typeⅠ的mRNA及蛋白表达,同时可检测到Oct4及Sox2在兔子宫内膜中的表达。结论兔子宫内膜可能存在上皮细胞及间质细胞两种细胞成分,同时可能存在兔子宫内膜干细胞。

榆栀止血颗粒含药血清对异位子宫内膜间质细胞PTEN/PI3K/AKT信号通路的影响

目的:探讨榆栀止血颗粒含药血清对异位子宫内膜间质细胞(ESCs)中第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白(PTEN)/磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响。方法:制备榆栀止血颗粒含药血清,体外培养人异位ESCs细胞,分为对照组(空白血清)、低剂量组(榆栀止血颗粒低剂量血清)、中剂量组(榆栀止血颗粒中剂量血清)和高剂量组(榆栀止血颗粒高剂量血清)。CCK-8法检测细胞增殖情况;Transwell法检测细胞侵袭情况;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测细胞中PTEN mRNA表达情况;蛋白印迹(WB)法检测细胞中PTEN、p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT蛋白表达情况。结果:与对照组相比,低、中、高剂量组异位ESCs细胞OD值、侵袭细胞数、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞中PTEN mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05);随着榆栀止血颗粒含药血清剂量升高,异位ESCs细胞OD值、侵袭细胞数、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达水平逐步递减(P<0.05),细胞中PTEN mRNA及蛋白表达水平逐步递增(P<0.05)。结论:榆栀止血颗粒含药血清可抑制异位ESCs细胞增殖与侵袭,上调PTEN表达并抑制PI3K/AKT信号通路。

芳香化酶抑制剂对异位子宫内膜间质细胞NO/ET表达的影响和意义

目的:探讨NO/ET与异位子宫内膜间质细胞凋亡的关系以及芳香化酶抑制剂依西美坦的作用。方法:体外培养原位和异位子宫内膜间质细胞,应用发光免疫法检测雌二醇的水平,应用ELISA检测内皮素表达,用硝酸还原酶法检测一氧化氮,应用流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果:与正常内膜间质细胞相比,异位内膜间质细胞可以合成雌激素,其NO和ET合成相应增加,但NO/ET比值下降,细胞凋亡率也相应降低(P<0.05)。依西美坦作用72 h后,异位内膜间质细胞雌激素合成减少,NO/ET比值增加,凋亡率相应升高(P<0.05)。结论:NO/ET比值可以预测异位子宫内膜间质细胞的凋亡情况,依西美坦可升调NO/ET比值并增加异位内膜间质细胞的凋亡。

依西美坦对异位子宫内膜间质细胞β-内啡肽表达的影响和意义

目的:探讨β-内啡肽对异位子宫内膜间质细胞凋亡的影响和芳香化酶抑制剂依西美坦的作用。方法:应用发光免疫法检测雌二醇的水平;应用免疫组织化学法检测β-内啡肽的表达;应用流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果:与正常内膜间质细胞相比,异位间质细胞可以合成雌激素,β-内啡肽的表达较低,凋亡率较低(P<0.05);依西美坦作用72 h后,异位间质细胞雌激素合成减少,β-内啡肽的表达增加,凋亡率升高(P<0.05);反向添加雌二醇后,异位间质细胞的β-内啡肽和凋亡率与异位间质细胞对照组无明显差异(P>0.05)。结论:β-内啡肽与异位子宫内膜间质细胞的凋亡有关,依西美坦经降调β-内啡肽的表达而增加异位内膜间质细胞的凋亡,反加雌激素可以阻断这一作用。

雌激素和孕酮对犬子宫内膜基质细胞增殖和孕酮受体表达的影响

本试验应用不同消化分离途径获取犬子宫内膜基质细胞,调节培养液中雌激素(E2)和孕酮(P4)的浓度,采用MTT法测定E2和P4浓度水平对犬子宫内膜基质细胞体外增殖的影响,利用细胞免疫组织化学法鉴定细胞并测定细胞孕酮受体(PR)表达与激素浓度水平的相关性。结果表明,E2浓度变化(15、30、100pg/mL)对犬子宫内膜基质细胞的增殖和PR的表达均没有显著的调节作用(P>0.05);P4(15、30ng/mL)对犬子宫内膜基质细胞的增殖有显著促进作用(P<0.05),P4(3、15、30ng/mL)对犬子宫内膜基质细胞PR的表达具有显著的抑制作用(P<0.05),其影响程度与浓度和作用时间关系密切。

从异位子宫内膜分离获得的内膜干细胞的生物学特点

目的建立子宫内膜异位症(内异症)患者异位病灶来源子宫内膜干细胞(En SCs)的分离培养及鉴定方法,并对所分离细胞的生物学特性进行检测,为研究En SCs在内异症发病机制中的潜在作用提供支持。方法收集临床内异症患者异位病灶内膜组织样本,机械剪碎后Ⅰ型胶原酶消化,分离获得异位En SCs,常规培养传代(n=10);免疫荧光检测细胞波形蛋白(vimentin)的表达(n=3);MTT法检测细胞增殖活性(n=5);成脂成骨诱导检测细胞多向分化潜能(n=3),流式细胞仪检测细胞表面标志物(n=3);蛋白芯片检测细胞条件培养基中促血管再生因子及相关炎症因子的分泌(n=6),同时检测细胞表面相关黏附分子的表达(n=7)。结果成功从异位病灶中分离获得异位En SCs,所分离细胞强阳性表达骨架蛋白vimentin,且细胞阳性表达间充质干细胞表面标志物CD29、CD73、CD90及CD105,阴性表达造血干细胞表面标志物CD34和CD45;经成脂诱导分化后油红O染色可见明显脂滴,成骨诱导分化后茜素红染色可见明显钙结节;蛋白芯片检测结果表明,异位En SCs能够分泌高浓度的促血管再生因子血管内皮生长因子(VEGF)、血管紧张素(ANG)及血小板衍生生长因子(PDGF)-AA,以及与促血管再生密切相关的炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-8和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1),且细胞表面高表达活化白细胞黏附分子(ACLAM)和细胞间黏附分子-1(ICAM-1)。结论本研究成功建立内异症患者异位病灶来源En SCs的分离培养及鉴定方法;对其活性因子分泌的研究表明,异位En SCs具有明显的促血管再生作用。上述实验结果肯定了内异症患者异位病灶中干细胞的存在,在支持内异症发病机制中"干细胞学说"的同时,为进一步围绕异位En SCs开发潜在的内异症治疗靶点提供可能。

TGF-β1体外诱导兔子宫内膜上皮细胞EMT模型

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对兔子宫内膜上皮细胞的影响,以建立子宫内膜上皮细胞上皮间质转化(EMT)模型。方法分离培养新西兰大白兔子宫内膜上皮细胞,采用不同浓度(0、10、60、110μg/L)的TGF-β1诱导24 h和48 h,筛选TGF-β1最适诱导浓度和时间,建立EMT模型。观察细胞形态变化,分别采用CCK-8检测细胞的增殖抑制,Western blot及免疫组化检测波形蛋白(VIM)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达变化。结果 60μg/L TGF-β1诱导细胞24 h能明显抑制兔子宫内膜上皮细胞的增殖作用,改变细胞形态,降低细胞密度使其向间质样形态发展,并下调E-cadherin蛋白和上调VIM蛋白的表达。结论 60μg/L TGF-β1诱导细胞24 h,能成功建立兔子宫内膜EMT模型。

经血源性子宫内膜干细胞治疗宫腔粘连的研究进展

宫腔粘连也被称为Asherman综合征,是涉及医源性宫腔手术的子宫内膜损伤的结果。严重的宫腔粘连可能损伤子宫内膜的基底层,影响子宫内膜上皮细胞和损伤血管的再生,从而导致子宫内膜修复障碍。由于机制不清,大大限制了宫腔粘连治疗的发展。近年来,干细胞治疗在组织再生和重建中显示出良好的前景。而经血源性子宫内膜干细胞在子宫内膜再生中展现了区别于其他类型干细胞的独特优势。基于经血源性子宫内膜干细胞的宫腔粘连治疗策略可能是解决宫腔粘连问题的关键,具有广阔的应用前景。

输卵管通液术与子宫内膜异位症和盆腔感染关系

目的 :探讨输卵管通液术可能出现的不良影响。方法 :直视下行输卵管通液术 ,收集输卵管流出液作巴氏染色、需氧菌及厌氧菌培养 ,进行宫内膜细胞及细菌学的检查。结果 :检出宫内膜细胞 6 0 6 7% (6 3/ 10 4) ,对月经周期中不同时间通液进行比较 ,发现各时间段宫内膜细胞的检出率之间差异无显著性意义。检出细菌31 73% (33/ 10 4) ,但 2 7例需氧菌及厌氧菌培养均为阴性。结论 :通液术将宫内膜细胞带入盆腔可能是造成子宫内膜异位症的原因 。

输卵管通液术与子宫内膜异位症的关系

目的：探讨输卵管通液术与子宫内膜异位症的关系。方法：直视下对１０４例输卵管性不孕患者行输卵管通液术，收集输卵管流出液作巴氏染色进行宫内膜细胞的检查。结果：发现子宫内膜异位症２９例（２７．８８％）；检出宫内膜细胞６０．６７％（６３／１０４），对月经周期中不同时间通液进行比较，发现各时间段宫内膜细胞的检出率之间差异无显著性意义（Ｐ＞Ｏ．０５）。结论：通液术将宫内膜细胞带入盆腔可能是造成子官内膜异位症的原因，但不同时间通水宫内膜细胞的检出无显著差异。