纳米铜/聚合物复合材料宫内节育器对猕猴宫腔液t-PA、PAF、PGE_2水平的影响

目的:探讨纳米铜/聚合物复合材料宫内节育器(IUD)对置器后子宫出血、疼痛的影响。方法:选择具规律月经周期且有生育史的育龄猕猴30只,分为空白对照组、裸铜组、生物材料组、低剂量纳米铜组(10μg/220mm2)、高剂量纳米铜组(20μg/220mm2),每组6只。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组置器后子宫宫腔冲洗液中t-PA、PAF、PGE2水平。结果:①与空白组相比,裸铜组宫腔冲洗液中t-PA及PGE2水平显著升高;②与裸铜组相比,纳米铜组t-PA及PGE2水平均显著降低;③除裸铜组PAF显著高于空白组外,其他各组间PAF水平无明显差异。结论:纳米铜IUD可减少对子宫t-PA和PGE2水平的影响,因而可能减轻置入IUD引起的子宫异常出血、疼痛副反应。

含铜宫内节育器铜丝和+铜套在模拟宫腔液中的腐蚀

背景:含铜宫内节育器有较好的避孕效果是铜在宫腔内腐蚀而释放出铜离子的结果,因而铜的腐蚀行为直接关系到含铜宫内节育器能否安全、有效、长期使用。目的:观察宫内节育器铜管与铜丝在模拟宫腔液中浸泡后的腐蚀形貌。设计、时间及地点:体外观察实验,于2008-10/12在中国药品生物制品检定所与北京科技大学电镜室完成。材料:实验使用天津医疗器械厂生产的健美牌宫内节育器,型号为TCu380A和TCu220C。方法:分别将相同表面积的含铜宫内节育器铜丝及铜套浸在模拟宫腔液中,定期换液。取未浸泡前,浸泡10,30,60d的样品,用扫描电镜观察表面形貌。主要观察指标:样品表面形貌。结果:未浸泡铜丝上有拉痕,腐蚀反应的产物沉积在铜丝表面,从而TCu380A开始浸泡阶段暴释效应明显;而铜套的腐蚀过程出现许多蚀坑,蚀坑刚出现时,增大铜表面积,随后腐蚀反应的产物沉积在表面,从而TCu220C的铜离子的释放速率开始时增加,后期下降。结论:含铜宫内节育器的铜套与铜丝浸泡在模拟宫腔液中的初期,腐蚀形貌存在明显差异。铜丝表面为均一的、密集的小的蚀坑,而铜套表面为分布不规则的大的蚀坑。

Cu-Zn-Al形状记忆合金在模拟宫腔液中的腐蚀行为

采用化学失重法、电化学方法和原子吸收光谱法研究了紫铜、Cu Zn Al形状记忆合金和Cu Zn Al合金在模拟宫腔液中的腐蚀行为。结果表明,模拟宫腔液中紫铜、Cu Zn Al形状记忆合金和Cu Zn Al合金的腐蚀历程受阴极氧去极化步骤控制。Cu Zn Al形状记忆合金和Cu Zn Al合金由于铝的表面离子化倾向比锌的大,优先形成致密坚固的保护性氧化铝膜,降低了腐蚀速率。在模拟宫腔液中发现Cu Zn Al形状记忆合金和Cu Zn Al合金发生脱铝腐蚀,Cl-参与腐蚀反应历程,促进脱铝腐蚀的进行。白蛋白与氧的竞争吸附加速了阳极溶解,使紫铜、Cu Zn Al形状记忆合金和Cu Zn Al合金的阳极活性电流密度随白蛋白浓度的上升而增加。

模拟宫腔液对加成型液体硅橡胶性能的影响

采用模拟宫腔液对加成型液体硅橡胶硫化胶进行浸泡处理,通过全反射傅里叶红外光谱分析、表面接触角和热重分析对模拟宫腔液浸泡前后的硫化胶进行表征,研究模拟宫腔液的浓度和浸泡时间对硫化胶性能的影响。结果表明,随着浸泡时间的延长和模拟宫腔液浓度的增大,硫化胶的拉伸强度、断裂伸长率和撕裂强度有所下降,硬度基本不变;但即使经过3倍标准浓度模拟宫腔液90℃下浸泡12天后,硫化胶的拉伸强度、断裂伸长率、撕裂强度的降低幅度均低于10%,而且硫化胶的化学性质稳定,亲水性提高,热稳定性良好。因此,加成型液体硅橡胶是制作宫内节育器的理想材料。

不同粒径铜颗粒在模拟宫腔液中的电化学腐蚀行为

采用极化曲线、循环伏安曲线和电化学阻抗谱等研究了微米铜、亚微米铜和纳米铜粉体制备的试样在模拟宫腔液中的电化学腐蚀行为。结果表明:在模拟宫腔液中,纳米铜试样最易被腐蚀,亚微米铜试样次之,微米铜试样最难被腐蚀;纳米铜试样的腐蚀速率介于亚微米铜和微米铜试样之间,这是因为在模拟宫腔液中,纳米铜表面生成了较多的腐蚀产物膜,从而导致其腐蚀速率降低;纳米铜试样的Warburg阻抗最小,其腐蚀过程由动力学因素控制,微米铜试样的Warburg阻抗最大,其腐蚀过程主要由扩散过程控制;选用纳米铜作为制作宫内节育器的材料更有利于铜离子扩散进入模拟宫腔液中,有助于延长宫内节育器的使用寿命。

血清白蛋白对模拟宫腔液中铜腐蚀的影响

为研究含铜宫内节育器 (CuIUD)的铜离子释放行为 ,在体外试验条件下考察了模拟宫腔液中添加生化组份人血清白蛋白对铜腐蚀行为的影响。极化电阻测试的结果表明 ,在所研究的pH和氧分压范围内 ,白蛋白总是使铜的腐蚀速度相对于无白蛋白的情况有所增大。同时发现 ,中性条件下 (pH =7)当白蛋白的浓度较小时 (<1g/L) ,铜的腐蚀速度随白蛋白浓度的增大而增大 ;当白蛋白浓度较大 (>1g/L)时 ,铜的腐蚀速度随白蛋白浓度的增大反而有所减小并趋于一稳定值。腐蚀试验后铜试样表面XRD分析和表面膜阴极还原等试验结果显示 ,在中性条件下 (pH =7) ,白蛋白浓度较小 (<1g/L)时 ,铜表面上有明显数量的Cu2 O生成 ,当其浓度较大(>1g/L)时几乎没有Cu2 O生成。白蛋白的存在促进了铜腐蚀的阳极过程。

模拟宫腔液中蛋白质对铜腐蚀的影响

为研究宫腔液中的生化组份对含铜宫内节育器 (Cu IUD)中铜离子释放行为的影响 ,在体外模拟试验条件下考察了人血液中的三种蛋白质 (白蛋白、丙球蛋白、血红蛋白 )对铜腐蚀行为的影响。极化电阻测试的结果表明 ,有蛋白质存在时总是使铜的腐蚀速度增大 ,但不同蛋白质的影响规律不同。白蛋白的浓度较小 (<1 g/ L)时 ,铜的腐蚀速度随白蛋白浓度的增大而增大 ;当白蛋白浓度较大 (>1 g/ L )时 ,增大浓度使铜的腐蚀速度反而有所减小并趋于一稳定值。而同样的测试表明 ,铜的腐蚀速度总是随丙球蛋白或血红蛋白浓度的增大而增大。这三种蛋白质都使铜在模拟宫腔液中的自腐蚀电位负移 ,说明蛋白质通过加速铜的阳极溶解过程而促进了铜在模拟宫腔液中的腐蚀。

利用电化学阻抗谱研究铜颗粒尺寸对铜/低密度聚乙烯复合材料在模拟宫腔液中腐蚀的影响

用电化学阻抗谱技术(electrochemical impedance spectroscopy,EIS),研究了铜/低密度聚乙烯(Cu/LDPE)复合材料在模拟宫腔液中的腐蚀行为,根据EIS特征建立等效电路模型并进行数据拟合分析,获得了复合材料及其表层对应的界面电化学信息参数,如双电层电容、电荷转移电阻、Warburg阻抗等,通过比较两种材料表层状态随时间的变化,探讨了复合材料中铜颗粒尺寸对复合材料腐蚀的影响。结果表明,纳米复合材料比微米复合材料的腐蚀速率低,且材料表层不易沉积腐蚀产物,更适合作为新型宫内节育器材料。

模拟宫腔液体积对Cu/LDPE多孔复合材料节育器的铜离子释放速率的影响

采用溶液分析法测定含铜宫内节育器(Cu-IUDs)的Cu2+释放速率时,所使用的模拟宫腔液(SUS)的体积远远大于人体宫腔液的实际体积,因此推算IUDs在体内宫腔液中的Cu2+释放速率时需要考虑SUS体积的影响。作者制备了两种不同孔隙度的Cu/LDPE多孔复合材料IUDs,测定了它们在不同体积SUS中的Cu2+释放速率,探讨了SUS体积对Cu2+释放速率的影响规律,并拟合出了释放初期和释放稳定期SUS体积与SUS中Cu2+浓度之间的关系式。结果发现,在释放初期,SUS体积对Cu2+释放速率影响不大;而在释放稳定期,SUS体积对Cu2+释放速率影响很大,SUS体积越大,Cu2+释放速率越快。

含吲哚美辛硅橡胶宫内节育器中吲哚美辛的载药量及在模拟宫腔液中的释放研究

目的测定含吲哚美辛硅橡胶宫内节育器中吲哚美辛的载药量及其在模拟宫腔液中的释放量。方法采用高效液相色谱（HPLC）法,色谱柱为SB-C18柱（150 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为0.1 mol/L冰醋酸-乙腈（1∶1）,流速为1.0 m L/min,检测波长为228 nm,检测温度为37℃。结果吲哚美辛载药量均在标示量的±10%范围内;吲哚美辛在模拟宫腔液中的释放速率起初较快,3～14 d后逐渐递减,最后基本趋于缓慢、平稳释放,且在同一数量级（20～85μg/d）。结论 HPLC法用于测定含吲哚美辛硅橡胶中吲哚美辛的载药量及其在模拟宫腔液中的释放量,测定结果准确、可靠,可满足相关产品的质量检测与控制。

不同含铜宫内节育器在模拟宫腔液中的铜离子释放研究

目的测定不同含铜宫内节育器在模拟宫腔液中的铜离子释放,进而拟合出铜离子的释放方程。方法采用火焰原子吸收法测定铜,并对测定方法进行了方法学考察。利用Excel趋势回归分析预测铜离子的释放。结果 TCu220C-IUD的时间与铜离子释放呈指数函数回归关系,其他宫内节育器的时间与铜离子释放呈幂函数回归关系。铜离子释放量的变化受观测值的变化影响所占比例为94.21%～98.07%。结论运用火焰原子吸收法及Excel回归分析可得出各种含铜宫内节育器的铜离子的释放。TCu380A-IUD的铜离子的暴释现象最严重。

柴胡止血液对置含铜IUD家兔宫腔液PGI_2和TXB_2含量的影响

为探讨柴胡止血液治疗宫内节育器所致子宫异常出血的作用机理,采用放射免疫法对照观察了柴胡止血液对置含铜宫内节育器(TCuIUD)家兔子宫宫腔冲洗液前列环素(PGF_(1α))和血栓素(TXB_2)含量的影响。结果表明置 TCuIUD后家兔子宫宫腔液中PGF_(1α)含量较未置器对照组明显增高(P<0.01),而TXB_2含量则明显降低(P<0.01),PGF_(1α)/TXB_2比值亦显著高于对照组(P<0.01);经柴胡止血液治疗后,家兔子宫宫腔冲洗液中PGF_(1α)含量与置器对照组比较明显降低(P<0.01),TXB_2含量则明显升高(P<0.01),PGF_(1α)/TXB_2比值亦趋于正常(与置器组比较,P<0.01;与对照组比较,P>0.05)。提示柴胡止血液对置TCuIUD家兔宫腔液的前列环素含量具有较强的调整作用,能使明显升高的PGF_(1α)及明显降低的TXB_2恢复正常,从对抗前列环素的角度阐明了柴胡止血液具有治疗IUD所致子宫出血的作用。

记忆合金硅胶宫内缓释系统与曼月乐在模拟宫腔液中左炔诺孕酮释放量对比观察

目的比较记忆合金硅胶宫内缓释系统(Memory Alloy Silicone Intrauterine System,MAS-IUS)模型与曼月乐在模拟宫腔液中左炔诺孕酮(LNG)的释放量。方法取MAS-IUS(模型1、2、3)和曼月乐,每组4个样本,放入聚丙烯管中,加入7.5 mL模拟宫腔液(37.0±0.1)℃温箱孵育,每天取模拟宫腔液5 mL,将样品充分洗涤后再次放入聚丙烯管,加入7.5 mL模拟宫腔液,连续取样30 d采用高效液相串联质谱法检测各模型样本模拟宫腔液中LNG释放量。结果与曼月乐比较,模型1的4个样品在模拟宫腔液中LNG释放量小(P均<0.05),模型2的4个样品在模拟宫腔液中LNG释放量高(P均<0.05),模型3中样品1、4在模拟宫腔液中LNG释放量低(P均<0.05)。结论模型3在模拟宫腔液中LNG的释放情况与曼月乐类似。

人血清白蛋白对模拟宫腔液中铜的光电响应特性的影响

用动电位伏安法、动电位光电流测量、表面膜的阴极还原和XRD分析等手段研究了铜在含或不含人血清白蛋白的模拟宫腔液 (pH =7)中的电化学和光电化学行为。在不含白蛋白的模拟宫腔液中 ,铜电极表面生成的Cu2 O呈n型光响应 ;一定量白蛋白存在时使Cu2 O的光响应从n型转为 p型。Cu2 O在模拟宫腔液中呈n型光响应可归因于氯离子对Cu2 O的掺杂 ;白蛋白排斥氯离子对Cu2 O的掺杂 ,使其光响应从n型转为

胚胎移植前宫腔液外泌体提取及其对妊娠结局的影响分析

目的探讨胚胎移植前宫腔液中是否存在外泌体以及在胚胎移植前抽吸宫腔液是否影响妊娠结局。方法选取2019年4月至2020年1月在北京大学人民医院接受IVF/ICSI并新鲜胚胎移植的79例妇女作为研究对象(研究组),研究组在胚胎移植前抽吸宫腔液然后进行胚胎移植,利用超速离心法提取所收集宫腔液中的外泌体并验证。按照年龄及获卵数1∶2的配比进行匹配,获得同期行IVF/ICSI-ET助孕的158例患者作为对照组,对照组患者不抽吸宫腔液,直接进行胚胎移植。比较两组患者的妊娠结局并探讨移植前抽吸宫腔液是否影响妊娠结局。结果研究组宫腔液中分离并提取出外泌体,经透射电镜下观察到外泌体为有完整包膜的圆形或椭圆形结构,Western Blot方法检测外泌体标志物ALIX、TSG101和CD81均呈阳性表达。比较两组的妊娠结局,研究组的胚胎着床率(36.6%vs.34.4%)、临床妊娠率(55.7%vs.47.5%)、持续妊娠率(46.8%vs.42.4%)略高于对照组,但均无显著性差异(P>0.05)。经多因素Logistic回归分析显示提取宫腔液不影响妊娠结局,仅黄体期长方案为影响持续妊娠率的独立因素,与持续妊娠率呈正相关[OR=2.783,95%CI(1.046,7.408),P=0.040]。结论体外受精-胚胎移植患者胚胎移植前抽吸宫腔液不会对妊娠结局造成负面影响,且宫腔液中可以检测到外泌体;宫腔液抽吸作为一种无创检查,为胚胎着床失败原因的分析提供了一种新的方法。

PVA缩甲醛吸水海绵在无创宫腔液取样和RNA检测中的安全性与可行性

目的:宫腔液RNA可用作检测子宫内膜容受性,但目前仍没有无创取样方法。聚乙烯醇(polyvinyl alcohol,PVA)缩甲醛吸水海绵作为一种医用生物吸水海绵,具有良好的吸水性和亲生物性,可用于开发新型无创宫腔液取样器。本研究旨在探讨PVA缩甲醛吸水海绵对子宫内膜上皮细胞的毒性及对宫腔液RNA测序(RNA sequencing,RNA-Seq)的影响。方法:使用PVA缩甲醛吸水海绵的细胞为实验组,包括0.005%、0.01%及0.02%(w/v)的悬液组以及0.01%、0.05%及0.1%(v/v)的浸提液组,对照组仅添加完全培养基,空白组无添加。采用体外细胞毒性实验测量每组细胞的存活率。招募2019年11月至2020年1月在中南大学湘雅医院生殖医学中心进行体外受精术的8例患者,采集患者的宫腔液,实验组将宫腔液用无菌PVA缩甲醛吸水海绵吸入后再置入RNA-later保存液中,对照组直接放入等量RNA-later保存液中,随后进行RNA-Seq及数据分析。结果:体外细胞毒性实验结果显示:0.005%浓度悬液组各培养时间的细胞存活率差异无统计学意义(P=0.255);0.01%和0.02%浓度悬液组在12 h内各培养时间的细胞存活率差异无统计学意义(均P>0.05),24 h与0 h相比细胞存活率下降(分别P<0.01,P<0.05)。在同一培养时间下,3个浓度梯度的悬液组细胞存活率均比对照组低(均P<0.05),其中0.005%浓度悬液组培养至24 h时细胞存活率下降幅度小于30%,0.01%浓度悬液组在12 h时细胞存活率下降幅度大于30%,0.02%浓度悬液组在0 h时下降幅度大于30%。0.01%浓度浸提液组在6 h内各培养时间的细胞存活率差异无统计学意义(均P>0.05),12 h、24 h与0 h组相比细胞存活率下降(均P<0.01);0.05%浓度浸提液组在12 h内各培养时间的细胞存活率差异无统计学意义(均P>0.05),24 h与0 h相比存活率下降(P<0.05);0.1%浓度浸提液组中各培养时间的细胞存活率差异无统计学意义(P=0.082)。在同一培养时间下,0.01%浓度浸提液组在0,3及24 h与对照组细胞存活率的差异均无统计学意义(均P>0.05);除了3 h之外,0.05%组与0.1%组的细胞存活率均较对照组下降(均P<0.05),下降幅度均小于30%。宫腔液RNA-Seq结果显示:实验组与对照组RNA的外显子率、基因检测数量、转录本检测数量差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:PVA缩甲醛吸水海绵对人子宫内膜上皮细胞的毒性作用符合国家要求的医用材料细胞毒性标准,用其进行宫腔液取样行RNASeq,不影响测序结果,表明PVA缩甲醛吸水海绵应用于无创宫腔液取样及RNA检测安全可行。

两种试剂盒提取大鼠容受期少量宫腔液胞外囊泡的比较

容受期宫腔液对于胚胎建立早期妊娠起着关键作用,宫腔液内含的胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)可能是子宫内膜与胚胎之间交流的新模式。目前为止,仍然没有一种提取方法能同时保证EVs的含量、纯度和生物活性。传统的超速梯度离心法对设备和样本量要求高,耗时长,因此寻求在少量样本中高效提取高纯度EVs的新方法十分重要。本研究对同一份大鼠容受期宫腔液样本分别采取PEG沉淀和亲和膜离心柱两款试剂盒进行EVs提取,使用透射电镜、Western-blot和动态光散射进行形态、表面蛋白质和粒径分布的鉴定,并对其内容物RNA进行了浓度和片段分布比较。结果显示,两种试剂盒都可以成功从少量的宫腔液样本中分离得到EVs,且效率较传统离心法大大提高,但均无法完全区分其亚群;亲和膜离心柱提取法得到的EVs浓度更高,RNA片段集中在20~40 nt,对于开展后续mi RNA建库测序分析具有更好效果。

MAS-IUS 优化品的制备及在模拟宫腔液中LNG释放规律的实验研究

目的探索新型“记忆合金硅胶宫内缓释系统”(Memory alloy silicone intrauterine system,MAS-IUS)优化品在模拟宫腔液中左炔诺孕酮(Levonorgestrel,LNG)的释放规律,以期为MAS-IUS持续改进提供实验数据。方法以纳米铜硅胶膜厚度为1 mm、膜中铜离子浓度为3.0 g/L为制环参数,按IUS标准化生产工艺流程制备出新型MAS-IUS优化品,将其随机分为两组,实验组加入模拟宫腔液,对照组加入生理盐水,分别将样品置于37℃恒温水浴箱中,用超高效液相-串联质谱系统(每24小时)测量两组样品中LNG的释放量。结果MAS-IUS优化品在模拟宫腔液及生理盐水中LNG释放量不同时间点均有显著差异(P<0.001),相邻时间点LNG释放量具有差异性(P<0.05);用分段线性回归法探究15 d前及15 d后LNG释放规律,结果显示:生理盐水组及模拟宫腔组15d前LNG的释放量均随时间延长显著下降(P<0.01),生理盐水组15 d前释放模型公式为:LR(μg/24 h)=2.550-0.058×T;模拟宫腔液组15 d前释放模型公式为:LR(μg/24 h)=3.359-0.083×T;生理盐水组及模拟宫腔液组15 d后LNG的释放量随时间延长均无明显变化(P>0.05),生理盐水组5 d前平均释放量为1.900±0.110(μg/24 h),模拟宫腔液组15 d后LNG平均释放量为2.440±0.110(μg/24 h)。将两组LNG平均释放量进行差异性比较,具有显著性差异(P<0.05),且模拟宫腔液组LNG平均释放量(2.560μg/24 h)高于生理盐水组(1.990μg/24 h)。结论MAS-IUS优化品在模拟宫腔液中15 d前LNG的释放量随时间延长逐渐下降,15 d后LNG释放量基本恒定,平均释放量为2.440±0.110(μg/24 h),符合零级释放规律。