黄芪注射液干预人宫颈永生化上皮细胞体外实验模型的细胞凋亡变化

背景:宫颈永生化上皮细胞H8在致癌因素诱导下可以发生癌变,当有协同因子共同作用时就会导致宫颈癌的发生。但临床上对于癌前病变的女性尚缺乏有效的干预治疗,此项治疗临床为空白。目的:分析黄芪注射液对人宫颈永生化上皮细胞(H8细胞)凋亡的作用及机制。方法:实验分2组,黄芪注射液药物组和空白对照组。1ELISA法检测黄芪注射液作用后人宫颈永生化上皮细胞H8凋亡的DNA片断。2酶标仪分析黄芪注射液作用后人宫颈永生化上皮细胞H8中凋亡酶caspase-3、caspase-9酶活性的变化。3Western blot检测黄芪注射液作用后,人宫颈永生化上皮细胞H8中caspase-3、caspase-9、PARP蛋白表达的变化。结果与结论:1ELISA法检测,20 g/L黄芪注射液分别作用0,6,12,24 h后,人宫颈永生化上皮细胞H8DNA片段随着药物作用时间的延长逐渐增多,且呈时间依赖性(P<0.05)。2酶标仪检测,20 g/L黄芪注射液作用0,6,12,24 h后,人宫颈永生化上皮细胞H8 caspase-3和caspase-9的活性增高,且呈时间依赖性(P<0.05)。320 g/L黄芪注射液分别作用0,6,12和24 h后,人宫颈永生化上皮细胞H8中cleaved caspase-3、cleaved caspase-9表达逐渐升高,差异有显著性意义(P<0.05);Cleaved PARP蛋白的表达逐渐下降,差异有显著性意义(P<0.05)。结果说明,黄芪注射液对人宫颈永生化上皮细胞H8具有较显著的诱导凋亡作用,其机制可能与上调caspase-3和caspase-9蛋白表达有关。

疣毒净通过MAPK信号通路对H8细胞增殖的影响

目的探讨疣毒净制剂影响宫颈上皮永生化细胞H8细胞增殖作用的可能机制。方法以转染HPV16基因后稳定传代的宫颈上皮永生化细胞H8细胞为研究对象;经0.5、1、2、4、8 g·L-1疣毒净作用于H8细胞,MTT法检测细胞增殖抑制效果;EdU细胞增殖检测法测定各实验组H8细胞增殖变化;流式细胞术检测各实验组H8细胞的周期情况;Western Blot法检测各实验组H8细胞MEK和ERK蛋白表达情况。结果与空白组相比,疣毒净药物干预24、48、72 h后,细胞生长力明显下降(P<0.05),抑制细胞生长率明显增加(P<0.05);EdU免疫荧光染色结果显示,疣毒净组EdU增殖细胞阳性率显著下降(P<0.05);与空白组相比,疣毒净各浓度组H8细胞的周期中,药物将细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05);与空白组相比,疣毒净组MEK蛋白明显下调(P<0.05)和ERK蛋白明显下调(P<0.05),呈浓度下调趋势,二者下调的趋势一致。结论疣毒净能明显抑制宫颈永生化上皮细胞H8细胞的增殖,这一影响可能是通过MAPK信号通路起作用的。

结核分支杆菌培养上清诱导呼吸道上皮细胞IL-8表达

目的 :观察呼吸道上皮细胞对结核杆菌产物产生的炎症反应 ,探讨炎症反应信号传递的机制。方法 :制备结核分枝杆菌强毒力H37RV株培养上清 ,用培养上清刺激肺上皮细胞株SPC A 1和A5 49,酶联免疫吸附实验检测细胞IL 8表达量。用突变MyD88表达重组质粒转染SPC A 1细胞 ,观察MyD88与结核杆菌培养上清诱导上皮细胞炎症反应信号传递的关系。结果 :结核分枝杆菌强毒力H37RV株培养上清明显增加SPC A 1和A5 49细胞IL 8的表达。用突变MyD88表达重组质粒 pcDNA3 .1 mMyD88转染SPC A 1 ,结果显著抑制了结核杆菌培养上清对SPC A 1细胞的炎症刺激作用。结论 :结核杆菌培养上清能够诱导呼吸道上皮细胞IL 8表达 ,Toll/IL 1受体信号通路及MyD88分子与细胞炎症反应的信号传递相关 ,提示在肺结核病发病过程中 ,结核杆菌的代谢产物可能刺激肺上皮细胞产生炎症细胞因子 。

肺炎克雷伯杆菌分泌因子及活菌诱导人肺上皮细胞表达分泌IL-8的研究

目的 :探讨肺炎克雷伯杆菌 (Klebsiellapneumoniae ,Kp)分泌因子及活菌诱导肺上皮细胞株表达和分泌IL 8的状况。方法 :用临床分离株Kp0 3 1 1 6、Kp0 3 1 83的细菌培养上清或活菌刺激肺上皮细胞株A5 49和SPC A 1 ,酶联免疫吸附实验 (ELISA)检测细胞IL 8表达量。结果 :①两株Kp培养上清分别刺激A5 49或SPC A 1后 ,IL 8表达量均有显著增高 (P <0 .0 1 ) ,且随上清刺激浓度增加而上升。②两株Kp及DH5 (活菌分别与SPC A 1共孵育 2h ,用庆大霉素杀死胞外菌 ,继续孵育 2 4h后两株Kp诱导细胞IL 8表达量均显著高于DH5α(P <0 .0 1 ) ,且随细菌数 /细胞数比例增大而上升。结论 :Kp分泌因子及活菌都能够诱导肺上皮细胞IL 8表达 ,而活菌上调IL 8的效应较培育上清分泌因子更显著 ,提示肺上皮细胞在Kp感染刺激的肺部炎症反应中起重要作用。

长链非编码RNA FAL1对宫颈癌Hela细胞增殖、侵袭与迁移的影响

目的:探索人宫颈癌细胞Hela与正常人宫颈永生化上皮细胞H8中长链非编码RNA FAL1分子的表达差异及沉默人宫颈癌细胞Hela中FAL1的表达对人宫颈癌细胞Hela增殖、侵袭和迁移的影响。方法:利用qRT-PCR技术检测细胞中FAL1基因表达水平;设计并合成FAL1的siRNA片段(FAL1-siRNA)转染宫颈癌Hela细胞,qRT-PCR技术检测其沉默效率;MTT检测人宫颈癌细胞Hela增殖;Transwell实验检测人宫颈癌细胞Hela的侵袭、迁移能力的变化。结果:长链非编码RNA FAL1在人宫颈癌细胞Hela中的表达明显高于正常人宫颈永生化上皮细胞H8中的表达,FAL1-siRNA下调了Hela细胞中FAL1的表达,并抑制了宫颈癌细胞Hela的增殖和侵袭迁移能力。结论:FAL1-siRNA能够下调Hela细胞FAL1的表达,进而抑制人宫颈癌细胞Hela的增殖及其侵袭迁移能力,提示长链非编码RNA FAL1在宫颈癌中是一种癌基因,FAL1的表达异常增高可能是宫颈癌发生发展的重要分子机制。

单磷酸阿糖腺苷对HPV16感染永生化宫颈上皮细胞株H8生物学影响

目的探讨单磷酸阿糖腺苷对HPV16感染永生化宫颈上皮细胞株H8增殖、凋亡及侵袭的影响。方法分别以0、20、40、60、80μg/mL浓度单磷酸阿糖腺苷处理体外培养HPV16感染永生化宫颈上皮细胞株H8,CKK-8法分别在12、24、48、72 h检测H8细胞增殖情况,筛选合适药物浓度及作用时间;将体外培养HPV16感染的H8细胞随机分为三组:对照组、单磷酸阿糖腺苷组及顺铂组,以CCK-8法检测细胞活力;以流式细胞技术检测细胞凋亡率;以Transwell侵袭实验和细胞划痕实验检测单磷酸阿糖腺苷对H8细胞侵袭能力的影响;以免疫印记法检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤因子相关X蛋白(Bax)及侵袭相关蛋白E-cadherin、Vimentin的表达。结果选择60μg/mL的单磷酸阿糖腺苷处理H8细胞48 h来进行H8细胞增殖、凋亡研究,选择单磷酸阿糖腺苷处理H8细胞12 h后检测细胞侵袭转移力。与对照组比较,单磷酸阿糖腺苷组与顺铂组H8细胞活力、H8细胞数目、侵袭能力、Bcl-2、Vimentin表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05),凋亡率、E-cadherin及Bax表达显著增加,差异有统计学意义(P<0.05);单磷酸阿糖腺苷组和顺铂组相比,各指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论单磷酸阿糖腺苷能抑制HPV16感染永生化宫颈上皮细胞H8增殖及侵袭转移能力,促进其凋亡。

Ghrelin抑制H_2O_2诱导的肺泡上皮A549细胞中IL-8的产生

目的:通过细胞培养的方法,初步研究了生长激素释放肽Ghrelin在氧化应激相关的肺泡上皮细胞炎症反应中的作用。方法:首先是用双氧水(H2O2)刺激A549细胞建立肺泡上皮细胞炎症反应模型,分别加入不同浓度的Ghrelin及普通培养基培养A549细胞,用酶联免疫吸附技术(ELISA)从蛋白水平检测上清液中IL-8的含量,采用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测炎性细胞因子IL-8mRNA的表达。结果:H2O2可以使A549细胞IL-8蛋白的释放及IL-8mRNA的表达明显升高(P<0.05),而用Ghrelin干预后IL-8的释放及IL-8mRNA的表达被抑制,明显低于单纯H2O2刺激的模型组(P<0.05),且随着浓度的增加Ghrelin的这种抑制作用逐渐增强。结论:分别从蛋白水平和基因水平证明了Ghrelin能够抑制H2O2诱导的肺泡上皮A549细胞中IL-8的产生,由此推测Ghrelin可能能够抑制以COPD、支气管哮喘为代表的氧化应激相关的肺部炎症反应。

红霉素对过氧化氢刺激的支气管上皮细胞表达白细胞介素-8与谷胱甘肽的影响

目的探讨红霉素对过氧化氢(H2O2)诱导的支气管上皮细胞表达炎症介质白细胞介素8(IL8)及抗氧化剂谷胱甘肽(GSH)的影响和可能的作用机制。方法培养16HBE株的人支气管上皮细胞,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察过氧化氢及红霉素对细胞生长的影响。将传代后的细胞按24、36、48h3个时间段分组,每个组再分为对照组、H2O2组、红霉素+H2O2组。通过酶联免疫吸附实验检测细胞上清中IL8的浓度;通过凝胶迁移率阻滞实验(EMSA)来检测转录因子核因子κB(NFκB)和激活蛋白1(AP1)的活性;通过酶联免疫检测仪检测细胞内GSH、谷氨酰半胱氨酸合成酶(γGCS)的含量;应用Western印迹检测谷氨酰半胱氨酸合成酶重链亚单位(γGCSHS)蛋白表达。结果红霉素(5μg/ml)预孵育36、48h后可以抑制H2O2(0.01mmol/L)诱导的HBE上清中IL8的含量;红霉素(5μg/ml)预孵育36、48h后可以下调H2O2(0.01mmol/L)诱导的支气管上皮细胞转录因子NFkB、AP1的活性;红霉素(5μg/ml)预孵育48h抑制H2O2(0.01mmol/L)诱导的HBE细胞GSH和γGCS的含量(3.46±0.41)以及γGCSHS蛋白表达、γGCSHS启动子区域AP1转录活性。结论红霉素通过下调NFκB、AP1的活性而抑制H2O2诱导的炎症介质IL8的释放,进而影响GSH及γGCS的合成调控。

疣毒净诱导H8细胞凋亡作用机制

目的:观察疣毒净制剂对人宫颈永生化细胞H8细胞增殖和凋亡的影响,探讨其可能的作用机制。方法:以转染HPV16基因后稳定传代的人宫颈永生化细胞株H8细胞为研究对象;经1,2,3,4,5 g·L^(-1)疣毒净干预H8细胞24,48,72 h,同时设立空白组,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖抑制作用;荧光显微镜下观察1,2,3,4,5 g·L^(-1)疣毒净干预24 h后,经Hoechst 33342染色的细胞凋亡情况;流式细胞仪检测1,2,3,4,5 g·L^(-1)疣毒净干预24 h后,经Annexin V/碘化丙啶(PI)双染后细胞早期凋亡率;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测1,2,3,4,5 g·L^(-1)疣毒净干预24 h后H8细胞半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)蛋白表达情况。结果:与空白组比较,2,3,4,5 g·L^(-1)疣毒净对H8细胞的生长抑制呈明显的浓度-时间依赖效应(P<0.05);经Hoechst 33342染色后,荧光显微镜下可见1,2,3,4,5 g·L^(-1)疣毒净给药后细胞均出现明显的核染色质浓缩,3,4,5 g·L^(-1)疣毒净干预下圆形亮蓝色凋亡小体逐渐增多;流式细胞仪检测到1,2,3 g·L^(-1)疣毒净干预24 h后细胞的早期凋亡率分别为(23.73±5.72)%,(63.9±3.59)%,(71.53±1.59)%,与空白组(6.53±0.85)%比较早期凋亡率显著升高(P<0.01);与空白组比较,疣毒净组凋亡执行蛋白Caspase-3及其底物PARP蛋白均明显下调(P<0.05),呈浓度下调趋势,二者下调的趋势一致。结论:疣毒净能明显抑制宫颈永生化细胞H8细胞增殖,诱导早期凋亡,可能是通过激活Caspase-3-PARP途径来执行的。

加味清心莲子饮治疗阿霉素肾病综合征大鼠的实验研究

目的:探讨加味清心莲子饮对阿霉素肾病综合征大鼠的疗效及对尿蛋白、血液生化指标、炎症介质的影响。方法:利用尾静脉注射阿霉素建立大鼠肾病综合征模型,分别给予泼尼松灌胃和加味清心莲子饮灌胃,同时设置对照组、模型组。实验过程中对大鼠进行一般形态学观察,每周检测24 h蛋白尿;实验末采血分离血清,对血清中清蛋白(ALB)、总蛋白(TP)、三酰甘油(TG)、胆固醇(TC)、血尿素氮(BUN)、血清肌酐(Scr)水平进行检测;利用ELISA法对血清炎症介质白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)水平进行检测。结果:模型组的24 h尿蛋白水平与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。给药后,激素组、中药组大鼠24 h尿蛋白含量均明显降低(均P<0.01)。与对照组比较,模型组血清TG、TC、BUN、Scr水平均明显升高(均P<0.01);血清ALB、TP水平均明显降低(均P<0.01)。给药后,激素组、中药组血清TG、TC、BUN、Scr水平均降低(均P<0.01,P<0.05);血清ALB、TP水平均明显升高(均P<0.01)。与对照组比较,模型组血清IL-1β、IL-8、TNF-α、MCP-1水平均升高(均P<0.05);给药后,激素组、中药组血清IL-1β、IL-8、TNF-α、MCP-1水平均降低(均P<0.05)。结论:加味清心莲子饮能够治疗阿霉素肾病综合征,作用机制为调节炎症介质的表达,改善病理损伤,恢复肺、脾、肾脏的功能。