Ras同源基因家族成员A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶信号转导通路在膝骨性关节炎软骨组织中的表达及意义

目的:探究Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号转导通路在膝骨性关节炎软骨组织中的表达及意义。方法:将取自因原发性膝骨性关节炎(KOA)行全膝关节置换术(TKA)去除的30例患者的膝关节软骨组织设为观察组,将同期行下肢离断术去除的25例患者的膝关节软骨组织设为对照组。比较两组标本外观形态,HE染色、番红O-固绿染色、电镜扫描结果。通过免疫组织化学(IHC)染色、免疫印迹(Western blot)及实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RhoA和ROCK蛋白及mRNA的表达变化。结果:观察组股骨髁软骨表面粗糙,缺损明显,呈溃疡状,染色不均匀,潮线不完整。对照组软骨面光滑平整,组织分层明显,颜色均匀。电镜扫描结果显示,观察组软骨组织毁损严重,结构不清;对照组表面光洁,软骨间质均匀。与对照组比较,观察组关节软骨组织中RhoA、ROCK蛋白及mRNA表达量高于对照组(均P<0.05)。结论:RhoA/ROCK信号转导通路中的RhoA、ROCK蛋白及mRNA在KOA患者关节软骨组织中表达明显高于行下肢离断术患者,提示RhoA/ROCK信号转导通路与KOA软骨退变具有相关性,可能对KOA的发生与发展起到了重要作用。

沉默Ras同源物家族成员C对唾液腺腺样囊性癌增殖、侵袭和迁移的影响

目的探讨沉默Ras同源物家族成员C(RhoC)对唾液腺腺样囊性癌(SACC)增殖、凋亡、侵袭、迁移和上皮-间充质转化(EMT)的影响及其分子机制。方法选择2019年1月1日—2024年3月1日于青岛市市立医院手术切除的SACC病灶和正常唾液腺组织各27例,通过蛋白免疫印迹(Western blot)和免疫组织化学法检测RhoC的表达水平。针对RhoC基因序列设计3条小干扰RNA(siRNA),转染至SACC-LM和SACC-83细胞系中并评估转染效率。通过Western blot比较RhoC、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、扭曲家族bHLH转录因子1(TWIST1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达水平。CCK-8实验、流式细胞术、Transwell侵袭实验、伤口愈合实验分别检测各组细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的差异。生物信息学方法预测RhoC可能的上游微小RNA(miRNA)及其在SACC中的表达情况,双荧光素酶报告基因实验验证二者的结合位点。结果RhoC在SACC中的表达显著上升(P<0.05)。沉默RhoC后,实验组ROCK1、p-p38MAPK、TWIST1、N-cadherin、Vimentin的表达显著下降,E-cadherin的表达显著上升(P<0.05);p38MAPK的表达无明显差异(P>0.05);细胞增殖、侵袭和迁移能力显著下降,凋亡率显著上升(P<0.05)。miR-138-5p在SACC中低表达,miR-138-5p micmic可以显著下调转染RhoC野生型质粒后293T细胞的荧光素酶活性(P<0.05)。结论RhoC在SACC中高表达,沉默RhoC可能靶向下游ROCK1/p38MAPK/TWIST1信号通路从而抑制SACC的增殖、侵袭、迁移和EMT,同时促进其凋亡。miR-138-5p在SACC中低表达,是RhoC潜在的上游基因,二者可能存在结合位点。

Ras同源物基因家族成员B对肾透明细胞癌细胞生长及迁移能力的影响

目的研究干扰Ras同源物基因家族成员B(Ras homolog gene family member B,RhoB)表达后对肾透明细胞癌(renal clear cell carcinoma,RCCC)细胞生长及迁移能力的影响。方法检测RhoB在RCCC细胞中的蛋白表达水平,采用脂质体转染方法转染RhoB真核表达载体pcDNA3.0-Flag-RhoB和沉默RhoB的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)即si-RhoB序列及相应空载体和对照序列,应用Western Blot法检测转染后RhoB的蛋白表达情况,通过3-(4,5-二甲基吡啶-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑[3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sugophenyl)-2H-tetrazolium,MTS]法、平板克隆和Transwell小室细胞迁移实验检测细胞生长和细胞迁移能力的变化。结果 RhoB在RCCC细胞中表达降低。与转染空载体组比较,转染pcDNA3.0-Flag-RhoB重组质粒组RhoB的蛋白表达水平明显上调;与转染对照组比较,si-RhoB转染组RhoB的蛋白表达水平明显下调。在RCCC细胞786-O和Caki-1中,上调RhoB的表达后,在4、5、6 d经MTS法测定光密度值明显降低(P<0.05);在786-0细胞中上调RhoB表达后细胞克隆数明显减少;转染48 h后Transwell细胞迁移数明显减少(P<0.05)。而下调RhoB表达后,细胞生长和Transwell细胞迁移数没有明显变化。在相对高表达RhoB的正常人肾小管上皮细胞中下调RhoB表达后细胞生长和细胞迁移数明显增多。结论过表达RhoB后明显抑制RCCC细胞生长和迁移能力。

番茄红素调节RAS同源基因家族成员A/Rho相关激酶信号通路对氧化低密度脂蛋白诱导脑血管内皮细胞凋亡的影响

目的探讨番茄红素(LYC)调节RAS同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关激酶(ROCK)信号通路对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的脑血管内皮细胞(EC)凋亡的影响。方法未做任何处理的人脑微血管内皮细胞(HBMECs)设为NC组;采用ox-LDL处理的HBMECs分为ox-LDL组、LYC组(0.5μmol/L的LYC处理HBMECs)、溶血磷脂酸(LPA)组(5μmol/L RhoA/ROCK信号通路激活剂LPA处理HBMECs)、LYC+LPA组(0.5μmol/L的LYC以及5μmol/L LPA共同处理HBMECs);处理24 h后用于后续实验。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBMECs细胞因子水平;CCK-8法检测HBMECs增殖;流式细胞术检测HBMECs凋亡率;Western blot检测细胞血小板内皮细胞黏附分子-1(CD31)、平滑肌(SM)22α、BCL-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-Caspase-3)、RhoA/ROCK通路相关蛋白表达。结果与NC组相比,ox-LDL组单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素(IL)-6、血管内皮细胞黏附分子1(VCAM-1)、HBMECs凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3、SM22α、RhoA、ROCK1蛋白水平升高,OD值、Bcl-2、CD31蛋白水平下降,差异有统计学意义(P<0.05);与ox-LDL组相比,LYC组MCP-1、IL-6、VCAM-1、HBMECs凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3、SM22α、RhoA、ROCK1蛋白水平降低,OD值、Bcl-2、CD31蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05),而LPA组趋势相反;LPA减弱了LYC对ox-LDL诱导的HBMECs凋亡的改善作用。结论LYC可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路来减轻HBMECs凋亡。

非小细胞肺癌矮小同源盒基因2和Ras相关结构域蛋白家族1A基因甲基化的意义

目的:探究矮小同源盒基因(SHOX2)和Ras相关结构域蛋白家族1A(RASSF1A)基因甲基化与非小细胞肺癌(NSCLC)浸润、转移的关系。方法:采用甲基化特异性PCR法(MSP)分析NSCLC及其相应癌旁组织中SHOX2和RASSF1A基因启动子区甲基化状态,分析其甲基化状态与患者临床病理特征的关系。结果:NSCLC癌组织中SHOX2和RASSF1A基因启动子区甲基化率分别为68.97%(80/116)、33.62%(39/116),明显高于癌旁正常组织中的12.93%(15/116)、10.34%(12/116)(P<0.05);SHOX2和RASSF1A基因甲基化分布情况与NSCLC患者性别、年龄、吸烟史、肿瘤直径、分化程度无关(P>0.05),与其TNM分期、病理分型、淋巴结转移以及患者生存时间有关(P<0.05),TNM分期中Ⅲa+Ⅲb期患者SHOX2基因甲基化率明显高于Ⅰ+Ⅱ期患者(P<0.05),鳞癌患者基因甲基化率明显高于腺癌患者(P<0.05),有淋巴结转移患者基因甲基化率明显高于无淋巴结转移患者(P<0.05),生存时间<2年患者基因甲基化率明显高于生存时间≥2年患者(P<0.05);TNM分期中Ⅲa+Ⅲb期患者RASSF1A基因甲基化率明显高于Ⅰ+Ⅱ期患者(P<0.05),腺癌患者基因甲基化率明显高于鳞癌患者(P<0.05),有淋巴结转移患者基因甲基化率明显高于无淋巴结转移患者(P<0.05),生存时间<2年患者基因甲基化率明显高于生存时间≥2年患者(P<0.05)。结论:SHOX2和RASSF1A基因启动子区甲基化可能是NSCLC发生浸润以及转移的原因之一,检测SHOX2和RASSF1A基因启动子区甲基化可为NSCLC的诊断及预后评估提供参考价值。

高分辨CT三维重建联合肺泡灌洗液中SHOX2、RASSF1A基因甲基化检测诊断早期肺结节的价值

目的:探究高分辨CT三维重建联合肺泡灌洗液(BALF)中矮小同源盒基因2(SHOX2)、Ras相关区域家族A1(RASSF1A)基因甲基化检测诊断早期肺结节的价值。方法:选取2021年5月—2022年5月某院就诊并经纤维支气管镜(FB)检查的肺结节患者100例,FB下收集患者的BALF,通过实时荧光定量PCR法测定BALF中SHOX2和RASSF1A基因甲基化状态,同时收集高分辨CT三维重建检查、BALF检测结果。依据病检结果将患者分为恶性结节组(n=40)和良性结节组(n=60),分析高分辨CT三维重建检查、BALF中SHOX2、RASSF1A基因甲基化检测对早期肺结节的诊断价值,并绘制ROC曲线评价各检测方法在早期肺结节诊断中的效能。结果:SHOX2甲基化诊断恶性结节的敏感度为50.00%,AUC为0.708,RASSF1A甲基化诊断恶性结节的敏感度为52.50%,AUC为0.713,2基因甲基化联合诊断恶性结节的敏感度为75.00%,AUC为0.767。高分辨CT三维重建诊断恶性结节的敏感度为72.50%,特异度为73.33%,AUC为0.729,BALF对恶性结节的诊断敏感度为25.00%,特异度为100.00%,AUC为0.625。2基因甲基化联合+高分辨CT三维重建诊断恶性肺结节的AUC为0.890,敏感度与特异度分别为90.00%和73.33%,其诊断效能高于2基因甲基化联合+BALF细胞学分析和高分辨CT三维重建+BALF细胞学分析(Z=2.453、2.736,P均<0.05)。结论:高分辨CT三维重建联合BALF中SHOX2、RASSF1A基因甲基化检测在肺结节良恶性诊断中的鉴别效能较高,值得在临床中应用。

Rho同源基因家族成员C在恶性肿瘤中的研究进展

癌症的发生发展机制一直被广大研究者探讨,其发生发展通常是由调节细胞基本过程的基因功能失常引起的。Rho同源基因家族成员C(RHOC)近年来已经成为研究热点。目前RHOC已经被广泛报道存在于众多恶性肿瘤细胞中,并发挥着重要作用,本文就RHOC在众多肿瘤细胞中的研究发展做一综述。

宫颈癌细胞系RASSFIA基因启动子及第1外显子区甲基化状态的研究

背景与目的:抑癌基因Ras相关区域家族1A(Ras association domain family 1A,RASSF1A)启动子及第1外显子区CG位点高甲基化导致该基因沉默与多种恶性肿瘤的发生发展相关。本研究旨在探讨宫颈癌细胞系RASSFIA基因启动子及第1外显子区甲基化状态以及甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-2’deoxycytidine,5-Aza-dc)作用对RASSFIA基因表达的影响。方法:采用5μmol/L(低浓度)和10μmol/L(高浓度)的5-Aza-dc作用于HeLa、Caski、HT-3以及C-33A等4种宫颈癌细胞系,分别采用甲基化特异PCR(methylation-specific PCR,MSP)和亚硫酸盐基因组测序法(bisulfite genome sequencing,BGS)检测5-Aza-dc处理前后RASSF1A基因启动子及第1外显子区甲基化状态,RT-PCR检测干预前后RASSF1A基因mRNA的转录表达。结果:HeLa和Caski两种HPV阳性细胞系RASSF1A基因启动子及第1外显子区均呈低甲基化状态,mRNA表达阳性。低浓度和高浓度5-Aza-dc作用后,mRNA表达未见明显改变(F HeLa=3.003,P=0.125;F Caski=0.045,P=0.956)。HT-3和C-33A两种HPV阴性宫颈癌细胞系RASSF1A基因启动子及第1外显子区则表现为高度甲基化状态,mRNA表达受到抑制。低浓度和高浓度5-Aza-dc作用后,HT-3和C-33A细胞系RASSF1A基因启动子及第1外显子区CG位点甲基化程度降低,检测到其mRNA表达,高浓度5-Aza-dc作用组表达水平明显高于低浓度组和细胞对照组(F HT-3=18.002,P=0.03;F C-33A=17.179,P=0.03),LSD-t检验显示差异有统计学意义(P<0.05)。结论:HPV阳性和HPV阴性宫颈癌细胞系中RASSFIA基因启动子及第1外显子区甲基化状态不同;RASSF1A基因启动子及第1外显子区的高甲基化可抑制该基因表达;5-Aza-dc处理可使RASSF1A基因启动子及第1外显子区去甲基化,重新激活基因的表达,这种作用在一定范围内有剂量依赖性。

宫颈癌C-33A细胞RASSF1A基因启动子CG位点甲基化及其临床意义

目的检测宫颈癌C-33A细胞RASSF1A基因启动子CG位点甲基化状态及mRNA,并探讨其临床意义。方法提取正常健康人宫颈上皮细胞和宫颈癌C-33A细胞总DNA和RNA,分别进行重亚硫酸氢盐测序(BSP)和RT-PCR扩增,检测RASSF1A基因启动子CG位点甲基化状态和RASSF1A基因mRNA。结果 C-33A细胞RASSF1A基因启动子CG位点呈现高甲基化状态,显著高于正常宫颈上皮细胞(P<0.01);C-33A细胞RASSF1A mRNA表达量明显低于正常宫颈上皮组织(P<0.01)。结论宫颈癌C-33A细胞RASSF1A基因启动子CG位点呈高度甲基化状态,其RASSF1A mRNA表达明显受到抑制。RASSF1A基因启动子CG位点甲基化在宫颈癌发生过程中发挥重要作用。

RASSF1A基因甲基化及血浆MYC抗体在宫颈癌诊断中的价值

目的:探讨RA相关区域家族1A(RASSF1A)基因甲基化及血浆骨髓细胞瘤病病毒致癌基因同源物(MYC)抗体在宫颈癌诊断中的价值。方法:选取2017年1月~2018年6月本院收治的64例宫颈癌患者为研究对象,同期健康体检女性45例为对照组。采用巢式甲基化特异性PCR(nMSP)法检测两组妇女RASSF1A基因甲基化状态,采用酶联免疫吸附实验法检测血浆MYC抗体水平,分析二者检测诊断宫颈癌价值。结果:64例宫颈癌患者血浆检测出RASSF1A基因启动子甲基化31例(48.4%),45例对照组女性均未检测出RASSF1A基因启动子甲基化,两组存在差异(P<0.05);宫颈癌组患者血浆MYC抗体水平高于对照组(P<0.05);宫颈癌患者RASSF1A基因甲基化与患者临床分期及淋巴结转移有关,血浆MYC抗体水平与临床分期及肿瘤直径有关(均P<0.05);血浆MYC抗体水平诊断宫颈癌的曲线下面积为0.611,敏感度为35.9%,特异度为84.4%。结论:检测RASSF1A基因甲基化及血浆MYC抗体在宫颈癌诊断中有一定临床价值。

RASSF1A和SHOX2基因甲基化检测联合快速现场细胞学评价对肺癌的诊断价值

目的评估RAS相关区域家族1A(RASSF1A)联合矮小同源盒基因2(SHOX2)基因甲基化检测和快速现场细胞学评价(C-ROSE)对肺癌的诊断价值。方法选取行RASSF1A和SHOX2甲基化检测并有明确病理诊断的179例可疑肺癌患者,其中肺癌58例,肺良性病变121例。179例中114例(肺癌45例,肺良性病变69例)通过迪夫快速染色完成C-ROSE检测。以病理结果为金标准,分析RASSF1A、SHOX2甲基化和(或)C-ROSE诊断肺癌的敏感度及特异度,同时明确不同标本类型和不同肿瘤类型中RASSF1A和SHOX2甲基化的结果与病理诊断的一致性。结果RASSF1A联合SHOX2甲基化检测的敏感度为77.59%(45/58),特异度为80.17%(97/121)。亚组分析中,肺穿刺活检及肺泡灌洗液标本中甲基化与病理诊断一致率较好,分别为88.8%(8/9)、79.75%(126/158),而胸水的一致率稍差,为63.64%(7/11)。小细胞肺癌和鳞癌甲基化检测准确率分别为100%(5/5)、92.31%(12/13),肺腺癌为66.67%(18/27)。C-ROSE检测的敏感度为75.56%(34/45),特异度为95.65%(66/69)。甲基化检测联合C-ROSE的敏感度为86.96%(39/45),特异度为86.67%(60/69)。结论RASSF1A、SHOX2甲基化检测及C-ROSE用于肺癌的诊断均具有较高的敏感度和特异度,两者结合将成为病理学诊断的有效的补充手段,两者结合有助于进一步提高诊断肺癌的效能。

低剂量CT结合SHOX2、RASSF1A甲基化在肺癌早期预警中的应用

目的探讨低剂量CT结合Ras相关区域家族蛋白1A(RASSF1A)、矮小同源盒基因2(SHOX2)甲基化在肺癌早期预测中的应用价值。方法选取2021年1月~2023年1月我院90例拟行肺结节手术患者,根据手术病理学分为肺良性结节组和肺癌组。2组均于术前行低剂量CT检查、SHOX2、RASSF1A甲基化检测,采用Kappa指数分析上述检查结果与手术病理学一致性,分析低剂量CT、SHOX2、RASSF1A甲基化与血清肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21)]对肺癌诊断效能,采用Spearman低剂量CT检查、SHOX2、RASSF1A甲基化与临床病理特征相关性。结果低剂量CT、SHOX2、RASSF1甲基化及三者联合分别确定40例、43例、46例、58例肺癌,三者联合与手术病理学诊断肺癌效能一致性Kappa值为0.951;三者联合诊断肺癌敏感度96.67%、准确度97.78%均高于三者单一诊断效能(P<0.05);肺癌患者血清CEA、SCC、NSE、CYFRA21水平均高于肺良性结节患者(P<0.05);低剂量CT联合SHOX2、RASSF1甲基化诊断肺癌效能的AUC为0.983,近似于四种血清肿瘤标志物诊断肺癌效能的AUC 0.933;不同肿瘤直径、临床分期、组织学分化肺癌患者低剂量CT检出率及SHOX2、RASSF1A甲基化阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);肺癌患者低剂量CT检出率、SHOX2及RASSF1A甲基化阳性率与肿瘤直径、临床分期呈正相关,与组织学分化呈负相关(P<0.05)。结论低剂量CT联合SHOX2及RASSF1A甲基化可用于肺癌早期预警中,临床可通过其进行早期诊断、评估病情进展程度,以针对性展开后续治疗,改善预后。

高分辨CT三维重建联合肺泡灌洗液中SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测诊断早期肺结节的效能分析

目的分析高分辨CT三维重建联合肺泡灌洗液中矮小同源盒基因2(SHOX2)和Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因甲基化检测在早期肺结节中的诊断效能。方法160例肺结节患者为研究对象,后期经CT引导下经皮肺部病理穿刺活检确诊小细胞肺癌(肺恶性肿瘤直径≤3 cm)患者60例,良性肺结节患者100例。所有患者先后进行高分辨CT联合肺泡灌洗液细胞学检测,肺泡灌洗液中SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测,高分辨CT三维重建联合肺泡灌洗液中SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测。以CT引导下经皮肺部病理穿刺活检为金标准,对比三种检测方式诊断早期肺结节的效能。结果高分辨CT三维重建联合肺泡灌洗液中SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测的灵敏度96.67%、准确率96.25%高于高分辨CT联合肺泡灌洗液细胞学检测(灵敏度83.33%、准确率84.38%)、肺泡灌洗液中SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测(灵敏度86.67%、准确率88.75%),高分辨CT三维重建联合肺泡灌洗液中SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测的特异度96.00%高于高分辨CT联合肺泡灌洗液细胞学检测的85.00%,差异具有统计学意义(P<0.05)。高分辨CT联合肺泡灌洗液细胞学检测、肺泡灌洗液中SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测的灵敏度、准确率比较,差异无统计学意义(P>0.05);肺泡灌洗液中SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测、高分辨CT三维重建联合肺泡灌洗液中SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测的特异度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论高分辨CT三维重建联合肺泡灌洗液中SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测方式显著优于单一指标检测与高分辨CT联合肺泡灌洗液细胞学检测。

SHOX2和RASSF1A基因组合甲基化检测参与诊断的肺结节1例假阴性分析

河南中医药大学第三附属医院肺病科开展了矮小同源盒基因2(SHOX2)和Ras相关区域家族1A(RASSF1A)基因组合的甲基化检测技术,进行肺结节诊断和肺癌早期筛查。其中1例的结果与手术病理结果不一致,出现假阴性。本文分析此病例出现假阴性结果的原因,可能与标本类型选择不到位、标本量不够充足、SHOX2和RASSF1A基因组合的甲基化检测对不同病理类型及不同分化程度的肺癌的阳性率和敏感性不同有关。

联合SHOX2、RASSF1A及CEA构建的列线图模型对肺癌发生的预测价值

目的 联合矮小同源盒基因2(Short stature homeobox gene 2,SHOX2)、RAS相关结构域家族1亚型A(RAS association domain family 1,isoform A,RASSF1A)及癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)构建预测肺癌发生的列线图模型,并确定该模型的预测价值。方法 选择2020年1月至2022年12月在新疆医科大学第一附属医院就诊的88例肺癌患者及肺良性肿瘤患者219名。比较两组患者的人口统计学和临床特征信息以及支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中SHOX2和RASSF1A基因的甲基化水平。进行单因素分析及多因素Logistic回归分析筛选出影响肺癌发生的变量构建列线图,并评估其预测效能。结果 肺癌患者中SHOX2阳性36例(41.4%),RASSF1A阳性30例(34.5%)。肺癌患者CEA、细胞角蛋白19片段(Cytokeratin 19 fragment,CYFRA21-1)、鳞状上皮细胞癌抗原(Squamous cell carcinoma antigen,SCCA)、胃泌素释放肽前体(Pro-gastrinreleasing peptide,Pro-GRP)水平与肺良性肿瘤患者比较差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示,SHOX2、RASSF1A和CEA为肺癌发生的独立危险因素(P<0.05),基于上述独立风险因素所构建的列线图模型显示出良好的区分能力(AUC=0.926),具有较好的一致性且获益良好。结论 联合SHOX2、RASSF1A和CEA构建的列线图模型对肺癌发生具有较高的预测价值,可为肺癌的早期诊断提供依据。

肺癌患者血浆甲基化SHOX2、RASSF1A基因的检测分析

目的检测肺癌患者血浆甲基化矮小同源盒基因2(SHOX2)及RAS相关区域家族1A(RASSF1A)基因,并探讨其意义。方法肺癌患者92例(观察组),肺部良性疾病患者68例(对照组),采用甲基化特异PCR法检测两组血浆甲基化SHOX2、RASSF1A基因,并计算甲基化SHOX2、RASSF1A基因阳性率;分析血浆SHOX2、RASSF1A基因甲基化阳性率与肺癌临床病理特征的关系;受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆甲基化SHOX2、RASSF1A基因阳性对肺癌的诊断价值;另分析血浆与癌组织、支气管肺泡灌洗液(BALF)甲基化SHOX2、RASSF1A基因阳性率的一致性。结果与对照组比较,观察组血浆甲基化SHOX2、RASSF1A基因阳性率高(P均<0.05)。血浆甲基化SHOX2、RASSF1A基因阳性与肺癌肿瘤分期、淋巴结转移有关(P均<0.05),而与性别、年龄、病理类型、肿瘤分化程度无明显相关性(P均>0.05)。血浆甲基化SHOX2基因单独检测诊断肺癌的灵敏度为53.7%、特异度为86.07%,血浆甲基化RASSF1A基因单独检测诊断肺癌的灵敏度为64.1%、特异度为92.1%,两者联合检测诊断肺癌的灵敏度为81.6%、特异度为94.2%。血浆与癌组织、BALF中甲基化SHOX2基因阳性率具有良好的一致性,一致率分别为87.3%(48/55)、97.9%(47/48),血浆与癌组织、BALF中甲基化RASSF1A基因阳性率具有良好的一致性,一致率分别为86.4%(51/59)、96.1%(49/51)。结论肺癌血浆甲基化SHOX2、RASSF1A基因阳性率增加,两指标与肺癌肿瘤分期、淋巴结转移有关,联合检测两者有助于提高肺癌的诊断,血浆与癌组织、BALF中甲基化SHOX2、RASSF1A基因阳性率具有良好的一致性。

支气管肺泡灌洗液SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测在临床肺癌诊断中的应用

目的探讨支气管肺泡灌洗液中人矮小同源盒基因2(SHOX2)、RAS相关区域家族1A(RASSF1A)基因甲基化检测在肺癌诊断中的应用效果。方法 202例呼吸科住院患者,其中33例经组织病理诊断肺癌患者, 169例肺部良性结节疾病患者,收集所有患者支气管肺泡灌洗液,然后修饰纯化脱氧核糖核酸(DNA),进行SHOX2、RASSF1A基因甲基化检测,观察其肺泡灌洗液SHOX2、RASSF1A基因甲基化诊断肺癌敏感性、特异性及诊断准确率,并比较SHOX2、RASSF1A基因甲基化检测与细胞学诊断肺癌敏感性,比较SHOX2联合RASSF1A基因甲基化与细胞学诊断肺癌病理学四期敏感性。结果肺泡灌洗液SHOX2基因甲基化诊断敏感性为87.88%,特异性为89.35%,诊断准确率为89.11%。肺泡灌洗液RASSF1A基因甲基化诊断敏感性为81.82%,特异性为93.49%,诊断准确率为91.58%。SHOX2、RASSF1A基因甲基化诊断肺癌敏感性分别为87.88%(29/33)、81.82%(27/33),均高于细胞学的54.55%(18/33),差异具有统计学意义(P<0.05)。SHOX2联合RASSF1A基因甲基化诊断Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期肺癌的敏感性分别为75.00%(6/8)、94.12%(16/17)、83.33%(5/6)、100.00%(2/2),细胞学诊断Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期肺癌的敏感性分别为37.50%(3/8)、52.94%(9/17)、66.67%(4/6)、100.00%(2/2), SHOX2联合RASSF1A基因甲基化诊断Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期肺癌的敏感性均高于细胞学诊断。其中SHOX2联合RASSF1A基因甲基化诊断Ⅱ期肺癌的敏感性高于细胞学诊断,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论支气管肺泡灌洗液SHOX2和RASSF1A基因甲基化检测有助于肺癌的早期诊断,可以作为新型的肿瘤分子标志物。

胸水细胞学标本SHOX2和RASSF1A基因甲基化预测肺腺癌的临床价值

目的探析胸水细胞学标本矮小同源盒基因2(SHOX2)和RAS相关区域家族1A(RASSF1A)基因甲基化对预测肺腺癌的临床价值。方法收集80例患者的胸水标本,其中40例为可疑肺腺癌(观察组),40例为良性病变(对照组)。用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)测定胸水细胞学标本SHOX2、RASSF1A基因甲基化情况。比较两组的SHOX2、RASSF1A检测值差异,Logistic回归分析法探析SHOX2、RASSF1A基因与肺腺癌病情的关系,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析SHOX2、RASSF1A在肺腺癌病情诊断预测中的应用价值。结果观察组的SHOX2、RASSF1A基因甲基化程度明显高于对照组;Logistic回归分析表明,SHOX2、RASSF1A基因甲基化高表达、强表达是肺腺癌的危险因素。ROC曲线分析得,SHOX2、RASSF1A基因甲基化联合预测肺腺癌病情结果的AUC(0.821,95%CI:0.727~0.915)最大,敏感度、特异性分别为87.5%、97.5%,并且SHOX2、RASSF1A甲基化检测结果联合液基细胞学诊断结果,有助于补充细胞学诊断上的漏诊。结论SHOX2、RASSF1A基因甲基化在肺腺癌中呈高表达,肺腺癌受检者的胸水细胞学标本SHOX2、RASSF1A基因甲基化水平高,可侧面说明患者病情恶化风险较高,可为肺腺癌的临床诊断及病情预测提供重要参考,同时也可作为细胞学病理诊断的补充,并且SHOX2、RASSF1A基因甲基化联合检测可作为可疑肺腺癌无创伤性辅助检查指标。

人Ras同源物基因家族成员B真核表达载体的构建及对肾癌细胞786—0增殖和凋亡的影响

目的观察人Ras同源物基因家族成员B（RhoB）对肾癌细胞株786一O细胞增殖和凋亡的影响。方法构建pcDNA3．0-Flag—RhoB真核表达载体，脂质体转染法将其转入肾癌细胞786一O，利用Westernblot检测细胞中RhoB的表达。用MTS法和流式细胞仪检测RhoB对肾癌细胞增殖和凋亡效应的影响。结果真核表达载体pcDNA3．0-Flag-RhoB构建成功，脂质体转染后RhoB在786一O细胞中表达明显升高；在转染后48、72、96h，重组质粒组细胞的增殖速度明显低于空载体组和阴性对照组（P〈0．05）；转染重组质粒细胞凋亡率为（24．05±0．60）％，明显高于空载体组[（1．67±0．30）％]和阴性对照组[（1．22±0．50）％，P〈0．05]。结论RhoB对肾癌细胞具有抑制增殖和诱导凋亡的作用。