稳定表达IL-8基因宫颈癌SiHa细胞株的建立及鉴定

目的建立高效、稳定表达IL-8基因的人宫颈癌pcDNA3.1-IL-8-SiHa细胞株。方法利用pcDNA3.1(+)真核表达载体构建pcDNA3.1/IL-8表达载体,利用基因克隆技术将IL-8cDNA基因片段通过脂质体转染入人宫颈鳞癌SiHa细胞中,经G418筛选获得稳定表达的细胞克隆,建立了高表达IL-8的pcDNA3.1-IL-8-SiHa宫颈癌细胞株,转染阳性细胞连续传代培养,传8代后用RT-PCR,ELISA,免疫细胞化学法进一步鉴定细胞中IL-8的表达。结果成功建立了持续高表达IL-8的pcDNA3.1-IL-8-SiHa细胞株,并在细胞中检测到IL-8mRNA及蛋白的高表达。结论高效表达IL-8基因的SiHa细胞株的建立有助于研究IL-8基因在宫颈癌发生发展中的作用。

敲减ARHGAP30基因对宫颈癌Siha细胞增殖及凋亡的影响

目的探究敲减Rho鸟苷三磷酸酶激活蛋白30(Rho GTPase-activating protein 30,ARHGAP30)后,宫颈癌Siha细胞增殖及凋亡的变化。方法设计特异性shARHGAP30引物并连接pLKO.1载体,转化到大肠杆菌感受态细胞中,再与慢病毒辅助质粒转入HEK-293T细胞,收集细胞上清获得的病毒过滤后感染Siha细胞,RT-qPCR和Western blot检测敲减效率,以及转染后Bax及Bcl-2的表达变化;CCK-8法检测敲减后细胞的增殖水平。结果成功构建敲减ARHGAP30基因的慢病毒质粒,并建立Siha稳转细胞,ARHGAP30在Siha细胞中的转录和翻译减少(P<0.01),Bax/Bcl-2明显降低(P<0.01),凋亡减少,细胞增殖水平升高(P<0.01)。结论ARHGAP30参与Siha细胞的增殖与凋亡,调控ARHGAP30基因或将干扰宫颈癌的发生和发展。

苦参碱联合顺铂对宫颈癌SiHa细胞株中TSLC1基因表达的影响研究

目的:探究苦参碱联合顺铂对宫颈癌Si Ha细胞株、肺癌肿瘤抑制因子1(TSLC1)基因的表达及Si Ha细胞株对顺铂敏感性的影响,为宫颈癌的临床治疗提供根据。方法:采取四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度苦参碱组、顺铂组以及联合组干预Si Ha细胞株48 h后的抑制率;采取实时荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测TSLC1 mRNA表达程度的变化。结果:苦参碱及顺铂对Si Ha细胞株的抑制率均呈剂量依赖关系,随着各组浓度的增高,TSLC 1mRNA的表达上调(P<0.05),不同浓度联合组对Si Ha细胞株的抑制率分别为40.13%、62.88%、67.35%、71.33%和75.11%,TSLC1 mRNA的表达量分别为8.61±0.02、14.29±0.01、27.52±0.06、62.19±0.01和93.12±0.01,与不同浓度苦参碱组及不同浓度顺铂组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:苦参碱联合顺铂可抑制宫颈癌Si Ha细胞株的生成和发展,此机制可能和TSLC1 mRNA的表达上调有关,且苦参碱可以增强Si Ha细胞株对顺铂的敏感性。

PRDX2调控HPV16 E6对宫颈癌Siha细胞活性的影响

目的探究PRDX2在宫颈癌组织中的表达以及对宫颈癌Siha细胞的恶性生物学行为的影响。方法免疫组化方法检测宫颈癌组织以及癌旁组织中PRDX2的表达;将宫颈癌Siha细胞设置为4个组:Siha组、siRNA NC组、siRNA PRDX2组与siRNA HPV16 E6组。EDU染色法检测Siha细胞的生长活性;Transwell实验方法分析Siha细胞的侵袭数量;流式细胞术检测Siha细胞的凋亡情况;蛋白免疫印迹方法分析Siha细胞中PRDX2/HPV16 E6蛋白的表达水平。结果与宫颈癌旁组织比较,宫颈癌组织PRDX2的表达上调。与Siha组和siRNA NC组比较,siRNA PRDX2和siRNA HPV16 E6组的Siha细胞增殖能力下降(P<0.05);siRNA PRDX2和siRNA HPV16 E6组的Siha细胞侵袭数量下降(P<0.05);siRNA PRDX2和siRNA HPV16 E6组的Siha细胞凋亡率增加(P<0.05);siRNA PRDX2组的Siha细胞的HPV16 E6蛋白表达下调(P<0.05)。结论PRDX2在宫颈癌组织中表达增加,抑制PRDX2表达后,Siha细胞的增殖速度与侵袭数量降低,凋亡率增加,该机制与PRDX2调节HPV16 E6蛋白的表达相关。

氧化苦参碱对人宫颈癌SiHa细胞株增殖及凋亡的影响

目的研究氧化苦参碱对体外人宫颈癌SiHa细胞株增殖活性及凋亡的影响。方法对人宫颈癌SiHa细胞株进行体外培养,经氧化苦参碱处理的细胞组为实验组,未经处理组为对照组。采用MTT细胞存活实验检测氧化苦参碱对入宫颈鳞癌SiHa细胞的增殖影响,并计算IC50;倒置相差显微镜下观察不同浓度的氧化苦参碱作用48h后SiHa细胞的形态改变;Hoechst33258染色法和Western blot法检测氧化苦参碱对SiHa细胞核及凋亡相关蛋白(P53、Bax及Bcl-2)表达水平的影响。结果 MTT结果显示氧化苦参碱剂量-时间依耐性抑制人宫颈癌SiHa细胞的体外增殖(P<0.05),计算24 h、48 h和72 h的IC50分别为(1 028.41±3.57)μg/ml、(701.72±6.01)μg/ml和(406.88±2.15)μg/ml;氧化苦参碱处理48 h后,SiHa细胞的形态特征及数目发生显著变化,且随氧化苦参碱浓度的增加而愈加明显;Hoechst33258染色证实氧化苦参碱处理后SiHa细胞发生凋亡,可见典型的凋亡特征;Western blot结果证实氧化苦参碱(700μg/ml、1 600μg/ml)处理48 h后,和对照组比较,药物处理组细胞凋亡周期蛋白P53、Bax表达上调(P<0.05),而Bcl-2表达下调(P<0.05),Bax/Bcl-2的比率明显增加(P<0.05)。结论氧化苦参碱可抑制体外人宫颈癌SiHa细胞的体外增殖活性发挥其抗肿瘤作用,其作用机制可能诱导SiHa细胞的凋亡有关。

miR-1246对人宫颈癌SiHa细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响及其靶基因的初步研究

目的探讨miR-1246对人宫颈癌SiHa细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响。方法将SiHa细胞分成3组,分别转染miR-1246mimics(模拟物)、miR-1246inhibitor(抑制物)、空白质粒,并测定转染效率。采用MTT法对比转染后SiHa细胞增殖能力的区别;Transwell小室、划痕实验对比转染后SiHa细胞侵袭、迁移能力的区别;Western blot对比转染后SiHa细胞表达THBS2(血小板反应蛋白2)的区别。构建THBS2的3UTR双荧光素酶质粒,与miR-1246共转染入SiHa细胞,检测荧光素酶的相对活性。结果转染miR-1246mimics的SiHa细胞,MTT试验显示其增殖能力较另外两组强;划痕实验显示细胞的迁移能力较另两组强;迁移、侵袭实验显示该组细胞穿膜数量较另外两组多(P<0.01);WB实验显示其THBS2蛋白低表达(灰度值6.28±10.22,与空白对照组相比P=0.013)。转染miR-1246inhibitor的SiHa细胞,MTT试验显示其生长速度较另外两组慢;划痕实验显示细胞的迁移能力较另两组弱;迁移、侵袭实验显示该组细胞穿膜数量较另外两组少(P<0.01);WB实验显示其THBS2蛋白表达稍高(灰度值12.90±19.81,与空白对照组相比P=0.037)。共转染miR-1246mimics和包含THBS2的3UTR端双萤光素酶质粒后,SiHa细胞荧光素酶表达降低。结论 miR-1246对人宫颈癌SiHa细胞的增殖、侵袭、迁移能力有促进作用,THBS2是其靶基因,降调靶蛋白THBS2的表达,可能是miR-1246促进宫颈癌发生发展的其中一个机制。

RNAi抑制Ku80表达后促进宫颈癌SiHa细胞的放射敏感性

背景与目的:Ku80为细胞受辐射致DNA双链断裂(DNA double-strand break,DSB)后的主要修复蛋白之一,Ku80的高表达预示着宫颈癌组织对放射线的抵抗,本研究运用RNAi技术抑制Ku80表达,观察宫颈癌Si-Ha细胞对X线敏感性的变化。方法:构建1个靶向抑制Ku80的siRNA表达载体和1个阴性对照质粒,稳定转染入SiHa细胞后Western blot和RT-PCR检测Ku80表达变化;6 MV X线照射10 Gy后20 h、28 h和48 h收集细胞,流式细胞术检测细胞凋亡率;克隆形成实验检测细胞D0、SF2和α等值。结果:构建表达质粒转染SiHa细胞经筛选后获得2个稳定转染细胞株,Western blot和RT-PCR分析表明转染pKu80-siRNA的阳性克隆Ku80在mRNA和蛋白质水平均受到明显抑制;X线照射28 h及48 h后,Ku80表达受抑细胞其凋亡率均显著高于转染阴性质粒组和空白对照组(P<0.05);Ku80受抑细胞的D0和SF2值分别为1.330和0.425,低于转染阴性质粒细胞(1.748和0.580)和空白对照细胞(1.835和0.597),α值为0.295,高于转染阴性质粒细胞(0.176)和空白对照细胞(0.188)。结论:运用RNAi技术可以有效抑制Ku80的表达从而促进SiHa细胞对X线的敏感性,Ku80可能是一个较理想的肿瘤分子治疗靶点。

利用斑马鱼模型研究芦荟大黄素对宫颈癌细胞SiHa的抑制作用

通过细胞增殖实验(MTT)研究不同浓度芦荟大黄素(Aloe emodin,AE)对人宫颈癌细胞Si Ha生长的抑制作用,并将Si Ha细胞注入48 hpf的斑马鱼胚胎卵黄囊,建立斑马鱼移植瘤模型,然后用不同浓度AE进行处理,考察肿瘤细胞在斑马鱼体内的增殖和迁移情况。结果显示,AE对Si Ha细胞的生长抑制率随浓度和作用时间的增加而呈明显上升趋势,表现出一定的浓度-时间-效应依赖关系;体内实验表明AE对斑马鱼移植瘤的增殖和转移具有抑制作用。本研究表明,AE具有开发成抗宫颈癌药物的潜能,同时斑马鱼移植瘤模型也可以成为宫颈癌研究和药物评价的重要模型。

GBX2过表达促进人宫颈癌SiHa细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探讨GBX2基因在人宫颈癌SiHa细胞增殖和侵袭转移中的作用及其机制。方法:应用质粒转染技术,分别将过表达GBX2基因重组质粒pCMV6-entry-GBX2(实验组)及空载体质粒pCMV6-entry(阴性对照组)转染到宫颈癌SiHa细胞中,用WST-1法、集落形成实验、流式细胞术分别检测转染细胞的增殖、集落形成和细胞周期,用划痕愈合实验、Transwell实验检测细胞的迁移、侵袭能力,用ELISA法检测细胞培养上清中IL-6的表达水平,用WB检测EMT相关蛋白的表达变化并探讨其可能的作用机制。结果:与SiHa/pCMV6组相比,上调GBX2表达后:(1)SiHa/GBX2组细胞的增殖、集落形成、迁移和侵袭能力明显增强(均P<0.01),G0/G1期的细胞比例减少、S期与G2/M期的细胞比例增加(均P<0.01)(;2)SiHa/GBX2组细胞EMT相关蛋白上皮钙黏蛋白表达水平下降,神经钙黏蛋白、波形蛋白和snail表达水平上调(均P<0.01)(;3)SiHa/GBX2组细胞培养上清中IL-6的表达水平明显增高(P<0.01);(4)SiHa/GBX2组细胞STAT3磷酸化水平增强,并能被STAT3抑制剂S31-201抑制(P<0.01)。结论:GBX2可能通过IL-6/STAT3通路诱导宫颈癌SiHa细胞EMT,从而促进宫颈癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力。

黄芩茎叶总黄酮对人宫颈癌Hela细胞株体外生长的影响

目的探讨黄芩茎叶总黄酮(SSTF)治疗人宫颈癌的可行性。方法配制含人宫颈癌细胞的细胞悬 液(4×105个／ml),取96孔板,每孔接种细胞悬液100μl,阴性对照组设6个孔均不点药,阳性对照药为5-氟尿嘧 啶(5-Fu),取0.01、0.1、1、10、100μg／ml5个浓度,SSTF选取浓度与5-Fu相同,每个浓度点3个孔,37℃5％CO2 培养48-72小时后采用MTT法在酶标仪上以570nm波长测定吸光度(A),计算SSTF和5-Fu抑制Hela细胞 株体外生长的抑制率和半数抑制浓度(IC50)。结果 SSTF、5-Fu均可明显抑制肿瘤细胞的生长,其IC50分别为 20.5、10.5μg／ml。结论SSTF能抑制人宫颈癌Hela细胞体外生长,具有一定细胞毒性作用,可作为临床治疗宫 颈癌的药物进一步深入研究。

宫颈癌细胞株和宫颈上皮组织中Pin1和Cyclin D1的表达及临床意义

背景与目的:肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1在人类多种肿瘤中过表达,Pin1过表达可增强CyclinD1表达,在肿瘤发生发展中起重要作用。本研究拟探讨宫颈癌细胞株及宫颈上皮组织中Pin1、CyclinD1的表达及其临床意义。方法:应用RT-PCR、Westernblot法检测HeLa、SiHa、C33a、Caski细胞中Pin1和CyclinD1基因蛋白表达,免疫组化法检测10例正常宫颈、21例宫颈上皮内瘤样病变、57例浸润癌组织中Pin1和CyclinD1的表达状况,评价其临床意义。结果:HeLa、SiHa、C33a、Caski细胞存在不同程度Pin1mRNA及蛋白过表达(P<0.05)。正常宫颈、宫颈上皮内瘤样病变、浸润癌组织中Pin1蛋白表达逐渐增强,分别为0%、47.62%、64.91%(P<0.05)。Pin1蛋白过表达与宫颈癌临床分期、病理分级、淋巴结转移无关(P>0.05);但宫颈腺癌组织中Pin1表达明显高于鳞癌(P<0.05)。Pin1过表达与CyclinD1表达呈显著正相关(P<0.05)。结论:Pin1在宫颈癌细胞株及宫颈癌组织中存在mRNA及蛋白水平上的过表达,Pin1过表达与CyclinD1表达密切相关,Pin1和CyclinD1异常表达可能参与宫颈癌的发生发展。

5-氨基酮戊酸光动力疗法对宫颈癌细胞株凋亡的诱导作用

背景与目的:5-氨基酮戊酸-光动力疗法(5-aminolevulinic acidmediated photodynamic therapy,ALA-PDT)是近年来兴起的一种肿瘤消融新技术,其作用于宫颈癌细胞的机制尚不清楚。本课题探讨ALA-PDT对宫颈癌细胞凋亡的影响及其相关机制。方法:用MTT法检测ALA-PDT对8种人宫颈癌细胞增殖的影响,并筛选出ALA-PDT对宫颈癌细胞增殖影响的最佳作用参数。采用Annexin V-FITC/PI双染法、Hoechst33342染色法和May-Grünwald-Farbstoff Giemsa染色法检测ALA-PDT对Me180细胞凋亡的影响。采用PI染色结合流式细胞术分析ALA-PDT对Me180细胞周期的影响。采用实时荧光定量RT-PCR法检测ALA-PDT对Me180细胞survivin等基因mRNA的影响,Western blot检测对Survivin蛋白表达的影响。结果:8种人宫颈癌细胞株中,Me180细胞株对ALA-PDT最敏感,与其它细胞株比较差异有统计学意义。ALA2mmol/L、10J/cm2激光剂量孵育3h为ALA-PDT体外杀伤Me180细胞较理想的实验条件,在该条件下ALA的IC50为7.28×10-4mmol/L。ALA-PDT可显著诱导Me180细胞凋亡,并可将细胞阻滞于G0/G1期。ALA-PDT可显著抑制Me180细胞survivin基因的mRNA和蛋白表达。结论:ALA-PDT在体外对人宫颈癌Me180细胞有明显的增殖抑制作用,能诱导Me180细胞发生凋亡,其机理可能与抑制survivin基因表达有关。

清毒栓含药血清对宫颈癌SiHa细胞MDM2基因的影响

目的研究中药清毒栓对宫颈癌SiHa细胞生长的调节作用,从细胞生物学及分子生物学水平探讨清毒栓对抑制宫颈癌SiHa细胞生长的作用机制。方法以不同浓度清毒栓含药血清培养液作用于SiHa细胞,并设立空白血清及含中、西药阳性对照药血清为对照,通过MTT法检测清毒栓对细胞生长增殖的影响;用流式细胞分析技术进行细胞周期及细胞凋亡检测,并用RT-PCR法半定量检测原癌基因MDM2表达。结果经清毒栓含药8%的血清培养液作用后细胞数量减少,其中以血清作用72h时对细胞抑制作用最强,与空白组比较,差异有显著性(P<0.01);细胞周期各时相中,清毒栓含药血清S期细胞所占的比例明显减少,对细胞凋亡有影响,但未见明显规律性,RT-PCR结果示清毒栓含药血清细胞中MDM2表达明显减少。结论清毒栓含药血清不仅可直接抑制宫颈癌细胞的生长,并可能通过下调MDM2基因表达的分子机制,达到抑制肿瘤的目的。

3,3’-二吲哚甲烷对宫颈癌SiHa细胞增殖抑制的实验研究

目的研究吲哚-3-甲醇(I3C)的重要衍生物3,3’-二吲哚甲烷(DIM)对宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响。方法采用CCK-8法检测不同浓度DIM对SiHa细胞体外生长的抑制作用,流式细胞术检测DIM对SiHa细胞凋亡的影响,荧光显微镜观察细胞形态的变化;Western blotting检测不同浓度DIM对SiHa细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果 DIM对SiHa细胞的抑制作用呈时间-剂量依赖性,DIM对SiHa细胞干预48h的半数抑制浓度(IC50)为44.44μmol/L。分别以25、50、100μmol/L的DIM处理48h后,SiHa细胞的凋亡率分别为(10.09±1.32)%、(21.11±3.36)%和(55.46±6.33)%,阴性对照组为(4.56±0.52)%,组间差异有统计学意义(P<0.05)。不同浓度DIM处理48h后,荧光显微镜下SiHa细胞呈现皱缩、变圆,并形成明显的凋亡小体。Western blotting显示随着DIM浓度的增加,SiHa细胞中MAPK家族的ERK、p38和p-p38蛋白的表达水平受抑制,JNK、p-JNK蛋白的表达水平上调,PI3K家族的Akt、p-Akt、PI3K p110α、PI3K p110β、PI3K classⅢ、GSK3-β、p-PDK1和p-c-Raf蛋白的表达也受到抑制。结论 DIM能抑制SiHa细胞的生长并诱导细胞凋亡,其作用机制是通过对MAPK家族和PI3K家族凋亡相关蛋白表达的调控实现的,并将有可能成为一种有效的抗宫颈癌药物。

HIF-1对人宫颈癌SiHa细胞增殖和凋亡的影响

目的观察缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在缺氧条件下对宫颈癌SiHa细胞的增殖、生长和凋亡的影响,探讨HIF-1α在宫颈癌的发展过程中所起的作用。方法将表达全长HIF-1α的重组质粒pcDNA3.1-full length HIF-1α和空质粒pcDNA3.1转染入SiHa细胞中,分别命名为fLHIF-1α组和pcDNA3.1组,未转染细胞组命名为未转染组。应用Western Blotting和免疫细胞化学法对细胞内的HIF-1α和VEGF表达量进行检测。应用MTT方法检测不同浓度的CoCl2处理后细胞的增殖情况;采用原位缺口末端标记(TUNEL)法检测细胞的凋亡情况。结果免疫细胞化学和Western Blotting结果显示重组质粒pcDNA3.1-full length HIF-1α转染成功,转染细胞内HIF-1α及VEGF表达较未转染细胞和质粒pcDNA3.1转染细胞增高(P<0.05),显示在正常或缺氧条件下,fLHIF-1α组细胞的增殖能力均高于pcDNA3.1组和未转染组(P<0.05),凋亡率小于pcDNA3.1组和未转染组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论HIF-1α在CoCl2诱导的缺氧条件下可以抑制SiHa细胞的凋亡,减少缺氧对细胞的损伤以及促进细胞的增殖,提示HIF-1α在宫颈癌的发生发展中可能起着重要作用。

掌叶半夏有效提取物对宫颈癌细胞株增殖的抑制作用

目的既往的临床研究证实中药掌叶半夏可有效治疗宫颈癌。在此基础上,课题组观察了中药掌叶半夏有效提取物(Pinellia Extract,PE)对宫颈癌细胞株CaSki和HeLa细胞增殖的作用,先前采用MTT法检测细胞活性以及倒置相差显微镜观察细胞形态的变化,初步显示了PE对CaSki和HeLa细胞的增殖有抑制作用;本文将对PE的增殖抑制作用进行进一步的研究。方法采用扫描电镜和透射电镜观察PE作用后CaSki和HeLa细胞表面及内部超微结构的变化,In-cell Western blot检测不同浓度PE作用15min后CaSki和HeLa细胞磷酸化ERK的表达。结果0.15mg/mlPE作用24h后CaSki和HeLa细胞表面结构及内部结构均发生了显著的变化,提示细胞增殖受到抑制;不同浓度PE作用15min后CaSki和HeLa细胞磷酸化ERK的表达随PE浓度的增加逐渐下降。结论PE对CaSki和HeLa宫颈癌细胞株的增殖有明显抑制作用,表现在细胞表面及内部超微结构的变化;增殖抑制作用之一是阻断ERK的磷酸化。实验结果为进一步研究PE的抗宫颈癌作用机制以及新药的研制开发奠定了一定的理论依据和实验基础。

异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞增殖影响的实验研究

目的:探讨异紫堇定碱(Isocorydione)对人宫颈癌Siha细胞增殖的影响。方法:以100、200、400、800、1 200μmol/L浓度的异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞体外干预,分别作用24、48、72 h后,采用MTT法检测异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞生长增殖的作用;流式细胞仪检测异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞周期的影响;结合Hoechst染色观察处理后Siha细胞核微形态的变化;Western Blot法检测异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞作用后凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3表达的影响。结果:MTT结果显示不同浓度的异紫堇定碱作用于人宫颈癌Siha细胞后具有明显的抑制其增殖的作用,呈剂量-时间依赖关系(P<0.05);流式细胞仪检测结果显示400μmol/L的异紫堇定碱作用于人宫颈癌Siha细胞后,细胞周期发生明显改变,其中G1和S期细胞比例变化不明显,但G2期细胞明显减少(P<0.05);Hoechst染色结果显示,与对照组比较,400μmol/L的异紫堇定碱作用于Siha细胞48 h后形态缩小、细胞核固缩,出现核碎裂形成凋亡小体;Western Blot结果显示400μmol/L的异紫堇定碱分别作用于人宫颈癌Siha细胞24、48、72 h后,其Bax蛋白表达增加,而Bcl-2蛋白表达逐渐减少,Bax/Bcl-2比值增加,Caspase-3蛋白表达逐渐增多。结论:异紫堇定碱对人宫颈癌Siha细胞增殖具有明显的抑制作用,其促使细胞发生凋亡行为可能与线粒体凋亡途径的蛋白有关。

小剂量顺铂增加人宫颈癌Hela和Siha细胞对光动力治疗敏感性的研究

目的探讨小剂量顺铂增加人宫颈癌Hela和Siha细胞系对光动力治疗的敏感性及细胞凋亡的机理。方法将Hela和Siha细胞分为空白对照组、单纯光动力治疗组、单纯顺铂治疗组和光动力加顺铂治疗组,MTT法检测各组人宫颈癌细胞株Hela和Siha的增殖情况。采用免疫细胞化学法检测各组Hela和Siha细胞受作用后P185c-erbB-2蛋白的表达情况。结果顺铂和光动力治疗联合应用导致细胞凋亡的程度均明显强于单一顺铂作用或光动力作用,细胞中P185c-erbB-2蛋白的表达下降程度也与之相一致。但是先顺铂后光动力治疗和先光动力治疗后顺铂相比,作用效果差异不明显。结论顺铂和光动力联合治疗在体外对人宫颈癌Hela和Siha细胞有明显增殖抑制作用,强于单独一种方法治疗,其机理可能与抑制P185c-erbB-2表达有关。

shRNA干扰VEGF的表达对宫颈癌SiHa细胞凋亡的影响

目的利用RNA干扰技术抑制S iHa细胞中血管内皮生长因子(VEGF)的基因表达,探讨其对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。方法设计针对VEGF的两种短发夹RNA(shRNA),分别构建PGPU6/GFP/Neo-VEGF重组质粒表达载体,命名为pv1、pv2。利用脂质体将质粒转染入人宫颈癌S iHa细胞,采用RT-PCR方法检测VEGF mRNA的变化情况。筛选出抑制率较高的质粒进行下一步实验;转染后,用流式细胞术检测细胞凋亡。结果 pv1、pv2对VEGF mRNA均有显著的抑制作用,抑制率分别为(82.17±4.45)%和(64.55±3.80)%,显著高于阴性对照组的(7.63±4.13)%(P<0.05)。pv1转染组的细胞凋亡率为(47.85±4.65)%,明显高于阴性对照组的(17.76±2.12)%和空白对照组的(19.66±3.74)%(P<0.01)。结论 RNA干扰技术可以有效沉默人宫颈癌细胞株S iHa中VEGF mRNA的表达,并可诱导宫颈癌细胞凋亡。

转化生长因子β1对宫颈癌Siha细胞microRNA表达谱的影响

目的 探讨转化生长因子β1(transforming growth factor β1,TGF-β1)对宫颈癌Siha细胞microRNA(miRNA)表达谱的影响及其意义。方法 应用miRNA芯片检测TGF-β1处理宫颈癌Siha细胞前后的miRNA表达谱;实时荧光定量RT-PCR验证差异表达的miRNA;生物信息学技术用于分析由差异表达的miRNA调节的可能靶基因。结果 TGF-β1处理宫颈癌Siha细胞48 h,miRNA的表达谱存在39个差异表达的miRNA,其中27个表达上调,12个表达下调。选择其中差异倍数大的2个miRNA(hsa-miR-494-3p,hsa-miR-378a-5p)进行实时荧光定量RT-PCR验证,结果与芯片结果一致。结论 TGF-β1影响宫颈癌Siha细胞miRNAs的表达,这些差异表达的miRNAs可能参与了宫颈癌的浸润转移。