科学家首次实现鸡冷冻卵巢组织活体复原

遗传材料的冷冻保存与复苏对畜禽遗传资源保护具有重要意义,由于家禽的繁殖特性和遗传材料的低温生物学特性,冷冻保存与复苏技术一直是难点,长期制约我国家禽遗传资源的高效保存。5月11日,中国农业科学院北京畜牧兽医研究所蛋鸡遗传育种创新团队利用原位移植技术,在白来航母鸡中成功移植了横斑洛克黑羽鸡冷冻卵巢组织,并成功孵化出一只横斑洛克黑羽雏鸡,首次实现了鸡冷冻卵巢组织活体复原。

移植卵巢组织卵泡损伤机制及保护策略

卵巢组织冷冻保存及移植是青春期前女性及不能延迟放疗或化疗的恶性肿瘤患者唯一的生育力保存手段。目前,卵巢组织冷冻保存及移植效率仍低,卵巢组织移植后面临缺血缺氧风险,始基卵泡的异常激活和血供恢复后的缺血-再灌注损伤也造成移植卵巢组织卵泡大量损失。大量研究尝试通过添加某些药物减少卵泡在冷冻及移植过程中所受的损伤,延长卵巢移植患者内分泌功能及生殖功能持续的时间:如添加褪黑素、N-乙酰半胱氨酸、促红细胞生成素或其他抗氧化剂以减轻氧化应激,添加不同来源的间充质干细胞、碱性成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子、血管生成素2、促性腺激素以促进血运重建,添加抗米勒管激素、雷帕霉素以减少始基卵泡异常激活。本文重点阐述了卵巢组织移植后卵泡损伤的主要机制及减少移植卵巢组织卵泡损伤的方法,以期为提高卵巢组织移植效率提供参考。

4种冷冻-解冻方法对家兔卵巢组织形态学的影响

目的:探讨适宜的卵巢组织冻存方案。方法:采用PROH(A2组)及DMSO(B2组)慢速程序化冷冻和DMSO+PROH(C2组)及DMSO+EG(D2组)玻璃化冷冻方法,冻存家兔卵巢组织,解冻复苏后,以相应的4组新鲜组织为对照(A1-D1组),做HE染色,行组织形态学分析。结果:A1-D1组始基卵泡的形态正常率分别为90.1%、91.5%、91.8%、92.2%,其相对应的A2-D2组分别下降为67.6%、69.7%、70.5%、80.1%,差异均有统计学意义(P均<0.05)。冷冻组中A2组始基卵泡形态正常率最高,与B2、C2、D2组比,差异有显著性(P<0.05)。C2、D2组间比,差异无显著性(P>0.05)。各冷冻组合并后形态正常率始基卵泡为72.7%,初级卵泡为55.7%,两者比较有统计学差异(P<0.05)。4个冷冻组中均可见卵巢组织结构受损的表现。结论:4种冷冻解冻方法对卵巢皮质中各级卵泡及卵巢组织结构均造成一定程度的损害,使各级卵泡的形态正常率明显下降,卵巢间质细胞连接变得疏松;PROH慢速程序化冷冻法明显优于DMSO法及玻璃化法,较适合卵巢组织中始基卵泡的保存;冻存卵巢组织对初级卵泡的影响大于始基卵泡。

抗冷冻蛋白Ⅲ减少家兔卵巢组织冷冻损伤的效果观察

目的:评价抗冷冻蛋白Ⅲ(AFPⅢ)对玻璃化冷冻家兔卵巢组织的影响。方法:收集家兔卵巢30只,随机分为新鲜卵巢组、添加AFPⅢ玻璃化冷冻组(AFPⅢ终浓度为500 ng/ml)和常规玻璃化冷冻组,各组10只,解冻后分析各组卵巢的组织学结构、卵泡形态正常率、卵巢组织超微结构、卵母细胞凋亡率及卵泡存活率。结果:新鲜卵巢组的卵泡形态正常率(91.6%)、卵泡存活率(81.75%)显著高于两冷冻组(P<0.01),卵母细胞凋亡率(12.0%)显著低于两冷冻组(P<0.01);添加AFPⅢ玻璃化冷冻组卵泡形态正常率(77.5%)、卵泡存活率(45.31%)显著高于常规玻璃化冷冻组(分别为62.1%、37.25%)(P<0.01),卵母细胞凋亡率(25.8%)显著低于常规玻璃化冷冻组(41.2%)(P<0.01)。结论:家兔冷冻卵巢组织的卵泡形态正常率、卵泡存活率显著低于新鲜组织,冷冻保护剂中加入AFPⅢ可减少家兔卵巢组织冷冻损伤。

新型玻璃化冷冻法在人卵巢组织深低温保存的应用

目的:分析新型玻璃化冷冻方法(NIV)与其他冷冻方法在人卵巢组织冷冻中的保存效果。方法:对10例患者的卵巢组织皮质片进行NIV法(NIV组)与程序化慢速冷冻法(慢速冷冻组)、滴入法玻璃化冷冻法(滴入法组)深低温保存,并与未行冷冻的新鲜卵巢组织(新鲜组)进行凋亡检测、组织体外培养和形态学分析、培养液中乳酸脱氢酶(LDH)浓度测定,并进行比较。结果:①新鲜组中正常始基卵泡百分率高于各冷冻组(P<0.01)。正常形态始基卵泡数目在各冷冻组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。②各组卵巢皮质中始基卵泡凋亡发生率:各冷冻组均较新鲜组明显增加(P<0.01);各冷冻组间两两比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。卵巢间质细胞凋亡发生率:各冷冻组较新鲜组明显增加(P<0.01);在各冷冻组间比较,NIV组间质细胞凋亡率较慢速冷冻组和滴入法组明显降低(P<0.05)。③各冷冻组LDH浓度均高于新鲜组(P<0.01)。在各冷冻组间比较,NIV组LDH浓度低于慢速冷冻组和滴入法组(P<0.01)。结论:NIV法较程序化慢速冷冻和滴入法玻璃化冷冻法能更好地保存卵泡周围的间质细胞。

玻璃化冷冻保存对小鼠卵巢组织的影响

目的探讨玻璃化冷冻保存对小鼠卵巢组织内卵泡形态及卵巢组织激素分泌功能的影响。方法将23只4周龄ICR雌鼠随机分为新鲜卵巢组、去势组和玻璃化冷冻组,应用乙二醇(EG)和二甲基亚砜(DMSO)玻璃化冷冻小鼠卵巢组织。冷冻前后取部分小鼠卵巢组织行组织学观察;同时将部分新鲜和复苏组织自体移植入小鼠肾被膜下。移植术后5 d开始观察小鼠的动情周期,术后30d测定小鼠血清雌激素浓度。结果冻融卵巢组织内存活的原始卵泡和初级卵泡与新鲜组织无显著差异(P>0.05);而次级卵泡的存活率显著下降(P<0.01)。移植术后玻璃化冷冻组和新鲜卵巢组小鼠均出现动情周期,两组动情周期出现时间无明显差异(P>0.05)。移植术后第30天两组小鼠血清雌激素浓度无显著差异(P>0.05)。结论玻璃化冷冻法可以较好地保存小鼠卵巢组织内的原始卵泡和初级卵泡,且不影响卵巢组织的激素分泌。

人卵巢组织冷冻保存及应用研究进展

卵巢组织冷冻保存可保留年轻的恶性肿瘤和卵巢早衰患者的生殖内分泌功能。目前常用的冷冻方案包括程序化慢速冷冻和玻璃化冷冻。程序化慢速冷冻技术较成熟,已在多领域广泛应用;玻璃化冷冻是近十多年新发展起来的冷冻技术,有研究报道,其冷冻效果优于前者。冻融后卵巢组织主要用于移植和体外培养。卵巢组织自体移植已用于临床,并有成功分娩的报道;体外培养技术尚不成熟,仍处于研究阶段。文献综述人卵巢组织冷冻保存及其应用的研究进展。

人卵巢组织慢速程序化冷冻保存方案的初步探讨

目的系统比较不同冷冻保护剂在不同浓度时对卵巢组织慢速程序化冷冻效果的影响。方法卵巢组织来源于15例卵巢良性肿瘤手术的患者。分别采用丙二醇(PROH)、乙二醇(EG)、二甲基亚砜(DMSO)作为冷冻保护剂,在每种冷冻保护剂1.5 mol/L或2.0 mol/L浓度下进行慢速程序化冷冻。每例患者平行进行上述6种冷冻程序,光镜及电镜下分析卵泡的形态正常率,结果与该患者的新鲜对照组织比较。结果各组中不同发育阶段的卵泡分布无统计学差异(P>0.05)。光镜观察显示,1.5mol/L EG组及2.0 mol/L EG组的冷冻效果最好,与新鲜对照组织相比卵泡形态正常率无统计学差异(P>0.05);1.5 mol/L PROH组、2.0 mol/L PROH组、1.5 mol/L DMSO组及2.0 mol/L DMSO组与新鲜对照组织相比,卵泡形态正常率的差异有统计学意义(P<0.05)。电镜观察显示,经程序化冷冻后,卵母细胞质量下降,但由于数据少未进行统计分析;与新鲜对照组织相比,6个冷冻组颗粒细胞的活力均明显降低(P<0.01)。形态正常的颗粒细胞数量在2.0 mol/L PROH组及1.5 mol/L EG组中稍高,但6个冷冻组间两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论慢速程序化冷冻采用1.5 mol/L EG作为冷冻保护剂,能较好的保存卵泡中的卵母细胞及颗粒细胞,是一种较好的冷冻卵巢组织的方案。

卵巢组织冷冻保存及其应用

癌症治疗会导致大多数妇女过早绝经和不育。卵巢组织冷冻保存给这些患者带来了新的希望。本文主要综述了目前卵巢组织冷冻保存、冻存卵巢组织应用以及相关问题。

卵巢组织冷冻保存及其应用的研究进展

自从人类精子库建立后 ,现又在探求建立卵子库。近年 ,科学家们试图通过卵巢组织冷冻法建立人类卵巢组织库 ,为女性提供生殖保险。目前 ,卵巢组织的冻存已成为人类生殖工程研究领域的热点之一 ,主要研究方向是卵巢组织冷冻的方法及其冷冻后的使用 ,通过与新鲜标本的对比 ,作出评估。

不同冷冻方案对家兔卵巢组织卵泡细胞增殖活性的影响

目的探讨不同冷冻方案对家兔卵巢组织卵泡细胞增殖活性的影响。方法应用PROH慢速程序化冷冻及DMSO＋EG玻璃化冷冻方案冻存家兔卵巢组织，复苏后机械性分离卵泡，采用^3H标记的胸腺嘧啶核苷掺入试验测定2～5层颗粒细胞包裹的小次级卵泡（小OGC组）及5层以上颗粒细胞包裹的大次级卵泡（大OGC组）的cpm值，并以新鲜组为对照。结果PROH组及DMSO＋EG玻璃化组复苏后形态正常的小OGC的cpm值分别为2554．67±93．59及2510．67±100．03，新鲜对照组为2507．00±25．94，两冷冻组与新鲜组比较，差异无显著性（P＞0．05）；而各大OGC组的cpm值分别为5784．00±188．95、5481．33±112．38及9629．00±265．64，两冷冻组与新鲜组比较，差异有显著性（P＜0.05）；两冷冻组间比较，大OGC及小OGC的cpm值均无显著性差异（P＞0．05）。结论①两种冷冻方法对形态正常的小OGC的细胞增殖活性无明显影响，这些卵泡复苏后体外培养及成熟可能为今后卵巢组织冷冻复苏体外培养的研究方向。②两种冷冻方法使形态正常的大OGC细胞增殖活性受到明显抑制，冷冻复苏可能对颗粒细胞造成了损害。③两种冷冻方法对大小OGC细胞增殖活性的影响相似，其具体机制尚需进一步研究。

卵巢组织冷冻保存和移植的研究进展

卵巢组织冷冻移植作为育龄女性癌症患者保存生育力和恢复内分泌功能的治疗方案之一,发挥着越来越重要的作用,它甚至是青春期女性患者的唯一选择。但是,卵巢组织冷冻移植比较复杂,其过程包括卵巢组织的获取、卵巢组织的冷冻复苏、冻融后的活力检测、复苏后再移植等步骤,而每个步骤又有诸多影响因素,都会影响冷冻保存和移植的效果。本文对卵巢组织冷冻保存和移植的各主要环节进行了论述,并阐述了该技术现存的主要问题及该领域的新进展。

单合子双胎间部分卵巢组织原位移植及冷冻保存

【目的】总结1例单合子双胎间卵巢组织原位移植手术的体会。【方法】卵巢组织受者:单合子双胎之一(姐姐)诊断"卵巢早衰",卵巢组织供者:双胎之二(妹妹)卵巢储备正常,育有一子。2012年2月8日于中山大学附属第六医院生殖医学研究中心分别进行供者卵巢部分组织获取术及卵巢早衰的受者卵巢组织原位移植术。【结果】供者术后月经规则,受者在移植术后108 d恢复月经,术后受者血清卵泡生成素(FSH)和黄体生成素(LH)水平逐渐下降。【结论】异体卵巢组织原位移植可以帮助卵巢早衰患者恢复内分泌功能,并可能恢复其生殖功能。

卵巢组织的冷冻保存方案及影响因素

随着低温生物医学和生殖医学的发展,卵巢组织的冷冻保存成为继胚胎冷冻、卵母细胞冷冻之外保存女性生殖能力又一极具潜力的选择。但目前卵巢组织的冷冻方案还不完善,有许多问题尚未解决。本文就卵巢组织冷冻保存方案及其影响因素进行综述。

卵巢组织玻璃化冷冻保存和移植的研究进展

背景:卵巢组织玻璃化冷冻技术作为一种快速、简便、经济的冷冻方式被逐渐应用于卵巢组织的保存。目的:综述国内外关于卵巢组织玻璃化冷冻保存及移植的研究进展。方法:由第一作者检索1995/2011PubMed数据库及清华同方数据库有关卵巢组织玻璃化冷冻保存以及卵巢组织移植技术等方面的文献。结果与结论:玻璃化冷冻是一个超高速的冷冻过程,形成高黏度的"玻璃样凝固状态",可以避免由于冰晶形成所造成的细胞损伤。但至今玻璃化冷冻仍缺乏统一的标准化程序。影响卵巢组织玻璃化冷冻保存效果的主要因素有卵巢组织块的大小、冷冻保护剂的种类、渗透平衡的时间和温度、冷冻载体等。随着低温生物学的发展和卵巢组织冷冻保存效果的提高,卵巢组织的移植已经具备了一定的临床应用可行性。到目前为止,全世界已有一系列关于冻存卵巢组织移植后成功妊娠及分娩的报道,移植成功的关键在于减少缺血再灌注损伤和促进新生血管的形成。

卵巢组织冷冻保存与移植技术研究进展

目前,保存女性生育力的方法主要有卵母细胞冷冻、胚胎冷冻和卵巢冷冻。对于尚未有配偶的女性患者以及由于法律等因素限制不能进行胚胎冷冻的患者来说,卵母细胞冷冻是较好的选择。但是,目前卵母细胞冷冻技术不够成熟,人类卵子冻存的成功率很低,出生率仅为2%。人类卵母细胞对温度的改变非常敏感,在冷冻和解冻过程中,冷冻暴露时间过长和冰晶形成都容易导致纺锤体去极化,从而导致染色单体分离异常而产生非整倍体,

卵巢组织玻璃化冷冻保存的研究进展

就目前卵巢组织玻璃化冷冻保存的发展状况及影响卵巢冻融成功的因素等几个方面进行综述,并对卵巢组织冷冻保存所存在的问题及今后研究方向提出了自己的看法。

两种冷冻方法对人大块卵巢组织卵泡活性的影响

目的探讨两种冷冻方法冻融人类大块卵巢组织的冷冻效果及对卵泡活性的影响。方法收集15例人卵巢组织,每例修剪成3块卵巢组织(约15 mm×15 mm×2mm),分别随机分配到新鲜对照组(A组)、玻璃化冷冻组(B组)、两步法冷冻组(C组),组织学分析3组卵泡形态学变化,并进行卵巢组织体外培养后测定培养液上清中雌激素、孕激素浓度,免疫组织化学染色测定培养后的卵巢组织细胞核增殖相关抗原Ki67及B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)表达水平,评估卵泡增殖及凋亡活性。结果 A组正常形态卵泡比率(91.9%)显著高于B组(71.3%)和C组(82.9%),差异有统计学意义(P<0.05),C组高于B组,差异有统计学意义(P<0.05)。C组的始基卵泡和初级卵泡的正常形态率分别为86.8%、54.4%,均分别高于B组73.8%、44.4%,差异有统计学意义(P<0.05)。同一时期3组激素测定结果差异不显著(P>0.05)。C组Ki67的阳性率为73%,分别显著高于A组50%和B组55%(P<0.05),A组低于B组(P<0.05)。Bcl-2阳性率,A组为57%和C组61%相比无差异(P>0.05),但B组42%阳性率分别低于A组和C组(P<0.05)。结论人体大块卵巢组织冻融后仍具有活性,并且两步法冻存效果优于玻璃化冷冻法。

人类卵巢组织条厚度对超低温冷冻效果影响的研究

目的 探索不同卵巢组织条厚度对超低温冷冻效果的影响,同时评估卵巢组织的凋亡情况.方法 卵巢组织取自10例手术的妇女.冷冻前行卵巢组织切片,按最小厚度随机分成1.0、0.5、0.25 mm 3组.采用二甲基亚砜（DMSO）为冷冻保护剂的程序慢速冷冻法进行超低温冷冻保存.冻融后进行卵泡计数及各组间正常卵泡形态学分析比较,使用TdT介导的dUTP缺口末端标记技术（TUNEL）进行组织细胞凋亡检测.上述结果与新鲜卵巢组织进行比较.结果新鲜卵巢组中97.6%原始卵泡保持形态学正常,切片厚度为1.0、0.5、0.25 mm三组形态正常率分别为71.1%、73.9%和72.7%,与新鲜组比较,三实验组下降明显,差别有统计学意义（χ2=15.66,P〈0.001）;而三冷冻组间相比差别无统计学意义（χ2=0.153,P=0.926）.TUNEL原位杂交显示窦前卵泡颗粒细胞中未见凋亡阳性信号,窦卵泡中可见散在阳性信号细胞,卵巢间质细胞亦有散在凋亡信号.结论 0.5～1.0 mm厚度卵巢组织为行超低温冷冻保存是较合理厚度,卵泡闭锁的机理值得进一步研究.

卵巢组织玻璃化冷冻研究进展

卵巢组织冷冻是保存女性生殖功能的重要方法之一。近20年来,玻璃化冷冻法作为一种新兴的生物冷冻保存方法,在冷冻人类及动物的卵巢组织中取得了很大进步。相对于传统的程序化冷冻,玻璃化冷冻方法较简单,耗资少。然而,玻璃化冷冻法方案尚无与程序化冷冻方案一样的统一标准。综述国内外新型的玻璃化冷冻方法的研究进展,探讨如何选择合适的冷冻方法。