沈阳地区家庭聚集性感染HBV的家庭HBV前C区基因突变率及其临床意义的研究

目的 研究沈阳地区家庭聚集性感染乙型肝炎病毒的家庭HBV前C区 1896位G→A基因突变率及其临床意义。方法 采用PCR RFLP法检测HBV前C区 1896位G→A基因突变。结果 患者及其家庭成员HBV前C区 1896位G→A基因突变发生率分别为 5 6 .3%和 4 0 .5 % ,明显高于患者配偶 2 5 0 %的突变发生率 ,且配偶中抗 HBs阳性率为 2 6 .3%。同时 ,这种突变在慢性乙型肝炎患者中的发生率为 5 2 .4 % ,在HBV携带者中的发生率为 4 4 .4 % ,在慢性重型肝炎患者中的发生率仅为 2 0 0 %。结论 HBV前C区 1896位G→A基因突变的发生 ,可能与HBV的持续感染有关。

HBV前C/C基因启动子区变异与HBeAg阴性CHB患者肝组织病理变化的关系

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）前C/C基因启动子区变异与HBe Ag阴性慢性乙型肝炎（CHB）患者肝组织病理变化的关系。方法：将2012年4月至2013年12月在广州市第八人民医院住院诊治所有伴肝活检的HBeAg阴性CHB患者71例纳入本项研究,提取血清DNA后通过巢式PCR扩增HBV的S基因区与前C/C基因启动子区并测序分析,Logistic回归分析与显著性肝脏组织学异常相关的病毒性因素指标。结果：基因型B患者组与基因型C患者组比较,显著性肝脏炎症发生率（15.8%vs.27.3%,χ^2=1.398,P=0.237）及显著性肝纤维化发生率（71.1%vs.84.4%,χ^2=1.926,P=0.165）均无显著差异。纳入年龄、性别、HBV基因型以及变异位点（T1753V、A1762T/G1764A、A1846T和G1896A）进行Logistic回归分析,HBV基因的A1762T/G1764A变异与显著性肝脏炎症相关（OR=4.296,P=0.037）,而年龄、性别、基因型和其他位点变异与显著性肝组织病理学改变无显著相关性（均P〉0.05）。结论：HBV前C/C基因区变异可能可作为评估肝组织病理变化的生化指标。

乙肝肝硬化患者HBV前C区和基本核心基因启动子序列分析

用套式PCR(nPCR)对 3 5例肝硬化患者血清HBV前C区和基本核心基因启动子 (BCP)进行扩增 ,阳性者用直接测序法进行序列分析。结果 2 3例HBVDNA阳性 ,阳性率为 65 7% ( 2 3 / 3 5 ) ,无正常序列标本 ,与e抗原产生有关的突变 :nt1762、1764双突变 (AT、GA) ,占 73 9% ( 17/ 2 3 ) ;nt1896点突变 (GA) ,导致终止密码产生 ,占2 1 7% ( 5 / 2 3 ) ;nt185 8点突变 (TC) ,占 2 1 7% ,其中标本 417、42 6、43 0同时在nt 185 6发生点突变 (CT)。其它的突变有nt1799点突变 (CG) ,占 47 8% ( 11/ 2 3 ) ,为无义突变 ;有 6例在nt1846发生点突变AT ,4例nt180 2 - 180 4发生突变 (TTCCGT) ;4例nt175 2位点突变 (AG) ;标本 43 2在nt175 1插入TG导致移码突变 ,并在nt1774- 1874发生缺失突变。说明HBVBCP和前C突变株在肝硬化患者中很常见 。

HBV前C区基因变异与血清肝纤维化标志物的相关性研究

探讨HBV前c区基因变异与肝纤维化的相关性。应用聚合酶链反应-单链构象多肽性分析(PCR-SS-CP)银染技术检测FIBV前C区基因变异和放射免疫法检测血清肝纤维化标志物(血清透明质酸,HA和血清Ⅲ型前胶原肽,PCⅢ)检测103例HBeAg阴性而HBV-DNA阳性的慢性乙肝患者的血清,进行前C区基因变异与血清肝纤维化标志物水平的相关性分析。结果发现,70.87％发生了HBV前C区变异,其中包括变异株与野生株混合感染的病例,而这些病例中的血清肝纤维化标志物(HA、PCⅢ)水平显著高于单纯野生株感染者(P<0.01),HBV前C区基因变异检出率与血清肝纤维化标志物水平呈正相关,提示HBV前C区基因变异与肝纤维化密切相关。

381例HBV感染者HBV DNA前C区基因突变的研究

目的 :研究乙肝病毒前C区基因变异株感染在乙肝病毒感染者中的分布情况 ,探讨其临床意义。方法 :采用PCR -SSCP分析技术对 381例HBV感染者进行HBVDNA前C区基因突变检测。结果 :在不同临床类型的感染者中 ,检出率以肝癌患者最高 (6 6 .7% ) ,其次为慢重肝 (5 0 .0 0 % )、肝硬化 (43 .75 % )和慢性肝炎 (35 .35 % ) ,它们与无症状HBV感染者和急性肝炎患者比较 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 ) ;在ALT明显升高的患者中 ,前C突变的检出率 (34.86 % )明显高于ALT正常者 (2 1.71% )。结论 :HBVDNA前C区基因突变可能与乙型肝炎病变的病程和严重程度有关 ;SSCP方法是检测HBVDNA前C区基因突变较为简便、快速、经济的方法 。

基因芯片检测HBV基因突变的临床意义——81例慢性乙型肝炎患者HBV前C区和BCP区突变的临床资料分析

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)基因组前C区变异和基本核心区启动子(basiccorepromoter.BCP)变异的临床意义以及基因芯片在慢性乙型肝炎(慢乙肝)临床检测中的应用。方法:用基因芯片法检测HBVDNA阳性慢乙肝患者的血清标本,根据HBV血清标志物的实验结果将受试者分为HBeAg(+)组和HBeAg(-)组,比较分析两组患者的临床资料,并根据变异在不同类型慢乙肝患者中的检出状况,以评定HBV前C区和BCP区变异的临床意义。结果:81例血清HBVDNA阳性患者中检出前C区变异51例,突变检出率为63.0%,检出BCP区变异60例,突变检出率为74.1%,其中HBeAg(-)者变异的检出率均明显高于HBeAg(+)者,突变株的检出以慢性重型肝炎最高,其次是慢乙肝重度、中度患者,慢乙肝轻度患者最低,表明HBV前C区突变与病情轻重及e系统血清标志有关,而与性别、年龄无关。结论:基因芯片定量检测HBV基因突变高效可靠,对于判断慢乙肝患者病情轻重、预后好坏和指导用药,具有一定临床参考价值。

原发性肝细胞肝癌患者癌组织和血清中HBV前C区基因的检测

目的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）是原发性肝细胞肝癌（ＨＣＣ）的主要诱导因素之一。为探讨ＨＢＶ在ＨＣＣ中的重要性，我们检测了ＨＣＣ患者癌组织及血清中的ＨＢＶ前Ｃ区基因。方法根据ＨＢＶ前Ｃ区ＤＮＡ序列，采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）对２３例手术切除后病理确诊有ＨＣＣ患者癌组织以及血清进行了检测。结果ＰＣＲ显示２３例ＨＣＣ患者癌组织和血清中ＨＢＶ前Ｃ区基因的阳性率分别为５２．２％（１２／２３）和３０．４％（７／２３）。结论ＨＢＶ前Ｃ区基因广泛存在于ＨＣＣ组织中，其中有２１．８％的ＨＣＣ患者的血清ＨＢＶ前Ｃ区基因为阴性而癌组织中为阳性，提示ＨＢＶ前Ｃ区基因在肝细胞中可能存在整合。

慢性乙型肝炎HBV前C区基因突变的临床研究

采用聚合酶链反应 (PCR)及单链构象多态分析 (SSCP)银染技术检测了 32例HBVDNA阳性慢性乙型肝炎患者及乙肝病毒携带者的前C区基因变异。结果表明有前C区基因突变株感染者 8例 ,突变株感染者检出率为 2 5 .0 % ;突变株的检出率以慢性乙肝重度最高 ,其次是慢性乙肝中度、轻度患者 ,乙肝病毒携带者最低 ;抗 -HBe阳性患者前C区突变株检出率高于HBeAg阳性患者。提示HBV前C区突变与病情轻重及e系统血清标志有关。

整合型HBV DNA前C区突变和p53基因突变与肝细胞癌发生的关系

背景与目的:乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus,HBV)的慢性感染是肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma,HCC)发生的主要危险因素,但其确切的作用机理还不清楚。本研究拟探讨整合型HBV前C区突变、p53基因突变与HCC发生的关系,以期更好地了解HCC发生的分子机理。方法:应用聚合酶链反应技术(PCR)和聚合酶链反应-单链构象多态(singlestrandconformationpolymorphismanalysisofpolymerasechainreactionproducts,PCR-SSCP)技术对28例肝癌组织、25例癌旁肝硬化组织、12例肝硬化组织和15例正常肝组织标本内的整合型HBVDNA及其前C区基因突变和肝细胞p53基因突变进行检测分析。结果:(1)正常肝组织、肝硬化组织、癌旁肝硬变组织和肝癌组织中整合HBVDNA阳性率分别为6.66%、66.67%、96.43%和96.43%,正常肝组织与其它三组间阳性率差异有非常显著性(P<0.005);(2)4组整合型HBVDNA前C区突变率分别为0%、25.00%、48.15%和70.37%,4组间的突变率差异有显著性(P<0.05);(3)肝癌组织的p53基因突变率(57.14%)明显高于肝硬化组(16.67%)(P<0.05);(4)不同肝组织中p53基因突变率与整合HBVDNA阳性率、HBV前C区基因突变率呈正相关。结论:在肝细胞癌的发生、发展中整合HBVDNA及其前C区基因突变和p53基因突变可能起协同作用。

慢性HBV感染者HBV前C区/基本核心启动子区基因突变与临床应用

目的:探讨2010年10月至2013年6月来我院门诊及住院慢性HBV感染者中HBV前C(Pre C)区/基本核心启动子(BCP)区基因突变与其病程进展的相关性。方法:165例慢性HBV感染者血清生化指标检测,血清HBV DNA含量和HBe Ag定性检测,HBV Pre C区/BCP区突变率比较,分析Pre C区l896、BCP区1762/1764变异在HBV携带者(As C)、慢性乙型肝炎(CHB)和慢性乙型肝炎肝硬化(CHB-LC)患者中的分布。结果:血清生化指标在慢性HBV感染者病程发展中呈现相关性。与As C组比较:CHB组、CHB-LC组患者血清ALT、AST、AFP、TBA水平升高,差异有显著性意义(p<0.01),呈显著正相关,而TP、Alb、A/G水平降低,差异有显著性意义(p<0.05),呈负相关。HBe Ag(+)、HBe Ag(-)的标本中,BCP的突变率高于前C区突变率,差异有非常显著性意义。BCP区1762/1764双突变的突变率高于Pre C1896突变率。As C、CHB、CHB-LC 3组患者Pre C A1896、BCP区1762/1764变异率依次升高,与As C组比较,CHB组差异有显著性意义(P<0.05);CHB-LC组差异有非常显著性意义(P<0.01)。结论:对165例慢性HBV感染者观察,HBe Ag(+)/HBe Ag(-)患者及其病程不同发展阶段,Pre C/BCP出现相关联的突变率。特别需要注意的是HBe Ag(-)的慢性HBV感染者BCP区的突变率高于Pre C区的突变率,需要慎防HBV复制的危害性。HBV Pre C区/BCP区突变率可以预测到慢性HBV感染者病情的发展程度,对临床此类患者的研究具有重要意义。

HBV-前C区反义基因真核表达重组质粒电穿孔转染2.2.15细胞转化方案的条件优化

目的 :探索最佳HBV 前C区反义基因真核表达重组质粒电穿孔转染 2 .2 .1 5细胞的转化条件。方法 :构建含HBV 前C区反义基因真核表达重组质粒后 ,通过控制质粒DNA浓度、电压、电容、时间、温度等实验条件进行电转染观察转染细胞生长情况。结果 :在电压 2 1 0V、电容 975uF、温度 4℃、DNA终浓度在 0 .1 2 5μg/μl至0 .75μg/μl之间时 ,细胞转染生长情况最佳。结论 :上述优化实验条件 ,可明显提高HBV 前C区反义基因真核表达重组质粒电穿孔 2 .2 .1

PCR检测HBV前C/C基因启动子区变异与肝细胞癌的关系

目的研究聚合酶链反应(PCR)检测乙型肝炎病毒(HBV)前C/C基因启动子区变异与肝细胞癌(HCC)的关系。方法纳入2016年3月至2018年9月本院35例HCC患者(观察组)与35例HBV感染者(对照组),所有患者均提取血清DNA,采用PCR扩增对HBV前C/C基因启动子区进行测序,对比两组患者基因变异位点和基因型分布。结果观察组HBV前C/C子区24例发生变异,其中G189617例,G18997例,对照组HBV前C/C子区7例变异,其中G18962例,G18995例,两组HBV前C/C子区变异率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。HCC患者基因亚型Ba型7例,C1亚型16例,C2型12例,对照组分别为4例,17例及14例。两组基因分型比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论HBV前C/C基因启动子区变异与HCC发生密切相关,其中HBV前C/C子区G1896变异可增加癌变风险。

慢性乙型肝炎HBV前C区基因突变研究(摘要)

目的:观察HBV前C区变异与患者病情轻重及血清e系统的关系,探讨改进的聚合酶链反应一单链构象多态性分析（PCR—SSCP）银染技术用于筛选HBV前C区突变的可行性和效果。方法:用酚—氯仿抽提法提取血清HBV DNA,根据adr亚型HBV基因核苷酸序列,选择Pre-C起始密码上游及C区保守序列设计引物P1、P2进行聚合酶链反应（PCR）,使全前C基因区段（876p）增幅。

HBV前C区基因变异与肝功能、TNF-α、sIL-2R的关系

探讨HBV前C区基因变异与患者肝功能、TNF-α、sIL-2R的关系。方法:应用海珠益肝胶囊或赛若金治疗36例慢性乙型肝炎患者,在治疗前后检测患者HBV前C区基因变异、肝功能、TNF-α、sIL-2R。结果:HBV前C区基因变异在治疗过程中存在3种情况:16例患者治疗前后均未发生基因变异,8例患者在治疗后发生了基因变异,12例患者在治疗前已经发生基因变异,在治疗后无1例由变异阳性转为阴性。治疗后,患者的肝功能、TNF-α、sIL-2R均有改善。结论:HBV前C区基因发生变异与否对患者的肝功能、TNF-α、sIL-2R无明显影响,在治疗过程中药物可能引起HBV前C区基因变异,难以防治基因变异的发生,药物对HBV基因变异患者的肝功能、TNF-α、sIL-2R均有改善作用。

HBV 家族聚集性感染者 HBV 前 C 区基因突变及临床意义的研究

采用ＭｕｔａｔｉｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃＰＣＲ方法，检测１０例ＨＢＶ家族聚集性感染的乙型肝炎病人及其配偶和家族成员ＨＢＶ前Ｃ区１８９６位基因Ｇ→Ａ突变情况，并探讨其临床意义。结果：病人及家族成员突变发生率分别为７０％（７／１０），６６．６％（１４／２１）；明显高于病人配偶１０％（１／１０）。且配偶中乙肝抗ＨＢｓ阳性率为６０％（６／１０）。同时，这种突变在慢性乙型肝炎发生率较高，为８５．７％（６／７），在ＨＢＶ携带者为４４．４％（８／１８），慢性重症肝炎为３３．３％（１／３）。提示这种突变的发生可能与ＨＢＶ持续感染有关。

南京地区HBV基因型分布及其前C区1896变异的特点

目的探讨南京地区HBV基因型分布及其前C区1896变异的特点.方法随机选择2004年3月～2005年3月南京地区HBV-DNA阳性(荧光PCR)的HBV感染者220例.采用多对型特异性引物PCR法检测HBV基因型,采用特异性引物PCR法检测HBV前C区1896变异株和野生株.结果 HBV感染者中基因型B 71例,基因型C 146例,基因型D 1例,B/C混合型1例,A/B混合型1例,未发现基因型A、E、F存在.有163例HBV感染者发生了前C区1896变异,变异株检出率(单纯变异株/混合变异株)为74.1%.基因型B 78.9%发生了前C区1896变异,基因型C有66.4%发生了C区1896变异,两组比较,差别有显著性意义 (χ2=4.56,P＜0.05).结论南京地区存在HBV基因B、C、D及B+C和 A+B混合型,以B、C型为优势基因型,未发现A、F、E基因型;HBV基因型B前C区1896的变异率较HBV基因型C高.

HBV X 基因及前C区突变对临床的影响

ＨＢＶＸ基因及前Ｃ区突变对临床的影响王志刚毕平安王兆丰王君耀作者单位：３１４０００浙江嘉兴二院（王志刚毕平安王兆丰）浙江医科大学附属邵逸夫医院（王君耀）ＨＢＶ－ＤＮＡ核苷酸负链的长度为３．２ｋｂ，其基因共有６个开放读码框架（ＯＲＦ），主要为Ｓ、Ｃ、Ｐ...