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家蚕中猪细小病毒病毒样颗粒的制备
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作者 吕慧芳 王雅诗 +7 位作者 张刘涛 赵丽 彭志锋 陈忠杰 宋幸辉 王瑞宁 卢婷婷 董望 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第7期20-25,共6页
为了防控猪细小病毒(PPV)感染,本试验利用家蚕杆状病毒表达系统制备PPV病毒样颗粒(VLPs)。首先扩增PPV结构蛋白VP2基因,克隆至pFastBacⅠ载体中,构建转移载体pFastBacⅠ-VP2,将转移载体pFastBacⅠ-VP2转化大肠杆菌制备重组杆粒(Bacmid)... 为了防控猪细小病毒(PPV)感染,本试验利用家蚕杆状病毒表达系统制备PPV病毒样颗粒(VLPs)。首先扩增PPV结构蛋白VP2基因,克隆至pFastBacⅠ载体中,构建转移载体pFastBacⅠ-VP2,将转移载体pFastBacⅠ-VP2转化大肠杆菌制备重组杆粒(Bacmid)。将Bacmid转染家蚕卵巢(BmN)细胞,制备重组杆状病毒。利用Western blot鉴定VP2蛋白的表达,采用透射电子显微镜观察PPV VLPs形态,血凝试验检测PPV VLPs的效价。将含有PPV VP2基因的重组杆状病毒注射家蚕幼虫制备PPV VLPs,并对家蚕中PPV VLPs进行鉴定。结果显示:BmN细胞样品和家蚕幼虫样品的Western blot检测,均可见64 kDa处存在VP2目的条带;在透射电子显微镜下可观察到约23 nm的PPV VLPs。BmN细胞中制备的PPV VLPs的血凝效价为1∶2~6,家蚕中制备的PPV VLPs的血凝效价为1∶2~9,其效价高于BmN细胞中制备的PPV VLPs效价。结果表明,本试验在家蚕中成功制备PPV VLPs,且具有良好的生物学活性,为PPV VLPs疫苗的研发提供了数据支持。 展开更多
关键词 猪细小病毒 病毒样颗粒 VP2 家蚕
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家蚕浓核病病毒和血液型脓病病毒PCR诊断方法的建立及应用
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作者 叶斌 蔡冬冬 +5 位作者 李建岗 范毅 罗毅 刘伽均 胡晓亮 田志革 《四川畜牧兽医》 2024年第2期31-34,共4页
蚕在密集群体饲养条件下极易受病原微生物和其他外界因素的影响而引起各种疾病,其中家蚕血液型脓病病毒、浓核病病毒是导致蚕患病的主要病原。本研究以上述2种病毒为研究对象,建立双重PCR检测方法,结果证实该方法具有检测效率高、特异... 蚕在密集群体饲养条件下极易受病原微生物和其他外界因素的影响而引起各种疾病,其中家蚕血液型脓病病毒、浓核病病毒是导致蚕患病的主要病原。本研究以上述2种病毒为研究对象,建立双重PCR检测方法,结果证实该方法具有检测效率高、特异性强、敏感性高的特点,能够为这两种病毒病的快速诊断提供技术支持。 展开更多
关键词 家蚕 血液型脓病病毒 浓核病病毒 单重PCR 双重PCR
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家蚕对核型多角体病毒病抵抗性及遗传规律的研究 被引量:37
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作者 钱荷英 徐安英 +3 位作者 林昌麒 赵云坡 孙平江 张月华 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期77-79,91,共4页
用几率值分析法和浓度(对数)—死亡率几率关系曲线法,研究家蚕对NPV病毒经口感染的抵抗性遗传规律。结果显示:家蚕对NPV病毒经口感染的抵抗性遗传方式受一对主效基因和若干微效基因控制;杂交后代(F1、F2)对于该病毒的抵抗性有偏父遗传现... 用几率值分析法和浓度(对数)—死亡率几率关系曲线法,研究家蚕对NPV病毒经口感染的抵抗性遗传规律。结果显示:家蚕对NPV病毒经口感染的抵抗性遗传方式受一对主效基因和若干微效基因控制;杂交后代(F1、F2)对于该病毒的抵抗性有偏父遗传现象,杂交一代的抗病性表现出杂种优势。 展开更多
关键词 家蚕 NPV病毒 抵抗性 遗传
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耐家蚕核型多角体病毒病蚕品种“华康2号”的育成 被引量:65
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作者 徐安英 林昌麒 +4 位作者 钱荷英 孙平江 张月华 刘明珠 李龙 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期275-282,共8页
以对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)侵染具有较强耐受力,且综合经济性状优良为家蚕新品种选育目标,选择我国蚕区推广量较大的家蚕品种秋丰和白玉作为受体,用BmNPV耐受性基因载体品种N作供体,采用杂交技术将耐病基因导入受体品种,再用受体品... 以对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)侵染具有较强耐受力,且综合经济性状优良为家蚕新品种选育目标,选择我国蚕区推广量较大的家蚕品种秋丰和白玉作为受体,用BmNPV耐受性基因载体品种N作供体,采用杂交技术将耐病基因导入受体品种,再用受体品种秋丰和白玉分别作回交亲本连续进行4次回交,纯合固定耐病基因,通过系统选育提高、稳定回交后代的综合经济性状,育成对家蚕核型多角体病毒病具有较强耐受性的新品种秋丰N×白玉N(定名为华康2号)。BmNPV对新品种的LC50为2.033×109个/mL,是原系统秋丰×白玉LC50值的12 115倍,新品种的耐病力显著增强。新品种的发育经过及丝质、茧质等主要经济性状与原系统相仿,万头收茧量、万头产丝量分别提高5.5%和9.6%,解舒丝长增加60 m,洁净提高1.1分,达到实用化的水平。 展开更多
关键词 家蚕品种 华康2号 家蚕核型多角体病毒 耐病性 经济性状
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家蚕中肠组织抗核型多角体病毒病的相关蛋白分析 被引量:8
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作者 刘晓勇 陈克平 +2 位作者 姚勤 李军 蔡克亚 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期443-448,共6页
家蚕中肠上皮是病毒经口侵入遇到的第一个组织。昆虫幼虫抵御杆状病毒的感染,可通过选择性的使感染的中肠上皮细胞发生调亡并在释放病毒粒子进入血淋巴之前使感染的细胞从中肠脱落。为研究家蚕抗核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopoled... 家蚕中肠上皮是病毒经口侵入遇到的第一个组织。昆虫幼虫抵御杆状病毒的感染,可通过选择性的使感染的中肠上皮细胞发生调亡并在释放病毒粒子进入血淋巴之前使感染的细胞从中肠脱落。为研究家蚕抗核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopoledrovirus,BmNPV)病的机制,通过对BmNPV高度抗性和高度敏感性的家蚕品系杂交和回交构建了近等基因系。本文对家蚕高抗,敏感及近等基因系5龄起蚕中肠组织的蛋白质表达谱进行了二维电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)分析,并利用基质辅助激光解吸电离飞行时间(matrix-assisted laser desorption/ionization-time of flight,MALDI-TOF)质谱对差异蛋白进行鉴定。结果发现了5个差异表达的蛋白。推测这些蛋白可能与家蚕中肠对BmNPV的抗性或感性有关。 展开更多
关键词 家蚕 中肠 家蚕核型多角体病毒 近等基因系 二维电泳 质谱
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昆虫保幼激素促进家蚕杆状病毒系统的基因表达 被引量:12
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作者 王厚伟 张志芳 +2 位作者 肖庆利 李卫国 何家禄 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期590-593,共4页
th instar silkworms were infected with recombinant baculovirus containing phytase gene or wild type BmNPV at 48hr after ecdysis,then treated with 100ppm Juvenile hormone.It showed that the expression level of phytase ... th instar silkworms were infected with recombinant baculovirus containing phytase gene or wild type BmNPV at 48hr after ecdysis,then treated with 100ppm Juvenile hormone.It showed that the expression level of phytase gene and polyhedrin gene per silkworm was increased by 30% and 40%,respectively.The LT 50 was lengthened for more than 4h,and the average weight of sick silkworm was increased by 10%.The results indicated that the improvement of expression efficiency of phytase gene and polyhedrin gene was mainly caused by longer time of virus replication in silkworm after the treatment of Juvenile hormone. 展开更多
关键词 家蚕 保幼激素 杆状病毒表达系统 表达效率
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乙肝病毒S基因在家蚕细胞及蚕体内高效表达 被引量:12
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作者 周耐明 张颖 +2 位作者 金伟 李载平 吴祥甫 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第3期211-216,共6页
把人乙型肝炎病毒(adr)的表面抗原S基因插入到家蚕核型多角体病毒基因组中,构建了重组病毒BmNPVS。用重组病毒感染家蚕细胞,测得每毫升培养物(1×10^5细胞)HBsAg表达量达35.5ug;感 家蚕幼虫和蛹... 把人乙型肝炎病毒(adr)的表面抗原S基因插入到家蚕核型多角体病毒基因组中,构建了重组病毒BmNPVS。用重组病毒感染家蚕细胞,测得每毫升培养物(1×10^5细胞)HBsAg表达量达35.5ug;感 家蚕幼虫和蛹,经检测表明HBsAg产量平均为每头蚕约750ug,每只蛹约为690ug。初步纯化的表达产物经Western blotting和电镜观察证实,表达产物是直径为22nm的颗粒。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 表面抗原 基因表达 家蚕 基因工程
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gp64基因相应dsRNA对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)增殖的抑制 被引量:9
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作者 夏定国 张国政 +2 位作者 王文兵 赵巧玲 唐顺明 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期2882-2887,共6页
【目的】研究gp64基因相对应的多个dsRNA对家蚕核型多角体病毒增殖的抑制效果。【方法】体外合成dsRNA,通过病毒滴度试验、实时定量RT-PCR法研究gp64基因的不同区域、不同长度与RNAi干扰效果的关系。【结果】供试的6个dsRNA的最大抑制... 【目的】研究gp64基因相对应的多个dsRNA对家蚕核型多角体病毒增殖的抑制效果。【方法】体外合成dsRNA,通过病毒滴度试验、实时定量RT-PCR法研究gp64基因的不同区域、不同长度与RNAi干扰效果的关系。【结果】供试的6个dsRNA的最大抑制效果相当(滴度TCID50的最大抑制差值为4.00左右);经RNAi的不同时间点的gp64mRNA表达水平均明显下调(P<0.01),其中48h的gp64mRNA的表达量约为对照的1/300。【结论】6个dsRNA均能有效地抑制病毒的基因表达和增殖;gp64ORF第1390~1499位点(G3-3)是RNAi的较佳靶位点。 展开更多
关键词 双链RNA 家蚕核型多角体病毒 gp64基因 病毒滴度 实时定量RT-PCR
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ie-1和lef-1基因dsRNA表达元件转染及转化细胞对家蚕核型多角体病毒增殖的抑制 被引量:7
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作者 薛仁宇 曹广力 +3 位作者 王崇龙 刘波 沈卫德 贡成良 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期250-256,共7页
通过RNAi介导可以抑制病毒增殖,将相应的RNAi元件通过转基因转入宿主有可能使宿主对病毒产生一定的抗性。根据家蚕核型多角体病毒(BmNPV)基因组中的病毒复制必需基因ie-1、lef-1设计相应的RNA干扰区段,并构建相应的转基因载体转入家蚕Bm... 通过RNAi介导可以抑制病毒增殖,将相应的RNAi元件通过转基因转入宿主有可能使宿主对病毒产生一定的抗性。根据家蚕核型多角体病毒(BmNPV)基因组中的病毒复制必需基因ie-1、lef-1设计相应的RNA干扰区段,并构建相应的转基因载体转入家蚕BmN细胞中,瞬时表达结果显示转染了转基因RNAi载体的BmN细胞均对BmNPV有一定的抑制作用。IE dsRNA在病毒滴度为10-4时有抑制作用,在病毒滴度为10-5时有比较好的作用;LEF dsRNA则在病毒滴度为10-5时有抑制作用,在病毒滴度为10-6时有较好的抑制作用。通过转基因及G418筛选后,转基因IE dsRNA细胞在病毒滴度为10-4显示出一定的抑制作用,在病毒滴度为10-5表现了明显的抑制作用;而转基因LEF dsRNA细胞在病毒滴度为10-5有一定的抑制作用,但只维持了一个时段。 展开更多
关键词 RNA干扰 转基因 家蚕核型多角体病毒 家蚕细胞 ie-1基因 lef-1基因
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dsRNA对家蚕核型多角体病毒复制增殖的抑制效果 被引量:11
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作者 夏定国 张国政 +5 位作者 王文兵 赵巧玲 沈兴家 唐顺明 张业顺 韦亚东 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期206-210,共5页
以家蚕核型多角体病毒(BmNPV)复制必需的极早期基因ie-1和细胞释放型病毒CRV入侵关键基因gp64为靶序列,分别人工设计并体外转录出dsRNA I1(438 bp)和dsRNA G1(337 bp),用家蚕培养细胞BmN研究目标dsRNA对BmNPV复制、增殖的抑制效果。结... 以家蚕核型多角体病毒(BmNPV)复制必需的极早期基因ie-1和细胞释放型病毒CRV入侵关键基因gp64为靶序列,分别人工设计并体外转录出dsRNA I1(438 bp)和dsRNA G1(337 bp),用家蚕培养细胞BmN研究目标dsRNA对BmNPV复制、增殖的抑制效果。结果表明:dsRNA I1能有效地抑制BmNPV在BmN细胞中的增殖,最大抑制效果使培养液中的病毒滴度(TC ID50)比对照降低了104.30倍;dsRNA G1能显著地抑制新形成的病毒粒子的细胞侵染能力,最高可使培养液中的病毒滴度降低103.17倍。 展开更多
关键词 双链RNA RNA干扰 家蚕核型多角体病毒 复制 增殖
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家蚕浓核病毒BmDNV-3(中国株)VD_1基因组结构与转录分析 被引量:7
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作者 王永杰 姚勤 +1 位作者 陈克平 韩序 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期707-712,共6页
为了进一步认识家蚕浓核病毒BmDNV-3(中国株)VD1基因组的结构和功能,VD1被分离、纯化、克隆到pUC119载体上,完成了基因组全序列的测定。序列分析显示VD1基因组全长为6543个核苷酸,末端拥有224个核苷酸反向重复序列(ITRs)。VD1基因组正... 为了进一步认识家蚕浓核病毒BmDNV-3(中国株)VD1基因组的结构和功能,VD1被分离、纯化、克隆到pUC119载体上,完成了基因组全序列的测定。序列分析显示VD1基因组全长为6543个核苷酸,末端拥有224个核苷酸反向重复序列(ITRs)。VD1基因组正链含有3个大的开放阅读框(ORF1-3),负链含有1个大的开放阅读框(ORF4)。比较BmDNV-3的VD1和BmDNV-2(Yamanashiisolate)的VD1基因组全序列,两者同源性为98.4%,并且有107个碱基的替代和1个碱基插入,氨基酸突变集中在VD1ORF3和VD1ORF4。Northern杂交结果显示VD1的左边正链上有1.1kb和1.5kb两个转录本,右边的负链上有一个3.3kb转录本。3′和5′-RACE结果显示1.1kb转录本开始于nt290,结束于nt1437;1.5kb转录本开始于nt1423,结束于nt2931;3.3kb转录本开始于nt6287,结束于nt2922。正链上1.5kb转录本和负链上3.3kb转录本拥有10个核苷酸的3′端的共同序列。研究结果显示该病毒基因转录与已报道的其它浓核病毒存在较大的差异性。 展开更多
关键词 家蚕浓核病毒 序列分析 转录分析
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家蚕核型多角体病毒P10基因的克隆及核苷酸序列分析 被引量:7
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作者 张耀洲 张颖 +2 位作者 吴祥甫 吕鸿声 李载平 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1992年第3期280-282,共3页
杆状病毒P10基因与多角体蛋白基因一样,都是由强启动子控制的高效表达晚期基因,且非病毒复制所必需,故在构建杆状病毒载体表达系统方面受到研究工作者的重视。苜蓿尺蠖核多角体病毒(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus,... 杆状病毒P10基因与多角体蛋白基因一样,都是由强启动子控制的高效表达晚期基因,且非病毒复制所必需,故在构建杆状病毒载体表达系统方面受到研究工作者的重视。苜蓿尺蠖核多角体病毒(Autographa californica nuclear polyhedrosis virus,AcMNPV)和黄杉毒蛾核型多角体病毒(Orgyia pseudotsugate nuclear polyhedrosis virus,OpMNPV) 展开更多
关键词 核苷酸序列 核多角体病毒 家蚕
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禽马立克氏病毒糖蛋白B基因在家蚕中的表达 被引量:7
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作者 肖庆利 季平 +3 位作者 何家禄 崔治中 秦爱建 吴祥甫 《蚕业科学》 CAS CSCD 1997年第2期104-108,共5页
将马克克氏病毒(Marek'sdiseasevirus,MDV)糖蛋白B(gB)基因克隆入转移载体pBac-PAK8中,得到重组转移载体质粒pBacPAK(gB)。经限制性酶切图谱结合Southernblot分析鉴定表明,gB基因以正确方向插入转移载体,受多角体蛋白基... 将马克克氏病毒(Marek'sdiseasevirus,MDV)糖蛋白B(gB)基因克隆入转移载体pBac-PAK8中,得到重组转移载体质粒pBacPAK(gB)。经限制性酶切图谱结合Southernblot分析鉴定表明,gB基因以正确方向插入转移载体,受多角体蛋白基因启动子控制。将此转移载体与经CvnI酶切线性化的亲本病毒Bm-BacPAK6DNA通过脂质体法共转梁家蚕细胞,只有发生重组的病毒才有复制增殖的能力。然后通过蓝白斑筛选、结合点杂交,纯化得到重组的空斑病毒vBM,用该重组病毒接种家蚕5龄幼虫,对表达产物进行SDS-PAGE分析,检测到gB基因在家蚕中高效表达,表达产物的分子量主要为97KD,表达量约为1mg/mL血淋巴。 展开更多
关键词 马立克氏病毒 家蚕 核型多角体病毒 基因表达
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家蚕核多角体病毒解链酶基因的克隆及部分序列分析 被引量:11
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作者 张志芳 张颖 +1 位作者 吕鸿声 吴祥甫 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第4期381-383,共3页
家蚕核多角体病毒解链酶基因的克隆及部分序列分析张志芳,张颖,吕鸿声,吴祥甫(中国科学院上海生物化学研究所上海200031)关键词家蚕核多角体病毒(BmNPV),解链酶基因,限制性内切酶谱家蚕核多角体病毒(BmNPV)... 家蚕核多角体病毒解链酶基因的克隆及部分序列分析张志芳,张颖,吕鸿声,吴祥甫(中国科学院上海生物化学研究所上海200031)关键词家蚕核多角体病毒(BmNPV),解链酶基因,限制性内切酶谱家蚕核多角体病毒(BmNPV)是杆状病毒A亚组单粒包埋型的代表种... 展开更多
关键词 基因克隆 解链酶基因 家蚕 核型多角体病毒
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荧光定量PCR分析不同家蚕品种对质型多角体病毒(BmCPV)的感染抵抗性 被引量:5
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作者 吴萍 钱荷英 +4 位作者 徐安英 陈涛 侯启瑞 郭锡杰 李龙 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期289-294,共6页
根据家蚕质型多角体病毒(BmCPV)的多角体蛋白基因保守序列设计特异性引物,建立家蚕质型多角体病毒的实时荧光定量PCR检测方法,并应用于检测分析该病毒在蚕体内的增殖规律和筛选抵抗性强的家蚕品种资源。运用该方法检测分析BmCPV感染不... 根据家蚕质型多角体病毒(BmCPV)的多角体蛋白基因保守序列设计特异性引物,建立家蚕质型多角体病毒的实时荧光定量PCR检测方法,并应用于检测分析该病毒在蚕体内的增殖规律和筛选抵抗性强的家蚕品种资源。运用该方法检测分析BmCPV感染不同家蚕品种4龄起蚕后的动态增殖变化:大多数品种的幼虫感染BmCPV后24 h,中肠组织中的病毒已开始复制,感染后48~96 h病毒的增殖急速上升,至96 h达到高峰,感染后120 h病毒多角体蛋白基因的表达量显著下降。基于实时荧光定量PCR的检测结果分析显示家蚕品种间对BmCPV的抵抗性差异很大,10个供试品种中,热带多化性品种7005及热带二化性品种P50的抵抗性最强,欧系一化性品种4008和4017的抵抗性最弱。 展开更多
关键词 家蚕质型多角体病毒 感染增殖 荧光定量PCR 家蚕品种 抵抗能力
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家蚕病毒的表面增强拉曼光谱研究 被引量:5
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作者 刘新民 黄天荃 +2 位作者 鲍培谛 伍铁桥 唐聘芳 《生物物理学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第1期29-34,共6页
得到并分析了家蚕核型多角体病毒(BombyxmoriNoclearPolyhedrosisVirus缩写为BmNPV)和质型多角体病毒(BombyxmoricytoplasmicPolyhedrosisVirus缩写... 得到并分析了家蚕核型多角体病毒(BombyxmoriNoclearPolyhedrosisVirus缩写为BmNPV)和质型多角体病毒(BombyxmoricytoplasmicPolyhedrosisVirus缩写为BmCPV)包涵体(即核型多角体BmNPB和质型多角体BmCPB)在银胶溶液中的表面增强拉曼散射(SERS)光谱。BmNPB和BmCPB通过氨基酸残基侧链的S原子、COO-(COOH)和NH2(NH)基团以及蛋白质分子的N-末端与银表面相作用。Trp残基金部或大部处于疏水环境中。BmNPB中蛋氨酸残基侧链的S-CH2和CH2-CH2链分别为扭曲和扭曲式构型。BmCPB中的S-CH2和CH2-CH2链则分别属于反式和扭曲构型;C-C-S-S-C-C链为反式-扭曲-反式结构。 展开更多
关键词 表面增强 拉曼散射光谱 家蚕病毒 昆虫病毒
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家蚕对浓核病毒中国(镇江)株抵抗性机制的初步研究 被引量:5
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作者 裘智勇 李木旺 +3 位作者 覃光星 刘挺 沈兴家 郭锡杰 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期596-601,共6页
通过生物测定和地高辛(DIG)标记的酶联免疫吸附剂测定(ELISA),初步分析了家蚕对浓核病毒中国(镇江)株(Bombyxmori densovirus,BmDNV-z)的抵抗性机制。试验表明:供试家蚕品种的消化液、血液中均不存在对BmDNV-z侵染性有影响的蛋白因子;... 通过生物测定和地高辛(DIG)标记的酶联免疫吸附剂测定(ELISA),初步分析了家蚕对浓核病毒中国(镇江)株(Bombyxmori densovirus,BmDNV-z)的抵抗性机制。试验表明:供试家蚕品种的消化液、血液中均不存在对BmDNV-z侵染性有影响的蛋白因子;抵抗性家蚕品种的中肠组织蛋白中不存在BmDNV-z的病毒受体蛋白,而感受性家蚕品种的中肠组织蛋白中可能存在对BmDNV-z侵染性有影响的蛋白因子,即感受性家蚕品种的中肠组织中可能存在BmDNV-z的病毒受体蛋白因子,且BmDNV-z与感受性家蚕品种中肠组织蛋白的结合具有组织特异性。 展开更多
关键词 家蚕 中肠组织 抵抗性 浓核病毒
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基于DNA载体的RNAi抑制家蚕核型多角体病毒复制 被引量:12
18
作者 薛仁宇 曹广力 +3 位作者 王崇龙 沈卫德 魏育红 贡成良 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期362-367,共6页
基于DNA载体的RNA i技术可以较长时间高效地抑制基因的活性。利用家蚕核型多角体病毒ie-1基因启动子,构建了在细胞内能转录形成与ie-1基因+19^+446区域互补同源的发夹状dsRNA的RNA i DNA载体。研究结果表明,该载体DNA在体外、体内均能... 基于DNA载体的RNA i技术可以较长时间高效地抑制基因的活性。利用家蚕核型多角体病毒ie-1基因启动子,构建了在细胞内能转录形成与ie-1基因+19^+446区域互补同源的发夹状dsRNA的RNA i DNA载体。研究结果表明,该载体DNA在体外、体内均能较好地抑制家蚕核型多角体病毒在细胞中的复制。 展开更多
关键词 DNA载体 RNA干涉 家蚕核型多角体病毒 极早期基因
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家蚕Polh^+ Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的构建 被引量:7
19
作者 曹翠平 兰丽盼 +3 位作者 姚慧鹏 何芳青 郭爱芹 吴小锋 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期237-243,共7页
为利用杆状病毒的强启动子——多角体启动子而构建的重组杆状病毒一般是多角体缺失型(polh-)病毒。为了解决家蚕生物反应器规模化生产中病毒必需经皮接种而效率低下的问题,在建立家蚕Bac-to-Bac快速表达系统的基础上,构建了能形成多角... 为利用杆状病毒的强启动子——多角体启动子而构建的重组杆状病毒一般是多角体缺失型(polh-)病毒。为了解决家蚕生物反应器规模化生产中病毒必需经皮接种而效率低下的问题,在建立家蚕Bac-to-Bac快速表达系统的基础上,构建了能形成多角体的家蚕Polh+ Bac-to-Bac表达系统。通过该系统能够产生表达外源目的基因的重组病毒,获得的该重组病毒能在培养细胞内表达,也能通过经口添食感染表达。利用EGFP报告基因分析了该系统的表达效果,构建的重组病毒不仅有效表达了EGFP蛋白,还在细胞核中形成了大量多角体。该系统较好解决了重组病毒必需经皮接种感染的缺陷,提高了生产效率,拓宽了杆状病毒在生物杀虫剂、基因治疗等领域的应用前景。 展开更多
关键词 家蚕 杆状病毒表达系统 多角体 经口感染
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家蚕核型多角体病毒云南株(Bm NPV-YN1)对不同龄期家蚕的侵染致病效应 被引量:6
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作者 唐芬芬 陈松 +3 位作者 邵榆岚 朱峰 张永红 白兴荣 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期692-697,共6页
家蚕核型多角体病毒(BmNPV)是主要的家蚕病毒病病原之一,由其侵染家蚕引发的家蚕核型多角体病(血液型脓病)严重影响云南的蚕业生产。测定分离自云南蚕区的BmNPV株系(BmNPV-YN1)对家蚕1~5龄幼虫的毒力,并运用“时间-剂量-死亡率”模型模... 家蚕核型多角体病毒(BmNPV)是主要的家蚕病毒病病原之一,由其侵染家蚕引发的家蚕核型多角体病(血液型脓病)严重影响云南的蚕业生产。测定分离自云南蚕区的BmNPV株系(BmNPV-YN1)对家蚕1~5龄幼虫的毒力,并运用“时间-剂量-死亡率”模型模拟分析该病毒株对家蚕各龄幼虫的感染致病力。结果表明,以浓度为1×10^8~1×10^5mL^-1的BmNPV-YN1多角体悬液添食处理后,家蚕各龄幼虫的感病死亡率随添食病毒多角体悬液浓度的降低而下降,添食1×10^7mL^-1BmNPV多角体悬液后第7天,家蚕1~5龄幼虫的累积死亡率分别为100%、76.67%、72.22%、56.67%和26.67%。BmNPV-YN1对家蚕幼虫的致病力与龄期相关,其敏感程度从高到低排序依次为1龄、2龄、3龄、4龄、5龄。用BmNPV-YN1多角体悬液添食家蚕1~5龄幼虫后第7天,致死中浓度(LC50)估计值分别为4.78×10^4mL^-1、5.38×10^5mL^-1、2.22×10^6mL^-1、7.95×10^6mL^-1和3.92×10^8mL^-1。在1×10^8~1×10^5mL^-1浓度范围内,BmNPV-YN1对家蚕幼虫的致死中时(LT50)与添食浓度相关,对1~4龄幼虫的LT50值随着BmNPV-YN1添食浓度的降低而增加。研究结果表明,BmNPV-YN1对家蚕具有较强的侵染致病效应,提示云南蚕区对血液型脓病的防控应以小蚕期为主,同时密切关注各龄期的眠初期。 展开更多
关键词 家蚕 家蚕核型多角体病毒 时间—剂量—死亡率模型
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