家蚕蛹人工培养巴西虫草研究

从广东省采集的巴西虫草（ＣｏｒｄｙｃｅｐｓｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓＨｅｎｎ），经分离提纯后给家蚕蛹接种，成功地培养出巴西虫草，提出了家蚕蛹人工培养巴西虫草的方法。人工培养巴西虫草的麦角甾醇、甘露醇、腺苷、氨基酸、微量元素等的含量与冬虫夏草（Ｃｏｒｄｙｃｅｐｓｓｉｎｅｓｉｓ（Ｂｅｒｋ．）Ｓａｃｃ）相近。有提高实验动物免疫功能、降低血清胆固醇等药理作用。

家蚕蛹巴西虫草多糖的分离纯化及其组成的初步分析

以家蚕蛹巴西虫草(Cordyceps brasiliensis Henn.)为材料提取水溶性多糖,并采用DEAE-52和Sephadex G-100柱色谱进行了分离纯化,获得了BCPS-1和BCPS-2两种多糖。BCPS-1多糖主要由葡萄糖、山梨糖、半乳糖和甘露糖组成;BCPS-2多糖主要由葡萄糖和山梨糖组成。两种多糖均为白色粉末,不溶于氯仿、丙酮等有机溶剂及高浓度乙醇,其相对分子量分别为41000和33000。

家蚕蛹甲壳素精制工艺的研究及产品质量检测

为制备高品质甲壳素衍生物,研究了利用家蚕蛹皮制备甲壳素的最佳工艺条件：将家蚕蛹皮用3%HCl在30℃条件下浸泡22 h,再用5%NaOH在85℃条件下水浴4 h,然后用10%H2O2于85℃下加热脱色0.5 h。上述工艺制备的甲壳素为白色片状或粉状固体,甲壳素提取率为32%,水分含量为5%～10%,灰分含量为0.63%～0.81%,含氮量为5.86%～6.02%。产品质量指标达到食品级标准。

家蚕蛹脂肪酸成分的气相色谱-质谱联用分析

家蚕蛹脂肪酸对人体具有多种药理作用。采用有机溶剂提取家蚕不同杂交组合、不同性别的蛹脂肪酸,经甲酯化后用气相色谱-质谱联用法(GC-MS)对脂肪酸成分进行鉴定分析。结果表明:月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈烯酸、软脂酸、α-亚麻酸、硬脂酸为5个家蚕杂交组合的蛹脂肪酸共有成分,其中相对含量最丰富的是α-亚麻酸;在G1白×C108和C108×大造(雄性)的蛹脂肪酸中检测出壬醛酸;在菁松×M-2的蛹脂肪酸中新检测出9-十二碳烯酸;壬醛酸、月桂酸、9-十二碳烯酸为首次从蚕蛹脂肪酸中检测出的成分。

家蚕蛹壳聚糖复合海绵止血材料的制备及止血性能测试

以从家蚕蛹壳中提取的壳聚糖为主要原料,与明胶共混溶解后加入助剂,通过冷冻真空干燥法制备海绵状复合止血材料。采用L16(45)正交试验,探讨复合止血材料中蚕蛹壳聚糖、明胶以及戊二醛、氯化钙和甘油等助剂的含量对体外凝血指数(BCI)的影响。各因素对BCI的影响大小顺序是:蚕蛹壳聚糖>氯化钙>戊二醛>明胶>甘油。优化复合止血材料中各组分的质量分数为:蚕蛹壳聚糖2.5%,明胶3.0%,戊二醛0.005%,氯化钙0.1%,甘油0.05%。对该复合止血材料进行体外凝血测试,并制作家兔耳动脉出血模型进行活体止血效果的试验,结果均表明其具有良好的止血效果,体外凝血指数较医用纱布和明胶海绵极显著下降,对缩短家兔耳动脉止血时间和降低出血量均极显著优于医用纱布和明胶海绵。

家蚕蛹油对大鼠肝脏脂质代谢及相关酶活性的影响

以不饱和脂肪酸含量达68%的家蚕蛹油为原料,喂食正常大鼠和高脂模型大鼠,检测大鼠肝脏总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、丙二醛浓度及脂蛋白脂酶和肝脂酶活性,研究蚕蛹油对大鼠肝脏脂质代谢及其相关酶活性的影响。结果表明:家蚕蛹油能显著降低大鼠肝脏组织总胆固醇、甘油三酯的含量,增加高密度脂蛋白胆固醇含量,降低肝脏致动脉粥样硬化指数和脂质过氧化产物丙二醛含量;显著提高脂蛋白脂酶和肝脂酶活性。上述结果说明家蚕蛹油具有调节大鼠肝脏脂质代谢、降低血脂的功效。

家蚕蛹虫草水溶性多糖CC_(1-1)的分子结构研究

利用高效液相色谱(HPLC)分离纯化家蚕蛹虫草菌丝体多糖获得单一组分CC1-1,通过离子色谱分析(IC)及红外光谱(IR)、核磁共振(NMR)鉴定,确定该多糖是由D-吡喃-半乳糖、D-吡喃-葡萄糖、D-吡喃-甘露糖按1∶2.81∶1.28的摩尔比经β-糖苷键连接的一种酸性多糖,内含硫酸酯基、乙酰氨基结构,其—OH形成分子内氢键。研究结果有助于进一步探讨家蚕蛹虫草多糖的药理学活性。

碱性蛋白酶酶解家蚕蛹蛋白过程中的产物抑制效应研究

测定碱性蛋白酶(alcalase)酶解家蚕蛹蛋白过程中不同水解度产物对酶解反应的抑制率,并通过Lineweaver-Burk双倒数曲线作图和紫外光谱分析,初步探讨酶解产物对碱性蛋白酶酶解反应的抑制机制。检测结果表明碱性蛋白酶酶解家蚕蛹蛋白的过程中存在产物抑制作用:当酶解产物水解度<9.2%时,其对酶解反应的抑制率随着水解度的增大而增大;酶解产物水解度>9.2%时,对酶解反应的抑制率则保持稳定。利用超滤膜和葡聚糖凝胶G-50从酶解产物中分离出具有强抑制作用的组分2,当其在酶解反应体系中的质量浓度达到2.0 mg/mL时,对酶解反应的抑制率为18.6%,且对碱性蛋白酶酶解反应呈现混合抑制模式。初步推测,当酶解产物组分2与碱性蛋白酶作用后,使酶蛋白分子发生折叠,其结构改变,从而导致对家蚕蛹蛋白的酶解效率下降。

超声波辅助提取家蚕蛹虫草子实体多糖的工艺条件优化

为建立高效提取家蚕蛹虫草多糖的工艺技术,以家蚕蛹虫草子实体为原料,用超声波辅助法提取蛹虫草多糖,考察料液质量浓度、提取时间和超声波功率3个因素对多糖提取率的影响,并采用响应面分析法优化提取工艺条件。在超声波频率40 kHz的条件下,超声波辅助提取家蚕蛹虫草子实体多糖的最佳工艺条件为:料液质量浓度0.023 2 g/mL,提取时间39.8min,超声波功率103 W。在此工艺条件下,家蚕蛹虫草子实体多糖提取率的预测值为8.20%,实测值为8.15%,比传统热水浸提法的提取率提高了1.08个百分点。扫描电子显微镜观察提取多糖后的蛹虫草子实体残渣颗粒的排列更为疏松,有较多的中空结构,表明采用超声波辅助提取更有利于家蚕蛹虫草子实体多糖的溶出。

家蚕蛹蛋白酶解产物对肿瘤细胞MGC-803的增殖抑制活性鉴定

以不同蛋白酶酶解制备家蚕蛹蛋白酶解产物（SPPHs）,采用MTT比色法检测其对人胃腺癌细胞MGC-803的增殖抑制活性。不同蛋白酶酶解制备SPPHs对MGC-803的增殖抑制作用存在显著差异（P〈0.05）,其中家蚕蛹蛋白以Alcalase 2.4L酶解的产物（AH）对MGC-803的增殖抑制活性最高,当AH的质量浓度为0.25 mg/m L时,水解度（DH）=25%的AH的抑制活性最高,对MGC-803细胞的增殖抑制率可达到92.74%。Alcalase2.4L酶解家蚕蛹蛋白产物的分子质量也显著影响其对MGC-803细胞的增殖抑制活性,其中分子质量〈5 k D组分的抑制率高达91.13%,将该组分经葡聚糖（G-25）凝胶层析后分离出4个组分（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ）,组分Ⅱ对MGC-803细胞的增殖抑制率最高（27.5%）,但与未分离样品相比,抑制效率显著降低,而其他3个分离组分则无抑制作用。研究结果提示,蚕蛹蛋白酶解产物对肿瘤细胞的体外增殖有抑制作用,并且这种抑制作用可能是由多种组分协同完成。

家蚕蛹虫草菌丝体水提物对CCl4诱导小鼠肝脏和免疫功能损伤的保护作用

为发掘家蚕蛹虫草的药用价值,研究家蚕蛹虫草菌丝体水提物对CCl4诱导的小鼠肝脏及免疫功能损伤的保护作用。将ICR雄性小鼠随机分为正常对照组、模型组和家蚕蛹虫草菌丝体水提物低、高剂量组[0.2、0.4 g/(kg.d)],除正常对照组外各组均按剂量30 mg/kg腹腔注射CCl4造模。测定各组小鼠血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)活性和免疫因子白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)的水平,结果表明家蚕蛹虫草菌丝体水提物可极显著提高模型小鼠血清中的IL-2、IFN-γ水平(P<0.01),并极显著降低AST、ALT活性及TNF-α含量(P<0.01)。研究结果显示家蚕蛹虫草菌丝体水提物对CCl4诱导的肝损伤具有明显的保护作用,并通过促进IL-2、IFN-γ的分泌,进而降低TNF-α的水平,调节CCl4模型小鼠的免疫功能,这也是其发挥抗肝脏纤维化作用的机制之一。

家蚕蛹虫草子实体及大米培养基多糖的提取和纯化

[目的]为家蚕蛹虫草大米培养基的应用和提高养蚕业的综合经济效益提供基础数据。[方法]分别对家蚕蛹虫草子实体及其大米培养基残基进行脱脂、热水浸提、脱蛋白、醇沉、干燥后得到粗多糖,用同种方法提取、纯化,并比较提取、纯化结果。[结果]家蚕蛹虫草子实体提取粗多糖得率为25.75%,培养基为12.85%。家蚕蛹虫草子实体和培养基粗多糖经DEAE-纤维素柱纯化,得到相似单一峰;家蚕蛹虫草子实体多糖的洗脱峰部分多糖含量占上样多糖总量的82%;培养基多糖的洗脱峰部分多糖含量占上样多糖总量的74%。两者所含多糖类似,大米培养基粗多糖得率较低,可不提取,有直接作为添加剂等生产应用价值。[结论]家蚕蛹虫草大米培养基可以作为一种新型添加剂加入饲料或调味品酿制原料中。

采用微波消解结合ICP-MS法定量检测家蚕蛹和柞蚕蛹中的12种金属元素

蚕蛹是极富营养价值的昆虫食品资源。建立精准、快速、稳定检测蚕蛹中金属元素的技术,是完善蚕蛹质量检测与食用安全风险评估技术体系的一个重要组成部分。采用HNO3＋H2O2体系对家蚕蛹和柞蚕蛹样品进行微波消解,再结合电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）法,测定11份家蚕蛹样品和2份柞蚕蛹样品中钾、钠、镁、钙、铁、锌、锰、镍、铜、铷、镉、铅等12种金属元素的含量。在优化的仪器工作条件下,12种元素的检出限为0.02~66.41μg/L,相对标准偏差均〈3.87%,加标回收率在87.1%~107.7%之间。检测结果表明家蚕蛹和柞蚕蛹中均含有丰富的钾、钠、钙、镁、铁、锌、铜、锰等对人体有益的元素,有害元素镉的含量均较低,但有2个柞蚕蛹样品和2个家蚕蛹样品中的铅含量较高。检测方法学验证试验表明,微波消解结合ICP-MS法具有良好的准确度和精密度,能满足对蚕蛹样品中常量元素和微量元素同时检测的需要;对11份家蚕蛹样品和2份柞蚕蛹样品的检测结果初步提示,一些家蚕和柞蚕饲养区在一定程度上受到了重金属铅的污染。

家蚕蛹虫草的化学成份分析

分析表明 :家蚕蛹虫草含有虫草酸、虫草素、腺嘌呤、尿嘧啶、β 谷甾醇、麦角甾醇、生物碱和多种游离基酸 ,其化学成份的种类与冬虫夏草基本类似 ,但虫草素、腺嘌呤的含量是冬虫夏草的 3倍。氨基酸分析表明 :家蚕蛹虫草子实体中氨基酸含量高于蛹体部分 ,特别是Glu、Lys ,而Gly则明显低于蛹体部分。比较家蚕蛹虫草与蛹虫草菌粉的化学成份可知 :炽灼残渣、重金属、总氮量和腺嘌呤的含量家蚕蛹虫草高于蛹虫草菌粉 ;总糖、腺苷、甘露醇的含量低于蛹虫草菌粉。稳定性试验表明

利用Balb/c小鼠构建家蚕蛹食物过敏模型的研究

利用Balb/c小鼠构建家蚕蛹过敏模型并研究其致敏作用。48只雌性Balb/c小鼠分别用灌胃和皮下注射家蚕蛹蛋白的方法进行致敏。小鼠致敏后通过尾静脉注射伊文斯蓝考察其对血管通透性的影响;光镜和扫描电镜下观察致敏小鼠空肠组织的病理切片;测定血清中IgE、组胺、IFN-γ、IL-4和IL-6等的含量;免疫印记反应测定小鼠血清特异性抗体与家蚕蛹变应原的结合度。结果表明:小鼠发生过敏反应时,血清中产生与家蚕蛹蛋白特异性结合的IgE抗体,血清中组胺、IL-4和IL-6等的含量显著上升,而IFN-γ含量显著下降,同时各致敏试验组小鼠血管通透性增加,空肠组织出现糜烂和结构受损症状。该小鼠致敏模型的成功构建对于后续研究家蚕蛹变应原及其致敏的抗原表位等均具有重要基础作用。

桑叶育和人工饲料育家蚕蛹期转录组的差异分析

用人工饲料饲养的家蚕存在生长发育状况差、产丝量低、造卵数少、活力弱等问题。为解析造成这些问题的分子机制,采用高通量测序的方法,比较桑叶育和人工饲料育家蚕化蛹第3天雌雄蛹的转录组差异。结果显示,与人工饲料育家蚕相比,桑叶育家蚕雌蛹中共鉴定出61个差异表达基因,其中45个基因上调表达,16个基因下调表达;雄蛹中共鉴定出227个差异表达基因,其中134个基因上调表达,93个基因下调表达。结合GO分析和KEGG通路分析,发现雌蛹中差异表达基因显著富集在细胞色素P450对外源物质代谢的通路,而雄蛹中差异表达基因主要富集在糖胺聚糖降解、糖酵解和糖异生等途径。人工饲料喂养组中雌蛹的谷胱甘肽-S-转移酶基因表达显著下调,可能影响雌蚕体内激素的合成,从而影响生殖;而雄蛹中丙酮酸激酶基因的表达显著下调,可能影响正常的能量代谢,从而导致雄蛾活力不高。

家蚕蛹表达的重组Vp28疫苗对克氏原螯虾的抗病毒保护效应

对虾白斑综合症病毒(WSSV)的致病性强、危害性大、地域分布和宿主范围广泛,目前还不能有效地控制疫情。将含有WSSV囊膜蛋白Vp28基因的重组杆状病毒HyNPV-Vp28感染家蚕(Bombyx mori)蛹,对发病蚕血淋巴进行SDS-PAGE和Western blotting分析,结果表明Vp28在家蚕体内得到了表达。将重组病毒囊膜蛋白rVp28疫苗配制成药饵,持续口服免疫75天,对克氏原螯虾进行预防WSSV,实验虾分为2%重组Vp28疫苗、2%普通蚕蛹组织匀浆(阳性对照)和普通饵料(阴性对照)3个处理组。免疫35天后进行口服攻毒,20天内rVp28疫苗组的累积存活率为63.33%,与阳性和阴性对照比差异显著(P<0.05),PRP分别达54.16%和59.26%;注射攻毒后20 天内rVp28疫苗组的累积存活率与阳性和阴性对照组比差异不显著(P>0.05),PRP分别为46.12% 和49.99%。第55天对存活虾再口服攻毒,20天内rVp28疫苗组与阳性和阴性对照组比累积存活率差异显著(P<0.05),PRP分别为55.80%和63.16%;二次注射攻毒后,rVp28疫苗组的PRP均为31.25%。对vVp28疫苗组存活虾的胃、肠和肝胰腺组织进行病毒的原位杂交检测均呈阴性反应,而对照组死亡虾组织都呈阳性反应。本研究表明,口服免疫家蚕蛹表达的病毒囊膜蛋白Vp28能诱导螯虾产生抗病毒保护作用,对应用疫苗预防对虾的病毒性疾病具有重要意义。

家蚕蛹虫草的毒性研究(续)

Acute peroral LD50 of silkworm C.militaris in SD rats and that of in Kunming mice were over 10.0g/kg（B.W）,.The silkworm Cordyceps militaris belonged to the practical no-toxicities substance according to standard method of toxicity classification.It displayed negative results in the test of oncogenesis,mutagenesis and teratosis respectively.In 30-days feeding toxicities test in rats,silkworm Cordyceps militaris showed no evident toxicity-action and all of the indicators observed were at normal level.Further experiments found that the no-action maximum-dose of silkworm Cordyceps militaris in rats was 4.0g/kg（B.W.）.

几株家蚕蛹油降解细菌的分离鉴定与降解能力测定

利用稀释培养法从缫丝废水中分离到5株可降解家蚕蛹油的细菌,采用紫外分光光度法测定了其对家蚕蛹油的降解能力,H73、H23、H1、H5和H43菌株在72 h内对家蚕蛹油的降解率分别达到76.36%、62.04%、60.58%、53.85%和51.20%。通过形态特征、生理生化特性测定和16S rDNA序列系统发生分析对各菌株进行鉴定,其中H23、H1和H43为芽孢杆菌属(Bacillus sp.),H5为微杆菌属(Microbacterium sp.),H73为肠杆菌属(Enterobacter sp.)。