超声诱导对家蝇幼虫基因组DNA影响的谱学研究

超声诱导3日龄家蝇幼虫后提取对照和处理组的基因组DNA,利用紫外光谱、荧光光谱、红外光 谱、核磁共振谱对其结构进行分析,并利用PCR对基因组中attacin基因的3’端序列进行测序比较。结果表 明,超声诱导能够影响家蝇幼虫基因组DNA的二级结构和碱基堆积状态,进而在DNA复制时造成碱基错 配最终导致DNA序列发生改变,但是超声诱导对DNA的化学基团和化学键没有明显的影响。

一种大量提取家蝇幼虫基因组DNA的新方法

介绍1种大量提取家蝇幼虫基因组DNA的新方法,该法由提取植物DNA的CTAB法改进而成,利用该法可在数小时内得到高质量的家蝇幼虫基因组DNA。琼脂糖凝胶电泳和紫外分析表明,该法所得DNA的完整性和纯度均可满足分子生物学水平的一般要求。

相同空间条件下饲喂不同时间蜂王浆蜜蜂幼虫总基因组DNA甲基化水平变化

为了观察蜜蜂幼虫相同空间条件下,饲喂蜂王浆3,5,10天幼虫总基因组DNA甲基化水平,试验采用孵化同一只蜂王产的卵,孵化后获同日龄24只幼虫。第1组12只蜜蜂幼虫向工蜂方向发育,共饲喂蜂王浆3 d,然后第3天、第5天、第10天随机取3只幼虫;第2组12只蜜蜂幼虫向蜂王方向发育,整个试验过程均饲喂新鲜蜂王浆,然后第3,5,10天随机取3只幼虫,此次共18只进入试验组。按上述时间点取材,提取各组幼虫头部DNA,高效液相色谱分析DNA甲基化水平。结果表明:向工蜂方向发育的蜜蜂幼虫第5天5-甲基脱氧胞苷(5-me C)的含量明显上升,但第10天明显下降;而向蜂王方向发育的蜜蜂幼虫第5天5-me C的含量虽有明显上升,但显著低于工蜂,而且甲基化程度继续增加至第10天,5-me C的含量略高于工蜂,但差异不显著。可见向工蜂方向发育的幼虫先出现高甲基化然后在第5天出现去甲基化的现象,向蜂王方向发育的幼虫则一直处于高甲基化过程。说明相同空间条件下,饲喂不同时间蜂王浆蜜蜂幼虫间总基因组DNA甲基化水平呈现有规律的变化。

荧光光谱分析家蝇幼虫抗菌肽与大肠杆菌染色体DNA作用机理

利用荧光光谱方法研究了家蝇幼虫抗菌肽MDL- 1与大肠杆菌染色体DNA的相互作用 ,并以溴化乙锭为荧光探针 ,考察了抗菌肽MDL- 1结合大肠杆菌DNA的作用方式 ,探讨其作用模式 ,即 :抗菌肽MDL- 1与大肠杆菌DNA骨架的磷酸基团通过静电引力结合 ,使抗菌肽MDL- 1和DNA的空间结构都发生变化 ,抗菌肽MDL- 1进一步与DNA双螺旋的沟槽结合 ,然后抗菌肽MDL- 1以嵌入或部分嵌入方式与DNA相互作用 ,计算出抗菌肽MDL- 1与DNA的结合常数和成键位点数。本试验从分子水平上研究抗菌肽与细菌DNA的作用模式和结构特征 ,对深入了解抗菌肽的作用机理极为重要。

家蝇卵黄蛋白基因的克隆与结构序列分析

解放军军需大学军事兽医研究所夏平安、江禹和中国农业大学生物学院刘维全等研究人员对此课题作了研究，他们认为家蝇卵黄蛋白基因编码的卵黄蛋白是家蝇胚胎发育的重要营养来源。根据3种家蝇卵黄蛋白cDNA保守序列设计引物，用PCR技术从家蝇基因组DNA中扩增到大小为768bp的mdyp1基因的部分DNA片段，

家蝇幼虫抗菌肽对弓形虫速殖子DNA的损伤作用

目的从家蝇幼虫血淋巴中分离纯化出有抗弓形虫作用的抗菌肽,观察其对弓形虫速殖子DNA的损伤作用。方法通过损伤加感染的方法诱导家蝇幼虫大量表达抗菌肽,然后经过研磨、离心和层析等过程,分离纯化并筛选出抗弓形虫作用的抗菌肽,采用流式细胞术(FCM)分析其对弓形虫速殖子DNA含量的影响。结果通过DNA含量直方图可以看出,实验组的速殖子数少于对照组,且两组分布参数存在较明显差异。正常的弓形虫速殖子处于M1期的较M2期的少,抗菌肽组则相反,处于M1期的较M2期的多,且M1峰值明显前移。结论家蝇幼虫血淋巴中存在抗弓形虫作用的抗菌肽,其可通过抑制弓形虫DNA的合成杀伤弓形虫。

利用末龄幼虫蜕和蛹壳对单头昆虫基因的无损伤检测

【目的】在昆虫基因功能等相关研究中,通常需要利用单对交配策略来筛选纯合突变品系,如何在配对前确定个体基因型同时又不对昆虫造成损伤,显得尤为重要。本文旨在探讨利用末龄幼虫蜕和蛹壳进行单头昆虫的无损伤基因检测方法。【方法】针对大小不同的3种鳞翅目昆虫斜纹夜蛾Spodoptera litura Fabricius、二点委夜蛾Athetis lepigone M?schler和小菜蛾Plutella xyllostella Linnaeus,收集末龄幼虫蜕及蛹壳,利用常规分子生物学技术进行基因组DNA提取、靶标基因PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳检测、连接转化和单克隆测序验证。【结果】从斜纹夜蛾、二点委夜蛾末龄幼虫蜕和蛹壳提取的基因组DNA,以其为模板对GOBP1基因进行PCR扩增,产物经琼脂糖凝胶电泳检测得到单一、明显的条带,进一步经连接转化和单克隆测序得到目的序列;但由于小菜蛾末龄幼虫蜕和蛹壳太小,以同样方法提取的基因组DNA浓度太低,PCR产物经电泳检测,未能得到目的条带。【结论】对于与斜纹夜蛾和二点委夜蛾相近或更大的昆虫,可以利用单头末龄幼虫蜕或蛹壳提取基因组DNA,通过常规PCR技术克隆特定基因序列,为突变品系筛选过程中昆虫个体的无损伤基因型检测提供了方法。