家蝇溶菌酶2基因的克隆及其性质研究

溶菌酶(lysozyme)作为抗菌肽重要一员,在昆虫先天免疫系统中起着重要作用。本文通过家蝇EST序列筛选并结合RACE技术克隆了家蝇Musca domestica的lysozyme2基因(Md-lysozyme 2,MdL2)全长516bp的cDNA序列。MdL2包含429bp的开放阅读框,编码142个氨基酸残基,推导的氨基酸序列N端包括20个氨基酸残基的信号肽,成熟肽由122个氨基酸残基组成,理论分子量为13.89kD,理论等电点为6.45,有8个半胱氨酸组成4对分子内二硫键。实时荧光定量PCR结果显示大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别刺激后,家蝇幼虫体内MdL2基因的表达模式发生了非常相似的变化。在刺激3～12h表达下调,12～24h出现一个短暂的恢复,在刺激24h后表达又开始下调。不同组织定量PCR结果表明MdL2表达量在肠和血细胞中较高,而在表皮和脂肪体中较低。MdL2成熟肽编码序列被克隆入pET-DsbA表达载体,并转化大肠杆菌后得到高效表达。