孕酮调控奶牛子宫内膜上皮细胞容受性基因表达的研究

【目的】探讨孕酮对奶牛子宫内膜上皮细胞容受性标志基因表达的影响,为研究孕酮与子宫内膜容受性的关系及其调控机制提供理论依据。【方法】用0、10、100μg/L孕酮处理奶牛子宫内膜上皮细胞,通过显微镜观察细胞形态,利用CCK8试验检测细胞增殖水平,使用实时荧光定量PCR检测磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、血管内皮生长因子(VEGF)和同源盒结构基因10(HOXa10)的mRNA表达水平,筛选孕酮最佳作用浓度。用孕酮、转录激活因子3(STAT3)抑制剂(1.5μmol/L)、孕酮+STAT3抑制剂分别处理奶牛子宫内膜上皮细胞,通过实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测VEGF和HOXa10的mRNA和蛋白表达水平。使用Lipofectamine 3000将VEGF的靶向miRNA(miR-497 mimic、miR-497 inhibitor)、HOXa10的靶向miRNA(miR-27a-3p mimic、miR-27a-3p inhibitor)以及阴性对照(mimic-NC、inhibitor-NC)分别转染奶牛子宫内膜上皮细胞,采用实时荧光定量PCR检测细胞中miR-497、miR-27a-3p以及VEGF和HOXa10的表达情况。【结果】与0μg/L组相比,10和100μg/L孕酮处理组细胞增殖水平、PI 3 K和Akt基因的mRNA表达水平没有显著差异(P>0.05),VEGF和HOXa 10基因mRNA表达水平显著升高(P<0.05),后续选用10μg/L孕酮进行试验。与10μg/L孕酮处理组相比,STAT3抑制剂处理组和孕酮+STAT3抑制剂联合处理组细胞中VEGF和HOXa10的mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P<0.05),但与对照组无显著差异(P>0.05)。与mimic-NC组相比,转染miR-497 mimic、miR-27a-3p mimic后细胞中VEGF、HOXa10的mRNA及蛋白表达水平均显著下降(P<0.05);与inhibitor-NC组相比,转染miR-497 inhibitor、miR-27a-3p inhibitor后细胞中VEGF、HOXa10的mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05)。【结论】孕酮通过激活STAT3信号通路调节奶牛子宫内膜上皮细胞中VEGF和HOXa 10基因的表达,miR-497负调控VEGF基因的表达,miR-27a-3p负调控HOXa 10基因的表达。