肠易激综合征患者炎性细胞因子的表达与酪酪肽、密封蛋白-1的相关性

目的通过检测IBS患者血清和结肠黏膜中炎性细胞因子与酪酪肽、密封蛋白1的表达及其相关性，探讨IBS的发病机制。方法选取2013年4月至2015年4月IBS门诊患者50例和健康对照者20名，采用ELISA法检测其血清酪酪肽、IL-10、TNF-α和密封蛋白-1水平；采用免疫组织化学法检测结肠黏膜中酪酪肽、IL-10、TNF-α和密封蛋白-1的蛋白表达水平。统计学分析采用单因素方差分析、最小显著差异（LSD）法、卡方检验和Pearson相关性分析。结果50例IBS患者中，腹泻型IBS组27例，便秘型IBS组23例。腹泻型IBS组血清酪酪肽水平及其结肠黏膜阳性表达率均高于健康对照组[（16.28±2.75） ng/L比（10.12±1.55） ng/L，66.7%（18/27）比30.0%（6/20）]，差异均有统计学意义（LSD-t＝10.19，χ2＝6.182；P均〈0.05）。腹泻型IBS组血清IL-10水平及其结肠黏膜表达率均低于健康对照组[（2.95±0.24） ng/L比（3.58±0.35） ng/L，22.2%（6/27）比50.0%（10/20）]，差异均有统计学意义（LSD-t＝4.52，χ2＝3.948；P均〈0.05），血清TNF-α水平及其结肠黏膜表达率均高于健康对照组[（8.73±0.41） ng/L比（7.73±0.51） ng/L，66.7%（18/27）比30.0%（6/20）]，差异均有统计学意义（LSD-t＝8.43，χ2＝6.182；P均〈0.05）。便秘型IBS组与健康对照组血清酪酪肽、IL-10、TNF-α水平[（10.24±1.34） ng/L比（10.12±1.55） ng/L，（3.43±0.71） ng/L比（3.58±0.35） ng/L，（7.81±0.26） ng/L比（7.73±0.51） ng/L ]及其结肠黏膜阳性表达率[39.1%（9/23）比30.0%（6/20），56.5%（13/23）比50.0%（10/20），34.8%（8/23）比30.0%（6/20）]比较差异均无统计学意义（P均〉0.05）。腹泻型IBS组血清密封蛋白-1水平及其结肠黏膜表达阳性率均低于健康对照组[（94.44±6.61） ng/L比（103.64±5.47） ng/L，11.1%（3/27）比40.0%（8/20）]，差异均有统计学意义（LSD-t＝5.76，χ2＝5.349；P均〈0.05）；便秘型IBS组血清密封蛋白-1水平及其结肠黏膜表达阳性率均高于健康对照组[（115.54±3.42） ng/L比（103.64±5.47） ng/L，73.9%（17/23）比40.0%（8/20）]，差异均有统计学意义（LSD-t＝5.56，χ2＝5.055；P均〈0.05）。腹泻型IBS组血清IL-10与酪酪肽，以及TNF-α与密封蛋白-1均呈负相关（r＝－0.874、－0.863，P均〈0.05），血清TNF-α与酪酪肽，以及IL-10与密封蛋白-1均呈正相关（r＝0.865、0.876，P均〈0.05）。结论IBS患者可能存在抗炎因子和促炎因子失衡；酪酪肽可能通过促进IL-10和抑制TNF-α水平降低密封蛋白-1的表达，改善IBS患者的低度炎性反应。

高温通过下调密封蛋白-1表达加重局灶性脑缺血再灌注大鼠脑损伤

目的 探讨高温对局灶性脑缺血大鼠密封蛋白-1表达的影响及其在缺血性脑损伤中的机制.方法 健康雄性Sprague-Dawley大鼠100只,随机分为假手术组、常温组和高温组,常温组和高温组再分为缺血（1 h）再灌注3h、6h、24h3个时间点.采用线栓法制作大鼠大脑中动脉闭塞模型.再灌注24 h时,采用干湿重法检测脑含水量,2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色法检测脑梗死体积.再灌注3h、6h和24 h时分别应用蛋白质印迹法和免疫组化染色法检测缺血脑组织密封蛋白-1表达.结果 再灌注24h时,常温组平均神经功能评分显著性低于高温组[（2.3±0.48）分对（3.2±0.63）分；=3.576,P=0.002）],假手术组、常温组和高温组手术侧脑组织含水量分别为（79.31±0.60）％、（81.13 ±0.12）％和（84.4±0.55）％,存在显著性差异（F=147.115,P=0.000）.蛋白质印迹分析显示,再灌注3h、6h和24 h时,常温组和高温组密封蛋白-1表达水平均较假手术组显著性降低（P均=0.000）,而且密封蛋白-1表达水平均随着缺血再灌注时间的延长进行性降低（P均＜0.05）.在相同时间点,高温组密封蛋白-1表达水平均显著性低于常温组（P均＜0.01）.假手术组、常温组再灌注3h和6h以及高温组再灌注3h和6h均可见密封蛋白-1在脑血管内皮细胞间呈阳性表达,而在再灌注24h时均未见密封蛋白-1阳性细胞.与假手术组相比,再灌注3h时,常温组和高温组密封蛋白-1阳性细胞数量和密封蛋白-1 IOD/Area（累计光密度/阳性细胞累计面积）均开始下降,6h时显著性降低,24h时消失（P=0.000）.再灌注3h和6h时,高温组密封蛋白-1 IOD/Area均显著低于常温组（P均＜0.01）.结论 脑缺血再灌注时,高温可能通过下调血脑屏障密封蛋白-1表达加重缺血性脑水肿和脑损伤.

加味四君子汤对脑缺血大鼠脑组织Occludin,ZO-1,Claudin-1蛋白及其mRNA表达的影响

目的:探讨加味四君子汤对脑缺血大鼠脑组织闭合蛋白(Occludin),密封蛋白-1(Claudin-1),闭锁连接蛋白-1(ZO-1)表达的影响,并探讨相关的作用机制。方法:将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,依达拉奉组(3.2×10-3g·kg-1),加味四君子汤加减低、中、高剂量组(4.77,9.54,19.08 g·kg-1)。采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,治疗7 d后处死,运用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠缺血侧脑皮质区Occludin,ZO-1,Claudin-1蛋白的表达,运用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠缺血侧脑皮质区Occludin,ZO-1,Claudin-1 mRNA表达。结果:与假手术组比较,模型组Occludin,Claudin-1,ZO-1蛋白显著减少(P<0.01);与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤各剂量组Occludin,Claudin-1,ZO-1蛋白均显著增高(P<0.01)。与假手术组比较,模型组大鼠Occludin,Claudin-1,ZO-1 mRNA表达下调(P<0.01);与模型组比较,依达拉奉组、加味四君子汤各剂量组大鼠Occludin,Claudin-1,ZO-1 mRNA表达上升(P<0.01)。结论:加味四君子汤可能通过增加紧密连接蛋白Occludin,ZO-1,Claudin-1的表达,保护血脑屏障,减轻缺血性脑卒中大鼠脑水肿。

健脾益气利水方对脑缺血大鼠脑水肿及其脑组织Occludin、Claudin-1、ZO-1蛋白表达的影响

目的:探讨健脾益气利水方(JPF)对脑缺血大鼠脑水肿及脑组织紧密连接蛋白闭合蛋白(Occludin)、密封蛋白-1(Claudin-1)、闭锁连接蛋白-1(ZO-1)表达的影响。方法:将105只雄性SD大鼠随机分为假手术组,模型组,依达拉奉组,JPF小、中、大剂量组。采用线栓法制备大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,治疗7d后处死,运用伊文思蓝(EB)渗出法检测血脑屏障的通透性,运用免疫组化法检测大鼠缺血侧脑组织Occludin、Claudin-1、ZO-1蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组缺血侧脑组织EB的含量显著增加(P<0.01),Occludin、Claudin-1、ZO-1阳性细胞表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,依达拉奉组和JPF中、大剂量组大鼠缺血侧脑组织EB的含量明显降低(P<0.05),各给药组Occludin、Claudin-1、ZO-1阳性细胞表达明显增强(P<0.01,P<0.05)。结论:健脾益气利水法组方可能通过上调紧密连接蛋白Occludin、Claudin-1、ZO-1表达保护血脑屏障,减轻脑缺血再灌注大鼠脑水肿。