猪α干扰素基因经密码子改造在毕赤酵母菌中的高效分泌表达

根据毕赤酵母Pichia pastoris表达系统对于密码子的偏嗜性,将去除信号肽的猪α干扰素(PoIFN-α)基因重新设计改造并合成一段新的核苷酸序列,置于毕赤酵母菌α因子分泌信号的DNA序列后,构建成pPICZαC-PoIFN-α分泌型重组表达载体,电转化进入野生型毕赤酵母菌X-33中,经Zeoc inTM抗性筛选后获得大量多拷贝重组子,SDS-PAGE和W estern-b lot分析结果表明,所获得的重组子能够分泌表达出相对分子质量约为19 000的PoIFN-α特异蛋白,其有效蛋白表达量较高达54.105 mg/L.经Vero-VSV系统测定,PoIFN-α效价达到5.87×107U/L.试验将PoIFN-α成熟肽全基因密码子进行改造,并实现了其在毕赤酵母菌表达系统中的高效分泌表达.

马铃薯密码子用法分析及其在t-PA基因密码子改造上的应用

采用bioperl 1.0工具在红旗LINUX系统下自编了密码子分析软件;通过对马铃薯98个蛋白质编码基因序列(codonDNAsequence)的分析,计算出了马铃薯的密码子用法,并确定出了马铃薯的4个高表达优越密码子;依据马铃薯密码子用法和高表达优越密码子分析结果,对t PA基因序列进行了密码子的改造,得到了具有马铃薯密码子使用特点的t PA基因序列,从而为以马铃薯为生物反应器高效生产t PA奠定了分子基础。

一种快速获得基因密码子偏爱性改造的方法——SOE-PCR

SOE-PCR采用具有互补末端的引物,使PCR产物形成重叠链,在不需要内切酶消化和连接酶处理的条件下实现DNA片段的拼接,能够高效、快速地实现基因的定点突变。应用SOE-PCR原理成功地实现了对几丁质酶基因chi58的5个位点的突变,构建了几丁质酶基因密码子偏爱性改造突变体—chi58A。实验证明,SOE-PCR具有简捷、快速、高效的优点。扩增过程中未引入其他突变,获得的chi58A突变体基因片段可以用于后续的分子克隆。

密码评估视角下的信息系统密码应用改造

为进一步增强国家信息安全、推动核心技术国产化,加快对信息系统的密码应用的改造是十分必要的。基于商用密码应用安全性评估以及国家的相关法律法规文件的要求,本文总结了目前信息系统建设过程中,密码应用改造中常见的问题,并从通用要求、密码技术应用要求和安全管理要求三方面提出了改进建议。这些建议能为有效增强信息系统的密码应用安全性提供参考。

信息系统国产密码算法应用改造的探索与实践——以福建广播电视大学系统为例

密码技术是支撑国家网络安全战略的核心技术,广泛应用具有自主知识产权的国产密码算法是保障网络安全的重要举措。当前信息技术领域密码算法主要分为对称加密、非对称加密和数字摘要三类。福建广播电视大学(简称电大)系统现使用的密码技术是以SM系列屏法为代表的国内自主知识产权的商用密码算法。

政务应用系统密码应用方案探讨

密码技术作为网络与信息安全保障的核心技术和基础支撑,在身份鉴别、完整性保护、机密性保护和操作不可否认等方面举足轻重。《中华人民共和国密码法》和《国家政务信息化项目建设管理办法》的相继印发,从法律规章层面确定了密码建设的必要性,应用系统建设单位应当落实国家密码管理有关法律法规和标准规范的要求,同步规划、同步建设、同步运行密码保障系统并定期进行评估。结合已有的研究,按照《信息安全技术信息系统密码应用基本要求》(GB/T 39786-2021)对政务应用系统密码应用方案进行了探讨,并以某政府部门信息化系统密码应用改造为实例进行方案阐述,以供参考。

政务信息系统密码应用方案设计--以某信用平台为例

密码技术是网络安全的核心技术和基础支撑,在身份鉴别、访问控制、安全隔离、数据加密等方面具有不可替代的重要作用。密码应用也是解决政务信息系统安全保障问题的基础技术手段。近年来,各级政府逐步将积极推进政务信息系统中的密码应用作为一项重要工作,因此从某信用平台密码应用改造出发,针对信息系统密码应用中的各方面要素进行探讨、研究。

山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶基因的克隆表达及其编码氨基酸的生物学分析

旨在获得山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,LDH)的蛋白表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究LDH蛋白的功能奠定基础。试验完成了LDH基因的克隆和密码子改造,成功将LDH基因中473、761、779 nt处的A突变为G,使改造后的LDH基因能在大肠埃希氏菌Rosetta中正确表达。SDS-PAGE电泳结果显示,IPTG诱导目的蛋白表达后获得一条大小约34 ku的蛋白条带,Western blot结果表明获得的原核表达产物可与抗6×His tag的单克隆抗体发生特异性反应,研究采用DNAStar Protean模块分析了LDH的二级结构、蛋白骨架柔性区域和可能的B细胞抗原优势表位,为进一步研究其功能奠定了基础。

猪肺炎支原体脂蛋白LppB的克隆表达及其编码氨基酸的生物学分析

本研究旨在获得猪肺炎支原体脂蛋白LppB的表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究脂蛋白LppB的功能奠定基础。试验构建重组表达质粒pET30a-LppB,通过快速定点突变试剂盒将LppB基因中1 068,1 353,1 578nt处的A突变为G,使改造后的LppB基因能在大肠杆菌系统中正确表达,IPTG诱导重组蛋白的表达并进行蛋白纯化。SDS-PAGE分析结果显示,IPTG诱导表达后获得一条特异性蛋白条带,相对分子质量约为70 000,与预期蛋白大小一致。可溶性分析结果表明目的蛋白主要以可溶的形式表达于上清中;Western blot鉴定结果表明纯化的蛋白能与抗6×His标签的单抗发生特异性反应。采用DNAStar Protean模块对脂蛋白LppB进行了二级结构、蛋白质骨架柔性区域、抗原指数的预测,并确定了B细胞抗原优势表位的可能分布。