温脾活血汤辅助治疗结核性胸膜炎的疗效及对富含丝氨酸和精氨酸的剪接因子6和miR-506-3p的影响

目的探讨温脾活血汤辅助治疗结核性胸膜炎的疗效,以及对富含丝氨酸/精氨酸的剪接因子6(SRSF6)和miR-506-3p的影响。方法选取2021年1月至2023年2月收治的98例结核性胸膜炎患者,随机分为对照组(49例)与研究组(49例),对照组采用胸腔穿刺抽液术+抗结核药物治疗,研究组采用温脾活血汤+胸腔穿刺抽液术+抗结核药物治疗,2组均连续治疗2个月。比较2组的临床疗效和不良事件发生情况;比较2组治疗前后的中医证候评分、胸膜厚度以及胸腔积液中炎症因子、腺苷脱氨酶(ADA)、转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1)),SRSF6水平和miR-506-3p表达水平。结果研究组总有效率(93.88%)高于对照组(79.59%),差异有统计学意义(P<0.05)。2组不良事件总发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后,2组中医证候评分和胸膜厚度均低于治疗前(P<0.05),并且研究组低于对照组(P<0.05);2组胸腔积液中干扰素诱导蛋白10(IP-10)、干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-17(IL-17)、ADA、TGF-β_(1)和SRSF6水平均低于治疗前(P<0.05),并且研究组低于对照组(P<0.05);2组胸腔积液中的miR-506-3p表达水平均高于治疗前(P<0.05),并且研究组高于对照组(P<0.05)。结论温脾活血汤可提高结核性胸膜炎患者的临床疗效,改善临床症状,减轻炎症反应,其机制可能与温脾活血汤能够调节SRSF6和miR-506-3p的水平有关。

富丝氨酸/精氨酸剪接因子7的表达在肝细胞癌中的意义

目的:探讨富丝氨酸/精氨酸剪接因子7(SRSF7)表达肝细胞癌(HCC)中的临床意义及生物学功能。方法:首先通过TCGA数据库中HCC转录组数据和临床数据分析SRSF7的表达水平、临床病理特征、功能和通路富集情况。再利用临床HCC样本、Huh7、Hep3B细胞株进行验证;将细胞分为对照组(control组)、过表达组(SRSF7OE组)和敲低组(SRSF7KD组)。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验、TUNEL实验检测其增殖和凋亡能力;伤口愈合实验、Transwell迁移实验和Transwell侵袭实验检测其迁移和侵袭能力;蛋白质免疫印迹法(western blotting)实验检测上皮—间质转化(EMT)相关标志物的蛋白水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)实验检测SRSF7下游调控基因的mRNA水平。结果:生信分析结果显示,SRSF7在HCC肿瘤组织中呈高表达并且与肿瘤分级、分期和患者预后不良有关(P<0.05)。Western blotting和免疫组化结果显示,SRSF7在肿瘤组织中呈高表达(P<0.05)。与对照组相比,过表达SRSF7能促进HCC细胞增殖、迁移侵袭以及EMT进程;敲低SRSF7能抑制HCC细胞增殖、促进细胞凋亡,抑制HCC细胞迁移侵袭和EMT进程(P<0.05)。结论:SRSF7在HCC中呈高表达,其高表达可能通过调控PAK5、RTL1等下游靶基因的表达来促进HCC细胞增殖,抑制细胞凋亡,并通过促进EMT进程来促进细胞迁移和侵袭,进而促进HCC的进展。

丝氨酸和富含精氨酸剪接因子1基因通过调控翻译过程影响神经胶质瘤U87细胞的增殖

目的:探讨丝氨酸和富含精氨酸剪接因子1(SRSF1)基因对神经胶质瘤U87细胞增殖和细胞周期的影响及其作用机制。方法:采用基因沉默技术抑制SRSF1基因表达,获得2种不同靶点的SRSF1稳定沉默细胞系(shSRSF1-1组和shSRSF1-2组)。用CCK-8法检测SRSF1沉默对神经胶质瘤U87细胞的增殖活性,流式细胞技术检测SRSF1沉默对U87细胞周期的影响,qPCR和WB实验检测SRSF1沉默对细胞分裂相关基因(CEP70和SMC4)m RNA和蛋白表达水平的影响,用WB实验检测SRSF1沉默对翻译起始蛋白4E-BP1磷酸化的影响。结果:shSRSF1-1组和shSRSF1-2组U87细胞中SRSF1蛋白表达均明显低于对照组(P<0.01),shSRSF1-1组和shSRSF1-2组U87细胞增殖能力被显著抑制(P<0.01),并且处在G2期的细胞数量明显高于对照组(P<0.01)。与对照组比较,shSRSF1-1组和shSRSF1-2组细胞中细胞分裂相关基因CEP70和SMC4 mRNA水平无明显差异(P>0.05),但是蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。shSRSF1-1组和shSRSF1-2组U87细胞中翻译起始蛋白4E-BP1磷酸化程度要明显低于对照组(P<0.01)。结论:沉默SRSF1基因通过降低翻译起始蛋白4E-BP1磷酸化水平抑制细胞分裂相关基因CEP70和SMC4的翻译过程,最终使细胞阻滞在G2期,进而减弱神经胶质瘤U87细胞的增殖能力。

基于TCGA数据库分析富含丝氨酸/精氨酸剪接因子家族在不同癌症中的表达及其预后意义

目的揭示不同类型癌症中富含丝氨酸/精氨酸剪接因子(SRSF)的整体表达及其对预后的作用。方法从癌症基因组图谱数据库(TCGA)中下载患者SRSF表达和临床信息,分析33种癌症类型中SRSF基因家族的表达差异及预后价值。利用R语言分析SRSF基因表达、突变及其相关细胞信号通路。结果SRSF在多种癌症中异常表达,并与G2/M检查点、DNA修复、IL-2/STAT5信号转导、缺氧和KRAS多种信号转导通路以及免疫细胞浸润密切相关。SRSF的异常表达与癌症患者的预后显著相关。结论SRSF基因异常表达可以预测癌症的预后,其可能作为癌症潜在标志物。

富含丝氨酸-精氨酸剪接因子7在非小细胞肺癌术后的表达及意义

目的 研究富含丝氨酸-精氨酸剪接因子7(serine/arginine-rich splicing factor 7,SRSF7)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)术后的表达。方法 选取2019年4月至2022年6月在河北省保定市第一中心医院术后病理结果证实为非小细胞肺癌的患者53例,收集患者的临床资料,依据免疫组化染色方法将患者分为SRSF7阳性表达组及SRSF7阴性表达组,分析患者癌组织中SRSF7表达情况与临床特征的关系。结果 SRSF7并非在所有癌组织中都有阳性表达;SRSF7表达与NSCLC患者的性别、年龄、吸烟史、肿瘤大小、病理分型、肿瘤标志物(癌胚抗原)、中性粒细胞淋巴细胞比值无相关性(P>0.05);SRSF7表达与TNM分期、是否存在淋巴结转移有相关性(P<0.05)。经logisitic回归分析发现,TNM分期越高,有淋巴结转移是SRSF7阳性表达的独立危险因素(P<0.05)。经Spearman相关性分析发现,SRSF7阳性表达与淋巴结转情况位呈正相关(r=0.527,P<0.001)。结论 SRSF7表达与NSCLC患者TNM分期以及淋巴结转移有关,SRSF7阳性表达是TNM分期、淋巴结转移的独立危险因素。

丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1在肿瘤发生发展过程中的作用

选择性剪接(alternative splicing)是产生蛋白质组多样性的重要机制,并与肿瘤的发生、发展密切相关。丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1(serine/arginine-rich splicing factor 1,SRSF1)是选择性剪接因子家族的代表性成员,参与前体mRNA的选择性剪接与加工、胞内定位与运输等生理过程。研究已证实,SRSF1为原癌蛋白,并在肺癌、乳腺癌和白血病等人类肿瘤细胞中存在过表达现象。SRSF1蛋白通过与肿瘤相关基因的相互作用、调控细胞周期及凋亡等多种途径参与肿瘤的发生、发展过程。此外,SRSF1蛋白通过影响PI3K-Akt-mTOR、Ras-MNK-MAPK及Wnt-β-catenin信号转导通路中相关基因的剪接方式发挥致癌作用。针对剪接异常事件,目前主要采用反义寡核苷酸方法特异性纠正基因的错误性剪接,该方法已在肺癌及乳腺癌等实体肿瘤治疗中开展研究。深入研究选择性剪接的位点选择机制和作用机制必将对探讨肿瘤发病机制、诊断和治疗方法产生深远影响。

富含丝氨酸和精氨酸的剪接因子1、转录因子7类似物2在胃癌组织中的表达及与化疗药物耐药性的关系

目的 探讨富含丝氨酸和精氨酸的剪接因子1(SRSF1)、转录因子7类似物2(TCF7L2)在胃癌组织中的表达及与化疗药物耐药性的关系。方法 收集120例胃癌患者的胃癌组织及癌旁组织,应用实时荧光定量聚合酶链反应检测胃癌患者胃癌组织和癌旁组织中SRSF1、TCF7L2的表达量,分析这两种蛋白的表达情况与患者临床特征的关系,并检测胃癌患者对不同化疗药物的敏感性与SRSF1、TCF7L2的关系。结果 胃癌组织中SRSF1、TCF7L2相对表达量均明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。不同分化程度、TNM分期及淋巴结转移情况胃癌患者的胃癌组织中SRSF1、TCF7L2表达情况比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。不同顺铂、紫杉醇、多西他赛和环磷酰胺耐药情况的胃癌患者胃癌组织中SRSF1、TCF7L2表达情况比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论 胃癌患者胃癌组织中SRSF1和TCF7L2呈异常高表达,SRSF1和TCF7L2高表达可能是胃癌患者对化疗药物产生耐药性的重要原因。

丝氨酸-精氨酸蛋白激酶对剪接因子调节作用的研究

目的 研究丝氨酸 -精氨酸蛋白激酶 (Serine \arginineprotein -specifickinase,SRPK)对剪接子在哺乳动物细胞核内定位的调节作用。方法 转染SRPK1和SRPK2 的细胞系通过免疫荧光染色在显微镜下观察剪接因子在胞核内的定位。结果 在转染了SRPK1和SRPK2 的细胞中 ,SRPK1和SRPK2 的绿色荧光信号可见于胞浆及胞核中 ,剪接因子以核斑点的形式集中在未转染SRPK1和SRPK2 的细胞中 ,而弥散性分布于表达SRPK1和SRPK2 的细胞中。结论 SRPK家族蛋白激酶可调节剪接因子在核内的重新分布。

丝氨酸/精氨酸富有剪接因子1、核因子κB在前列腺癌中的表达及与患者临床特征的关系

目的探讨前列腺癌组织中丝氨酸/精氨酸富有剪接因子1(SRSF1)、核因子κB(NF-κB)的表达情况及与患者临床特征的关系。方法选取前列腺癌患者和前列腺良性增生患者,各70例,取前列腺癌组织和前列腺良性增生组织。免疫组化法检测前列腺癌组织和前列腺良性增生组织SRSF1、NF-κB蛋白的阳性表达率,并分析不同临床特征前列腺癌患者前列腺癌组织中SRSF1、NF-κB蛋白的表达情况。结果前列腺癌组织中SRSF1、NF-κB蛋白的阳性表达率均高于前列腺良性增生组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。不同前列腺特异性抗原(PSA)水平前列腺癌患者前列腺癌组织中SRSF1蛋白的阳性表达率比较,差异无统计学意义(P﹥0.05);不同TNM分期、淋巴结转移情况、Gleason评分前列腺癌患者前列腺癌组织中SRSF1蛋白的阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。不同PSA水平、Gleason评分前列腺癌患者前列腺癌组织中NF-κB蛋白的阳性表达率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);不同TNM分期、淋巴结转移情况前列腺癌患者前列腺癌组织中NF-κB蛋白的阳性表达率比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。结论前列腺癌组织中的SRSF1、NF-κB蛋白表达水平和阳性表达率均较高,SRSF1蛋白的表达可能与TNM分期、淋巴结转移情况和Gleason评分,NF-κB蛋白的表达可能与TNM分期和淋巴结转移情况有关。

下调丝氨酸/精氨酸富集剪接因子6通过调控髓系分化因子88选择性剪接抑制巨噬细胞炎症反应

丝氨酸/精氨酸富集剪接因子6(serine/arginine-rich splicing factor 6,SRSF6)属于SR蛋白家族,主要在RNA剪接中发挥调控作用。SRSF6表达或功能失调能够导致部分基因选择性剪接异常,进而引发肿瘤、糖尿病和胸膜纤维化等炎症性疾病发生发展,但是SRSF6在炎症中的作用尚未阐明。本研究采用脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7建立炎症反应体系,探究SRSF6在炎症中的表达及作用,初步分析SRSF6在炎症中的靶点和机制。研究发现,LPS刺激肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)等炎症相关因子表达增加,同时,SRSF6 mRNA和蛋白质表达水平均随LPS刺激时间延长而显著增加(P<0.05)。进一步探究SRSF6表达对炎症因子的影响,上调表达SRSF6促进LPS诱导的炎症因子表达增加(P<0.05),而下调SRSF6则抑制炎症因子表达(P<0.05),并且核因子-κB(nuclear factor,NF-κB)和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)信号通路的激活受到SRSF6下调的抑制(P<0.05),提示SRSF6在巨噬细胞中参与调控炎症反应。髓系分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)是TLR4信号通路中的关键接头分子,MyD 88 mRNA剪接异构体MyD88-L和MyD88-S在炎症反应中分别发挥促炎和抑炎的相反功能。RNA结合蛋白数据库分析和RNA结合蛋白免疫沉淀实验发现,SRSF6蛋白结合MyD 88 mRNA;剪接分析结果显示,下调SRSF6促进抑炎型剪接异构体MyD88-S mRNA表达增多(P<0.01),并且敲低MyD88-S能够恢复SRSF6下调所抑制的炎症因子表达。以上研究结果发现,SRSF6在巨噬细胞中通过调控MyD 88选择性剪接,从而影响炎症信号通路激活及炎症因子表达,这为深入解析SRSF6在炎症性疾病中的作用奠定了基础。

基于剪接因子SRSF9在头颈部鳞状细胞癌中的表达及临床意义的生物信息学分析

目的:基于生物信息学方法分析富含丝氨酸/精氨酸的剪接因子9(SRSF9)在头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)中的表达情况、临床意义以及与肿瘤免疫浸润的关系,并探讨其作用机制。方法:利用癌症基因图谱(TCGA)数据库、基因表达综合(GEO)数据库中GSE30784和GSE13601数据集、临床蛋白质组学肿瘤分析联盟(CPTAC)数据库、基因表达交互分析(GEPIA)数据库和Kaplan-Meier plotter数据库分析SRSF9在HNSCC中的表达及与患者临床病理特征和预后的关系;利用cBioPortal数据库分析SRSF9基因变异情况;应用ESTIMATE算法和肿瘤免疫估计资源(TIMER)数据库评估SRSF9表达与肿瘤微环境和肿瘤免疫细胞浸润的关系;利用LinkedOmics数据库分析SRSF9在HNSCC中的共表达基因及其调控通路;基于TCGA SpliceSeq数据库分析HNSCC中SRSF9调控的可变剪接事件,并对靶基因进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析。结果:TCGA数据库、GEO数据库中GSE30784和GSE13601数据集分析,HNSCC组织中SRSF9 mRNA表达水平较癌旁正常组织明显升高(P<0.01);CPTAC数据库分析,与正常组织比较,HNSCC组织中SRSF9蛋白表达水平明显升高(P<0.001)。TCGA数据库分析,SRSF9 mRNA表达与HNSCC患者病理分级(P=0.004)和HPV感染(P=0.031)有关联。GEPIA和Kaplan-Meier plotter数据库分析,HNSCC组织中SRSF9 mRNA高表达均与患者总生存期(OS)较差相关[风险比(HR)=1.40,P=0.019;HR=1.55,P=0.003]。cBioPortal数据库分析,HNSCC中SRSF9基因拷贝数变异(CNV)占26.85%,其CNV与SRSF9 mRNA表达水平呈正相关关系(r=0.44,P<0.001)。ESTIMATE算法分析,SRSF9 mRNA高表达组基质评分和免疫评分均较SRSF9 mRNA低表达组低(P<0.001),肿瘤纯度则高于SRSF9 mRNA低表达组(P<0.001)。TIMER数据库分析,SRSF9 mRNA表达水平与CD4+T淋巴细胞浸润呈正相关关系(r=0.186,P<0.001),而与B淋巴细胞、CD8+T淋巴细胞和树突状细胞浸润呈负相关关系(r=-0.269,P<0.001;r=-0.353,P<0.001;r=-0.304,P<0.001)。SRSF9共表达基因富集分析,核糖体、剪接体和代谢通路等相关基因上调,而黏着斑、细胞因子和细胞黏附分子等相关基因下调。SRSF9相关可变剪接靶基因主要涉及脂类代谢、胰高血糖素和紧密连接等通路。结论:SRSF9在HNSCC中呈高表达,且与患者预后不良和肿瘤微环境免疫细胞浸润相关,可成为HNSCC诊断、预后评估和治疗的潜在分子靶标。

丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1上调表达对前列腺癌发病进程及临床预后的指导作用

目的 探讨丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1（ASF/SF2）在前列腺癌的作用及其可能参与的致癌分子机制.方法 免疫组织化学法检测102例前列腺癌患者及20例前列腺良性组织ASF/SF2的表达水平.x^2检验分析ASF/SF2表达同前列腺癌患者临床病理特征的相关性.Kaplan-Meier及Cox多因素模型检测ASF/SF2表达同前列腺癌生化复发的关系.结果 ASF/SF2在前列腺癌组中阳性率为51.0％ （52/102）,在前列腺良性组织的阳性率为20.0％（4/20）,两者差异有统计学意义（P＜0.05）.ASF/SF2表达同临床病理分期显著相关（P＜0.05）,其高表达与无生化复发生存率呈显著负相关（P＜0.05）,Cox多因素分析表明ASF/SF2可独立预测前列腺癌生化复发的危险度（风险比=2.943,P＜0.05）.结论 ASF/SF2高表达同前列腺癌的发病进程密切相关,ASF/SF2的致癌作用也许同哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路有关.

丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1和Livin在膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨膀胱移行细胞癌组织中丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1(serine/arginine-rich splicing factor 1,SRSF1)和凋亡蛋白抑制因子Livin表达及临床意义。方法膀胱移行细胞癌患者46例,取手术切除癌组织46份为膀胱移行细胞癌组,癌旁正常组织10份为对照组,采用免疫组织化学法检测2组SRSF1和Livin阳性表达情况,分析SRSF1和Livin阳性表达与膀胱移行细胞癌临床病理特征的关系,Spearman秩相关分析膀胱移行细胞癌患者SRSF1和Livin阳性表达的相关性。结果膀胱移行细胞癌组SRSF1、Livin阳性表达率(80.4%、82.6%)均高于对照组(10.0%、30.0%)(P<0.05);膀胱移行细胞癌组肿瘤复发者SRSF1、Livin阳性表达率(92.6%、96.3%)高于未复发者(63.2%、63.2%)(P<0.05),SRSF1、Livin阳性表达率在肿瘤是否单发、分化程度、TNM分期上比较差异无统计学意义(P>0.05);Spearman秩相关分析结果显示,膀胱移行细胞癌组SRSF1和Livin阳性表达呈正相关(r=0.662,P<0.001)。结论膀胱移行细胞癌组织中Livin、SRSF1呈高表达,且与患者复发有关。

丝氨酸/精氨酸剪接因子1调节T细胞活化在系统性红斑狼疮发病机制中的作用

T细胞活化是SLE发生发展的关键环节,异常活化的T细胞不仅促进大量炎性细胞因子分泌,引起组织炎性浸润,还能促进生发中心B细胞产生大量的自身抗体,导致靶器官损伤。丝氨酸/精氨酸剪接因子1(SRSF1)是机体内重要的剪接因子,通过多种机制调控基因表达。研究发现,SLE患者T细胞中SRSF1减少,并与T细胞活化有关。因此,明确SRSF1调节T细胞活化在SLE发病机制中的作用具有重要意义。

SRSF1通过调控VEGFA mRNA可变剪接促进食管鳞状细胞癌Eca9706细胞增殖、侵袭和迁移

背景与目的:丝氨酸/精氨酸富集剪接因子1(serine/arginine-rich splicing factor 1,SRSF1)与肿瘤的发生、发展密切相关。食管癌是常见的消化系统恶性肿瘤,但SRSF1在食管癌中的作用罕有报道。检测SRSF1在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中的表达及其对ESCC细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并初步探讨其作用机制。方法:收集2020年1月—2021年12月于河北医科大学第四医院行手术切除的40例ESCC患者的癌及癌旁组织标本,采用免疫组织化学染色法检测ESCC组织中SRSF1的水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测ESCC细胞系中SRSF1 mRNA表达和蛋白水平。筛选SRSF1高表达的Eca9706细胞进行研究。采用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)技术降低SRSF1 mRNA表达。采用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)、transwell和Matrigel基质胶实验分别检测Eca9706细胞增殖、迁移和侵袭能力。采用数据库分析ESCC组织中血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)的表达,并分析SRSF1与VEGFA表达的相关性。采用RTFQ-PCR检测Eca9706细胞VEGFA Iso8a和Iso8b亚型的表达水平,以及敲低SRSF1后VEGFA Iso8a和Iso8b亚型的表达变化。结果:SRSF1在ESCC组织中的表达水平高于癌旁组织(P<0.05)。SRSF1 mRNA表达和蛋白水平在ESCC Eca9706细胞系中最高(P<0.01)。转染siRNA-SRSF1组中SRSF1 mRNA表达和蛋白水平显著低于siRNA-NC组(P<0.01)。与siRNA-NC组相比,siRNA-SRSF1组Eca9706细增殖、迁移和侵袭能力显著降低(P<0.05)。ESCC组织中VEGFA表达明显高于食管正常组织(P<0.05),且与SRSF1表达呈正相关(P<0.01)。Eca9706细胞VEGFA Iso8a亚型表达明显高于VEGFA Iso8b亚型(P<0.01),且敲低SRSF1后VEGFA Iso8a亚型表达降低,VEGFA Iso8b亚型表达升高(P<0.01)。结论:SRSF1可通过作用于VEGFA可变剪接促进ESCC Eca9706细胞增殖、侵袭和迁移。

剪接因子SRSF7新mRNA剪接异构体在顺铂处理细胞中的变化

目的:探讨不同梯度浓度顺铂(CDDP)处理不同肺癌细胞后新发现的剪接因子SRSF7 m RNA异构体在同浓度CDDP处理后不同的细胞中的水平变化。方法:采用梯度浓度的CDDP处理肺癌细胞A549(8、18、24、32、40、48及56μmol/L)和H1299(12、24、36、48、60、72及84μmol/L),处理24 h后提取总RNA,进行RT-PCR检测SRSF7 m RNA剪接异构体,并选取NCBI中未确定的异构体进行TA克隆后测序并分析鉴定异构体类型;用56μmol/L的CDDP处理人胚肾细胞293FT,宫颈癌细胞Ca Ski、Si Ha、C33A细胞24 h,提取总RNA后验证新发现的SRSF7 m RNA剪切异构体是否存在这些细胞中。结果:发现3种新的SRSF7 m RNA剪接异构体(分别标记为New1、New2及New3),在肺癌细胞A549、H1299,人胚肾细胞293FT,宫颈癌细胞Ca Ski、Si Ha、C33A细胞等多种肿瘤细胞中均存在,根据NCBI的预测New1,New2,New3异构体均为非编码蛋白的m RNA异构体,随着处理CDDP浓度的增加,其比例明显上升;而编码蛋白的m RNA异构体a和(或)b所占比例明显下降;同时SRSF7的总m RNA水平逐渐降低。结论:新发现的3种非编码的m RNA异构体的变化揭示细胞可能通过SRSF7自身的m RNA选择性剪接来应对DNA损伤。

SRSF6和miR-506-3p在结核性胸膜炎胸腔积液中表达的意义及其诊断价值

目的 探讨富含丝氨酸/精氨酸剪接因子6(SRSF6)、微小RNA-506-3p(miR-506-3p)在结核性胸膜炎胸腔积液中表达的意义及诊断价值。方法 选取2020年1月到2022年1月本院收治的60例结核性胸膜炎胸腔积液患者作为结核组,另选取同期非结核性胸膜炎胸腔积液患者30例作为对照组。两组患者均于无菌条件下进行胸腔穿刺,抽取胸腔积液进行miR-506-3p、SRSF6水平测定。Pearson法分析结核组SRSF6与miR-506-3p水平的相关性。采用多因素Logistic回归分析影响结核性胸膜炎发生的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析胸腔积液SRSF6和miR-506-3p水平对结核性胸膜炎的诊断价值。结果 结核组胸腔积液SRSF6表达水平明显高于对照组(P<0.05),miR-506-3p表达水平明显低于对照组(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,结核组胸腔积液SRSF6与miR-506-3p表达水平呈负相关(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,SRSF6高水平、miR-506-3p低水平是影响结核性胸膜炎发生的危险因素(P<0.05)。SRSF6、miR-506-3p联合诊断结核性胸膜炎的价值高于SRSF6及miR-506-3p单独诊断。结论 SRSF6在结核性胸膜炎胸腔积液中表达水平升高,miR-506-3p在结核性胸膜炎胸腔积液中表达水平降低,两者是影响结核性胸膜炎发生的危险因素,两者联合对于结核性胸膜炎具有较高的诊断价值。

胃癌中异常表达剪接因子的生物信息学分析及功能

目的采用生物信息学方法分析胃癌中有表达差异的剪接因子,研究异常表达的富含丝氨酸苏氨酸蛋白家族中的剪接因子10(SRSF10)对胃癌细胞表型的影响。方法通过癌症基因组图谱数据库(TCGA)下载胃癌以及癌旁组织的RNA-seq数据,对其采用生物信息学方法进行分析,最终得到胃癌中差异表达的剪接因子。从中挑选出SRSF10研究其对胃癌发生发展的影响,利用RNA干扰技术构建SRSF10敲低的胃癌细胞,同时采用MTS、Transwell以及细胞划痕方法研究敲低SRSF10后对胃癌细胞表型的影响。结果胃癌中差异表达的剪接因子有48个,其中表达上调35个,表达下调13个。挑选表达上调的剪接因子SRSF10进行进一步研究,发现SRSF10敲低后的胃癌细胞与正常胃癌细胞相比增殖减慢,迁移能力降低,划痕愈合能力下降。结论胃癌患者中存在较多有表达差异的剪接因子,可能在胃癌发生发展中起到重要作用。剪接因子SRSF10在胃癌发生发展中可能发挥重要的作用。

miR-346通过靶向调控SRSF10抑制胶质瘤细胞迁移、侵袭和增殖

胶质瘤是最常见的肿瘤之一,预后较差。有研究表明,microRNAs(miRNAs)与包括胶质瘤在内的多种肿瘤有密切联系。然而,miR-346通过靶向调控丝氨酸/精氨酸剪接因子10(serine/arginine splicing factor 10,SRSF10)抑制胶质瘤细胞迁移、侵袭和增殖能力的分子机制目前仍不明确。对GSE165137与GSE139031芯片进行差异表达分析结果显示,miR-346在两个数据集中共同下调,运用CGGA数据库分析显示,miR-346高表达的患者总生存期明显提高(P<0.0001),miR-346的表达随胶质瘤WHO分级升高而降低(P<0.05)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)结果显示,miR-346在胶质瘤细胞U251中的表达显著降低(P<0.05),且miR-346过表达质粒转染成功(P<0.05)。Transwell实验,5-乙炔基-2脱氧尿嘧啶核苷(EdU)增殖实验和细胞克隆形成结果显示,与对照组相比,过表达miR-346后U251细胞的迁移、侵袭和增殖能力下降(P<0.05)。生物信息学方法预测miR-346的靶基因为SRSF10;双荧光素酶结果证实,miR-346与SRSF10mRNA的3′-UTR存在靶向结合关系(P<0.05);Western印迹结果显示,过表达miR-346后SRSF10蛋白表达水平下降(P<0.05)。Transwell实验、EdU实验及细胞克隆形成结果显示,与miR-346+Vector组相比,miR-346+SRSF10组的迁移、侵袭和增殖能力显著增加(P<0.05)。综上所述,miR-346在胶质瘤细胞和组织中表达普遍下调,且miR-346可通过靶向调控SRSF10抑制胶质瘤细胞的迁移、侵袭和增殖。

SRSF6在大鼠胰岛细胞中结合的靶标及测序分析

目的研究富含丝氨酸和精氨酸的剪接因子6(serine and arginine rich splicing factor 6,SRSF6,又称SRp55)作为RNA剪切因子在大鼠胰腺β细胞中对胰岛素分泌影响的具体机制。方法通过改进的RNA结合蛋白免疫共沉淀高通量测序(improved RNA Binding Protein Immunoprecipitation highthroughput sequencing,iRIP-seq)技术在大鼠胰岛细胞中鉴定SRSF6调控的基因及功能通路,对SRSF6直接作用的靶标和调控通路及可变剪接事件进行鉴定。结果SRSF6富集性地结合编码区和内含子区域,KEGG分析发现SRSF6结合的靶标在胰岛素信号通路显著富集。结论SRSF6可能通过与胰岛素通路相关重要基因的m RNA前体结合,调控它们的剪接和加工,进而成为影响胰岛素分泌的潜在因素。