富含亮氨酸重复激酶2在神经病理性疼痛大鼠痛敏中的作用及机制研究

目的研究富含亮氨酸重复激酶2(LRRK2)对神经病理性疼痛(NP)大鼠痛觉敏感性的影响,并探讨其可能的机制。方法将48只SD大鼠随机分成4组:假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、LRRK2抑制剂组(MLi-2组)和LRRK2抑制剂+p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)激动剂组(MLi-2+Anisomycin组),每组12只。采用坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)诱导NP大鼠模型,术后第8天开始鞘内注射MLi-2(1 mg/kg,10μl)或Anisomycin(20μmol/L,10μl),每天1次,连续7 d。分别于术前(第0天)及术后第7、14天进行痛觉敏感性检测,分析各组大鼠机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(PWTL)变化;ELISA检测大鼠脊髓背角中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;尼氏染色观察大鼠脊髓组织神经元病理变化;免疫荧光染色观察大鼠脊髓中小胶质细胞标志物离子化钙结合适配分子-1(Iba-1)表达水平;Western blot检测大鼠脊髓背角中LRRK2、p-p38 MAPK、p38 MAPK和Iba-1蛋白表达水平。结果与Sham组比较,Model组大鼠右侧后肢MWT和PWTL均明显降低(P<0.01),脊髓背角组织中IL-1β、IL-6和TNF-α含量及LRRK2、Iba-1蛋白和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白比值水平均明显升高(P<0.01),脊髓组织中Iba-1阳性细胞比例明显升高(P<0.01),而尼氏小体明显减少(P<0.01)。与Model组比较,MLi-2组大鼠右侧后肢MWT和PWTL明显升高(P<0.01),尼氏小体明显增多(P<0.01),脊髓组织中Iba-1阳性细胞比例明显降低(P<0.01),脊髓背角组织中IL-1β、IL-6和TNF-α水平及LRRK2、Iba-1蛋白和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白比值水平明显降低(P<0.01)。然而,Anisomycin干预可激活p38 MAPK信号通路,并部分逆转MLi-2对NP大鼠痛敏、神经炎症的改善作用。结论抑制LRRK2表达可减轻由小胶质细胞活化介导神经炎症引起的NP大鼠痛觉敏感性,其作用机制可能与调控p38 MAPK信号通路有关。

富含脯氨酸的酪氨酸激酶2和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶在舌鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(Pyk2)和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)在舌鳞状细胞癌(TSCC)及其癌旁非肿瘤组织中的表达差异及临床意义。方法采用免疫组织化学法检测45例TSCC组织及30例癌旁非肿瘤组织中Pyk2和p-AKT蛋白的表达情况,并分析两者蛋白表达与临床病理参数的关系。结果在TSCC组织中Pyk2和p-AKT蛋白均呈高表达,而在癌旁非肿瘤中呈低表达或无表达(P<0.05)。并且两者的表达呈正相关(γs=0.412)。Pyk2蛋白的表达与病理分化程度、有无淋巴结转移及TNM临床分期有关(P<0.05),与性别、年龄无关。而p-AKT只与病理分化程度有关(P<0.05)。结论 Pyk2和p-AKT蛋白异常表达与TSCC的发生、发展密切相关,联合检测两者有望成为明确TSCC恶性程度的指标。

PP2C蛋白磷酸酶调控的细胞信号通路研究进展

2C类蛋白磷酸酶是蛋白磷酸酶家族的重要成员,可以对丝/苏氨酸残基特异性脱磷酸。近来研究表明,2C类蛋白磷酸酶控制着大量关键的细胞功能,如增殖、细胞周期阻滞、衰老和细胞程序性死亡、凋亡和自噬等,因而在介导机体免疫反应、衰老、神经发育及肿瘤发生发展中发挥重要的生物学作用。总结PP2C基因各亚型参与介导的重要细胞信号通路,如丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷脂酰肌醇3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)、转化生长因子-β(TGF-β)/Smads、核转录因子-κB(NF-κB)及DNA损伤应答通路,以期为阐明上述生理病理过程的分子基础和调控机制提供新的思路。

FTO介导m6A修饰的PRKD2调节SIRT1/HIF-1α通路抑制糖尿病肾病足细胞损伤的机制研究

目的探究脂肪含量和肥胖相关蛋白(fat mass and obesity-associated protein,FTO)和丝氨酸-苏氨酸激酶蛋白激酶D2(serine-threonine kinase protein kinase D2,PRKD2)在糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)进展中的调控作用和调节机制。方法采用35 mmol/L葡萄糖对足细胞(MPC5细胞)进行高糖刺激24h构建DKD体外模型。采用FTO过表达载体(pcDNA-FTO)和PRKD2过表达载体(pcDNA-PRKD2),或空载体(vector)转染高糖诱导的MPC5细胞。通过RT-qPCR检测FTO和PRKD2过表达效率;MeRIP检测PRKD2 mRNA的N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)修饰水平;ELISA检测Caspase-3活性、IL-6,TNF-α和单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)分泌量;流式细胞术分析细胞凋亡率;Western blot评估FTO和PRKD2蛋白水平,以及SIRT1/HIF-1α通路关键蛋白表达水平;Pearson分析FTO和PRKD2水平的相关性。结果与无高糖诱导对照组比较,高糖诱导的足细胞中FTO蛋白(0.51±0.04 vs 1.00±0.03)和PRKD2蛋白(0.45±0.03 vs 1.01±0.04)水平显著下调,差异具有统计学意义(t=13.17,16.76,均P<0.001)。高糖诱导的足细胞中FTO蛋白水平和PRKD2蛋白水平呈正相关(r2=0.7051,P<0.001)。与vector组相比,pcDNA-FTO组PRKD2 mRNA的m6A水平(0.56±0.09 vs1.01±0.13)降低,PRKD2 mRNA水平(3.16±0.14 vs 1.03±0.02)显著升高,差异具有统计学意义(t=51.37,11.82,均P<0.001)。与control组(IL-6:512.76±61.85 pg/ml,TNF-α:28.17±2.83 pg/ml,MCP-1:157.31±17.69 pg/ml)和vector组(IL-6:498.41±87.51 pg/ml,TNF-α:26.35±5.47 pg/ml,MCP-1:165.52±16.87 pg/ml)比较,pcDNA-PRKD2组IL-6(301.86±21.85 pg/ml),TNF-α(11.06±4.12 pg/ml),MCP-1分泌量(81.45±9.03pg/ml)显著减少,差异具有统计学意义(F=7.51,10.47,61.97,均P<0.01)。与control组(Caspase-3:689.65±79.5U/L,细胞凋亡率:22.31%±2.69%)和vector组(Caspase-3:715.91±113.58 U/L,细胞凋亡率:21.07%±3.28%)比较,pcDNA-PRKD2组Caspase-3活性(437.64±104.76 U/L)和细胞凋亡率(8.41%±3.15%)下降,差异具有统计学意义(F=2.35,79.13,均P<0.01)。与control组(SIRT1:1.01±0.05,HIF-1α:1.03±0.07)和vector组(SIRT1:0.97±0.05,HIF-1α:1.02±0.03)相比,pcDNA-PRKD2组SIRT1蛋白(3.51±0.15)水平升高,HIF-1α蛋白(0.37±0.07)水平降低,差异具有统计学意义(F=31.54,8.31,均P<0.01)。结论FTO介导m6A修饰的PRKD2通过SIRT1/HIF-1α通路抑制高糖诱导的足细胞炎症反应和细胞凋亡。

LRRK2基因R1067Q和GBA基因R202Q双变异致早发型帕金森病一例

患者男性,42岁。主因左手抖动18个月,左下肢抖动伴运动迟缓6个月,于2023年7月8日入院。患者18个月前(2022年1月)无明显诱因出现左上肢不自主抖动,静止时出现、持物及动作时消失,无动作迟缓、反应变慢等其他伴随症状。于2022年11月至外院就诊,头部MRI检查无明显异常,结合临床症状,考虑帕金森病(PD),服用普拉克索0.375 mg/d并逐渐增量至0.375 mg/次、2次/d长期治疗,症状无明显改善。6个月前(2023年1月)出现左下肢不自主抖动,并逐渐出现动作迟缓,左侧肢体活动不灵活,体位变化或行走时偶有头晕,不伴视物旋转及恶心呕吐等,持续数分钟后头晕可自行好转,无嗅觉丧失、情绪低落,睡眠质量尚可,无多梦、呓语、乱喊乱叫、手舞足蹈等症状。

缺氧后线粒体Drp1通过LRRK2-HK2诱导mPTP过度开放的机制研究

目的:探究缺氧后线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)对线粒体膜通透性转换通道(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)开放的调控机制。方法:在血管平滑肌细胞中通过免疫荧光方法观察缺氧后mPTP开放情况;通过超速离心法分离线粒体和细胞质成分蛋白;使用Co-IP和Westernblot检测缺氧或者干预Drp1、干预己糖激酶-2(hexokinase-2,HK2)后Drp1的表达分布情况、HK2与电压依赖性阴离子通道蛋白(voltage dependent anion channel,VDAC)结合情况、Drp1与富含亮氨酸重复激酶2(leucine-rich repeat kinase 2,LRRK2)结合情况;使用蛋白分子对接和蛋白芯片方法筛选Drp1的潜在结合蛋白及结合位点;使用Drp1抑制剂和点突变法用于相应机制探究。结果:缺氧后Drp1发生线粒体转位促使mPTP过度开放(P<0.05)。使用Mdivi-1减少线粒体Drp1表达后可抑制mPTP开放,减少细胞色素C(cytochrome C,CytC)释放(P<0.05)。缺氧后HK2-Thr473磷酸化水平减低引起的HK2线粒体分离会导致mPTP结构破坏,通过HK2 T473D点突变恢复HK2活性后,HK2与线粒体结合情况及mPTP开放情况明显改善(P<0.05)。Drp1蛋白芯片结果发现缺氧后Drp1可以与LRRK2结合并封闭其活性位点,通过Drp1 T595A点突变破坏Drp1-LRRK2结合后,HK2活性及HK2线粒体分离情况明显改善(P<0.05),mPTP开放情况明显减少(P<0.05)。结论:缺氧后线粒体Drp1通过封闭激酶LRRK2活性位点导致HK2 Thr473磷酸化水平减低及其线粒体分离,最终诱导mPTP过度开放。

Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体诱导帕金森病样病理变化

目的:探讨Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体能否诱导帕金森病(PD)样病理改变。方法:提取野生型(WT)和Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体,使用免疫印迹法检测尿液外泌体标记物TSG101和CD81,Y216位点磷酸化糖原合成酶激酶-3β(pGSK-3β-216)表达水平。在C57小鼠纹状体中分别注射WT小鼠(C57-WT组,n=8)和Lrrk2 R1628P小鼠尿液外泌体(C57-Lrrk2组,n=8)。注射前3天,注射后1、3、6个月,利用平衡木、挂线、转棒和旷场实验对小鼠进行行为学分析,免疫组化法分析脑组织中磷酸化α-突触核蛋白(pα-syn)的沉积情况,免疫印迹法检测脑组织中pα-syn的表达。结果:Lrrk2 R1628P小鼠尿液外泌体TSG101和CD81表达水平与WT小鼠比较,差异无统计学意义(P>0.05),pGSK-3β-216表达水平高于WT小鼠(P<0.001)。C57-Lrrk2组小鼠出现PD样行为学表型(P<0.001),皮层、纹状体和黑质中有pα-syn沉积,脑组织中pα-syn表达水平为(0.44±0.06),C57-WT组则无表达(P<0.001)。结论:小鼠纹状体中注射Lrrk2 R1628P转基因小鼠的尿液外泌体能够诱导PD样病理改变。

溃疡性结肠炎小鼠血清miR-23a-3p和miR-27a-3p的表达水平及其作用的研究

目的·探究miR-23a-3p和miR-27a-3p在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠血清中的表达及其可能的作用机制。方法·将20只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组和模型组,每组10只。模型组小鼠采用含有5%硫酸葡聚糖钠(dextran sulfate sodium,DSS)的饮用水诱导7 d,诱导期间观察小鼠一般情况、粪便形态以及隐血状况;7 d后,采集小鼠全血和结肠组织,测量结肠长度并称取湿重。qRT-PCR检测血清中miR-23a-3p和miR-27a-3p的表达,Western blotting检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅助激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptor γ,coactivator 1α,PPARGC1A)、PH域富含亮氨酸重复蛋白磷酸酶2(PH domain leucine-rich repeat protein phosphatase,PHLPP2)、B淋巴细胞瘤2蛋白(B-cell lymphoma-2,BCL-2)、BCL-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,BAX)、细胞色素C(cytochrome c,CYT-C)和胱天蛋白酶3剪切体(cleaved cysteine-containing aspartate-specific proteases,cleaved-caspase-3)蛋白表达。结果·DSS诱导后,模型组小鼠出现精神萎靡、体质量减轻、腹泻、肉眼血便等症状,结肠长度缩短、湿重减轻(均P<0.05),小鼠UC模型构建成功。与对照组比较,模型组小鼠血清中miR-23a-3p和miR-27a-3p表达明显下调(均P<0.05),结肠组织中PPARGC1A、PHLPP2、BAX、CYT-C和cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高(均P<0.05),而BCL-2表达显著降低(P<0.05)。结论·miR-23a-3p和miR-27a-3p在UC小鼠血清中呈低表达水平,可能通过介导结肠组织中PPARGC1A和PHLPP2表达上调,触发线粒体途径诱导细胞凋亡,从而参与了UC的发生/发展。

OPN、Pyk2、p-AKT在舌鳞状细胞癌中的表达及临床意义

目的分析骨桥蛋白(OPN)、富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(Pyk2)、磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)在舌鳞状细胞癌中的表达及临床意义。方法收集2018年2月—2020年2月诊治103例舌鳞状细胞癌组织(舌癌组)及距肿瘤边缘>0.5 cm的癌旁正常组织(对照组)。比较不同组织中OPN、Pyk2、p-AKT表达情况,分析OPN、Pyk2、p-AKT与舌鳞状细胞癌患者临床病理参数的关系,采用多因素Logistic回归分析影响舌鳞状细胞癌患者预后生存的危险因素。结果舌癌组OPN、Pyk2、p-AKT表达阳性率均高于对照组(P<0.01)。Ⅲ~Ⅳ期、高分化、有淋巴结转移舌鳞状细胞癌患者OPN、Pyk2、p-AKT表达阳性率分别高于Ⅰ~Ⅱ期、低-中分化、无淋巴结转移患者(P<0.05,P<0.01)。Ⅲ~Ⅳ期、高分化、有淋巴结转移及OPN、Pyk2、p-AKT表达阳性舌鳞状细胞癌患者病死率分别高于Ⅰ~Ⅱ期、低-中分化、无淋巴结转移及OPN、Pyk2、p-AKT表达阴性患者(P<0.05,P<0.01)。Ⅲ~Ⅳ期、高分化、有淋巴结转移以及OPN、Pyk2、p-AKT表达阳性是影响舌鳞状细胞癌患者预后生存的独立危险因素(P<0.01)。结论OPN、Pyk2、p-AKT在舌鳞状细胞癌组织中表达均明显上调,与癌细胞浸润和转移密切相关,可为舌鳞状细胞癌预后评估提供参考。

佐剂关节炎大鼠血管新生COX-2、PI3K、AKT与细胞因子相关性研究

目的:观察佐剂关节炎大鼠环氧化酶-2(COX-2)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)的表达,以及其与白细胞介素-6(IL-6)、大鼠白细胞介素-10(IL-10)、血管内皮生长因子(VEGF)细胞因子的关系。方法:将20只大鼠适应性喂养1周后,随机分为正常对照组(NC组)、模型对照组(MC组),每组10只。MC组每只大鼠右后足趾皮内注射弗氏完全佐剂0.1 ml,复制佐剂关节炎大鼠模型,NC组每只大鼠右后足趾皮内注射蒸馏水0.1 ml,两组均给药18 d。结果:与NC组比较,MC组足肿胀率、关节炎指数均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01);MC组的IL-6、VEGF指标也均明显升高,而IL-10指标明显下降升高,差异均有统计学意义(P<0.01);MC组的COX-2、PI3K、AKT指标均明显升高,差异均有统计学意义(P<0.01);MC组大鼠COX-2与IL-6、VEGF呈正相关,与IL-10呈负相关;PI3K与IL-6、VEGF呈正相关,与IL-10呈负相关;AKT与IL-6、VEGF呈正相关。结论:COX-2、PI3K、AKT与IL-6、IL-10、VEGF细胞因子密切相关。

多西环素对多发性骨髓瘤中MMP-2、MMP-9表达的影响

目的:研究多发性骨髓瘤(MM)患者基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及临床意义,并进一步研究多西环素(DOX)对MM细胞MMP-2、MMP-9表达的影响。方法:收集MM患者外周血浆及骨髓标本,将患者分为新诊断组、缓解组和难治复发组,另选取34例我院健康体检者的外周血浆为正常对照组,17例我院血液科就诊的缺铁性贫血患者的骨髓为对照组,ELISA法检测MMP-2、MMP-9的表达;不同浓度DOX处理骨髓瘤细胞株H929一定时间后,Western blot法检测MMP-2、MMP-9的表达;联合使用Akt抑制剂MK-2206 2HCl和DOX处理H929一定时间后,Western blot法检测MMP-2、MMP-9表达的变化。结果:新诊断组患者外周血浆和骨髓中MMP-2、MMP-9的表达水平较正常对照组均明显增高(P<0.05),治疗后缓解组患者MMP-2、MMP-9的表达水平较新诊断组下降,但仍高于正常对照组,而难治复发组患者MMP-2、MMP-9的表达水平再次升高,与新诊断组无明显差异;DOX 10和15 mg/L处理H929细胞能明显抑制MMP-2、MMP-9的表达;5 nmol/L的MK-2206 2HCl单独处理H929细胞对MMP-2、MMP-9的表达无明显影响,但是与10 mg/L的DOX联合处理H929细胞可增强DOX对MMP-2、MMP-9蛋白的抑制作用。结论:MM患者MMP-2、MMP-9的表达增高,其表达水平与骨髓瘤疾病状态相关。DOX可抑制MM细胞MMP-2、MMP-9的表达,拮抗DOX对Akt信号通路的激活可进一步增强这一抑制作用。

miR-126-3p靶向AKT2对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的探讨微小RNA-126-3p(miR-126-3p)对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测正常葡萄膜组织及葡萄膜黑色素瘤组织中miR-126-3p的表达。采用葡萄膜黑色素瘤MUM2B细胞作为研究对象,在细胞中分别转染miR-126-3p mimics及其阴性对照miR-NC、si-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)2及其阴性对照si-NC,分别记为miR-126-3p组、miR-NC组、si-AKT2组、si-NC组。甲基噻唑基四氮唑(MTT)、平板克隆形成实验检测增殖;Transwell小室实验检测迁移及侵袭;靶基因预测miR-126-3p的靶基因,双荧光素酶报告实验验证靶基因,Western印迹检测AKT2蛋白表达。MUM2B细胞中共转染miR-126-3p mimics与AKT2过表达载体,用以上方法检测细胞增殖、迁移及侵袭能力。结果与正常葡萄膜组织相比,miR-126-3p在葡萄膜黑色素瘤组织中表达水平显著降低(P<0.05);转染miR-126-3p mimics或si-AKT2后MUM2B细胞存活率降低,迁移、侵袭细胞数明显减少(P<0.05);miR-126-3p过表达可抑制野生型载体WT-AKT2细胞的荧光素酶活性,且miR-126-3p可负向调控AKT2表达(P<0.05);miR-126-3p+pcDNA3.1-AKT2组细胞存活率、迁移细胞数与侵袭细胞数明显高于miR-126-3p+pcDNA3.1组(P<0.05)。结论miR-126-3p可通过抑制靶基因AKT2表达而抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移、侵袭。

SH2B1沉默对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及PI3K/AKT通路的影响

目的研究沉默SH2B1基因表达对胃癌SGC-7901细胞增殖、凋亡及3-磷酸肌醇激酶(PI3K)/蛋白质丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(AKT)通路的影响。方法体外培养胃癌SGC-7901细胞,采用SH2B1 siRNA转染SGC-7901细胞作为研究组,采用国际通用的与所有基因均无同源序列的non-target siRNA转染作为阴性对照组(NC组),以未经处理的胃癌SGC-7901细胞作为空白对照组(BC组),48h后收集各组转染成功细胞,采用荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SH2B1 mRNA表达情况,采用蛋白质印迹法(Western Blot)检测SH2B1蛋白表达情况;采用细胞计数试剂盒(CKK-8)检测细胞增殖情况,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,同时检测Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、Caspase-9、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达情况。结果研究组SGC-7901细胞SH2B1蛋白及mRNA表达量较BC组和NC组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);转染后,siRNA组SGC-7901细胞增殖明显受到抑制、平板克隆形成率较BC组和NC组明显降低,凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与BC和NC组比较,研究组SGC-7901细胞PI3K、p-AKT蛋白、Ki67及PCNA蛋白呈低表达,差异有统计学意义(P<0.05),Caspase-9蛋白呈高表达,AKT蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论沉默SH2B1基因表达可能通过抑制PI3K/ATK信号通路激活,抑制SGC-7901细胞增殖,促进凋亡。

Rac1蛋白参与2型糖尿病发病

Rac1即Ras相关的C3肉毒素底物1,是Rho GTP酶家族Rac亚家族成员之一。Rho家族GTP酶是一类分子量为20-30 ku的单体G蛋白,又称小G蛋白。Rac1是细胞内重要的信号转导分子,其激活与一些疾病如2型糖尿病密切相关。本文就Rac1参与肌动蛋白骨架重构、参与调控NADPH氧化酶类及Rac1活化影响骨骼肌葡萄糖转运体-4调控葡萄糖摄取及其参与2型糖尿病的发病机制进行了综述。

LGR4、R-spondin2在胃癌组织中的表达及其预后相关性研究

目的:探讨富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体-4(LGR4)、R-spondin2在胃癌组织中的表达及其预后相关性。方法:2015年1月至2017年5月,151例胃癌患者术中癌灶组织151例,癌旁组织(距癌灶边缘≥5 cm)80例,采用免疫组织化学染色法检测组织中LGR4、R-spondin2表达,并分析其与胃癌患者临床病理特征的关系;采用乘积极限(K-M)法对胃癌患者进行生存分析,Log-rank检验比较显著性;采用COX回归模型分析胃癌患者预后影响因素。结果:与癌旁组织相比,癌灶组织LGR4、R-spondin2阳性表达率均较高(P<0.05)。胃癌组织中LGR4表达与性别、年龄均无关(P>0.05),与肿瘤直径、病理分级、临床分期、淋巴结转移均有关(P<0.05);R-spondin2表达与性别、年龄、肿瘤直径均无关(P>0.05),与病理分级、临床分期、淋巴结转移均有关(P<0.05)。151例胃癌患者在随访期内有72例死亡,病死率为47.68%,高于LGR4阴性表达者病死率(P<0.05),总生存期较短(P<0.05);R-spondin2阳性表达者病死率高于R-spondin2阴性表达者(P<0.05),总生存期较短(P<0.05)。COX多因素分析结果显示,LGR4阳性表达、R-spondin2阳性表达、低分化、Ⅲ~Ⅳ期、伴淋巴结转移均是影响胃癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:胃癌组织中LGR4、R-spondin2均为高表达,且两者均与患者临床病理特征密切相关,是影响患者预后的独立危险因素,可能用于临床病情评估及预后死亡风险预测。

Lgr5、VEGF及VEGFR-2在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体(Lgr5)、血管内皮生长因子(VEGF)及血管内皮生长因子受体-2(VEGFR-2)在结直肠癌和正常结直肠黏膜组织中的表达情况及与结直肠癌临床病理特征和预后的关系。方法选取90例结直肠癌患者癌组织标本作为观察组,选取其中10例患者癌旁正常结直肠黏膜组织标本作为对照组,应用免疫组化法检测2组标本中Lgr5、VEGF及VEGFR-2蛋白表达情况,分析Lgr5、VEGF及VEGFR-2表达与结直肠癌患者临床病理特征与预后的关系。结果观察组Lgr5、VEGF及VEGFR-2阳性表达率均明显高于对照组(P均<0.05)。观察组中Lgr5、VEGF及VEGFR-2阳性表达率与分化程度、有无淋巴结转移、临床分期、肿瘤大小、浸润深度均有明显相关性(P均<0.05),且线性相关性分析显示Lgr5、VEGF及VEGFR-2之间呈正相关性(P均<0.05);生存分析显示Lgr5、VEGF及VEGFR-2表达均与患者的预后相关(P均<0.05)。结论结直肠癌患者癌组织中Lgr5、VEGF及VEGFR-2高表达且具有协同正向作用,共同促进肿瘤的形成和进展。

KCNE2对胃癌细胞上皮间质转化和PI3K/AKT信号通路的影响

目的探讨钾离子通道蛋白家族成员2(KCNE2)在胃癌细胞增殖、迁移侵袭和上皮间质转化(EMT)中的作用及其对磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)信号通路的影响。方法采用GEPIA和UALCAN分析KCNE2在胃癌组织中的表达。收集胃癌肿瘤组织和胃癌细胞系(MKN-1、MKN-28、SGC-7901、MKN-45和MGC-803)用于检测KCNE2表达;采用Kaplan-Meier法和Log-rank检验进行生存分析。将MKN-45和MGC-803细胞分为pcDNA3.1组(阴性对照)和pcDNA3.1-KCNE2组(KCNE2过表达),CCK-8、伤口愈合实验和Transwell小室实验评估细胞的增殖、迁移和侵袭情况,qPCR和Western blot检测波形蛋白、N-钙黏蛋白、E-钙黏蛋白、磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)和磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(p-AKT)的表达。结果KCNE2在胃癌组织中表达下调,与胃癌分期、分级和淋巴结转移有关(P<0.05)。与GES-1细胞相比,KCNE2在胃癌细胞中低表达(P<0.05)。与pcDNA3.1组相比,pcDNA3.1-KCNE2组MKN-45和MGC-803细胞的增殖、伤口愈合率、侵袭细胞数和EMT过程均受到抑制(P<0.05)。另外,pcDNA3.1-KCNE2组MKN-45和MGC-803细胞中p-PI3K和p-AKT表达较pcDNA3.1组降低(P<0.05)。结论KCNE2可作为肿瘤抑制因子,下调PI3K/AKT信号通路活性,抑制胃癌EMT过程以及细胞增殖和转移。

大肠腺瘤、大肠癌序列过程中AKT2、HIF-1α的表达及其临床意义

目的检测丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶2（AKT2）、缺氧诱导因子-1α（HIF-100在正常大肠组织、癌旁大肠黏膜组织、大肠腺瘤及大肠癌中的表达，探讨2种标志物在大肠癌发生、发展中的作用及其相关性，为大肠癌临床病理诊断及预后判断提供参考指标。方法将50例大肠癌手术标本和10例相应癌旁大肠黏膜组织及14例正常大肠组织制作成组织芯片，同时将17例大肠腺瘤活检标本进行常规切片，应用免疫组化SABC法研究AKT2、HIF—1α在其中的表达。结果AKT2、HIF—1α在大肠癌中的阳性表达分别为84．0％、64．0％，二者表达呈显著正相关（r=0．285,P〈0．05）。AKT2在大肠癌中的阳性表达（84．0％）明显高于大肠腺瘤阳性表达（52．9％）和正常大肠组织的阳性表达（14．3％）（P〈O．05、P〈0．01）。HIF-1α在大肠癌中的阳性表达（64．0％）明显高于正常大肠组织（28．6％）（P〈0．05）；但在大肠腺瘤中的阳性表达为58．8％，与大肠癌的阳性表达比较，无显著性差异（P〉0．05）。AKT2、HIF—1α的表达与Dukes分期、淋巴结转移有关，而与患者性别、年龄及组织学分级无关。结论AKT2、HIF-1α在大肠癌中的阳性表达均较正常大肠组织增高，且二者呈正相关。AKT2可能通过调节HIF-1α表达来影响大肠癌的发生、发展、转移；AKT2、HIF-1α在正常大肠组织-大肠腺瘤-大肠癌发展过程中可能起重要作用，AKT2比HIF-1α能更好地作为临床监控大肠腺瘤癌变及大肠癌进展的指标。

存在LRRK2和Parkin基因罕见位点突变的早发性帕金森病一例

患者女性,32岁。因右下肢不自主运动1年余、渐进性加重1个月,于2018年3月26日入院。患者1年前无明显诱因出现右下肢震颤,尤以情绪激动时明显;6个月前出现左下肢运动受限,表现为左下肢拖曳步态,以快走、转弯、遇障碍物、人多等情况下运动速度减慢明显并易跌倒。

PI3-K/Akt信号通路对骨髓源性心肌干细胞分化的调控作用

目的研究磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶（PI3-K/Akt）信号通路在骨形态发生蛋白-2（BMP-2）诱导骨髓源性心肌干细胞（MCSCs）向心肌细胞分化中的调控作用,探讨MCSCs向心肌细胞分化的信号转导机制。方法利用单克隆培养技术从SD大鼠骨髓中筛选MCSCs,用BMP-2诱导其向心肌细胞定向分化,通过免疫细胞化学标记和Western blotting检测BMP-2诱导后细胞内p-Akt水平的变化,并通过RT-PCR检测心肌早期转录因子和心肌特异基因的表达。结果BMP-2诱导前MCSCs内p-Akt水平较低,诱导后渐增强,20~30min达高峰,1h后逐渐降低。用PI3-K抑制剂Ly294002预处理细胞后,p-Akt水平明显降低。RT-PCR检测显示,诱导前MCSCs的Nkx2.5和GATA-4呈低表达,诱导后2周表达增强,4周表达更加明显。cTnT和Cx-43 mRNA在诱导前未见表达,诱导后2周表达明显,4周表达增强。用Ly294002处理后,细胞的Nkx2.5、GATA-4和cTnT、Cx-43 mRNA的表达显著降低,细胞形态变化不明显。结论BMP-2能诱导MCSCs向心肌细胞分化,PI3-K/Akt信号通路在BMP-2诱导MCSCs向心肌细胞分化中发挥重要的调控作用。