中医药干预核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(NLRP3)炎症小体防治类风湿性关节炎的研究进展

类风湿性关节炎(RA)是一种慢性、全身性自身免疫性疾病,以软骨损伤、滑膜炎症等为主要病理特征。核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(NLRP3)炎症小体是一种细胞内感应蛋白复合物,可感知内源性危险信号并鉴别外来病原体,从而释放白细胞介素-1β、白细胞介素-18等促炎因子,介导细胞凋亡。研究表明,NLRP3炎症小体可以诱发炎症级联反应,加速软骨破坏,与RA密切相关。中医药在防治RA方面已取得一定成果。多项研究证实,中医药可靶向干预NLRP3炎症小体介导RA的病变过程,但尚未有系统性的相关论述。该文论述NLRP3炎症小体参与RA的机制,总结归纳近几年中医药干预NLRP3炎症小体防治RA的研究进展,以期为RA靶向药物的研发与应用提供一定借鉴。

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1、E-Cadherin和EGFR在胃癌中的表达和临床意义

目的探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)、上皮钙黏蛋白(E-Cadherin)和表皮生长因子受体(EGFR)在胃癌中的表达和及其与临床病理特征的相关性。方法选取50例胃癌患者作为研究对象,并选取正常胃黏膜组织50例作为对照。用免疫组化方法检测两组患者卵巢组织中的LRIG1、E-Cadherin和EGFR的表达,分析LRIG1、E-Cadherin和EGFR的阳性表达率在胃癌患者不同临床病理特征中的差异。采用spearson秩相关分析LRIG1,E-Cadherin和EGFR的阳性表达率的相关性。结果胃癌组的LRIG1、E-Cadherin的阳性表达率显著低于正常胃黏膜组,胃癌组的EGFR的阳性表达率显著高于正常胃黏膜组。胃癌中LRIG1、E-Cadherin和EGFR阳性表达率与临床分期、病理分级和淋巴结转移有关(P<0.05),而与年龄、组织学类型无关(P>0.05)。LRIG1、E-Cadherin和EGFR在胃癌患者中的阳性表达率具有相关性,共同调控参与胃癌的发生和发展。结论 LRIG1、E-Cadherin在胃癌中低表达和EGFR在胃癌中高表达,与胃癌的进展和转移相关。

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1基因特异性RNA干扰表达载体的构建、鉴定和稳定株筛选(英文)

背景:有研究表明富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1(leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains1,LRIG1)基因在神经胶质瘤细胞中呈低表达,LRIG1基因过表达后对神经胶质瘤细胞的LRIG1mRNA和蛋白表达均明显增强和抑制其生物学行为,但却很少有研究从阻断LRIG1基因的表达的角度进行论证。目的:构建针对LRIG1基因的特异性RNA干扰质粒,稳定转染人脑胶质瘤GL15细胞系,观察其对目的基因LRIG1表达的影响。方法:根据GenBank提供的LRIG1基因序列设计2条RNA干扰序列,命名为LRIG1-shRNA1和LRIG1-shRNA2,并设计1条非特异性序列作为阴性对照,命名为pGenesil2-negativeshRNA。合成各自的寡核苷酸链,退火后与pGenesil2质粒载体连接,转化扩增后测定序列。用不同浓度的G418作用于GL15细胞确定G418对GL15细胞的筛选浓度。将3种重组表达载体转染GL15细胞,G418筛选后挑单克隆并扩增获得稳定株。Western blot检测LRIG1蛋白的表达。结果与结论:构建的重组pGenesil2-LRIG1-shRNA质粒经限制性酶切及DNA测序分析证明其序列插入正确。转染pGenesil2-LRIG1-shRNA1(LRIG11)细胞和pGenesil2-LRIG1-shRNA2(LRIG12)细胞LRIG1蛋白表达水平较阴性对照组pGenesil2-negativeshRNA分别下降47.9%(P<0.01)和32.8%(P>0.05)。结果证实,实验成功构建了针对LRIG1基因的特异性shRNA表达载体pGenesil2-LRIG1-shRNA1,其转染GL15细胞后可抑制LRIG1的表达。

三阴性乳腺癌组织富含亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体5表达及其对MDA-MB-231细胞免疫微环境的调控作用

目的检测富含亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体5(LGR5)在三阴性乳腺癌组织中的表达,并探究其对肿瘤细胞免疫微环境的影响。方法收集2017年1月至2019年12月于四川大学华西医院龙泉医院行手术治疗的40例三阴性乳腺癌(TNBC)患者的癌组织及癌旁组织,以及培养乳腺上皮癌细胞株MDA-MB-231作为研究对象。采用免疫组织化学染色法检测癌组织及癌旁组织中LGR5的表达水平。将MDA-MB-231细胞随机分为空白对照组、NC shRNA组和LGR5 shRNA组,采用脂质体介导法将LGR5 shRNA质粒及NC shRNA质粒分别转染至LGR5 shRNA组和NC shRNA组细胞,空白对照组细胞正常培养;转染24h后,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot检测细胞中LGR5的表达,采用MTT法和流式细胞术检测细胞存活与凋亡,采用Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-13、金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP1)蛋白的表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中转化生长因子(TGF)-β1、白介素(IL)-2、IL-6、IL-10的含量。从健康志愿者外周血中分离自然杀伤(NK)细胞,测定NK细胞对MDA-MB-231细胞的杀伤活性。结果TNBC患者癌组织中LGR5阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.05);与空白对照组比较,LGR5 shRNA组细胞中LGR5 mRNA与蛋白的表达水平均下降,细胞存活率下降、凋亡率增加(P<0.05);与空白对照组比较,LGR5 shRNA组细胞上清中TGF-β1、IL-10含量下降而IL-2、IL-6含量升高,MMP-9和MMP-13蛋白表达下降,TIMP1蛋白表达升高(P<0.05);沉默LGR5表达后,NK细胞对LGR5 shRNA组细胞的杀伤率显著增加(P<0.05)。结论LGR5在TNBC患者癌组织中呈高表达,并参与免疫微环境形成,沉默该基因表达可增强NK细胞对TNBC的杀伤效应。

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)增强顺铂诱导的人垂体瘤细胞凋亡

目的探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白结构域1(LRIG1)在人垂体瘤组织中表达情况,并观察过表达LRIG1后对顺铂(DDP)诱导的垂体瘤细胞增殖、凋亡的影响。方法采用免疫组织化学染色法检测45例垂体瘤患者肿瘤组织及瘤旁组织中的LRIG1表达,分析LRIG1阳性表达与患者临床病理指标的相关性。选取原代分离培养的人垂体瘤细胞,采用脂质体介导的基因转染技术将LRIG1基因过表达质粒p EGFP-N1-LRIG1转染进细胞中,筛选LRIG1过表达的细胞,同时选取转染空质粒p EGFP-N1的细胞作为对照组。两组细胞均经20μg/m L DDP诱导48 h,流式细胞术检测细胞凋亡情况,平板克隆实验检测细胞的增殖能力,Western blot法检测细胞中凋亡相关蛋白BAX、胱天蛋白酶3(caspase-3)和Bcl2的相对表达量。结果垂体瘤患者肿瘤组织中LRIG1阳性率显著低于瘤旁组织,且LRIG1在侵袭性肿瘤表达显著降低。与对照组相比,过表达LRIG1后,DDP诱导的细胞凋亡率显著增加、细胞增殖显著降低、BAX、caspase-3的水平显著增加,而Bcl2水平显著降低。结论过表达LRIG1增加DDP诱导的人垂体瘤细胞凋亡并抑制其增殖。

乳腺浸润性导管癌患者术后癌组织中真核翻译起始因子4e、3h和富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体5表达特征

目的检测乳腺浸润性导管癌患者术后癌组织中真核翻译起始因子(EIF)4e、3h和富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体(LGR)5的表达及其相关性。方法 132例乳腺浸润性导管癌术后组织蜡块及临床资料为研究组,经病理证实为正常乳腺小叶和导管上皮组织85例为对照组,选择EIF4e、3h和LGR5的多克隆性抗体,应用免疫组化SP法检测3种蛋白的表达。结果研究组EIF4e、3h和LGR5表达阳性率明显高于对照组,研究组EIF4e、3h和LGR5表达与肿瘤最大径、脉管浸润、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和Ki67的表达均具有相关性,EIF4e表达与淋巴结转移相关。研究组EIF4e和3h、EIF3h和LGR5表达正相关。结论乳腺浸润性导管癌患者术后组织中EIF4e、3h和LGR5高表达且具有协同作用,三者参与肿瘤的发生和进展,术后联合检测EIF4e、3h和LGR5的表达可能对判断预后有一定价值。

NALP3富含亮氨酸重复序列结构域识别人细胞周期蛋白H和禽冠状病毒蛋白

目的:寻找与NALP3富含亮氨酸重复序列(leucine-rich repeat,LRR)结构域相互作用的蛋白质分子。方法:克隆NALP3富含亮氨酸重复序列(NALP3-LRR)结构域的DNA序列并经测序检验。应用酵母双杂交技术,构建以NALP3-LRR结构域为诱饵基因的酵母双杂交载体,对人胚肺cDNA文库进行杂交筛选,经酵母回交实验验证蛋白质在酵母细胞内的相互作用并对阳性克隆的DNA进行序列测定和生物信息学分析。将筛选到的阳性克隆进一步用免疫共沉淀实验验证NALP3-LRR结构域与阳性蛋白之间相互作用的可靠性。结果:成功克隆NALP3-LRR结构域的DNA序列并经测序检验正确。用酵母双杂交技术对人胚肺cDNA文库进行酵母杂交筛选共获得4个阳性克隆。免疫共沉淀实验证实能与NALP3-LRR结构域发生相互作用的阳性蛋白是人细胞周期蛋白H和禽传染性支气管炎病毒株Cal99的ORF1a。结论:NALP3的富含亮氨酸重复序列结构域能与人细胞周期蛋白H和禽冠状病毒蛋白发生相互作用。

亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域1、存活蛋白在胶质瘤中的表达及对患者远期预后的影响

目的探讨亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域1(LRIG1)、存活蛋白(survivin)在胶质瘤中的表达及对患者远期预后的影响。方法选取77例胶质瘤患者,取其胶质瘤组织及相应的癌旁组织,采用免疫组化法检测LRIG1、survivin的表达情况。随访3年,记录胶质瘤患者的预后情况,胶质瘤患者预后的影响因素采用多因素Logistic回归分析。结果胶质瘤组织中LRIG1阳性表达率明显低于癌旁组织,survivin阳性表达率明显高于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。随访3年,77例胶质瘤患者中死亡25例,生存52例。预后死亡胶质瘤患者胶质瘤组织中LRIG1阳性表达率低于生存患者,survivin阳性表达率高于生存患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。Logistic回归分析结果显示,肿瘤直径≥5 cm、高级别胶质瘤、LRIG1阴性表达、survivin阳性表达均是胶质瘤患者预后的独立危险因素(P﹤0.05)。结论胶质瘤组织中LRIG1呈阴性表达,survivin呈阳性表达,且二者均是胶质瘤患者预后的独立危险因素,临床可通过检测这两种指标为胶质瘤患者的远期预后评估提供参考。

多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1对U251胶质瘤细胞基因表达的影响

目的运用基因芯片技术研究多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains 1,LRIG1)对U251胶质瘤细胞基因表达的影响。方法提取正常U251细胞和转染了LRIG1的U251细胞的RNA,并反转录为cDNA,加用cy3、cy5染色标记后使用Roche-Nimble Gen人全基因组表达谱芯片检测LRIG1对U251胶质瘤细胞基因表达的影响。结果转染LRIG1的U251细胞相对U251细胞,差异基因为808条,其中上调基因有397条,下调基因有411条,包括细胞骨架、细胞增殖、细胞凋亡、生长代谢等相关基因。结论基因芯片能够高效地初步检测差异基因表达,有助于揭示LRIG1作用于胶质瘤细胞的分子机制。

Rspo3/Lgr5促进N-钙黏蛋白表达参与小鼠肝损伤

目的本文旨在研究在损伤肝组织中,特异性顶部盘状底板反应蛋白3(R-spondin3,Rspo3)上调周细胞N-钙黏蛋白(N-cadherin,Ncad,基因名Cdh2)表达,从而参与小鼠肝损伤。方法采用反转录实时定量聚合酶链反应法(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)测定Rspo3,小鼠肝组织富含亮氨酸重复序列G蛋白偶联受体5(leucine-rich repeat-containing G protein-coupled receptor 5,Lgr5)和Cdh2 mRNA表达情况;采用蛋白质免疫印迹方法以及免疫荧光染色方法测定Ncad定位以及表达情况;分离并培养小鼠原代骨髓间充质细胞(bone marrow mesenchymal stromal cell,BMSC),采用靶向Lgr5的RNA干扰实验以确定Rspo3是否通过作用于Lgr5上调Ncad表达。结果在损伤小鼠肝组织中,Rspo3及其受体Lgr5显著上调;肝损伤时黏附连接蛋白Ncad表达上调,且与Rspo3及Lgr5表达量呈正相关;Ncad主要定位于损伤肝脏的周细胞;使用Rspo3处理小鼠原代BMSC能够上调Ncad表达,Lgr5 siRNA能使Ncad水平下降。结论在小鼠损伤肝组织中,Rspo3通过作用于受体Lgr5,上调周细胞中Ncad表达,从而影响小鼠肝损伤。

富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域基因3在肝癌细胞株中的表达及对细胞周期、侵袭性和凋亡的影响

目的观察富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域基L大J3（LRIG3）在3种肝癌细胞株HepG-2、LM3和7721中的表达，探讨LRIG3基因对肝癌细胞株HepG-2、LM3和7721的细胞周期、侵袭能力和凋产的影响。方法将过表达的LRIG3质粒和空白质粒经脂质体法分别转染肝癌细胞株HepG-2、LM3和7721中，相对廊分为实验组和对照组，采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Westernblot法检测LRIG3表达水平变化，采用流式细胞仪、Transwell法及原佗末端转移酶标记（TUNEL）等方法对细胞株的生物学行为进干亍分析。

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1在垂体瘤中的表达及其预后意义

目的 探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1（LRIGl）在垂体瘤中的表达及意义.方法 应用免疫组织化学链菌素抗生物素蛋白-过氧化物酶（SP）法检测74例垂体瘤、20例正常脑组织中LRIG1的表达,分析其表达与患者预后的关系.结果 LRIG1在正常脑组织中的阳性表达率为100.0％,明显高于垂体瘤中的表达（54.1％）,差异有统计学意义（P＜0.05）.同时,LRIG1在非侵袭性垂体瘤中的阳性表达率为66.7％,明显高于在侵袭性垂体瘤中的表达（20.0％）.Kaplan-Meier生存分析表明LRIG1及垂体瘤类型与患者的预后明显相关（P＜0.05）.Cox多因素生存分析表明LRIGI可作为患者预后评估的独立因素.结论 LRIG1参与了垂体瘤的发生及发展,低表达患者预后较差.

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2基因全长及胞外段慢病毒表达载体的构建及对胶质瘤细胞增殖的影响

目的构建富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2（LRIG2）基因全长及胞外段的慢病毒表达载体并转染人胶质瘤细胞株，观察其对胶质瘤细胞增殖的影响。方法运用基因重组技术将LRIG2基因全长（LRIG2）和胞外段（LRIG2ecto）片段分别插入慢病毒载体pLVX—Puro-3×Flag：然后用pLVX—Puro-3×Flag-LRIG2和pLVX。Puro-3×Flag—LRIG2ecto分别转染胶质瘤细胞株U87；荧光定量聚合酶链反应（PCR）和Westernblot分别检测LRIG2及LRIG2ecto的mRNA和蛋白表达；细胞增殖检测试剂盒（CCK-8）检测转染后细胞的增殖；流式细胞术检测细胞周期。结果West-ernblot鉴定Flag标签蛋白表达成功；LRIG2及LRIG2ecto过表达组mRNA表达分别是对照组的8．42和29．58倍（P〈0．01）；LRIG2及LRIG2ecto过表达组细胞增殖率明显高于对照组；LRIG2及LRIG2ecto过表达组细胞增殖指数（PI）分别为（50．63±1．29）％和（48．61±0．55）％，明显高于对照组（42．48±0．72）％（P〈0．01）。结论成功建立稳定表达外源性LRIG2基因全长及胞外段的人胶质瘤细胞株，且证实均促进胶质瘤细胞增殖。

RNA干扰富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2后对胶质瘤细胞生长的影响及其机制

目的探讨RNA干扰富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2（LRIG2）基因表达后对胶质瘤细胞生长的影响及其机制。方法用携带U6启动子和LRIG2特异性短发夹RNA（shRNA）序列的质粒载体pGenesil2-LRIG2-shRNA（siRNA）及含非特异性shRNA编码序列的对照质粒pGenesil2-scramble—shRNA（set）转染胶质瘤细胞系GL15、G418（600mg/L）筛选出稳定株，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Westemblot法检测LRIG2和表皮生长因子受体（EGFR）表达的改变。噻唑蓝（MTT）比色法检测稳定转染对照组和实验组细胞的增殖，流式细胞仪检测对照组和实验组细胞的细胞周期改变。结果实验组细胞LRIG2mRNA和蛋白水平与对照组比较分别下降了68．6％和62．3％，EGFR蛋白水平下降了32．6％。MTT结果显示实验组细胞增殖率低于对照组。细胞周期分析表明对照组G0／G1期为（26．72±2．10）％，实验组为（36．58±3．29）％（P〈0．05），LRIG2表达下调后GL15细胞细胞周期部分阻滞在G0／G1期。结论GL15细胞经RNA干扰基因表达后，LRIG2mRNA和蛋白水平明显降低，同时EGFR蛋白水平下降，从而抑制细胞增殖和使细胞周期阻滞在G0／G1期。LRIG2可通过EGFR信号系统影响胶质瘤细胞的生长。

富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域基因1过表达对膀胱癌细胞免疫相关基因的影响

目的利用基因表达谱芯片技术筛选过表达富含亮氨酸重复序列和免疫球蛋白样结构域基因1（LRIG1）的膀胱癌细胞与对照组膀胱癌细胞间差异表达的免疫相关基因，探讨LRIG1对膀胱癌细胞免疫功能影响的机制。方法分别提取转染LRIG1基因的膀胱癌细胞BIU87-LRIG1和未转染LRIG1基因的膀胱癌细胞BIU87的总核糖核酸（RNA），反转录成cDNA并标记后，同22K人类基因表达谱芯片杂交后筛选出与免疫相关的差异表达基因，并进一步使用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）验证。结果在21522条基因中，两组细胞间差异表达的免疫相关基因有9条，其中BIU87-LRIG1细胞中上调基因4条，下调基因5条。RT-PCR提示BIU87-LRIG1组的程序化死亡基因5（PDCD5）表达水平（1．22±0．04）较BIU87组（0．43±0．06）明显增高。结论使用基因芯片技术筛选出了LRIG1过表达可影响膀胱癌免疫功能的9种相关基因。

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白1在食管癌中的研究

食管癌的发病具民族及地区特异性。我国的哈萨克族是食管癌高发民族，深入研究哈萨克族食管癌发病机制具重要意义。富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白（leucine-rich repeats and immunoglobulin like domainprotein, Lrig） 1是调控表皮生长因子受体（epidermal growth factor tyrosine kinase receptor,EGFR）信号通路的上游因子，在大多数肿瘤中表达缺失。

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2调控血小板源性生长因子受体β信号通路促进胶质母细胞瘤细胞周期进展

目的探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2(LRIG2)调控血小板源性生长因子受体β(PDGFRβ)信号通路促进胶质母细胞瘤(GBM)细胞周期进展的机制。方法免疫组织化学法检测肿瘤组织中蛋白表达;流式细胞术检测细胞周期进展;裸鼠皮下移植瘤模型检测细胞在体成瘤能力;免疫荧光共聚焦及免疫共沉淀检测蛋白结合;Western blot检测信号通路蛋白表达。结果人GBM组织中LRIG2与PDGFRβ蛋白表达呈正相关(χ^2=6.411,P<0.05)。PDGF-BB刺激下,LRIG2过表达组S期及G2/M期细胞百分比均明显高于对照组[(22.74±1.23)%比(11.60±0.82)%,t=13.052,P<0.05;(19.06±1.04)%比(9.36±0.65)%,t=13.699,P<0.05]。裸鼠皮下移植瘤LRIG2过表达组肿瘤体积明显高于对照组[(1 372.56±167.88) mm3比(413.34±76.79) mm3,t=11.619,P<0.05]。GBM细胞中LRIG2蛋白与PDGFRβ蛋白存在共表达,且存在物理性结合。PDGF-BB刺激下,LRIG2过表达组U87细胞中PDGFRβ、磷酸化PDGFRβ(p-PDGFRβ)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化信号转导与转录激活因子-3(p-STAT3),细胞周期蛋白(Cyclin) B1和Cyclin D1表达水平均明显高于对照组。结论LRIG2通过调控PDGFRβ信号通路促进GBM细胞周期进展。

信号转导和转录激活因子3信号通路在多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1诱导U251细胞凋亡中的作用

目的探讨信号转导和转录激活因子3 （STAT3）信号通路在多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白l（LRIGl）诱导人脑胶质瘤细胞株U251细胞凋亡中的作用及机制。方法传代培养U251细胞，随机分为对照组、空载体组及实验组，应用脂质体介导的基因转染技术分别将磷酸盐缓冲液（PBS）、PEGFP-N1质粒体、PEGFP-LRIG1质粒体转染入各组细胞，应用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞体外生长活性，膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）/碘化丙锭（PI）法经流式检测各组细胞凋亡率，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法测定各组细胞中STAT3的mRNA表达，Westernblot法测定各组细胞中STAT3、磷酸化STAT3（p-STAT3）、B淋巴细胞/白血病-2（ bcl-2）、bax的蛋白表达。结果成功转染LRIG1，实验组细胞中LRIG1基因表达明显上调（P〈0.05）;实验组细胞增殖显著受抑，48 h抑制率为（45. 12 ±0. 68）%，72h抑制率为（52. 24 ± 1. 77）%，总凋亡率由（2. 54 土0. 43）%增高至（22. 51 ±2. 12）%（P〈0. 05） ； RT-PCR检测显示实验组细胞中STAT3 mRNA表达明显降低;Western blot检测显示实验组细胞中STAT3蛋白表达及磷酸化水平明显降低，bcl-2表达明显降低，bax表达明显升高。结论LRIG1可促进U251细胞凋亡，其机制可能是通过下调STAT3信号通路，进而抑制STAT3激活的抗凋亡途径。

富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1基因过表达增强膀胱癌T24细胞对顺铂敏感性的实验研究

目的 探讨富含亮氨酸重复和免疫球蛋白样结构域1 （leucine-rich repeats and immunoglobulin-like domains-1,LRIG1）基因过表达对膀胱癌T24细胞顺铂（cis-diaminodichloroplatinum,CDDP）敏感性的影响及其机制.方法 2012年12月至2014年2月选取膀胱癌T24细胞株,将建立并鉴定的过表达LRIG1基因的T24细胞分为3组：实验组,转染Ad-Surp-LRIGl;对照组,转染Adeno-SP-EGFP;空白组,未转染.将3组细胞分别加入CDDP,构建为CDDP/Ad-Surp-LRIG1组、CDDP/Adeno-SP-EGFP组、CDDP组,与未加入CDDP的空白组共4组进行诱导凋亡实验.采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染前后T24细胞中LRIG1和表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）的表达水平.蛋白质印迹法检测CDDP对T24细胞的总EGFR和核磷酸化EGFR表达的影响.采用CCK-8法检测各组细胞对CDDP的敏感性.流式细胞学检测各组细胞的凋亡率.结果 实验组、对照组和空白组的LRIG1 mRNA和EGFR mRNA的表达量分别为2.79±0.15和0.65±0.05、0.76±0.09和1.98±0.07、0.66±0.05和2.05±0.04,LRIG1蛋白和EGFR蛋白分别为1.98±0.12和0.92±0.05、0.88 ±0.07和2.51 ±0.07、1.00 ±0.08和2.42±0.09,实验组与对照组和空白组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）,对照组与空白组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.CDDP组、CDDP/Adeno-SP-EGFP组和CDDP/Ad-Surp-LRIGl组的半数抑制浓度IC50值分别为（30.96±0.57）、（31.55 ±0.48）和（14.09±0.31） μg/ml,CDDP组与CDDP/Adeno-SP-EGFP组和CDDP/Ad-Surp-LRIGl组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）,CDDP/Adeno-SP-EGFP组和CDDP/Ad-Surp-LRIGl组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.CDDP/Ad-Surp-LRIGl组的细胞凋亡率[（69.77±2.14）％]高于CDDP/Adeno-SP-EGFP组[（48.15±1.53）％]、CDDP组[（46.82±1.23）％]、空白组[（3.17±0.21）％],差异均有统计学意义（P＜0.05）,CDDP组和CDDP/Adeno-SP-EGFP组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.空白组、CDDP组、CDDP/Adeno-SP-EGFP组、CDDP/Ad-Surp-LRIGl组的总EGFR和核磷酸化EGFR的表达量分别为2.52±0.11和1.76±0.08、1.22±0.05和2.75±0.15、1.25±0.05和2.82±0.13、0.32 ±0.02和1.08±0.04,CDDP组与空白组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,CDDP/Adeno-SP-EGFP组与CDDP/Ad-Surp-LRIGl组比较差异有统计学意义（P＜0.05）,CDDP组与CDDP/Adeno-SP-EGFP组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 LRIG1通过下调EGFR和核磷酸化EGFR的表达促进CDDP诱导的T24细胞凋亡,提高T24细胞对CDDP的敏感性.

多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白3基因表达沉默对人肿瘤裸鼠移植瘤生长的影响

目的 构建人肿瘤裸鼠移植瘤模型,探讨多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白3（LRIG3）表达沉默后对移植瘤生长以及表皮生长因子受体（EGFR）表达的影响.方法 将Hela229细胞接种于裸鼠背部皮下,成瘤后将裸鼠分为3组,分别在瘤体内注射生理盐水、LRIG3反义寡核苷酸（ASODN）、LRIG3错义寡核苷酸（MSODN）,检测各组移植瘤生长以及LRIG3和EGFR表达.结果 ASOND组较其他两组瘤体生长加快、体积增大,苏木素-伊红（HE）染色可见核仁染色较深,核分裂相增多,LRIG3蛋白表达结果：空白对照组为0.2302±0.0108、MSODN组为0.2203±0.0183,ASODN组为0.1532±0.0132,两两比较,ASODN组肿瘤组织中LRIG3蛋白表达明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）.EGFR蛋白表达结果：空白对照组为0.9212±0.0796、MSODN组为0.9904±0.0830、ASODN组为1.2730±1.1116,两两比较,ASODN组肿瘤组织中EGFR蛋白表达明显增加,差异有统计学意义（P＜0.05）.LRIG3表达降低,EGFR表达升高.结论 LRIG3基因表达抑制引起人肿瘤裸鼠移植瘤生长加快,瘤体内EGFR表达升高.