中医药干预核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(NLRP3)炎症小体防治类风湿性关节炎的研究进展

类风湿性关节炎(RA)是一种慢性、全身性自身免疫性疾病,以软骨损伤、滑膜炎症等为主要病理特征。核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(NLRP3)炎症小体是一种细胞内感应蛋白复合物,可感知内源性危险信号并鉴别外来病原体,从而释放白细胞介素-1β、白细胞介素-18等促炎因子,介导细胞凋亡。研究表明,NLRP3炎症小体可以诱发炎症级联反应,加速软骨破坏,与RA密切相关。中医药在防治RA方面已取得一定成果。多项研究证实,中医药可靶向干预NLRP3炎症小体介导RA的病变过程,但尚未有系统性的相关论述。该文论述NLRP3炎症小体参与RA的机制,总结归纳近几年中医药干预NLRP3炎症小体防治RA的研究进展,以期为RA靶向药物的研发与应用提供一定借鉴。

NLRP3炎症小体在肺癌中的研究进展

核苷酸结合结构域富含亮氨酸重复序列和含热蛋白结构域受体3(nucleotide-binding domain leucine-rich repeat and pyrin domain-containing receptor 3,NLRP3)炎症小体是重要的炎症反应调节因子,可诱导炎症级联反应,参与细胞凋亡。炎症与肿瘤发生发展存在某种关联。本文对NLRP3炎症小体的研究进展及其在肺癌发生发展和治疗方面的相关研究成果进行综述,旨在为肺癌的临床预后及治疗方案的选择提供一定参考。

炎症小体NLRP3调控LPS诱导的前列腺癌增殖和侵袭的机制研究

目的探讨炎症小体NLRP3对LPS诱导的前列腺癌细胞增殖和侵袭能力的影响及分子机制。方法体外培养人前列腺癌细胞系PC-3和DU-145,加入LPS刺激或转染siNC及NLRP3 siRNAs,用CCK-8实验检测细胞增殖活性,用Transwell实验检测细胞侵袭能力,用实时荧光定量PCR实验及Western blot实验检测NLPR3表达水平,用生物信息学手段分析NLRP3表达水平与炎症细胞浸润的相关性。结果与Control组相比,LPS处理组前列腺癌细胞增殖活性升高,侵袭能力增强,NLRP3表达水平显著升高,差异均具有统计学意义(P<0.05);敲低NLRP3抑制前列腺癌细胞的增殖活性和侵袭能力,以及细胞分泌的IL-18水平,差异具有统计学意义(P<0.05)。前列腺癌组织中NLRP3与多种炎症细胞浸润呈正相关。结论LPS诱导前列腺癌细胞中NLRP3表达水平升高,增强细胞增殖、侵袭能力及炎症因子的分泌,促进炎症细胞浸润。

白色念珠菌经组织蛋白酶B途径诱导小鼠腹腔巨噬细胞NLRP3炎性体表达

目的探讨含热蛋白结构域3富含亮氨酸重复序列的核苷酸结合寡聚化结构域(NLRP3)在白色念珠菌诱导的小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子产生中的作用及其激活途径。方法体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,将其分为空白对照组、CA-074Me组、白色念珠菌组、白色念珠菌+10-6mol·L-1CA-074Me组和白色念珠菌+10-5mol·L-1CA-074Me组。实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞内NLRP3 mRNA表达,Western blot检测细胞内溶酶体组织蛋白酶B(cathepsin B)和胱天蛋白酶-1(caspase-1)p20蛋白质水平,酶联免疫吸附试验测定各组细胞培养上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)水平。结果白色念珠菌组细胞内NLRP3 mRNA表达、cathepsin B和caspase-1 p20蛋白表达、细胞培养上清液中IL-1β水平均显著高于空白对照组(P<0.01)。加入10-5mol·L-1CA-074Me干预后,细胞内NLRP3mRNA表达、cathepsin B和caspase-1 p20蛋白的表达及细胞培养上清液中IL-1β水平与白色念珠菌组比较显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论白色念珠菌通过活化cathepsin B诱导巨噬细胞NLRP3的表达、caspase-1的活化和IL-1β的分泌。

下调PHLPP1表达通过激活PI3K/AKT/mTOR通路改善高糖诱导的人足细胞自噬抑制和凋亡促进作用

目的研究富含亮氨酸重复序列的普列克底物蛋白同源结构域蛋白磷酸酶1(PHLPP1)在糖尿病肾病(DN)肾组织的表达及其对足细胞自噬、凋亡的影响并初步探究其相关作用机制。方法采用免疫组织化学检测DN肾组织及非糖尿病肾组织PHLPP1表达,免疫荧光组织化学染色检测肾病蛋白(nephrin)、 PHLPP1的共表达以确定PHLPP1在足细胞的定位;在正常葡萄糖(NG)及高糖(HG)培养液中培养足细胞,实时荧光定量PCR检测细胞PHLPP1 mRNA表达。采用脂质体瞬时转染技术将靶向沉默PHLPP1的小干扰RNA(si-PHLPP1)转染入足细胞,实时定量PCR检测转染效率;按足细胞处理方式的不同将细胞分为NG组(正常葡萄糖浓度的培养液进行培养的足细胞)、 HG组(高糖培养液培养的足细胞)、 HG联合si-PHLPP1组(高糖培养液培养转染si-PHLPP1后的足细胞组)、羟氯喹(HCQ)处理的HG组(用自噬抑制剂HCQ与HG培养液联合处理的足细胞)。透射电镜观察各组足细胞中自噬小体的形成, Western blot法检测微管相关蛋白1轻涟3(LC3)、 P62、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化的mTOR(p-mTOR)、裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、蛋白激酶B (AKT)及磷酸化的AKT(p-AKT)蛋白表达,异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡。结果 PHLPP1在DN患者肾组织中高表达,且主要表达于肾小球足细胞内。HG培养液能够促进足细胞中PHLPP1 mRNA表达,并具有时间依赖性;与NG组相比, HG组、 HG联合si-PHLPP1组及HG联合HCQ组的足细胞自噬水平、 PI3K蛋白表达与mTOR的磷酸化水平均显著减低,细胞凋亡率、 c-caspase-3蛋白表达水平均显著增加,但HG联合si-PHLPP1组细胞的AKT磷酸化水平明显升高,其余两组AKT磷酸化水平显著降低;与HG组相比, HG联合si-PHLPP1组细胞的凋亡率、c-caspase-3蛋白表达均明显降低,而自噬水平, PI3K蛋白表达与mTOR和AKT蛋白的磷酸化水平均显著增加, HG联合HCQ组细胞的自噬水平明显降低,凋亡率与c-caspase-3蛋白表达均显著增加,其他指标无明显变化。结论 PHLPP1在DN肾组织显著高表达,下调足细胞PHLPP1的表达通过激活PI3K/AKT/mTOR通路促进足细胞自噬水平,减少足细胞的凋亡。

原发性肝癌患者癌组织NLRP3炎性小体表达状况研究

目的研究原发性肝癌患者癌组织核苷酸结合寡聚化结构域富含脓素亮氨酸重复序列结构域3(NLRP3)炎性小体表达情况。方法2017年1月~2018年1月我院诊治的原发性肝癌(PLC)患者34例和同期因肝胆管结石切除的肝组织标本30份,采用免疫组织化学法检测肝组织NLRP3炎性小体表达,采用RT-PCR法检测肝组织NLRP3 mRNA水平,采用ELISA法检测血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平,采用蛋白印记法检测肝组织NLRP3炎性小体、细胞钙依粘连蛋白、波形蛋白和半胱氨酸蛋白酶-1表达。结果肝癌组织细胞NLRP3炎性小体阳性率为76.5%,显著高于正常对照组的23.3%(P<0.05);肝癌组织NLRP3 mRNA水平为(-2.58±0.35),显著高于正常肝组织[(0.00±0.24),P<0.05];PLC患者血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平分别为(17.25±3.36)pg/ml、(60.32±8.14)pg/ml和(24.68±3.58)pg/ml,显著高于对照组[(10.35±1.25)pg/ml、(33.21±4.20)pg/ml和(10.36±2.54)pg/ml,P<0.05];正常对照组肝组织钙依粘连蛋白水平为(1.2±0.15),显著高于肝癌组[(0.41±0.04),P<0.05],而半胱氨酸蛋白酶-1和波形蛋白水平为(0.21±0.03)和(0.42±0.06),显著低于肝癌组[(1.49±0.12)和(1.51±0.14),P<0.05]。结论原发性肝癌患者癌组织NLRP3炎性小体呈现高表达,可能会导致炎症反应并促进肝癌细胞的迁移。

miR-25-3p和PHLPP2在肺腺癌中的表达及其与预后的相关性分析

目的检测miR-25-3p与PH结构域和富含亮氨酸的重复蛋白磷酸酶2(PHLPP2)在肺腺癌组织中的表达情况,探讨二者与肺腺癌临床病理参数及预后的相关性。方法选择2014年3月至2016年11月在该院手术治疗的肺腺癌患者90例,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测研究对象肺腺癌组织与癌旁组织中miR-25-3p和PHLPP2 mRNA表达水平,分析miR-25-3p mRNA和PHLPP2表达与肺腺癌患者预后的关系。结果miR-25-3p mRNA在肺腺癌组织中表达水平高于癌旁组织(P<0.05),PHLPP2 mRNA在肺腺癌组织中表达水平低于癌旁组织(P<0.05);miR-25-3p mRNA和PHLPP2表达水平与肺腺癌分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05);miR-25-3p mRNA高表达组患者的3年累积生存率明显低于miR-25-3p mRNA低表达组,PHLPP2高表达组患者的3年累积生存率明显高于PHLPP2低表达组(P<0.05)。Cox回归模型分析显示,淋巴结转移、miR-25-3p mRNA高表达、PHLPP2低表达是影响肺腺癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论在肺腺癌组织中miR-25-3p mRNA高表达、PHLPP2低表达与患者生存情况有关,可能作为肺腺癌患者潜在的预后标志物。