富含亮氨酸重复激酶2在神经病理性疼痛大鼠痛敏中的作用及机制研究

目的研究富含亮氨酸重复激酶2(LRRK2)对神经病理性疼痛(NP)大鼠痛觉敏感性的影响,并探讨其可能的机制。方法将48只SD大鼠随机分成4组:假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、LRRK2抑制剂组(MLi-2组)和LRRK2抑制剂+p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)激动剂组(MLi-2+Anisomycin组),每组12只。采用坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)诱导NP大鼠模型,术后第8天开始鞘内注射MLi-2(1 mg/kg,10μl)或Anisomycin(20μmol/L,10μl),每天1次,连续7 d。分别于术前(第0天)及术后第7、14天进行痛觉敏感性检测,分析各组大鼠机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(PWTL)变化;ELISA检测大鼠脊髓背角中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;尼氏染色观察大鼠脊髓组织神经元病理变化;免疫荧光染色观察大鼠脊髓中小胶质细胞标志物离子化钙结合适配分子-1(Iba-1)表达水平;Western blot检测大鼠脊髓背角中LRRK2、p-p38 MAPK、p38 MAPK和Iba-1蛋白表达水平。结果与Sham组比较,Model组大鼠右侧后肢MWT和PWTL均明显降低(P<0.01),脊髓背角组织中IL-1β、IL-6和TNF-α含量及LRRK2、Iba-1蛋白和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白比值水平均明显升高(P<0.01),脊髓组织中Iba-1阳性细胞比例明显升高(P<0.01),而尼氏小体明显减少(P<0.01)。与Model组比较,MLi-2组大鼠右侧后肢MWT和PWTL明显升高(P<0.01),尼氏小体明显增多(P<0.01),脊髓组织中Iba-1阳性细胞比例明显降低(P<0.01),脊髓背角组织中IL-1β、IL-6和TNF-α水平及LRRK2、Iba-1蛋白和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白比值水平明显降低(P<0.01)。然而,Anisomycin干预可激活p38 MAPK信号通路,并部分逆转MLi-2对NP大鼠痛敏、神经炎症的改善作用。结论抑制LRRK2表达可减轻由小胶质细胞活化介导神经炎症引起的NP大鼠痛觉敏感性,其作用机制可能与调控p38 MAPK信号通路有关。

帕金森病与富含亮氨酸重复片段的激酶2、脂酶基因基因多态性的关系

目的探讨富含亮氨酸重复片段的激酶2（LRRK2）、脂酶基因（GBA）基因多态性与帕金森病（PD）的相关性。方法选取我院就诊的帕金森患者70例，作为PD组。同时选取70例我院门诊健康体检人员，作为对照组。分别对两组进行LRRK2、GBA基因检测，观察其与帕金森病的关系。结果LRRK2中G2385R的变异可能会增加帕金森的发病概率；GBA基因的外显子9、10的核苷酸序列基本相同，未见基因产生突变；观察组LRRK2基因突变率为94．29％，GBA基因突变率为97．14％，均明显高于健康对照组，差异有统计学意义（t=13．276，P〈0．05）。结论LRRK2中的基因变异可能会导致帕金森发病率增加，GBA基因多态性与帕金森病发病无明显相关。

植物富含亮氨酸重复序列型类受体蛋白激酶的生物学功能

介绍了植物富含亮氨酸重复序列(leucine-richrepeat,LRR)型类受体蛋白激酶概念、最近发现的这类蛋白激酶的亚结构域特征;总结了目前已确定其功能的LRR型类受体蛋白激酶,并分别阐述了它们在参与植物抗逆性反应、发育调控及激素的信号转导等过程中的生物学功能;着重介绍和讨论了LRR型类受体蛋白激酶复合物之间及其与下游成分KAPP之间互作而产生信号传递的分子机理。最后展望了LRR型类受体蛋白激酶生物学功能、信号转导机制、以及应用于生产实践的研究前景。

富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体5、血管内皮生长因子及其受体2在胃腺癌组织中表达

目的应用免疫组化方法检测胃腺癌中富含亮氨酸重复序列G-蛋白耦联受体(LGR)5、血管内皮生长因子(VEGF)和其受体(VEGFR)2的表达。方法 58例胃腺癌患者的临床资料及术后蜡块组织作为研究组,选择上述患者在距肿物边缘>5 cm、经病理主治医师证实为非癌组织的胃黏膜组织的蜡块组织47例作为对照组,应用免疫组化方法检测LGR5、VEGF和VEGFR2的表达。结果研究组中LGR5、VEGF和VEGFR2的阳性率均明显高于对照组,研究组中LGR5、VEGF和VEGFR2的阳性率与浸润深度和脉管浸润相关,LGR5的阳性率与分化程度、Ki67增殖指数相关,VEGF和VEGFR2的表达与肿瘤的最大径相关。相关性分析显示研究组中LGR5和VEGF、VEGF和VEGFR2均具有正相关性。结论 LGR5、VEGF和VEGFR2在胃腺癌术后组织中高表达,三者可以促进肿瘤的形成和进展。LGR5可能与VEGF和VEGFR2蛋白的表达有协同作用。

富亮氨酸重复激酶2抑制剂作为新型帕金森病治疗剂的研究进展

帕金森病(PD)是以多巴胺能神经系统退行性病变为特征的多因素疾病。对其进行分型研究,发展针对PD发病机制的治疗药物是提高PD治疗效果的必由之路。富亮氨酸重复激酶2(LRRK2)基因突变是部分家族遗传性PD和散发性PD的直接原因。LRRK2基因突变会导致LRRK2活性增加,进而导致神经退行性病变。因此,发展LRRK2抑制剂调控LRRK2活性有望成为新的PD治疗方法。LRRK2既是激酶,也是小GTP酶,存在2个药物作用位点,因此,目前LRRK2抑制剂有2类,一类是LRRK2激酶位点抑制剂,另一类是LRRK2 GTP结合位点抑制剂。本文综述了LRRK2及其抑制剂的研究进展。

EGCG对富亮氨酸重复激酶2活性的影响及其作用机制

目的:研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对富亮氨酸重复激酶2(leucine rich repeat kinase 2,LRRK2)活性的影响及其分子机制。方法:选用Ddc-LRRK2-G2019S品系果蝇,分为7组,对照组用标准玉米培养基饲养,各实验组果蝇分别用含LRRK2抑制剂GW5074、N-乙酰半胱氨酸(NAC)及浓度为0.1、1、10和100μmol/L的EGCG加药培养基饲养,检测并统计果蝇生命周期和运动能力,筛选出药物作用的最佳浓度与最适时间点;用蛋白质印迹法检测果蝇脑组织中p-LRRK2、p-p38 MAPK、核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)、p-ERK1/2和酪氨酸羟化酶(TH)等蛋白的表达。结果:与对照组相比,10μmol/L EGCG延长果蝇寿命、改善果蝇运动能力的效果最为突出,1μmol/L EGCG效果较好(P<0.05);各组果蝇第5周时行为学变化最显著(均P<0.05);与对照组相比,10μmol/L和1μmol/L EGCG组Nrf2、p-ERK1/2、TH表达均明显增加(均P<0.05),p-LRRK2、p-p38 MAPK表达明显降低(P<0.05)。结论:EGCG可能通过Keap1-Nrf2-ARE、MAPK等信号通路有效抑制LRRK2激酶活性。

富含亮氨酸的-2-糖蛋白的表达对急性心肌梗死发生的预测作用

目的探讨富含亮氨酸的-2-糖蛋白对急性心肌梗死的预测能力。方法收集40例急性心肌梗死患者和40例正常体检居民,于入院后第2天清晨(心肌梗死后24 h内)空腹肘静脉抽取外周静脉血,检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)和富含亮氨酸的-2-糖蛋白,比较两组治疗前后相关指标。结果心肌梗死组富含亮氨酸的-2-糖蛋白1与CK-MB呈正相关(=0.760,<0.05)。富含亮氨酸的-2-糖蛋白1指标在的最大为0.997,高于CKMB的0.926,其灵敏度为82%,高于CK-MB的78%。结论富含亮氨酸的-2-糖蛋白对急性心肌梗死的早期发生和预后评估的判断能力较强。

脊髓富亮氨酸重复激酶2在大鼠神经病理性痛中的作用

目的:评价脊髓富亮氨酸重复激酶2(LRRK2)在大鼠神经病理性痛中的作用。方法:SPF级健康雄性SD大鼠50只,6~7周龄,体质量210~245 g,采用随机数字表法分为5组(n=10):对照组(C组)、神经病理性痛组(NP组)、GNE-7915低剂量组、GNE-7915中剂量组和GNE-7915高剂量组。采用选择性坐骨神经损伤术建立神经病理性痛模型。建模后7 d时,GNE-7915低、中、高剂量组分别腹腔注射LRRK2抑制剂GNE-791512.5、25.0和50.0 mg/kg。于建模前、建模后7 d、注射抑制剂后4 h时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。痛阈测定结束后处死大鼠,取脊髓组织,采用免疫荧光染色法检测离子钙结合衔接分子1(Iba-1)阳性表达,采用ELISA法检测IL-1β、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和IL-18的含量,免疫荧光染色法检测磷酸化LRRK2(p-LRRK2)阳性表达,采用免疫印迹法检测LRRK2、IL-1β、MCP-1和IL-18的表达,计算p-LRRK2/LRRK2比值。结果:与C组相比,NP组MWT和TWL降低,脊髓组织Iba-1与p-LRRK2阳性细胞百分比、IL-1β、MCP-1与IL-18含量、p-LRRK2/LRRK2比值升高,IL-1β、MCP-1和IL-18表达上调(P<0.05);与NP组相比,GNE-7915低、中、高剂量组MWT和TWL升高,脊髓组织Iba-1与p-LRRK2阳性细胞百分比、IL-1β、MCP-1与IL-18含量、p-LRRK2/LRRK2比值降低,IL-1β、MCP-1和IL-18表达下调(P<0.05)。结论:脊髓LRRK2可能通过激活小胶质细胞,诱发炎症反应,参与大鼠神经病理性痛的病理生理机制。

LRRK2基因R1067Q和GBA基因R202Q双变异致早发型帕金森病一例

患者男性,42岁。主因左手抖动18个月,左下肢抖动伴运动迟缓6个月,于2023年7月8日入院。患者18个月前(2022年1月)无明显诱因出现左上肢不自主抖动,静止时出现、持物及动作时消失,无动作迟缓、反应变慢等其他伴随症状。于2022年11月至外院就诊,头部MRI检查无明显异常,结合临床症状,考虑帕金森病(PD),服用普拉克索0.375 mg/d并逐渐增量至0.375 mg/次、2次/d长期治疗,症状无明显改善。6个月前(2023年1月)出现左下肢不自主抖动,并逐渐出现动作迟缓,左侧肢体活动不灵活,体位变化或行走时偶有头晕,不伴视物旋转及恶心呕吐等,持续数分钟后头晕可自行好转,无嗅觉丧失、情绪低落,睡眠质量尚可,无多梦、呓语、乱喊乱叫、手舞足蹈等症状。

Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体诱导帕金森病样病理变化

目的:探讨Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体能否诱导帕金森病(PD)样病理改变。方法:提取野生型(WT)和Lrrk2 R1628P转基因小鼠尿液外泌体,使用免疫印迹法检测尿液外泌体标记物TSG101和CD81,Y216位点磷酸化糖原合成酶激酶-3β(pGSK-3β-216)表达水平。在C57小鼠纹状体中分别注射WT小鼠(C57-WT组,n=8)和Lrrk2 R1628P小鼠尿液外泌体(C57-Lrrk2组,n=8)。注射前3天,注射后1、3、6个月,利用平衡木、挂线、转棒和旷场实验对小鼠进行行为学分析,免疫组化法分析脑组织中磷酸化α-突触核蛋白(pα-syn)的沉积情况,免疫印迹法检测脑组织中pα-syn的表达。结果:Lrrk2 R1628P小鼠尿液外泌体TSG101和CD81表达水平与WT小鼠比较,差异无统计学意义(P>0.05),pGSK-3β-216表达水平高于WT小鼠(P<0.001)。C57-Lrrk2组小鼠出现PD样行为学表型(P<0.001),皮层、纹状体和黑质中有pα-syn沉积,脑组织中pα-syn表达水平为(0.44±0.06),C57-WT组则无表达(P<0.001)。结论:小鼠纹状体中注射Lrrk2 R1628P转基因小鼠的尿液外泌体能够诱导PD样病理改变。

上皮性卵巢癌组织中LRRC15、SUN2表达变化及其与患者预后的关系

目的探讨富含亮氨酸重复序列15(LRRC15)、SUN结构域蛋白2(SUN2)在上皮性卵巢癌(EOC)组织中的表达变化及其与患者预后的关系。方法选取102例EOC患者手术切除癌组织(观察组),以60例因卵巢良性囊肿行手术治疗的正常卵巢组织为对照组。采用免疫组化法检测癌及正常卵巢组织中LRRC15、SUN2表达。通过Spearman秩相关分析评估LRRC15与SUN2表达的相关性,采用Kaplan-Meier生存曲线和Cox回归分析LRRC15、SUN2表达与EOC患者预后的关系。结果观察组LRRC15阳性率高于对照组,SUN2阳性率低于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。观察组中LRRC15与SUN2表达呈负相关(r=-0.634,P<0.05)。LRRC15在EOC患者FIGO分期Ⅲ期、淋巴结转移中的阳性率高于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移癌组织,SUN2在EOC患者FIGO分期Ⅲ期、淋巴结转移中的阳性率低于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移癌组织,差异有统计学意义(P均<0.05)。LRRC15阳性组EOC患者3年总生存率低于LRRC15阴性组,SUN2阴性组EOC患者3年总生存率低于SUN2阳性组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。FIGO分期Ⅲ期、病理分级Ⅲ级、淋巴结转移、LRRC15阳性是影响EOC患者预后的危险因素,SUN2阳性是保护因素(P均<0.05)。结论EOC患者癌组织中LRRC15表达升高、SUN2表达降低,LRRC15、SUN2表达与EOC肿瘤进展有关,检测二者水平有助于评估EOC患者预后。

脑梗死后血管性认知功能障碍患者血清CCR2、LRRK2 mRNA水平及其诊断价值

目的探讨CC趋化因子受体2(CCR2)、富亮氨酸重复激酶2(LRRK2)信使RNA(mRNA)在脑梗死后血管性认知功能障碍(VCI)患者血清中的水平及其诊断价值。方法选取2020年8月至2022年6月该院收治的123例脑梗死患者作为研究对象,根据蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分分为VCI组(MoCA评分<26分)和无VCI组(MoCA评分≥26分);另选取同期该院52例健康体检者作为对照组。采用酶联免疫吸附试验检测血清CCR2水平,采用实时定量反转录聚合酶链反应检测血清LRRK2 mRNA水平;采用Spearman相关分析脑梗死后VCI患者血清CCR2、LRRK2 mRNA水平与MoCA评分的相关性;采用多因素Logistic回归分析脑梗死后VCI发生的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CCR2、LRRK2 mRNA对脑梗死后VCI发生的诊断价值。结果VCI组血清CCR2、LRRK2 mRNA水平均明显高于对照组和无VCI组,无VCI组血清CCR2、LRRK2 mRNA水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);脑梗死后VCI患者血清CCR2、LRRK2 mRNA水平与MoCA评分均呈负相关(P<0.05);血清CCR2、LRRK2 mRNA水平升高为脑梗死后VCI发生的危险因素(P<0.05);血清CCR2、LRRK2 mRNA联合检测诊断脑梗死后VCI发生的曲线下面积(AUC)为0.943,优于2项单独检测的AUC,差异均有统计学意义(Z=2.210、2.205,P=0.027、0.028);联合检测的灵敏度和特异度分别为97.06%、80.90%。结论血清CCR2、LRRK2 mRNA在脑梗死后VCI患者中水平均较高,2项联合检测对脑梗死后VCI发生具有较高的诊断价值。

富含亮氨酸重复序列激酶2调控自噬影响甲状腺癌可能机制的研究进展

甲状腺癌是内分泌系统最常见的恶性肿瘤,且发病率逐年上升,严重威胁人们的身体健康。自噬是一种程序性死亡方式,能够作为抗肿瘤治疗潜在的作用靶点,发挥重要的调控作用。富含亮氨酸重复序列激酶2(LRRK2)是由PARK8基因编码的一种蛋白激酶。最近研究证实,细胞自噬和甲状腺癌关系密切。文章就LRRK2通过自噬影响甲状腺癌的可能调控机制进行分析,为甲状腺癌的基础研究和临床诊疗提供新思路。

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2基因全长及胞外段慢病毒表达载体的构建及对胶质瘤细胞增殖的影响

目的构建富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2（LRIG2）基因全长及胞外段的慢病毒表达载体并转染人胶质瘤细胞株，观察其对胶质瘤细胞增殖的影响。方法运用基因重组技术将LRIG2基因全长（LRIG2）和胞外段（LRIG2ecto）片段分别插入慢病毒载体pLVX—Puro-3×Flag：然后用pLVX—Puro-3×Flag-LRIG2和pLVX。Puro-3×Flag—LRIG2ecto分别转染胶质瘤细胞株U87；荧光定量聚合酶链反应（PCR）和Westernblot分别检测LRIG2及LRIG2ecto的mRNA和蛋白表达；细胞增殖检测试剂盒（CCK-8）检测转染后细胞的增殖；流式细胞术检测细胞周期。结果West-ernblot鉴定Flag标签蛋白表达成功；LRIG2及LRIG2ecto过表达组mRNA表达分别是对照组的8．42和29．58倍（P〈0．01）；LRIG2及LRIG2ecto过表达组细胞增殖率明显高于对照组；LRIG2及LRIG2ecto过表达组细胞增殖指数（PI）分别为（50．63±1．29）％和（48．61±0．55）％，明显高于对照组（42．48±0．72）％（P〈0．01）。结论成功建立稳定表达外源性LRIG2基因全长及胞外段的人胶质瘤细胞株，且证实均促进胶质瘤细胞增殖。

RNA干扰富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2后对胶质瘤细胞生长的影响及其机制

目的探讨RNA干扰富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2（LRIG2）基因表达后对胶质瘤细胞生长的影响及其机制。方法用携带U6启动子和LRIG2特异性短发夹RNA（shRNA）序列的质粒载体pGenesil2-LRIG2-shRNA（siRNA）及含非特异性shRNA编码序列的对照质粒pGenesil2-scramble—shRNA（set）转染胶质瘤细胞系GL15、G418（600mg/L）筛选出稳定株，逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和Westemblot法检测LRIG2和表皮生长因子受体（EGFR）表达的改变。噻唑蓝（MTT）比色法检测稳定转染对照组和实验组细胞的增殖，流式细胞仪检测对照组和实验组细胞的细胞周期改变。结果实验组细胞LRIG2mRNA和蛋白水平与对照组比较分别下降了68．6％和62．3％，EGFR蛋白水平下降了32．6％。MTT结果显示实验组细胞增殖率低于对照组。细胞周期分析表明对照组G0／G1期为（26．72±2．10）％，实验组为（36．58±3．29）％（P〈0．05），LRIG2表达下调后GL15细胞细胞周期部分阻滞在G0／G1期。结论GL15细胞经RNA干扰基因表达后，LRIG2mRNA和蛋白水平明显降低，同时EGFR蛋白水平下降，从而抑制细胞增殖和使细胞周期阻滞在G0／G1期。LRIG2可通过EGFR信号系统影响胶质瘤细胞的生长。

FBXL2和Dkk-1在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的研究结直肠癌(CRC)组织中F-盒富含亮氨酸的重复蛋白2(FBXL2)、Wnt信号通路抑制剂1(Dkk-1)的表达及临床意义。方法选取2017年10月—2019年5月保定市第一中心医院普通外科诊治CRC患者75例作为研究对象。应用荧光定量PCR及免疫组化检测CRC癌组织和癌旁组织中FBXL2、Dkk-1 mRNA及蛋白表达水平。比较不同临床病理特征CRC患者癌组织中FBXL2、Dkk-1蛋白表达差异。Kaplan-Meier生存分析(Log-rank检验)FBXL2、Dkk-1蛋白表达与CRC患者生存预后的关系。多因素COX回归分析影响CRC患者生存预后的危险因素。结果CRC癌组织中FBXL2、Dkk-1 mRNA表达水平低于癌旁组织(t=25.053、34.053,P均<0.001)。CRC癌组织中FBXL2、Dkk-1蛋白表达阳性率低于癌旁组织(χ^(2)=58.134、51.042,P均<0.001)。CRC癌组织中FBXL2与Dkk-1蛋白表达呈显著正相关(r s=0.714,P<0.001)。TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、淋巴结转移阴性CRC患者癌组织中FBXL2、Dkk-1蛋白表达阳性率高于TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移阳性患者,差异均有统计学意义(χ^(2)/P=7.588/0.006、5.220/0.022)。FBXL2阴性表达组患者3年累积生存率明显低于阳性表达组患者(χ^(2)=5.991,P=0.014);Dkk-1阴性表达组患者3年累积生存率明显低于阳性表达组患者(χ^(2)=8.058,P=0.005)。肿瘤分期Ⅲ期、淋巴结转移阳性、FBXL2阴性表达、Dkk-1阴性表达是影响CRC患者预后的独立危险因素[HR(95%CI)=1.613(1.223~2.126),1.917(1.314~2.799),1.837(1.229~2.745),1.738(1.246~2.426),P均<0.001]。结论CRC癌组织中FBXL2、Dkk-1表达降低,两者表达与CRC肿瘤分期及淋巴结转移有关,是评估CRC患者生存预后新的肿瘤标志物。

硝普钠对SH-SY5Y细胞中F-box富含亮氨酸重复蛋白5和铁调节蛋白2表达的调节作用（英文）

帕金森病(Parkinson’s disease,PD)患者早期铁选择性聚集在黑质致密带,残存的多巴胺能神经元内铁含量增高,说明铁升高可能是PD发生的一个关键因素。铁调节蛋白(iron regulatory proteins,IRPs)IRP1和IRP2可与铁转运和储存蛋白中的铁反应元件相结合,对维持细胞铁稳态起重要作用。F-box富含亮氨酸重复蛋白5(F-box and leucine-rich repeat protein 5,FBXL5)通过泛素蛋白酶体途径降解IRP2而参与铁代谢的调控。有研究显示一氧化氮(nitric oxide,NO)能够增强IRP1的活性,但对IRP2的表达影响尚未明确。本研究选择NO的供体硝普纳(sodium nitroprusside,SNP)作为处理药物,研究其对体外培养的SH-SY5Y细胞内FBXL5和IRP2蛋白表达的影响。细胞活力检测结果显示SNP可剂量依赖性地损伤SH-SY5Y细胞,降低细胞存活率。流式细胞术结果显示,经过100和300μmol/L的SNP处理后,细胞线粒体膜电位分别降低45%和60%。此外,Western blotting结果显示300μmol/L SNP能够引起细胞内FBXL5的蛋白表达量升高39%,而使IRP2的蛋白表达量降低46%。以上结果提示,SNP可造成SH-SY5Y细胞的线粒体功能障碍,并上调FBXL5的表达和下调IRP2的表达。

Survivin和富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白2在人膀胱移行细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨Survivin和富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白2（LRIG2）基因及其产物在人膀胱移行细胞癌中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学检测72例膀胱癌组织病理标本中的Smvivin和LRIG2的表达，每例标本均选用癌组织中心、癌旁组织及其远端正常黏膜对照。结果免疫组织化学显示Survivin蛋白在正常膀胱黏膜中无表达，在膀胱癌组织中表达明显高于癌旁组织，阳性率分别为90．28％、33．33％，Survivin蛋白在膀胱癌不同病理分级中的阳性表达率分别为Gl组72．22％、G2组90．48％、G3组100．00％；在膀胱癌临床分期Ta～Tis、T1～12的阳性表达率分别81．25％、97．50％；在淋巴结转移组和非淋巴结转移组的阳性表达率为96．00％、85．11％，随着病理分级、临床分期的升高和淋巴结转移的卅现，Survivin蛋白表达水平逐渐升高，各组间差异有统计学意义（P〈0．05）；LRIG2在膀胱移行细胞癌中的阳性表达率显著低于癌旁组织和正常膀胱黏膜组织，并随组织病理分级、分期的增高和淋巴结转移的卅现，LRIG2阳性表达率逐渐下降，差异有统计学意义（P〈0．05）；提示Survivin和LRIG2表达呈负相关（r=-0．487，P〈0．01）。结论Survivin和LRIG2基因表达与膀胱移行细胞癌的分级、分期、淋巴结转移有关，Survivin过表达和LRIG2基因突变或缺失在膀胱移行细胞癌的发生发展中可能起重要作用。

富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2调控血小板源性生长因子受体β信号通路促进胶质母细胞瘤细胞周期进展

目的探讨富含亮氨酸重复序列免疫球蛋白样蛋白2(LRIG2)调控血小板源性生长因子受体β(PDGFRβ)信号通路促进胶质母细胞瘤(GBM)细胞周期进展的机制。方法免疫组织化学法检测肿瘤组织中蛋白表达;流式细胞术检测细胞周期进展;裸鼠皮下移植瘤模型检测细胞在体成瘤能力;免疫荧光共聚焦及免疫共沉淀检测蛋白结合;Western blot检测信号通路蛋白表达。结果人GBM组织中LRIG2与PDGFRβ蛋白表达呈正相关(χ^2=6.411,P<0.05)。PDGF-BB刺激下,LRIG2过表达组S期及G2/M期细胞百分比均明显高于对照组[(22.74±1.23)%比(11.60±0.82)%,t=13.052,P<0.05;(19.06±1.04)%比(9.36±0.65)%,t=13.699,P<0.05]。裸鼠皮下移植瘤LRIG2过表达组肿瘤体积明显高于对照组[(1 372.56±167.88) mm3比(413.34±76.79) mm3,t=11.619,P<0.05]。GBM细胞中LRIG2蛋白与PDGFRβ蛋白存在共表达,且存在物理性结合。PDGF-BB刺激下,LRIG2过表达组U87细胞中PDGFRβ、磷酸化PDGFRβ(p-PDGFRβ)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、磷酸化信号转导与转录激活因子-3(p-STAT3),细胞周期蛋白(Cyclin) B1和Cyclin D1表达水平均明显高于对照组。结论LRIG2通过调控PDGFRβ信号通路促进GBM细胞周期进展。

蛋白磷酸酶PHLPP2通过线粒体凋亡途径加重顺铂诱导的小鼠急性肾损伤

目的:研究Pleckstrin同原序列富亮氨酸重复片段蛋白磷酸酶(PHLPP2)在急性肾损伤(AKI)发生发展中的作用及机制;方法:将20只野生型C57BL/6(WT)小鼠与20只敲除PHLPP2(PHLPP2^-/-)表达的转基因小鼠按是否使用顺铂(CDDP)处理进行分组,即WT对照组、WT CDDP处理组、PHLPP2^-/-对照组和PHLPP2^-/-CDDP处理组(每组10只)。3d后处死小鼠,RT-PCR及Western Blot检测各组小鼠中PHLPP2 mRNA及蛋白水平;免疫组织化学染色检测肾组织PHLPP2表达及定位;HE与TUNEL染色检测肾组织损害和细胞的凋亡情况;分离并鉴定小鼠肾小管上皮细胞(RTECs),透射电子显微镜观察RTECs中线粒体结构;JC-1法检测RTECs中线粒体膜电位变化;Western Blot检测RTECs中促凋亡蛋白Bax、Caspase-3,及凋亡抑制蛋白Bcl-2和Akt的Thr308与Ser473位点磷酸化水平。结果:CDDP成功诱导AKI模型,肾脏组织中PHLPP2表达显著增加;与WT CDDP组相比,PHLPP2^-/-CDDP组小鼠的血尿素氮、血清肌酐明显降低,肾组织结构损害较轻,凋亡细胞减少,线粒体结构损伤减轻,线粒体膜电位下降减少;敲除PHLPP2基因表达可显著促进Bcl-2蛋白表达,而抑制Bax、Caspase-3蛋白表达,且PHLPP2基因通过对Akt的Thr308与Ser473位点去磷酸化而调节上述蛋白表达。结论:敲除PHLPP2表达能够通过减轻线粒体膜电位的下降,保护线粒体的正常结构及功能,从而通过线粒体途径的凋亡改善AKI损伤。