氯沙坦对血管平滑肌细胞富含半胱氨酸蛋白61的影响

目的探讨氯沙坦对血管平滑肌细胞富含半胱氨酸蛋白61(CYR61)的影响。方法贴块法培养大鼠血管平滑肌细胞,分别给予不同浓度血管紧张肽Ⅱ(ATⅡ)和氯沙坦,采用半定量逆转录聚合酶链反应及Western blotting检测不同处理组平滑肌细胞CYR61 mRNA和蛋白表达。采用酶联免疫吸附技术检测平滑肌细胞培养介质中CYR61含量的变化。结果10^(-6)/10^(10) mol·L^(-1)ATⅡ呈剂量依赖性地增加平滑肌细胞内CYR61蛋白及其mRNA表达水平,增高培养介质中CYR61含量(P<0.01)。10^(-5)～10^(-7)mol·L^(-1)氯沙坦预处理组中,ATⅡ刺激的平滑肌细胞CYR61蛋白及其mRNA表达水平及培养介质中CYR61含量明显减低(P<0.01)。结论氯沙坦可拮抗ATⅡ所致的平滑肌细胞内CYR61的表达与分泌。

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白在肿瘤中的研究进展

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine, SPARC)是肿瘤微环境中重要的基质成分,它作为正常细胞恶变和肿瘤发生发展过程中一个重要的分子,能够调节多种肿瘤相关细胞因子及其受体的相互作用,并调节多种信号通路以及蛋白水解酶的表达水平。由于它抑制和促进肿瘤进展的能力取决于细胞类型、肿瘤分期等,因此在多种类型的肿瘤中差异表达,并可能成为肿瘤早期诊断的新型生物标记物以及治疗的新靶点。本文就近年来SPARC在肿瘤研究中的进展作一综述。

血清高半胱氨酸蛋白61、干扰素-γ、基质金属蛋白酶-9水平与Graves眼病活动性关系研究

目的:探讨血清高半胱氨酸蛋白61(CYR61)、干扰素-γ(IFN-γ)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平与Graves眼病疾病活动性的关系。方法:选择GO患者112例为研究对象,依据临床活动性评分(CAS)分为活动期组(CAS≥3分,62例)和非活动期组(CAS<3分,50例)。比较两组血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平。分析血清CYR61、IFN-γ、MMP-9与疾病活动性的相关性及影响疾病活动性的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CYR61、IFN-γ、MMP-9对GO疾病活动性的预测价值。结果:非活动期组患者血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平较活动期组下降(均P<0.05)。血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平与GO患者疾病活动性呈正相关(均P<0.05)。血清CYR61、IFN-γ、MMP-9为影响GO患者疾病活动性的影响因素(均P<0.05)。血清CYR61、IFN-γ、MMP-9对GO患者疾病活动性均有一定的预测价值,三者联合的预测价值更高(均P<0.05)。结论:GO患者活动期血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平明显高于非活动期,与GO患者疾病活动性呈正相关,三者联合检测对GO患者疾病活动性的临床预测价值良好。

富含半胱氨酸和甘氨酸蛋白2在神经母细胞瘤恶性进展中的功能和机制

目的:探究富含半胱氨酸和甘氨酸蛋白2(cysteine and glycine-rich protein 2,CSRP2)在神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)恶性进展中的功能和作用机制。方法:利用R2数据库分析NB临床样本中CSRP2基因的mRNA水平与NB患儿临床预后的相关性;在NB细胞系SK-N-BE(2)和SH-SY5Y中利用靶向小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰CSRP2的表达或利用质粒转染过表达CSRP2;通过结晶紫染色和实时无标记动态细胞分析技术观察NB细胞的增殖情况;采用克隆形成方法观察NB细胞长时间的克隆形成能力;利用免疫荧光实验检测细胞增殖标记物Ki-67的水平;利用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色流式细胞术分析细胞周期比例,Annexin V/7AAD染色分析细胞凋亡比例;采用划痕实验观察细胞的迁移能力;利用Western blot或实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测NB原发肿瘤组织和细胞系中蛋白和基因的表达水平。结果:NB临床数据库中,国际神经母细胞瘤分期(international neuroblastoma staging system,INSS)为高危险度3/4期的NB组织中CSRP2的mRNA水平显著高于低危险度的1/2期,且高表达水平组NB患儿的生存期显著低于低表达组;Western blot结果显示,CSRP2在3/4期NB组织中的蛋白水平显著高于1/2期。NB细胞中敲低CSRP2,细胞的活力减弱、增殖能力降低;NB细胞中过表达CSRP2促进细胞增殖;敲低CSRP2后,sub-G1、G0/G1和S期细胞的比例增加,Annexin V阳性细胞的比例增多;敲低CSRP2的NB细胞的划痕愈合率显著小于对照组。机制研究发现,敲低CSRP2后细胞增殖标记分子Ki-67和细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinases 1/2,ERK1/2)磷酸化水平显著低于对照组。结论:CSRP2在高危险度3/4期NB组织中高表达,表达水平与NB患儿生存期呈负相关;CSRP2通过促进ERK1/2活化,促进NB细胞的增殖和迁移,抑制细胞凋亡,表明CSRP2通过激活ERK1/2促进NB进展,为高危NB的靶向治疗提供了潜在的靶点。

富含半胱氨酸蛋白61在球囊损伤大鼠腹主动脉中的表达变化

目的观察大鼠腹主动脉球囊损伤后富含半胱氨酸蛋白61表达的变化。方法对球囊损伤后不同时间段的大鼠腹主动脉标本采用组织形态学观察内膜增生,采用免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应、免疫蛋白印记分析检测富含半胱氨酸蛋白61的表达。结果球囊损伤后可见新生内膜在术后7天出现,术后14天明显增厚,术后28天内膜继续增生,形成的新生内膜厚度不均,较假手术组明显增厚(P<0.01)。球囊损伤后7天、14天采用免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应、蛋白印记分析检测富含半胱氨酸蛋白61的表达均明显增强,与假手术组比较差异有显著性(P<0.01)。28天时与假手术组比较差异没有显著性(P>0.05)。结论球囊损伤后富含半胱氨酸蛋白61的表达明显增强,提示富含半胱氨酸蛋白61可能在球囊损伤后内膜增生过程中起重要作用。

富含半胱氨酸蛋白61 RNA干扰质粒抑制血管平滑肌细胞的增殖

目的观察富含半胱氨酸蛋白61（Cyr61）RNA干扰质粒（pCyr61-shRNA）对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。方法构建Cyr61RNA干扰质粒转染大鼠血管平滑肌细胞，采用半定量逆转录聚合酶链反应及West-ern blot检测Cyr61 RNA和蛋白表达；采用MTT法检测细胞增殖；^3H-标记胸腺嘧啶掺入法检测细胞DNA含量。结果测序证实成功构建Cyr61 RNA干扰质粒；转染pCyr61-shRNA组mRNA及蛋白表达均明显降低（P〈0．01）；pCyr61-shRNA组细胞数、吸光度值和DNA含量均明显降低（P〈0．01）。结论Cyr61 RNA干扰质粒抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖。

血管紧张素Ⅱ上调血管平滑肌细胞富含半胱氨酸蛋白61的表达

目的探讨血管紧张素Ⅱ对培养鼠血管平滑肌细胞富含半胱氨酸蛋白61的影响及其可能的转导通路。方法组织贴块法培养血管平滑肌细胞,血管紧张素Ⅱ处理平滑肌细胞15min、30min、60min、180min,PD98059在血管紧张素Ⅱ刺激细胞前1h加到培养基中,用逆转录聚合酶链反应和Westernblotting检测分析富含半胱氨酸蛋白61的表达。结果逆转录聚合酶链反应分析显示用1μmol/L血管紧张素Ⅱ刺激细胞培养15min、30min富含半胱氨酸蛋白61的表达与对照组相比明显增加;同时细胞外信号调节激酶1/2活性高于对照组(P<0.01),60min时仍有表达,180min时减弱;细胞外信号调节激酶1/2特异性抑制剂PD98059(20μmol/L)能阻断血管紧张素Ⅱ上调富含半胱氨酸蛋白61的表达并抑制增加的磷酸化细胞外信号调节激酶1/2活性。结论血管紧张素Ⅱ通过细胞外信号调节激酶1/2促进血管平滑肌细胞上调富含半胱氨酸蛋白61表达,这可能是血管紧张素Ⅱ促血管平滑肌细胞增殖的一个重要机制。

息痛散通过富含半胱氨酸蛋白61对痛风性关节炎大鼠炎症反应的干预机制

目的:观察息痛散对尿酸钠诱导的痛风性关节炎大鼠模型富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)及相关炎症因子表达的影响。方法:将尿酸钠混悬液注入大鼠踝关节腔,建立急性痛风性关节炎大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为模型组、息痛散组、息痛散联合shRNA组、秋水仙碱组,并灌胃治疗7 d。观察各组大鼠足趾肿胀度,采用ELISA法检测尿酸钠诱导的急性痛风关节炎大鼠血清Cyr61、IL-1β、TNF-α、IL-6水平;采用RT-PCR、Western blotting法检测大鼠踝关节滑膜组织中Cyr61、IL-1β、TNF-α、IL-6的表达。结果:灌胃治疗后,息痛散组、秋水仙碱组大鼠踝关节肿胀度低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05)。息痛散联合shRNA组与模型组大鼠踝关节肿胀度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。息痛散组大鼠炎症因子水平经灌胃治疗后降低。灌胃治疗后,息痛散组、秋水仙碱组大鼠血清Cyr61、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均低于模型组,差异有统计学意义(均P<0.05)。息痛散联合shRNA组与模型组血清Cyr61、IL-1β、TNF-α、IL-6水平比较,差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:息痛散通过抑制Cyr61表达减轻急性痛风性大鼠模型炎症反应。

富含半胱氨酸蛋白61(CYR61/CCN1)与风湿病关系的研究进展

富含半胱氨酸蛋白61(CYR61/CCN1)在人体细胞中广泛表达,但在不同器官、细胞中表达存在明显差异,具有调节细胞外基质形成,影响细胞增殖、趋化、黏附、凋亡等作用,与骨形成、血管发生、组织炎症及修复密切相关,在肿瘤、心血管、发育领域研究深入。CCN1在类风湿性关节炎、干燥综合征、系统性硬化症、系统性红斑狼疮、骨关节炎等风湿病患者血清或组织中差异表达,参与介导炎症因子产生,炎细胞浸润,成纤维细胞样滑膜细胞增殖,软骨成熟、分化,血管生成等过程,与疾病活动度显著相关,且在不同机制信号通路中发挥作用。

富含半胱氨酸蛋白61的研究进展及其在眼科的应用

CCN家族属于基质细胞蛋白，富含半胱氨酸蛋白61（CYR61）是其中第一个被克隆的基因。CYR61蛋白参与调节细胞的增生、黏附、迁移、分化、凋亡以及细胞外基质的生成。CYR61与某些细胞因子和生长因子相互作用并调节其生物活性，包括转化生长因子-β（TGF—p）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、血管内皮生长因子（VEGF）、骨形成蛋白（BMPs）以及Wnt家族成员等。CYR61是血管生成及骨和软骨生成的重要调控因子，在胚胎发育、创伤修复、肿瘤的发生和发展以及其他多种疾病的发病中起着重要的作用。研究发现，CYR61在体外可促进视网膜毛细血管内皮细胞的增生、迁移及生成管状结构，糖尿病大鼠视网膜及增生型糖尿病视网膜病变（PDR）患者玻璃体内CYR61均明显增高，且与VEGF有一定的关系，CYR61很可能参与视网膜新生血管性疾病，特别是糖尿病视网膜病变（DR）的发生和发展，对CYR61在DR中的作用及通路的研究为该病的发病机制及治疗提供了新的思路。就近年来CYR61的研究进展进行综述。

富含半胱氨酸蛋白61和血管内皮生长因子在大脑中动脉慢性闭塞性病变患者体内表达水平和相互作用研究

目的探索富含半胱氨酸蛋白61(CYR61)和血管内皮生长因子(VEGF)在大脑中动脉慢性闭塞性病变患者体内的表达水平及调控关系。方法回顾性连续纳入2018年6月至2021年10月在齐齐哈尔医学院附属第二医院脑血管狭窄诊断与介入治疗中心诊治的40例大脑中动脉慢性闭塞性病变患者并进入试验组,依据全脑血管造影显示的侧支代偿情况,将试验组患者分为2组,其中二级侧支代偿组29例,二级+三级侧支代偿组11例,并收集同期于齐齐哈尔医学院附属第二医院神经内科住院的20例无脑动脉狭窄的缺血性卒中患者并进入对照组。入组患者或其家属签署知情同意书后,采集静脉血,利用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术分析CYR61和VEGF(VEGFA、VEGFB、VEGFC、VEGFD)在患者体内的表达规律,并利用细胞转染和双荧光素报道基因实验探索CYR61与VEGF之间的调控关系。通过GeneMANIA数据库(http://genemania.org/)对CYR61与VEGFA的相互作用进行预测,基因和基因作用的位点(序列)通过Match-1.0 Public软件分析。结果二级+三级侧支代偿组CYR61和VEGFA的表达水平均高于二级侧支代偿组和对照组(均P<0.01),二级侧支代偿组CYR61和VEGFA的表达水平与对照组差异无统计学意义(均P>0.05)。而VEGFB、VEGFC和VEGFD在实验组与对照组之间表达水平差异均无统计学意义(均P>0.05)。经http://genemania.org/数据库结构预测和Match-1.0 Public软件作用位点分析,血小板反应蛋白1(THBS1)可能是CYR61调控VEGFA的关键因子,且在二级+三级侧支代偿组中THBS1表达水平高于二级侧支代偿组和对照组(均P<0.01),其表达趋势与CYR61和VEGFA基本一致。进一步的双荧光素报道基因试验表明,CYR61可通过血清应答因子(SRF)增强THBS1的表达,相对值达到5.63;THBS1可通过调控因子X1(RFX1)增强VEGFA的表达,相对值达到2.67。结论CYR61和VEGFA在启动二级+三级侧支循环的大脑中动脉慢性闭塞性病变患者体内表达水平显著上升,CYR61可通过THBS1调控VEGFA的表达。

富含半胱氨酸蛋白61在子宫内膜样腺癌组织中的表达及意义

目的检测富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)在子宫内膜样腺癌(内膜癌)组织中的表达,探讨其在内膜癌发病中的作用。方法利用免疫组化法检测Cyr61在43例不同期别和级别内膜癌组织中的表达并与20例非内膜癌患者子宫内膜组织(对照组)进行比较。结果 Cyr61在内膜癌Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期的表达分别为(3.38±1.69)、(3.25±1.96)、(1.60±1.35)分,在对照组为(5.10±2.64)分,组间两两比较除内膜癌Ⅰ期与Ⅱ期间差异无统计学意义(P>0.05)外,余组间差异均有统计学意义(P<0.05)。将Cyr61在不同组织学分级比较,G1级为(3.55±1.53)分,G2级为(3.30±1.71)分,均高于G3级的(1.82±1.17)分(P<0.05),但内膜癌G1与G2级间无明显差异(P>0.05)。结论 Cyr61可能参与了内膜癌的发病,有望成为指导治疗的分子指标。

动脉粥样硬化症患者中富含半胱氨酸蛋白61的表达变化及其临床意义

目的探索动脉硬化症患者血浆富含半胱氨酸蛋白(Cyr61)的水平及相关临床意义。方法动脉粥样硬化是冠状动脉粥样硬化性心脏病及动脉狭窄闭塞的主要病理机制,内皮细胞和平滑肌细胞等多种细胞的黏附、增殖和迁移均参与动脉粥样硬化的形成和发展的过程。动脉粥样硬化的炎性反应学说鉴于Cyr61在细胞功能和炎性反应方面的作用,本研究旨在探讨Cyr61在动脉粥样硬化中的作用。本研究分别比较冠心病患者(急性冠状动脉综合征患者及稳定型心绞痛患者)和对照组(冠状动脉动脉造影未见明显狭窄)的血浆Cyr61水平,并评价其与动脉硬化严重程度及动脉硬化其他实验室指标的相关性。结果冠心病患者Cyr61水平明显高于对照组(P<0.01),急性冠状动脉综合征组的血浆Cyr61水平显著高于稳定型心绞痛组,血浆Cyr61水平与Gensini积分正相关(P<0.01),血浆Cyr61水平与冠心病独立相关。结论血浆Cyr61水平与冠心病高度相关,且与冠心病的类型及严重程度有关。

17β-雌二醇和富含半胱氨酸蛋白61对JEG-3细胞增殖作用的机制研究

目的探讨17β-雌二醇(E2)和富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)影响人绒毛膜癌细胞系JEG-3细胞增殖的机制。方法定量PCR检测Cyr61和microRNA 195(miR-195)的表达,羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色法检测细胞增殖。结果 E2能够提高Cyr61 mRNA的表达;Cyr61能够降低miR-195的表达和促进JEG-3的细胞增殖。结论 E2通过增强Cyr61和降低miR-195的表达影响JEG-3细胞的增殖,可能为探讨子痫前期的发病机制提供线索。

RNA干扰质粒抑制富含半胱氨酸蛋白61在大鼠血管平滑肌细胞中的表达

目的观察RNA干扰质粒对大鼠血管平滑肌细胞中富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61)表达的抑制作用。方法构建Cyr61RNA干扰质粒(pCyr61-shRNA)转染大鼠血管平滑肌细胞,采用半定量反转录聚合酶链反应及Western blot检测Cyr61 mRNA和蛋白表达。结果测序证实成功构建Cyr61RNA干扰质粒;转染pCyr61-shRNA组mRNA及蛋白表达均明显降低,与正常对照组和转染无关序列对照组(p-HK)相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论RNA干扰质粒抑制Cyr61在大鼠血管平滑肌细胞中的表达。

二硫键的氧化还原状态对Trx融合赤霉酸诱导富含半胱氨酸蛋白内源荧光及变性过程影响

在采用亲和层析、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对原核表达的赤霉酸诱导的富含半胱氨酸蛋白(Trx-GcGASA)进行纯化、鉴定的基础上,运用稳态荧光光谱手段研究了二硫苏糖醇(DTT)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、过氧化氢、盐酸胍(GdnHCl)对Trx-GcGASA内源荧光及变性过程的影响,发现(1)在中性缓冲体系中融合蛋白的内源荧光以305 nm的酪氨酸的荧光发射为主;(2)伴随着二硫键还原,融合蛋白中色氨酸和酪氨酸的相对荧光强度比值从0.7变化至1.8倍左右;(3)经过0.5 mmol.L-1GSSG、5 mmol.L-1过氧化氢处理后,酪氨酸和色氨酸的荧光强度下降约12~21%;(4)无论是否采用1 mmol.L-1DTT处理,6 mol.L-1盐酸胍均不能诱导融合蛋白彻底变性;(5)二硫键的存在与否影响了盐酸胍诱导的变性过程。通过两态模型拟合获得Trx-GcGASA变性过程Gibbs自由能变化ΔG约为3.7 kJ.mol-1。相关工作不仅为深入研究融合伴侣Trx对GcGASA变性热力学、动力学及复性过程影响奠定了基础;同时,也为通过光谱手段获取GcGASA的结构信息提供了基础的数据。

右美托咪定在急性缺血性脑卒中介入机械取栓术中的应用效果及对血浆富含半胱氨酸蛋白61的影响

分析急性缺血性脑卒中患者接受介入机械取栓术时应用右美托咪定的价值。方法:研究对象为急性缺血性脑卒中患者,研究数例为100例,研究时间为2021年1月-2021年12月,常规组患者接受盐酸利多卡因注射液,观察组患者接受右美托咪定注射液,比较两组患者生命体征、并发症发生率、镇静评分、神经功能缺损程度、穿刺-血管再通时间、血浆富含半胱氨酸蛋白61水平。结果:常规组与观察组无血氧饱和度上的差异,P>0.05,而血压波动与心率存在差异,且常规组患者更高,P<0.05;神经功能缺损程度有差异,且观察组低于常规组患者,P<0.05;与常规组相比,观察组患者有着更低的镇静评分P<0.05;观察组患者神经功能缺损程度低于常规组患者,P<0.05;观察组患者穿刺-血管再通时间、血浆富含半胱氨酸蛋白61水平均低于常规组患者,P<0.05;观察组患者并发症发生率低于常规组患者,P<0.05。结论:右美托咪定有着显著应用效果,可以考虑积极推广。

富含半胱氨酸蛋白61在心血管疾病中的研究进展

富含半胱氨酸蛋白61(cysteine-rich protein 61,CYR61)是结缔组织生长因子家族基质细胞蛋白的成员,参与许多重要生物学功能,具有广泛的生物学特性.CYR61在肿瘤性疾病、自身免疫性疾病、肾脏疾病中研究较为广泛.近年来,CYR61在心血管系统中的研究越来越多,发现其在动脉粥样硬化、心肌损伤、心肌纤维化中具有重要的生物学作用,参与了冠心病、高血压、心力衰竭等心血管疾病的发生发展.CYR61还可作为疾病的标志物,对疾病的治疗提供新的靶点.

冠心病患者血浆富含半胱氨酸蛋白61表达水平及临床意义

目的探讨冠心病患者血浆富含半胱氨酸蛋白61(CYR61)的表达水平及其临床意义。方法纳入108例冠心病患者(冠心病组,其中心绞痛患者63例及急性心肌梗死患者45例),另选取冠脉造影阴性患者30例(对照组)。比较冠心病组和对照组间及不同类型冠心病患者的一般临床资料及血浆CYR61水平的差异,采用Logistic回归模型分析冠心病发生的危险因素,并采用受试者工作特征(ROC)曲线评价血浆CYR61水平诊断急性心肌梗死的效能。结果冠心病组血浆CYR61水平高于对照组,急性心肌梗死患者血浆CYR61水平高于心绞痛患者(均P<0.05)。血浆CYR61水平升高是冠心病发生的危险因素(P<0.05)。CYR61、肌钙蛋白诊断急性心肌梗死的ROC曲线下面积分别为0.869、0.787,差异无统计学意义(P>0.05)。结论冠心病患者血浆CYR61水平升高,其中急性心肌梗死患者的血浆CYR61水平较心绞痛患者更高。CYR61与冠心病的发生密切相关,并对急性心肌梗死具有一定的诊断效能。

富含半胱氨酸蛋白61在新生血管性眼底病中的作用

富含半胱氨酸蛋白61（CYR61）是一种分泌性蛋白，具有4个不同的结构域，为其在多种细胞生命活动中发挥重要作用提供了结构基础。CYR61可调控多种细胞因子表达及信号通路，参与细胞的增生、迁移、黏附、血管新生、炎性介质调控、胚胎发育、骨及软骨的形成等过程，因其具有能显著促进新生血管形成的重要功能而受到广泛关注。本文对CYR61在新生血管性眼底病，如糖尿病视网膜病变、早产儿视网膜病变、湿性年龄相关性黄斑变性中的作用做一综述，为理解新生血管性眼底病发病机制及治疗策略提供新的思路。