富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白在肿瘤中的研究进展

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine, SPARC)是肿瘤微环境中重要的基质成分,它作为正常细胞恶变和肿瘤发生发展过程中一个重要的分子,能够调节多种肿瘤相关细胞因子及其受体的相互作用,并调节多种信号通路以及蛋白水解酶的表达水平。由于它抑制和促进肿瘤进展的能力取决于细胞类型、肿瘤分期等,因此在多种类型的肿瘤中差异表达,并可能成为肿瘤早期诊断的新型生物标记物以及治疗的新靶点。本文就近年来SPARC在肿瘤研究中的进展作一综述。

富含半胱氨酸和甘氨酸蛋白2在神经母细胞瘤恶性进展中的功能和机制

目的:探究富含半胱氨酸和甘氨酸蛋白2(cysteine and glycine-rich protein 2,CSRP2)在神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)恶性进展中的功能和作用机制。方法:利用R2数据库分析NB临床样本中CSRP2基因的mRNA水平与NB患儿临床预后的相关性;在NB细胞系SK-N-BE(2)和SH-SY5Y中利用靶向小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰CSRP2的表达或利用质粒转染过表达CSRP2;通过结晶紫染色和实时无标记动态细胞分析技术观察NB细胞的增殖情况;采用克隆形成方法观察NB细胞长时间的克隆形成能力;利用免疫荧光实验检测细胞增殖标记物Ki-67的水平;利用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色流式细胞术分析细胞周期比例,Annexin V/7AAD染色分析细胞凋亡比例;采用划痕实验观察细胞的迁移能力;利用Western blot或实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测NB原发肿瘤组织和细胞系中蛋白和基因的表达水平。结果:NB临床数据库中,国际神经母细胞瘤分期(international neuroblastoma staging system,INSS)为高危险度3/4期的NB组织中CSRP2的mRNA水平显著高于低危险度的1/2期,且高表达水平组NB患儿的生存期显著低于低表达组;Western blot结果显示,CSRP2在3/4期NB组织中的蛋白水平显著高于1/2期。NB细胞中敲低CSRP2,细胞的活力减弱、增殖能力降低;NB细胞中过表达CSRP2促进细胞增殖;敲低CSRP2后,sub-G1、G0/G1和S期细胞的比例增加,Annexin V阳性细胞的比例增多;敲低CSRP2的NB细胞的划痕愈合率显著小于对照组。机制研究发现,敲低CSRP2后细胞增殖标记分子Ki-67和细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinases 1/2,ERK1/2)磷酸化水平显著低于对照组。结论:CSRP2在高危险度3/4期NB组织中高表达,表达水平与NB患儿生存期呈负相关;CSRP2通过促进ERK1/2活化,促进NB细胞的增殖和迁移,抑制细胞凋亡,表明CSRP2通过激活ERK1/2促进NB进展,为高危NB的靶向治疗提供了潜在的靶点。

帕金森病患者血清同型半胱氨酸、脑源性神经营养因子、α-突触核蛋白水平与脑白质病变的关系研究

目的 探讨帕金森病患者血清同型半胱氨酸(Hcy)、脑源性神经营养因子(BDNF)、α-突触核蛋白(α-Syn)水平与脑白质病变的关系。方法 选取扬中市人民医院2022年6月至2023年6月收治的104例帕金森病患者为观察组,并选取同期健康体检者60例为对照组,收集两组临床资料并测定血清Hcy、BDNF、α-Syn水平;依据脑白质病变分级将观察组患者分正常组、轻度病变组、中度病变组及重度病变组,比较四组临床资料以及上述指标,并采用多因素Logistic回归分析帕金森病患者脑白质病变的影响因素、受试者工作特征曲线(ROC)分析生化指标对脑白质病变的预测价值。结果 观察组血清Hcy、α-Syn水平高于对照组,BDNF水平低于对照组(P<0.05);轻度病变、中度病变及重度病变组患者年龄、病程、Hoehn-Yahr(HY)分级、统一帕金森病评定量表(UPDRS)-Ⅲ评分、Hcy、α-Syn水平高(大)于正常组,BDNF水平低于正常组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,Hcy、BDNF、α-Syn水平为帕金森病患者脑白质病变的影响因素(P<0.05);结果显示α-Syn水平诊断帕金森病患者脑白质病变的AUC值最高为0.949,敏感度、特异度分别为82.69%、96.67%;其次为BDNF(0.829);且α-Syn诊断AUC值明显高于BDNF、Hcy诊断(Z=2.832、4.991,P<0.05)。结论 Hcy、α-Syn升高是帕金森病患者脑白质病变的独立危险因素,BDNF升高是其保护因素,且Hcy、α-Syn、BDNF可作为帕金森病患者是否发生脑白质病变的生物标志物。

血清高半胱氨酸蛋白61、干扰素-γ、基质金属蛋白酶-9水平与Graves眼病活动性关系研究

目的:探讨血清高半胱氨酸蛋白61(CYR61)、干扰素-γ(IFN-γ)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平与Graves眼病疾病活动性的关系。方法:选择GO患者112例为研究对象,依据临床活动性评分(CAS)分为活动期组(CAS≥3分,62例)和非活动期组(CAS<3分,50例)。比较两组血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平。分析血清CYR61、IFN-γ、MMP-9与疾病活动性的相关性及影响疾病活动性的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CYR61、IFN-γ、MMP-9对GO疾病活动性的预测价值。结果:非活动期组患者血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平较活动期组下降(均P<0.05)。血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平与GO患者疾病活动性呈正相关(均P<0.05)。血清CYR61、IFN-γ、MMP-9为影响GO患者疾病活动性的影响因素(均P<0.05)。血清CYR61、IFN-γ、MMP-9对GO患者疾病活动性均有一定的预测价值,三者联合的预测价值更高(均P<0.05)。结论:GO患者活动期血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平明显高于非活动期,与GO患者疾病活动性呈正相关,三者联合检测对GO患者疾病活动性的临床预测价值良好。

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白在心血管疾病中的研究进展

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)为典型的基质细胞蛋白,参与组织发育和修复,通过调节细胞黏附、增殖和生长因子信号转导,以及细胞外基质与细胞的相互作用,在心肌损伤过程发挥重要作用。该文介绍SPARC在高血压、冠状动脉粥样硬化性心脏病、心力衰竭、病毒性心肌炎等心血管疾病中的相关研究进展。

缬沙坦对老年原发性高血压伴轻度认知障碍病情改善及血清同型半胱氨酸、基质金属蛋白酶-9水平的影响

目的探讨缬沙坦对老年原发性高血压伴认知功能障碍患者病情改善及对血清同型半胱氨酸(Hcy)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平的影响。方法选取2019年1月至2022年12月联勤保障部队第九二一医院收治的142例老年原发性高血压伴轻度认知功能障碍患者为研究对象,采用随机数字表法将其分为观察组(n=71)和对照组。观察组给予缬沙坦胶囊降压治疗,对照组给予苯磺酸左氨氯地平降压治疗,观察并比较两组患者治疗前后的心率、血压、认知功能、血清Hcy和MMP-9水平变化情况。结果两组患者治疗前后组间、组内的心率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组治疗前的收缩压、舒张压水平比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组治疗后的收缩压低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);但治疗后两组的舒张压比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者治疗前的认知功能各项评分及总分比较,差异无统计学意义(P>0.05);观察组治疗后的延迟回忆、抽象、注意、语言4项维度和认知功能总分高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),两组治疗后的命名、定向、视空间与执行功能评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组患者治疗前血清Hcy及MMP-9水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),观察组治疗后的血清Hcy及MMP-9水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论老年原发性高血压伴轻度认知功能障碍的患者采用缬沙坦和苯磺酸左氨氯地平均可降低血压、改善认知功能障碍、降低血清Hcy、MMP-9水平,相比之下,缬沙坦的作用效果更为明显,值得在临床上推广实施。

老年腔隙性脑梗死患者血β2微球蛋白、同型半胱氨酸水平及其临床意义研究

目的探究老年腔隙性脑梗死患者血β2微球蛋白(β2M)、同型半胱氨酸(Hcy)水平及其临床意义。方法选取2023年1月—2023年10月接受治疗的84例老年腔隙性脑梗死患者作为研究组,选取80名同期健康体检者作为对照组,比较两组血β2M、Hcy水平及认知功能[神经功能缺损评分量表(NIHSS)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)],采用Pearson相关分析老年腔隙性脑梗死患者血β2M、Hcy水平与认知功能的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血β2M、Hcy水平对老年腔隙性脑梗死患者预后不良的预测价值。结果研究组β2M、Hcy水平及NIHSS评分高于对照组,MoCA评分低于对照组(P均<0.05);老年腔隙性脑梗死患者β2M、Hcy水平均与NIHSS评分呈正相关,与MoCA评分呈负相关(P均<0.05);预后不良组β2M、Hcy水平高于预后良好组,血β2M、Hcy水平预测老年腔隙性脑梗死预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.873、0.790(P均<0.05)。结论老年腔隙性脑梗死患者血β2M、Hcy高表达,与患者认知功能成反比,且对老年腔隙性脑梗死患者预后不良具有较高的预测价值。

胎儿超声心动图联合母体血清SFRP5、同型半胱氨酸浓度对先天性心脏病胎儿的诊断价值

目的分析胎儿超声心动图联合母体血清分泌型卷曲相关蛋白5(secreted frizzled-related protein 5,SFRP5)、同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)浓度对先天性心脏病(先心病)胎儿的诊断效能。方法选取2018年7月至2022年2月在十堰市妇幼保健院进行孕中期产前检查的孕妇2756例为研究对象,根据妊娠结局将孕妇分为先心病组(n=110),正常组(n=2646)。孕中期均行胎儿超声心动图检查。酶联免疫吸附法试验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测母体血清SFRP5浓度,全自动生化分析仪检测Hcy浓度。Pearson法分析先心病组母体血清SFRP5浓度与Hcy浓度的相关性。以妊娠结局为“金标准”,分析胎儿超声心动图、母体血清SFRP5、Hcy浓度及三者联合对先心病胎儿的诊断效能。结果先心病组母体血清SFRP5浓度明显低于正常组(P<0.05),Hcy浓度明显高于正常组(P<0.05),两者浓度呈负相关(r=-0.575,P<0.05)。胎儿超声心动图、母体血清SFRP5、Hcy浓度诊断先天性心脏病胎儿的灵敏度分别为63.64%、64.55%、65.45%,特异度分别为81.52%、81.07%、80.35%,准确度分别为80.81%、80.41%、79.75%。胎儿超声心动图、母体血清SFRP5、Hcy浓度联合诊断先心病胎儿的灵敏度、准确度分别为96.36%、80.91%,均高于三者单独检测,且三者联合诊断的灵敏度显著高于三者单独诊断(P<0.05)。结论胎儿超声心动图联合母体血清SFRP5、Hcy浓度对先心病胎儿具有较高的诊断价值,三者联合诊断可提高灵敏度。

铁蛋白、尿酸、同型半胱氨酸、超敏C反应蛋白对原发性高血压患者颈动脉内膜中层厚度增厚的预测价值

目的探讨铁蛋白、尿酸、同型半胱氨酸(Hcy)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)对原发性高血压患者颈动脉内膜中层厚度(CIMT)增厚的预测价值。方法106例原发性高血压患者分为CIMT增厚组(55例)和正常组(51例),比较两组铁蛋白、尿酸、Hcy、hs-CRP水平,采用logistic回归分析,并以ROC曲线评价CIMT增厚的预测价值。结果增厚组的铁蛋白、尿酸、Hcy、hs-CRP水平均明显高于正常组(P<0.01)。logistic回归分析显示铁蛋白、尿酸、Hcy、hs-CRP均是CIMT增厚的独立危险因素(P<0.05)。铁蛋白、尿酸、Hcy、hs-CRP单独检测的AUC分别为0.735、0.802、0.818、0.778,4项指标联合检测的AUC为0.939(P<0.01)。结论铁蛋白、尿酸、Hcy、hs-CRP在CIMT增厚预测中具有一定价值,但4种指标联合检测的预测效能最高。

原发性高血压患者血清铁蛋白和同型半胱氨酸水平与颈动脉粥样硬化的关系分析

探讨对原发性高血压患者的血清铁蛋白指标和同型半胱氨酸水平实施检测,观察分析其与颈动脉粥样硬化情况发生的关联。方法 本研究采用随机抽样的方法,从本院的患者中选择60例原发性高血压群体作为研究对象。选取时间在2022年1月至2023年1月,根据颈动脉的内膜中层厚度予以分组,分为增厚组(35例)、未增厚组(25例),并另选同期内健康体检者30例作为对照组,对三组研究对象均实施血清铁蛋白和同型半胱氨酸水平的检测,同时对颈动脉的内膜中层厚度予以检查,分析其与动脉粥样硬化的关系。结果 研究对象的血清Fer和Hcy水平存在显著差异(P<0.05);实施分组后显示,在增厚组中,血清Fer测得数值、Hcy测得数值均高于未增厚组别的数值,同时也高于对照组的检测数值;并且未增厚组的血清Fer测得数值和Hcy测得数值也显示其显著高于对照组(P<0.05)。结论 针对原发性高血压患者,实施血清铁蛋白和同型半胱氨酸水平检测后,可助于发现其与颈动脉粥样硬化程度得相关性。

富含半胱氨酸型酸性糖蛋白在皮肤纤维化疾病中的研究进展

皮肤纤维化疾病的主要病理特征是以胶原蛋白为主的细胞外基质(ECM)在真皮内过量沉积,进而导致皮肤的增厚或瘢痕过度增生。皮肤较为典型的纤维化病变有硬皮病、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩等。研究发现富含半胱氨酸型酸性糖蛋白(SPARC)在多种纤维化病变组织中均存在过表达的情况。SPARC是一种典型的钙结合基质蛋白,能够调节细胞/ECM的相互作用,并影响细胞对生长因子的反应。本文对SPARC在皮肤纤维化疾病中的研究进展进行综述,以期为SPARC作为减轻纤维化的潜在靶点提供依据。

富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白在IgA肾病患者血、尿中的含量及肾组织中的表达

目的:测定富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白(SPARC)在IgA肾病患者血液、尿液中的浓度,并观察其在肾组织中的分布和表达。方法:采用夹心ELISA法对IgA肾病患者和正常人血清和尿液中SPARC、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)进行定量检测;应用夹心ELISA法检测IL-6处理后的人肾小球系膜细胞(HMC)和人肾小管上皮细胞(HKC)SPARC蛋白的分泌水平;运用免疫组织化学SP法检测SPARC在IgA肾病患者及正常人肾组织中的表达及分布。结果:IgA肾病患者血液及尿液SPARC、TNF-α、IL-1β、IL-6的含量均显著高于正常对照组(P<0.01或P<0.05);IgA肾病患者尿液SPARC浓度显著高于血液浓度(P<0.01)。IL-6(50 pg/ml)分别作用HMC、HKC 96 h后,SPARC蛋白的表达量明显高于对照组(P<0.01),而且HKC组SPARC蛋白的表达量明显高于HMC组(P<0.01)。在正常肾组织中,SPARC在远端小管细胞仅有极微弱表达,在IgA肾病肾组织小管上皮细胞中SPARC蛋白表达较正常肾组织肾小管细胞明显增强。结论:IgA肾病时,增多的炎症因子可刺激肾小管细胞产生和分泌SPARC蛋白增加,引起血清SPARC浓度升高,可能起到一种保护性反馈抑制系膜细胞增殖的作用。

富含半胱氨酸酸性分泌型糖蛋白2.1肽段对体外培养人系膜细胞超微结构及其分泌细胞外基质的影响

目的:观察富含半胱氨酸酸性分泌型糖蛋白(SPARC)2.1肽段对体外培养人肾小球系膜细胞(HMC)超微结构及其分泌细胞外基质的影响。方法:50μg/mlSPARC2.1肽段作用48h、96h后,倒置显微镜下观察HMC形态变化,透射电镜观察其超微结构,以正常培养的HMC作空白对照组。荧光定量RT-PCR法检测空白对照组和50μg/mlSPARC2.1肽段作用96h后HMC分泌细胞外基质[Ⅰ型和Ⅳ型胶原(ColⅠ、ColⅣ)、层粘连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)]相关基因mRNA表达的变化;ELISA法比较两组HMC培养上清中细胞外基质(ColⅠ、ColⅣ、LN、FN)的蛋白含量。结果:空白对照组HMC无明显变化;50μg/mlSPARC2.1肽段作用48h电镜可见少数HMC发生凋亡早期改变;96h可见较多细胞发生典型凋亡改变,电镜下可见典型的凋亡小体。与空白对照组相比,SPARC2.1肽段作用96h后,HMC的ColⅠ、ColⅣ、FNmRNA和蛋白含量显著下调(P<0.01,P<0.05),LNmRNA及其蛋白含量无明显变化。结论:SPARC2.1肽段可在体外诱导HMC细胞的凋亡,超微结构可见典型凋亡小体,并抑制其分泌细胞外基质。

原发性高血压老年患者血清富含半胱氨酸酸性分泌蛋白、DFR、半乳糖凝集素-3与颈动脉粥样硬化的相关性分析

目的研究原发性高血压老年患者血清富含半胱氨酸酸性分泌蛋白(SPARC)、D-二聚体与纤维蛋白原之比(DFR)、半乳糖凝集素-3(Gal-3)与颈动脉粥样硬化的关系。方法将2019年8月—2020年8月于河北医科大学第二医院收治的原发性高血压患者132例设为观察组,将同期健康体检合格者90例设为对照组,检测并比较2组血清SPARC、DFR和Gal-3水平,比较高血压分级及颈动脉粥样硬化分级不同患者的血清SPARC、DFR和Gal-3水平,领动脉内膜中层厚度(CIMT)及斑块面积,分析血清SPARC、DFR与Gal-3水平与高血压分级及颈动脉粥样硬化分级的相关性。结果观察组SPARC、D-二聚体、纤维蛋白原、DFR和Gal-3检测值均显著高于对照组(P<0.05);IMT、斑块面积及血清SPARC、DFR和Gal-3水平均随着高血压分级的增高而上升(P<0.05);颈动脉粥样硬化分级中,2~3级患者血清SPARC、DFR和Gal-3水平均显著高于0~1级患者(P<0.05);相关性分析提示,血清SPARC、DFR、Gal-3水平与高血压分级及颈动脉粥样硬化分级均呈正相关(P<0.05)。结论SPARC、DFR和Gal-3在原发性高血压老年患者血清中呈高表达水平,并与颈动脉粥样硬化关系密切。

富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白在病理性瘢痕中的表达及其意义

目的观察富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白(Secreted protein,acidic and rich in cysteine,SPARC)在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕中的表达规律及其意义。方法瘢痕患者的瘢痕疙瘩和3～12个月增生性瘢痕组织各26例;另取手术剩余的正常成人皮肤组织5例;所有标本用40 g/L甲醛固定,行连续切片,厚4μm,应用链菌素生物素-过氧化物酶标记物免疫组织染色法染色。同时设正常对照(正常皮肤)、阳性对照(胃癌癌变组织)、阴性对照(磷酸盐缓冲液代替一抗)。鼠抗人SPARC单克隆一抗浓度为1:200。结果正常成人皮肤中SPARC表达稀少,局限在真皮-表皮交界的乳头真皮,部分靠近基底膜血管和皮肤附件。SPARC在增生性瘢痕的真皮瘢痕组织、皮肤附件中低表达,且早期增生性瘢痕中表达无明显强于晚期增生性瘢痕(P>0.05)。在真皮中SPARC呈弥散性散在分布(同增生性瘢痕),阳性信号表达较低。增生性瘢痕及瘢痕疙瘩的SPARC较正常皮肤表达无差异(P>0.05)。结论SPARC在3～12个月增生性瘢痕中呈低表达,在瘢痕疙瘩中低表达。

酸性富含半胱氨酸分泌型蛋白的表达与食管鳞状细胞癌患者临床特征的关系

目的:观察食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)组织中酸性富含半胱氨酸分泌型蛋白(secreted protein acidicand rich in cysteine,SPARC)的表达与患者临床特征的关联.方法:收集90例诊断为ESCC患者的肿瘤组织及癌旁组织,采用免疫组织化学检测肿瘤组织及癌旁组织中SPARC的表达,并探讨其表达与食管癌患者临床特征的关系.结果:肿瘤组织中有73例SPARC表达阳性,阳性率81.11%,癌旁组织中SPARC表达均为阴性.肿瘤组织与癌旁组织SPARC表达阳性率差异有统计学意义(P<0.05).72.22%(65例)SPARC阳性表达均位于细胞间质,少量(8.89%,8例)位于细胞质.肿瘤组织中SPARC表达与肿瘤分期、转移与否密切相关(P<0.05).结论:对ESCC患者进行SPARC检查,可以作为预测食管鳞癌分期、转移的重要指标.

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白在喉癌和下咽癌间质组织中表达及功能

目的:通过研究富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)在喉癌及下咽癌的蛋白表达与相关功能,探讨SPARC对头颈鳞癌发展所起的作用。方法:免疫组织化学染色检测SPARC在51例肿瘤组织中的表达,观察外源性SPARC对体外细胞系生长及迁移的影响。结果:免疫组化染色显示SPARC在46.3%(19/41)喉癌及60.0%(6/10)下咽癌的间质组织表达下调,外源性SPARC抑制头颈鳞癌细胞株的增殖及迁移。结论:肿瘤间质SPARC表达下调促进了喉癌及下咽癌细胞的增殖。

分泌性中耳炎病灶组织中伴有Kazal基序富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白的表达及其与细胞外基质重塑、骨破坏及细胞凋亡的相关性

目的探讨分泌性中耳炎病灶组织中伴有Kazal基序富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)的表达及其与细胞外基质重塑、骨破坏及细胞凋亡的相关性。方法选择58例接受开放式乳突改良根治手术或完壁式乳突根治手术的分泌性中耳炎患者,术后留取分泌性中耳炎病灶组织;另取同期因外伤接受外耳道成形术的44例患者,术后留取正常外耳道上皮组织。检测两种组织中以下指标的mRNA表达量:RECK、细胞外基质重塑分子[基质金属蛋白酶2(MMP2)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad 2/3、基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)1、TIMP2]、骨破坏分子[Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子(RANK)、RANK配体(RANKL)]及细胞凋亡基因[第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、Livin、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)]。分析分泌性中耳炎局部组织中RECK mRNA表达量与细胞外基质重塑分子、骨破坏分子、细胞凋亡基因mRNA表达量的相关性。结果分泌性中耳炎病灶组织中RECK、TIMP1、TIMP2、RUNX2、OPG、Livin、Cyclin D1、PCNA的mRNA相对表达量均低于正常外耳道上皮组织,而MMP2、TGF-β1、Smad 2/3、RANK、RANKL、PTEN、Caspase-3的mRNA相对表达量均高于正常外耳道上皮组织(均P<0.05)。分泌性中耳炎病灶组织中RECK的相对mRNA表达量与TIMP1、TIMP2、RUNX2、OPG、Livin、Cyclin D1、PCNA的mRNA相对表达量呈正相关,与MMP2、TGF-β1、Smad 2/3、RANK、RANKL、PTEN、Caspase-3的mRNA相对表达量呈负相关(均P<0.05)。结论分泌性中耳炎病灶组织中RECK呈低表达,这能够促进细胞外基质重塑、骨质破坏及细胞凋亡的发生。

富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白与肿瘤的关系

富含半胱氨酸的分泌型酸性蛋白(SPARC)是一种调节细胞外基质的糖蛋白,与某些基质成分、生长因子和细胞因子作用,参与组织重建、形态生成、细胞迁移和增殖,调节机体的生理和病理过程。现就其分子结构、生物学功能、相应机制、表达调节及与肿瘤的发生、发展、侵袭和转移的关系等作一简述。

中国小麦花叶病毒富含半胱氨酸蛋白多克隆抗体的制备与应用

中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)是小麦花叶病的重要病原体之一,长期威胁小麦的产量和品质;CWMV富含半胱氨酸蛋白(cysteine-rich protein,CRP)在病毒侵染过程中具有重要而复杂的功能。为了深入研究CRP的功能和CWMV侵染机制,本研究采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)从CWMV侵染的小麦叶片中获得CRP基因编码区,将其克隆至原核表达载体pET-32a上,并将重组质粒pET-CRP转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达;通过镍柱亲和层析法纯化CRP重组蛋白,并用作抗原免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体。蛋白质印迹法、间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和斑点ELISA分析结果显示:纯化的CRP抗体不仅具有高度的特异性,而且效价高达1∶4096000,是未纯化抗体效价的4倍;该抗体能识别0.5 ng抗原,显示出较高的灵敏度;在1∶120000稀释条件下,该抗体能特异且灵敏地识别天然CRP。综上所述,本研究所制备的CRP抗体不但可用于田间CWMV病株样品的精准诊断,还可用于植物体内瞬时表达CRP的检测分析,为后续CRP检测、定量分析及其亚细胞定位等研究提供了依据。