微RNA-103a-3p靶向调节Kazal基序富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白表达对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨胃癌细胞中微RNA(miR)-103a-3p与Kazal基序富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)表达的关系及其对胃癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法将对数生长期人胃癌细胞系MKN-45细胞随机分为阴性对照(NC)组、miR-103a-3p组、RECK组、miR-103a-3p+RECK组。NC组细胞共转染miR-103a-3p-NC(miR-NC)和pCDH空表达载体,miR-103a-3p组细胞共转染miR-103a-3p模拟物(miR-103a-3p mimics)和pCDH空表达载体,RECK组细胞共转染miR-NC和含RECK的pCDH表达载体(pCDH-RECK),miR-103a-3p+RECK组细胞共转染miR-103a-3p mimic和pCDH-RECK。采用划痕试验检测各组细胞的迁移能力,采用Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力,采用Western blot法检测各组细胞中RECK蛋白相对表达量。应用Starbase数据库通过生物信息分析预测miR-103a-3p与RECK的3′非翻译区(3′-UTR)是否存在结合位点,构建含有预测结合位点的野生型(Wt)、突变型(Mt)RECK 3′-UTR片段的荧光素酶报告基因载体Wt-RECK和Mt-RECK,使用脂质体2000将Wt-RECK或Mt-RECK载体与miR-NC或miR-103a-3p mimics共转染入MKN-45细胞,将转染后的细胞设为miR-NC+Wt-RECK组、miR-103a-3p+Wt-RECK组、miR-NC+Mt-RECK组、miR-103a-3p+Mt-RECK组,使用双荧光素酶检测试剂盒检测4组细胞的相对荧光素酶活性。结果4组细胞的划痕愈合率、侵袭细胞数比较差异有统计学意义(F=16.044、60.975,P<0.05);RECK组细胞划痕愈合率显著低于NC组,miR-103a-3p组细胞划痕愈合率显著高于RECK组,miR-103a-3p+RECK组细胞划痕愈合率显著低于miR-103a-3p组(P<0.05);miR-103a-3p组、miR-103a-3p+RECK组与NC组细胞划痕愈合率比较差异无统计学意义(P>0.05);RECK组与miR-103a-3p+RECK组细胞划痕愈合率比较差异无统计学意义(P>0.05)。RECK组侵袭细胞数显著少于NC组,miR-103a-3p组侵袭细胞数显著多于NC组(P<0.05);miR-103a-3p组、miR-103a-3p+RECK组侵袭细胞数显著多于RECK组(P<0.05);miR-103a-3p+RECK组侵袭细胞数显著少于miR-103a-3p组(P<0.05);NC组与miR-103a-3p+RECK组侵袭细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)。4组细胞中RECK蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=33.473,P<0.05);RECK组细胞中RECK蛋白相对表达量显著高于NC组,miR-103a-3p组、miR-103a-3p+RECK组细胞中RECK蛋白相对表达量显著低于RECK组(P<0.05);NC组与miR-103a-3p组、miR-103a-3p+RECK组细胞中RECK蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05);miR-103a-3p组与miR-103a-3p+RECK组细胞中RECK蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。Starbase数据库预测显示,miR-103a-3p与RECK的3′UTR存在结合位点。miR-NC+Wt-RECK组、miR-NC+Mt-RECK组、miR-103a-3p+Mt-RECK组细胞的相对荧光素酶活性显著高于miR-103a-3p+Wt-RECK组(P<0.05);miR-NC+Wt-RECK组、miR-NC+Mt-RECK组、miR-103a-3p+Mt-RECK组细胞的相对荧光素酶活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论miR-103a-3p可能通过靶向抑制RECK的表达而促进胃癌细胞的侵袭和迁移。

巨噬细胞移动抑制因子、伴有kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白及循环肿瘤细胞在骨肉瘤中的表达及临床意义

目的 探讨巨噬细胞移动抑制因子(MIF)、伴有kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)及外周血循环肿瘤细胞(CTC)在骨肉瘤中的表达及临床意义。方法 将132例骨肉瘤患者设为观察组,另选取同期的129例软骨瘤患者设为对照组。对比两组患者MIF、RECK、CTC阳性表达情况;对观察组患者随访2年,分析不同预后骨肉瘤患者MIF、RECK、CTC阳性表达情况;采用Cox多元回归分析对骨肉瘤患者预后影响因素进行分析。结果 观察组患者MIF、CTC阳性表达率均明显高于对照组,RECK阳性表达率明显低于对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。随访2年,132例骨肉瘤患者中,死亡58例,生存74例。死亡患者MIF、CTC阳性表达率均明显高于生存患者,RECK阳性表达率明显低于生存患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。发生肺部转移、低中分化、MIF阳性、RECK阴性、CTC阳性均为骨肉瘤患者预后死亡的危险因素(P﹤0.05)。结论 MIF、CTC、RECK可用于骨肉瘤患者早期诊断及预后评价中,能作为评估骨肉瘤患者预后的标志物。

分泌性中耳炎病灶组织中伴有Kazal基序富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白的表达及其与细胞外基质重塑、骨破坏及细胞凋亡的相关性

目的探讨分泌性中耳炎病灶组织中伴有Kazal基序富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)的表达及其与细胞外基质重塑、骨破坏及细胞凋亡的相关性。方法选择58例接受开放式乳突改良根治手术或完壁式乳突根治手术的分泌性中耳炎患者,术后留取分泌性中耳炎病灶组织;另取同期因外伤接受外耳道成形术的44例患者,术后留取正常外耳道上皮组织。检测两种组织中以下指标的mRNA表达量:RECK、细胞外基质重塑分子[基质金属蛋白酶2(MMP2)、转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad 2/3、基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)1、TIMP2]、骨破坏分子[Runt相关转录因子2(RUNX2)、骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子(RANK)、RANK配体(RANKL)]及细胞凋亡基因[第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因(PTEN)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)、Livin、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、增殖细胞核抗原(PCNA)]。分析分泌性中耳炎局部组织中RECK mRNA表达量与细胞外基质重塑分子、骨破坏分子、细胞凋亡基因mRNA表达量的相关性。结果分泌性中耳炎病灶组织中RECK、TIMP1、TIMP2、RUNX2、OPG、Livin、Cyclin D1、PCNA的mRNA相对表达量均低于正常外耳道上皮组织,而MMP2、TGF-β1、Smad 2/3、RANK、RANKL、PTEN、Caspase-3的mRNA相对表达量均高于正常外耳道上皮组织(均P<0.05)。分泌性中耳炎病灶组织中RECK的相对mRNA表达量与TIMP1、TIMP2、RUNX2、OPG、Livin、Cyclin D1、PCNA的mRNA相对表达量呈正相关,与MMP2、TGF-β1、Smad 2/3、RANK、RANKL、PTEN、Caspase-3的mRNA相对表达量呈负相关(均P<0.05)。结论分泌性中耳炎病灶组织中RECK呈低表达,这能够促进细胞外基质重塑、骨质破坏及细胞凋亡的发生。

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白在肿瘤中的研究进展

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(secreted protein acidic and rich in cysteine, SPARC)是肿瘤微环境中重要的基质成分,它作为正常细胞恶变和肿瘤发生发展过程中一个重要的分子,能够调节多种肿瘤相关细胞因子及其受体的相互作用,并调节多种信号通路以及蛋白水解酶的表达水平。由于它抑制和促进肿瘤进展的能力取决于细胞类型、肿瘤分期等,因此在多种类型的肿瘤中差异表达,并可能成为肿瘤早期诊断的新型生物标记物以及治疗的新靶点。本文就近年来SPARC在肿瘤研究中的进展作一综述。

伴有Kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白在呼吸系统疾病中的研究进展

伴有Kazal域的富含半胱氨酸的逆转诱导蛋白(RECK)是一种新型基质金属蛋白酶抑制剂,可对多种基质金属蛋白酶的活性进行负调节。RECK基因的表达可在转录、转录后和表观遗传水平受到调控。RECK对人体正常发育至关重要,在组织发育、形态发生、肌肉和血管形成等生命活动过程中发挥重要作用,其下调参与多种呼吸系统疾病的发生、发展,包括慢性阻塞性肺疾病、哮喘、肺纤维化、肺结节病和肺癌等。本文就RECK的结构、表达调控、功能及其在呼吸系统相关疾病中的研究现状进行综述。

富含半胱氨酸和甘氨酸蛋白2在神经母细胞瘤恶性进展中的功能和机制

目的:探究富含半胱氨酸和甘氨酸蛋白2(cysteine and glycine-rich protein 2,CSRP2)在神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)恶性进展中的功能和作用机制。方法:利用R2数据库分析NB临床样本中CSRP2基因的mRNA水平与NB患儿临床预后的相关性;在NB细胞系SK-N-BE(2)和SH-SY5Y中利用靶向小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰CSRP2的表达或利用质粒转染过表达CSRP2;通过结晶紫染色和实时无标记动态细胞分析技术观察NB细胞的增殖情况;采用克隆形成方法观察NB细胞长时间的克隆形成能力;利用免疫荧光实验检测细胞增殖标记物Ki-67的水平;利用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色流式细胞术分析细胞周期比例,Annexin V/7AAD染色分析细胞凋亡比例;采用划痕实验观察细胞的迁移能力;利用Western blot或实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测NB原发肿瘤组织和细胞系中蛋白和基因的表达水平。结果:NB临床数据库中,国际神经母细胞瘤分期(international neuroblastoma staging system,INSS)为高危险度3/4期的NB组织中CSRP2的mRNA水平显著高于低危险度的1/2期,且高表达水平组NB患儿的生存期显著低于低表达组;Western blot结果显示,CSRP2在3/4期NB组织中的蛋白水平显著高于1/2期。NB细胞中敲低CSRP2,细胞的活力减弱、增殖能力降低;NB细胞中过表达CSRP2促进细胞增殖;敲低CSRP2后,sub-G1、G0/G1和S期细胞的比例增加,Annexin V阳性细胞的比例增多;敲低CSRP2的NB细胞的划痕愈合率显著小于对照组。机制研究发现,敲低CSRP2后细胞增殖标记分子Ki-67和细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinases 1/2,ERK1/2)磷酸化水平显著低于对照组。结论:CSRP2在高危险度3/4期NB组织中高表达,表达水平与NB患儿生存期呈负相关;CSRP2通过促进ERK1/2活化,促进NB细胞的增殖和迁移,抑制细胞凋亡,表明CSRP2通过激活ERK1/2促进NB进展,为高危NB的靶向治疗提供了潜在的靶点。

血清高半胱氨酸蛋白61、干扰素-γ、基质金属蛋白酶-9水平与Graves眼病活动性关系研究

目的:探讨血清高半胱氨酸蛋白61(CYR61)、干扰素-γ(IFN-γ)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平与Graves眼病疾病活动性的关系。方法:选择GO患者112例为研究对象,依据临床活动性评分(CAS)分为活动期组(CAS≥3分,62例)和非活动期组(CAS<3分,50例)。比较两组血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平。分析血清CYR61、IFN-γ、MMP-9与疾病活动性的相关性及影响疾病活动性的危险因素。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CYR61、IFN-γ、MMP-9对GO疾病活动性的预测价值。结果:非活动期组患者血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平较活动期组下降(均P<0.05)。血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平与GO患者疾病活动性呈正相关(均P<0.05)。血清CYR61、IFN-γ、MMP-9为影响GO患者疾病活动性的影响因素(均P<0.05)。血清CYR61、IFN-γ、MMP-9对GO患者疾病活动性均有一定的预测价值,三者联合的预测价值更高(均P<0.05)。结论:GO患者活动期血清CYR61、IFN-γ、MMP-9水平明显高于非活动期,与GO患者疾病活动性呈正相关,三者联合检测对GO患者疾病活动性的临床预测价值良好。

血清同型半胱氨酸、低氧诱导因子-1α、高迁移率族蛋白B1对急性心肌梗死患者预后的评估价值

目的 探讨血清同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)、低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)及高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein B1,HMGB1)对急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)患者预后的评估价值。方法 回顾性选取2020年2月至2022年6月广东省人民医院收治的98例AMI患者为AMI组;根据AMI患者冠状动脉狭窄程度,将AMI患者分为轻度组(21例)、中度组(45例)和重度组(32例);同时根据AMI患者1年内是否出现主要不良心血管事件(major adverse cardiovascular events,MACE)分为MACE组(24例)和非MACE组(74例)。检测各组患者血清Hcy、HIF-1α、HMGB1水平,分析Hcy、HIF-1α、HMGB1对AMI患者发生MACE的预测价值。结果 AMI组血清Hcy、HIF-1α、HMGB1水平显著高于对照组(P<0.05);重度组血清Hcy、HIF-1α、HMGB1水平高于中度组,中度组又高于轻度组(P<0.05);AMI患者血清Hcy、HIF-1α、HMGB1水平与Gensini评分呈正相关(P<0.05);MACE组血清Hcy、HIF-1α、HMGB1水平高于非MACE组(P<0.05);Hcy、HIF-1α与HMGB1联合预测AMI患者发生MACE的曲线下面积、敏感度也高于单项检测(P<0.05)。结论 血清Hcy、HIF-1α、HMGB1水平与AMI病情及预后密切相关,三项指标可作为评估AMI患者发生MACE的参考指标,联合检测的预测效能更佳。

中国小麦花叶病毒富含半胱氨酸蛋白多克隆抗体的制备与应用

中国小麦花叶病毒(Chinese wheat mosaic virus,CWMV)是小麦花叶病的重要病原体之一,长期威胁小麦的产量和品质;CWMV富含半胱氨酸蛋白(cysteine-rich protein,CRP)在病毒侵染过程中具有重要而复杂的功能。为了深入研究CRP的功能和CWMV侵染机制,本研究采用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)从CWMV侵染的小麦叶片中获得CRP基因编码区,将其克隆至原核表达载体pET-32a上,并将重组质粒pET-CRP转化至大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中进行诱导表达;通过镍柱亲和层析法纯化CRP重组蛋白,并用作抗原免疫新西兰白兔,制备多克隆抗体。蛋白质印迹法、间接酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和斑点ELISA分析结果显示:纯化的CRP抗体不仅具有高度的特异性,而且效价高达1∶4096000,是未纯化抗体效价的4倍;该抗体能识别0.5 ng抗原,显示出较高的灵敏度;在1∶120000稀释条件下,该抗体能特异且灵敏地识别天然CRP。综上所述,本研究所制备的CRP抗体不但可用于田间CWMV病株样品的精准诊断,还可用于植物体内瞬时表达CRP的检测分析,为后续CRP检测、定量分析及其亚细胞定位等研究提供了依据。

富含半胱氨酸型酸性糖蛋白在皮肤纤维化疾病中的研究进展

皮肤纤维化疾病的主要病理特征是以胶原蛋白为主的细胞外基质(ECM)在真皮内过量沉积,进而导致皮肤的增厚或瘢痕过度增生。皮肤较为典型的纤维化病变有硬皮病、增生性瘢痕和瘢痕疙瘩等。研究发现富含半胱氨酸型酸性糖蛋白(SPARC)在多种纤维化病变组织中均存在过表达的情况。SPARC是一种典型的钙结合基质蛋白,能够调节细胞/ECM的相互作用,并影响细胞对生长因子的反应。本文对SPARC在皮肤纤维化疾病中的研究进展进行综述,以期为SPARC作为减轻纤维化的潜在靶点提供依据。

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白在心血管疾病中的研究进展

富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)为典型的基质细胞蛋白,参与组织发育和修复,通过调节细胞黏附、增殖和生长因子信号转导,以及细胞外基质与细胞的相互作用,在心肌损伤过程发挥重要作用。该文介绍SPARC在高血压、冠状动脉粥样硬化性心脏病、心力衰竭、病毒性心肌炎等心血管疾病中的相关研究进展。

术前血清Ⅳ型胶原和富含半胱氨酸蛋白61水平与腹腔镜直肠癌根治术患者术后复发的关系

目的探讨分析术前血清Ⅳ型胶原(COLⅣ)和富含半胱氨酸蛋白61(Cry61)水平与腹腔镜直肠癌根治术患者术后复发的关系。方法选取2020年2月-2021年2月该院收治的100例行腹腔镜直肠癌根治术的患者,随访至2022年2月28日,根据术后是否复发将患者分为复发组(34例)和未复发组(66例)。比较两组患者基线资料,采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测血清COLⅣ和Cry61水平,分析术前血清COLⅣ和Cry61水平与腹腔镜直肠癌根治术患者术后复发的关系。结果两组患者性别、年龄和病程比较,差异均无统计学意义(P>0.05),而两组患者肿瘤分期、分化程度、淋巴转移、术前血清COLⅣ和Cry61水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,肿瘤分期(O^R=3.384,95%CI:1.437~7.969)、分化程度(O^R=3.121,95%CI:1.493~6.521)、淋巴转移(O^R=3.476,95%CI:1.274~9.483)、术前血清COLⅣ水平(O^R=3.165,95%CI:1.290~7.765)和Cry61水平(O^R=2.924,95%CI:1.543~5.540)是腹腔镜直肠癌根治术患者术后复发的独立影响因素(O^R>1,P<0.05)。术前血清COLⅣ水平截断值为164.58 ng/mL时,预测腹腔镜直肠癌根治术患者术后复发的受试者操作特征曲线(ROC)的曲线下面积(AUC)为0.75(95%CI:0.678~0.907),此时的敏感度和特异度分别为78.34%和69.52%;术前血清Cry61水平截断值为447.36 ng/L时,预测腹腔镜直肠癌根治术患者术后复发的ROC AUC为0.73(95%CI:0.714~0.912),此时的敏感度和特异度分别为75.63%和68.45%;两者联合检测预测腹腔镜直肠癌根治术患者术后复发的ROC AUC为0.79(95%CI:0.752~0.936),此时的敏感度和特异度分别为82.49%和69.31%。结论术前血清COLⅣ和Cry61水平升高是腹腔镜直肠癌根治术患者术后复发的独立影响因素,术前血清COLⅣ和Cry61水平,对腹腔镜直肠癌根治术后复发,具有较好的预测价值。

二硫键的氧化还原状态对Trx融合赤霉酸诱导富含半胱氨酸蛋白内源荧光及变性过程影响

在采用亲和层析、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对原核表达的赤霉酸诱导的富含半胱氨酸蛋白(Trx-GcGASA)进行纯化、鉴定的基础上,运用稳态荧光光谱手段研究了二硫苏糖醇(DTT)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、过氧化氢、盐酸胍(GdnHCl)对Trx-GcGASA内源荧光及变性过程的影响,发现(1)在中性缓冲体系中融合蛋白的内源荧光以305 nm的酪氨酸的荧光发射为主;(2)伴随着二硫键还原,融合蛋白中色氨酸和酪氨酸的相对荧光强度比值从0.7变化至1.8倍左右;(3)经过0.5 mmol.L-1GSSG、5 mmol.L-1过氧化氢处理后,酪氨酸和色氨酸的荧光强度下降约12~21%;(4)无论是否采用1 mmol.L-1DTT处理,6 mol.L-1盐酸胍均不能诱导融合蛋白彻底变性;(5)二硫键的存在与否影响了盐酸胍诱导的变性过程。通过两态模型拟合获得Trx-GcGASA变性过程Gibbs自由能变化ΔG约为3.7 kJ.mol-1。相关工作不仅为深入研究融合伴侣Trx对GcGASA变性热力学、动力学及复性过程影响奠定了基础;同时,也为通过光谱手段获取GcGASA的结构信息提供了基础的数据。

综合疗法对强直性脊柱炎伴骨质疏松患者血清富含半胱氨酸的酸性蛋白酶的影响

目的观察综合疗法对强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)伴骨质疏松患者血清富含半胱氨酸的酸性蛋白酶(serum secreted protein acidic and rich in cysteine,SPARC)水平的影响,探讨SPARC在AS伴骨质疏松发生过程中可能的作用机制。方法 48例AS伴骨质疏松患者(AS组)采用推拿、静脉滴注鹿瓜多肽注射液及口服补肾祛寒治尪汤治疗3个月,并以健康人45名为健康对照组(对照组);采用酶联免疫吸附法测定AS组治疗前后及对照组的血清SPARC水平,股骨颈骨密度(bone mineral density of femoral neck,FN BMD)、腰2-腰4骨密度(bone mineral density of 2-4 lumbar spine,L2-4BMD)、骨碱性磷酸酶(bone specific alkaline phosphatase,BSAP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、转化生长因子β1(TGF-β1)水平。同时检测AS组治疗前后Bath AS疾病活动指数(Bath AS disease activity index,BASDAI)及Bath AS功能指数(Bath AS functional index,BASFI),并分析上述指标与血清SPARC水平间的相互关系。结果 AS组血清SPARC水平明显低于对照组(μg/L,175.30±72.04vs190.52±86.13,P<0.01)。AS组血清SPARC水平与TNF-α呈负相关(r=-0.261,P<0.01),与L2-4BMD、TGF-β1、BSAP呈正相关(r=0.437,0.256,0.385,P<0.05,P<0.01);L2-4BMD和BSAP是影响AS组血清SPARC水平的独立相关因素。AS组经综合治疗后TNF-α、BAS-DAI、BASFI明显降低,TGF-β1、BSAP、L2-4BMD和FNBMD明显升高(P<0.05,P<0.01),血清SPARC水平也显著升高[(188.32±87.50)μg/L,P<0.05]。结论综合疗法能有效改善AS伴骨质疏松患者骨代谢水平、临床症状和关节活动功能,同时升高其血清SPARC水平。

富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白在IgA肾病患者血、尿中的含量及肾组织中的表达

目的:测定富含半胱氨酸的酸性分泌糖蛋白(SPARC)在IgA肾病患者血液、尿液中的浓度,并观察其在肾组织中的分布和表达。方法:采用夹心ELISA法对IgA肾病患者和正常人血清和尿液中SPARC、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)进行定量检测;应用夹心ELISA法检测IL-6处理后的人肾小球系膜细胞(HMC)和人肾小管上皮细胞(HKC)SPARC蛋白的分泌水平;运用免疫组织化学SP法检测SPARC在IgA肾病患者及正常人肾组织中的表达及分布。结果:IgA肾病患者血液及尿液SPARC、TNF-α、IL-1β、IL-6的含量均显著高于正常对照组(P<0.01或P<0.05);IgA肾病患者尿液SPARC浓度显著高于血液浓度(P<0.01)。IL-6(50 pg/ml)分别作用HMC、HKC 96 h后,SPARC蛋白的表达量明显高于对照组(P<0.01),而且HKC组SPARC蛋白的表达量明显高于HMC组(P<0.01)。在正常肾组织中,SPARC在远端小管细胞仅有极微弱表达,在IgA肾病肾组织小管上皮细胞中SPARC蛋白表达较正常肾组织肾小管细胞明显增强。结论:IgA肾病时,增多的炎症因子可刺激肾小管细胞产生和分泌SPARC蛋白增加,引起血清SPARC浓度升高,可能起到一种保护性反馈抑制系膜细胞增殖的作用。

富含半胱氨酸蛋白61在球囊损伤大鼠腹主动脉中的表达变化

目的观察大鼠腹主动脉球囊损伤后富含半胱氨酸蛋白61表达的变化。方法对球囊损伤后不同时间段的大鼠腹主动脉标本采用组织形态学观察内膜增生,采用免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应、免疫蛋白印记分析检测富含半胱氨酸蛋白61的表达。结果球囊损伤后可见新生内膜在术后7天出现,术后14天明显增厚,术后28天内膜继续增生,形成的新生内膜厚度不均,较假手术组明显增厚(P<0.01)。球囊损伤后7天、14天采用免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应、蛋白印记分析检测富含半胱氨酸蛋白61的表达均明显增强,与假手术组比较差异有显著性(P<0.01)。28天时与假手术组比较差异没有显著性(P>0.05)。结论球囊损伤后富含半胱氨酸蛋白61的表达明显增强,提示富含半胱氨酸蛋白61可能在球囊损伤后内膜增生过程中起重要作用。

富含半胱氨酸酸性分泌型糖蛋白2.1肽段对体外培养人系膜细胞超微结构及其分泌细胞外基质的影响

目的:观察富含半胱氨酸酸性分泌型糖蛋白(SPARC)2.1肽段对体外培养人肾小球系膜细胞(HMC)超微结构及其分泌细胞外基质的影响。方法:50μg/mlSPARC2.1肽段作用48h、96h后,倒置显微镜下观察HMC形态变化,透射电镜观察其超微结构,以正常培养的HMC作空白对照组。荧光定量RT-PCR法检测空白对照组和50μg/mlSPARC2.1肽段作用96h后HMC分泌细胞外基质[Ⅰ型和Ⅳ型胶原(ColⅠ、ColⅣ)、层粘连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)]相关基因mRNA表达的变化;ELISA法比较两组HMC培养上清中细胞外基质(ColⅠ、ColⅣ、LN、FN)的蛋白含量。结果:空白对照组HMC无明显变化;50μg/mlSPARC2.1肽段作用48h电镜可见少数HMC发生凋亡早期改变;96h可见较多细胞发生典型凋亡改变,电镜下可见典型的凋亡小体。与空白对照组相比,SPARC2.1肽段作用96h后,HMC的ColⅠ、ColⅣ、FNmRNA和蛋白含量显著下调(P<0.01,P<0.05),LNmRNA及其蛋白含量无明显变化。结论:SPARC2.1肽段可在体外诱导HMC细胞的凋亡,超微结构可见典型凋亡小体,并抑制其分泌细胞外基质。

土槿乙酸诱导HL60细胞凋亡及其与半胱氨酸蛋白酶-3活化的关系

目的 探讨土槿乙酸 (PLAB)的抗癌活性及其机制。方法 对用不同浓度PLAB处理的HL 60细胞 ,或半胱氨酸蛋白酶 3 (caspase 3 )抑制剂DEVD fmk预处理的HL 60细胞。采用MTT法检测HL60细胞抑制增殖作用 ,采用Hoechst3 3 3 42 /PI双荧光活细胞染色和原位末端标记 (TUNEL)方法检测细胞凋亡 ,CPP3 2colorimetrickit检测caspase 3酶活性。 结果 PLAB以剂量依赖的方式抑制HL60细胞的生长 ,其IC50 值为 1μmol/L。PLAB诱导HL60细胞死亡的形式以细胞凋亡为主 ,且该凋亡可被caspase 3抑制剂所遏制。PLAB诱导的caspase 3酶的活化与剂量和作用时间呈依赖关系。 结论 PLAB能有效诱导HL 60细胞凋亡 ,该凋亡过程伴有caspase

富含半胱氨酸蛋白61 RNA干扰质粒抑制血管平滑肌细胞的增殖

目的观察富含半胱氨酸蛋白61（Cyr61）RNA干扰质粒（pCyr61-shRNA）对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。方法构建Cyr61RNA干扰质粒转染大鼠血管平滑肌细胞，采用半定量逆转录聚合酶链反应及West-ern blot检测Cyr61 RNA和蛋白表达；采用MTT法检测细胞增殖；^3H-标记胸腺嘧啶掺入法检测细胞DNA含量。结果测序证实成功构建Cyr61 RNA干扰质粒；转染pCyr61-shRNA组mRNA及蛋白表达均明显降低（P〈0．01）；pCyr61-shRNA组细胞数、吸光度值和DNA含量均明显降低（P〈0．01）。结论Cyr61 RNA干扰质粒抑制大鼠血管平滑肌细胞的增殖。

富含半胱氨酸肠蛋白的研究进展

富含半胱氨酸肠蛋白是一种含双锌指结构的小分子蛋白,其在锌离子转运、个体发育、免疫防御以及肿瘤发生等多种生理过程中发挥重要作用。作者主要对富含半胱氨酸肠蛋白的结构特点及其在发育和免疫方面的研究进展进行系统概述,并指出其相关作用机制尚待深入研究。