儿童细菌性脓毒症中富含组氨酸糖蛋白血浆浓度及其诊断价值

目的:探讨血浆富含组氨酸糖蛋白(histidine-rich glycoprotein,HRG)、降钙素原(procalcitonin,PCT)和C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)浓度在儿童细菌性脓毒症中的诊断价值。方法:收集2018年1月至12月于武汉市金银潭医院传染病科住院就诊的60例细菌性脓毒症患儿为观察组,同期年龄和性别相匹配的60例健康儿童为对照组。检测并比较观察组治疗前后血浆HRG,PCT和CRP浓度差异,并与对照组进行比较,受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析三者诊断效能。结果:治疗前,观察组血浆HRG浓度显著低于对照组[(28.7±11.3)μg/mL vs(53.0±21.0)μg/mL,P<0.001];治疗后,HRG浓度升至(38.6±9.7)μg/mL。观察组血浆PCT[(10.9±4.6)μg/L vs(0.5±0.2)μg/L,P<0.01]和CRP[(19.4±6.5)mg/L vs(0.2±0.3)mg/L,P<0.05]浓度均显著高于对照组。治疗后PCT和CRP浓度均较治疗前显著下降(P<0.05)。当截断值为33.2μg/mL时,血浆HRG浓度诊断脓毒症ROC曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.910(95%CI 0.840~0.940,P<0.001),优于PCT(AUC 0.754)和CRP(AUC 0.654)。三种标志物联合应用可提高诊断效能,其敏感度和特异度分别为94.6%和96.8%。治疗前血浆HRG与PCT浓度显著正相关(r=0.76,P<0.001)。结论:细菌性脓毒症患儿血浆HRG浓度显著下降,PCT和CRP浓度显著升高,HRG对细菌性脓毒症患儿诊断效能优于PCT和CRP,是细菌性脓毒症的潜在诊断标志物。

日本七鳃鳗Arg-Gly-Asp毒素蛋白Lj-RGD3野生型与RGD全缺失突变体Lj-112的抗血管新生作用

七鳃鳗Arg-Gly-Asp(RGD)毒素肽Lj-RGD3与富含组氨酸糖蛋白HRG具有序列同源性,而RGD毒素蛋白及HRG都具有抑制血管新生的活性,但作用靶点不同。为研究Lj-RGD3结构与功能的关系,对野生型Lj-RGD3及其RGD全缺失突变体Lj-112进行了抗血管新生功能研究。将3个RGD模体的全缺失突变体基因Lj-112全序列合成后构建于pET-23b载体,对野生型Lj-RGD3及突变体Lj-112蛋白进行IPTG诱导表达,重组蛋白经组氨酸亲和层析纯化;采用MTT法测定野生型和突变体蛋白对人脐静脉内皮细胞ECV304细胞增殖的抑制作用;采用Transwell细胞培养板及人工基质膜Matrigel模仿体内环境研究rLj-RGD3与rLj-112对ECV304细胞迁移及浸润的抑制作用;运用鸡绒毛尿囊膜(CAM)模型检测rLj-RGD3与rLj-112对血管新生的抑制作用;ELISA法检测两种蛋白对整合素连接激酶ILK-1表达的影响。经组氨酸亲和层析获得了分子量约为15 kDa的rLj-RGD3及rLj-112纯化蛋白。MTT实验表明,rLj-RGD3与rLj-112均以剂量依赖方式抑制bFGF诱导的ECV304细胞增殖,rLj-RGD3的IC50为0.889μmol/L,rLj-112的IC50为0.160μmol/L。迁移及浸润结果表明,Lj-RGD3与Lj-112均能抑制ECV304细胞的迁移,抑制率分别为50%和63%;而以bFGF为趋化剂的ECV304细胞穿透Matrigel的浸润行为均明显受到抑制,且Lj-112的抑制功能强于Lj-RGD3。CAM血管新生实验结果表明,rLj-RGD3与rLj-112均能抑制CAM的血管新生,且同等剂量条件下rLj-112的作用强于rLj-RGD3。ILK-1的ELISA实验结果表明,rLj-RGD3与rLj-112均能下调ECV304细胞ILK-1的表达。野生型rLj-RGD3与其RGD全缺失突变体蛋白rLj-112均具有抑制血管新生功能,且突变体Lj-112的活性高于野生型Lj-RGD3,这说明Lj-112为HRG功能蛋白,而野生型Lj-RGD毒素蛋白与HRG序列的同源性并未使白其抗血管新生功能得到协同加强,二者的抗血管新生功能涉及了不同的信号通路。