富含半胱氨酸和甘氨酸蛋白2在神经母细胞瘤恶性进展中的功能和机制

目的:探究富含半胱氨酸和甘氨酸蛋白2(cysteine and glycine-rich protein 2,CSRP2)在神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)恶性进展中的功能和作用机制。方法:利用R2数据库分析NB临床样本中CSRP2基因的mRNA水平与NB患儿临床预后的相关性;在NB细胞系SK-N-BE(2)和SH-SY5Y中利用靶向小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)干扰CSRP2的表达或利用质粒转染过表达CSRP2;通过结晶紫染色和实时无标记动态细胞分析技术观察NB细胞的增殖情况;采用克隆形成方法观察NB细胞长时间的克隆形成能力;利用免疫荧光实验检测细胞增殖标记物Ki-67的水平;利用碘化丙啶(propidium iodide,PI)染色流式细胞术分析细胞周期比例,Annexin V/7AAD染色分析细胞凋亡比例;采用划痕实验观察细胞的迁移能力;利用Western blot或实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,RT-qPCR)检测NB原发肿瘤组织和细胞系中蛋白和基因的表达水平。结果:NB临床数据库中,国际神经母细胞瘤分期(international neuroblastoma staging system,INSS)为高危险度3/4期的NB组织中CSRP2的mRNA水平显著高于低危险度的1/2期,且高表达水平组NB患儿的生存期显著低于低表达组;Western blot结果显示,CSRP2在3/4期NB组织中的蛋白水平显著高于1/2期。NB细胞中敲低CSRP2,细胞的活力减弱、增殖能力降低;NB细胞中过表达CSRP2促进细胞增殖;敲低CSRP2后,sub-G1、G0/G1和S期细胞的比例增加,Annexin V阳性细胞的比例增多;敲低CSRP2的NB细胞的划痕愈合率显著小于对照组。机制研究发现,敲低CSRP2后细胞增殖标记分子Ki-67和细胞外信号调节激酶1/2(extracellular signal-regulated kinases 1/2,ERK1/2)磷酸化水平显著低于对照组。结论:CSRP2在高危险度3/4期NB组织中高表达,表达水平与NB患儿生存期呈负相关;CSRP2通过促进ERK1/2活化,促进NB细胞的增殖和迁移,抑制细胞凋亡,表明CSRP2通过激活ERK1/2促进NB进展,为高危NB的靶向治疗提供了潜在的靶点。

富含亮氨酸重复激酶2在神经病理性疼痛大鼠痛敏中的作用及机制研究

目的研究富含亮氨酸重复激酶2(LRRK2)对神经病理性疼痛(NP)大鼠痛觉敏感性的影响,并探讨其可能的机制。方法将48只SD大鼠随机分成4组:假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、LRRK2抑制剂组(MLi-2组)和LRRK2抑制剂+p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)激动剂组(MLi-2+Anisomycin组),每组12只。采用坐骨神经慢性压迫损伤(CCI)诱导NP大鼠模型,术后第8天开始鞘内注射MLi-2(1 mg/kg,10μl)或Anisomycin(20μmol/L,10μl),每天1次,连续7 d。分别于术前(第0天)及术后第7、14天进行痛觉敏感性检测,分析各组大鼠机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(PWTL)变化;ELISA检测大鼠脊髓背角中白细胞介素(IL)-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;尼氏染色观察大鼠脊髓组织神经元病理变化;免疫荧光染色观察大鼠脊髓中小胶质细胞标志物离子化钙结合适配分子-1(Iba-1)表达水平;Western blot检测大鼠脊髓背角中LRRK2、p-p38 MAPK、p38 MAPK和Iba-1蛋白表达水平。结果与Sham组比较,Model组大鼠右侧后肢MWT和PWTL均明显降低(P<0.01),脊髓背角组织中IL-1β、IL-6和TNF-α含量及LRRK2、Iba-1蛋白和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白比值水平均明显升高(P<0.01),脊髓组织中Iba-1阳性细胞比例明显升高(P<0.01),而尼氏小体明显减少(P<0.01)。与Model组比较,MLi-2组大鼠右侧后肢MWT和PWTL明显升高(P<0.01),尼氏小体明显增多(P<0.01),脊髓组织中Iba-1阳性细胞比例明显降低(P<0.01),脊髓背角组织中IL-1β、IL-6和TNF-α水平及LRRK2、Iba-1蛋白和p-p38 MAPK/p38 MAPK蛋白比值水平明显降低(P<0.01)。然而,Anisomycin干预可激活p38 MAPK信号通路,并部分逆转MLi-2对NP大鼠痛敏、神经炎症的改善作用。结论抑制LRRK2表达可减轻由小胶质细胞活化介导神经炎症引起的NP大鼠痛觉敏感性,其作用机制可能与调控p38 MAPK信号通路有关。

富含脯氨酸的酪氨酸激酶2和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶在舌鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(Pyk2)和磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)在舌鳞状细胞癌(TSCC)及其癌旁非肿瘤组织中的表达差异及临床意义。方法采用免疫组织化学法检测45例TSCC组织及30例癌旁非肿瘤组织中Pyk2和p-AKT蛋白的表达情况,并分析两者蛋白表达与临床病理参数的关系。结果在TSCC组织中Pyk2和p-AKT蛋白均呈高表达,而在癌旁非肿瘤中呈低表达或无表达(P<0.05)。并且两者的表达呈正相关(γs=0.412)。Pyk2蛋白的表达与病理分化程度、有无淋巴结转移及TNM临床分期有关(P<0.05),与性别、年龄无关。而p-AKT只与病理分化程度有关(P<0.05)。结论 Pyk2和p-AKT蛋白异常表达与TSCC的发生、发展密切相关,联合检测两者有望成为明确TSCC恶性程度的指标。

富含脯氨酸的酪氨酸蛋白激酶2在主动脉夹层发生机制中的作用研究进展

主动脉夹层(AD)发病突然,病死率高,但发病机制尚不明确。近年来发现富含脯氨酸的酪氨酸蛋白激酶2(Pyk2)与许多心血管事件的发生有关。本文对Pyk2在AD发生机制中的作用做一综述。

富含脯氨酸的酪氨酸激酶2信号通路在血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞表型转化及主动脉夹层形成中的作用

目的探讨富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(Pyk2)信号通路在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞表型转化及主动脉夹层发生中的作用。方法应用免疫荧光染色和免疫印迹法分析人体正常主动脉及夹层主动脉组织中Pyk2及磷酸化Pyk2(p-Pyk2)的定位和表达情况。将小鼠主动脉血管平滑肌细胞(MOVAS)分为对照组1(仅加入血管平滑肌细胞完全培养基)、0.01μmol AngⅡ组、0.1μmol AngⅡ组、1μmol AngⅡ组,加入相应的药物后处理24 h,免疫印迹法检测p-Pyk2、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和骨桥蛋白(OPN)的表达水平。将MOVAS分为对照组2(仅加入血管平滑肌细胞完全培养基)、1.2μmol酪氨酸激酶抑制剂TAE226组、1μmol AngⅡ组、1.2μmol TAE226+1μmol AngⅡ组,加入相应的药物后均处理24 h,免疫印迹法检测p-Pyk2、α-SMA和OPN的表达量。结果 Pyk2和p-Pyk2在正常主动脉及夹层主动脉中均有表达,但在夹层主动脉中表达更高(均P<0.05)。对照组1、0.01μmol AngⅡ组、0.1μmol AngⅡ组、1μmol AngⅡ组的p-Pyk2及OPN的表达量依次增加,而α-SMA的表达量依次减少(均P<0.05)。与对照组2比较,1.2μmol TAE226组p-Pyk2及α-SMA蛋白的表达量降低,OPN蛋白的表达升高(均P<0.05);与1μmol AngⅡ组比较,1.2μmol TAE226+1μmol AngⅡ组p-Pyk2及OPN蛋白的表达量均降低,α-SMA蛋白的表达量升高(均P<0.05)。结论 Pyk2信号通路可能通过介导AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞表型转化参与主动脉夹层的形成。

富含脯氨酸的酪氨酸激酶2在肿瘤中的研究进展

近年来肿瘤的发病率与病死率均呈持续上升趋势,传统治疗方法包括手术切除、放疗和化疗。由于肿瘤的高复发和转移率,目前病死率仍然较高。大量研究表明,肿瘤的发生和转移与某些致癌基因的过表达有关。因此,有必要寻找新的分子生物标志物和治疗靶点,以改善预后。富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(Pyk2)是一种能调节细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的非受体酪氨酸激酶。近年来,Pyk2在肿瘤进展中的作用引起了人们的广泛关注。Pyk2在肿瘤组织中的过表达与不良预后相关,为新型酪氨酸激酶抑制剂在肿瘤治疗中的应用提供了分子证据。本文就Pyk2在肿瘤进展中的作用及其分子机制作一综述。

富含亮氨酸的-2-糖蛋白的表达对急性心肌梗死发生的预测作用

目的探讨富含亮氨酸的-2-糖蛋白对急性心肌梗死的预测能力。方法收集40例急性心肌梗死患者和40例正常体检居民,于入院后第2天清晨(心肌梗死后24 h内)空腹肘静脉抽取外周静脉血,检测肌酸激酶同工酶(CK-MB)和富含亮氨酸的-2-糖蛋白,比较两组治疗前后相关指标。结果心肌梗死组富含亮氨酸的-2-糖蛋白1与CK-MB呈正相关(=0.760,<0.05)。富含亮氨酸的-2-糖蛋白1指标在的最大为0.997,高于CKMB的0.926,其灵敏度为82%,高于CK-MB的78%。结论富含亮氨酸的-2-糖蛋白对急性心肌梗死的早期发生和预后评估的判断能力较强。

富含脯氨酸的蛋白酪氨酸激酶2蛋白在非肌层浸润性膀胱癌中的表达及意义

目的探讨富含脯氨酸的蛋白酪氨酸激酶2(Pyk2)蛋白在非肌层浸润性膀胱癌(NMIBC)中的表达及其与NMIBC预后的关系。方法收集2013年6月至2018年3月114例经尿道膀胱肿瘤切除术后病理诊断为NMIBC患者的组织标本(NMIBC组),取其中50例标本癌旁0.5 cm正常膀胱黏膜组织作为对照组。男63例(55.3%),女51例(44.7%)。年龄42~87岁,平均(63.6±13.8)岁。肿瘤直径<3 cm 73例,≥3 cm 41例。肿瘤单发83例,多发31例。病理分级:高级别53例,低级别61例。病理分期:Ta期59例,T1期55例。采用免疫组化染色法及蛋白质印迹法检测两组标本中Pyk2蛋白表达情况。分析Pyk2蛋白表达与患者性别、年龄,以及肿瘤大小、数目、病理分级、病理分期的关系。采用Kaplan-Merier法及log-rank检验分析Pyk2蛋白表达与NMIBC患者无复发生存率(RFS)和无进展生存率(PFS)的关系。采用Cox回归模型分析影响NMIBC患者预后的危险因素。结果免疫组化染色检测结果显示,NMIBC组和对照组的Pyk2蛋白阳性表达率分别为66.7%(76/114)和16.0%(8/50),差异有统计学意义(P<0.01)。蛋白质印迹检测结果表明Pyk2蛋白在NMIBC组中的表达水平明显高于对照组(0.571±0.230与0.253±0.152,P<0.01)。Pyk2蛋白在NMIBC组织中的表达与肿瘤分期(P=0.027)、肿瘤分级(P=0.010)有关,与患者性别(P=0.275)、年龄(P=0.419)、肿瘤大小(P=0.317)、肿瘤数目(P=0.208)无关。生存分析结果显示,Pyk2蛋白阳性表达者与阴性表达者的RFS分别为46.1%(35/76)和28.9%(11/38),PFS分别为35.5%(27/76)和10.5%(4/38),差异均有统计学意义(P<0.001,P=0.003)。Cox回归分析结果显示,Pyk2蛋白阳性表达是NMIBC患者复发(HR 0.245,95%CI 0.078~0.768,P=0.016)和进展(HR 0.095,95%CI 0.012~0.764,P=0.027)的独立危险因素。结论Pyk2蛋白在NMIBC组织中呈高表达,并与NMIBC的复发和进展均相关。

富含脯氨酸的蛋白酪氨酸激酶2蛋白在前列腺癌中的表达及意义

目的:探讨富含脯氨酸的蛋白酪氨酸激酶2(Pyk2)蛋白在前列腺癌中的表达及意义。方法:选择2015年2月~2018年3月在我院行根治性切除术的82例前列腺癌患者的组织标本(病例组)及同期因82例前列腺增生行前列腺电切的组织标本(对照组)进行研究。以免疫组化方法检测Pyk2蛋白表达情况,收集患者临床、病理特征,比较不同Pyk2蛋白表达情况前列腺癌患者与临床病理特征间的关系,进行生存分析,并结合生物信息学数据库进行分析。结果:对照组共出现Pyk2蛋白阳性12例(14.63%)低于病例组的56例(68.29%)。不同Pyk2蛋白表达情况患者术前血清PSA水平、Gleason评分、T分期及淋巴转移情况差异具有统计学意义。Pyk2蛋白阴性组患者平均无病生存时间为(39.15±2.83)月较阳性组的(33.18±1.789)月更短。从STRING数据库预测结果显示Pyk2蛋白的编码基因PTK2B与ITGB3、LPXN、BCAR1等10个基因具有相互作用。GO富集分析共得到与PTK2B相关的176个条目,其中BP条目148个,CC条目20个,MF条目8个。KEGG共富集到Pyk2蛋白的编码基因PTK2B参与的9个信号通路。结论:前列腺癌组织中Pyk2蛋白表达阳性率高于前列腺增生组织且Pyk2蛋白阳性者无病生存时间更短。Pyk2蛋白可能通过多种不同的靶点及信号通路参与前列腺癌的发生、发展,但尚有待进一步研究证实。

LRRK2基因R1067Q和GBA基因R202Q双变异致早发型帕金森病一例

患者男性,42岁。主因左手抖动18个月,左下肢抖动伴运动迟缓6个月,于2023年7月8日入院。患者18个月前(2022年1月)无明显诱因出现左上肢不自主抖动,静止时出现、持物及动作时消失,无动作迟缓、反应变慢等其他伴随症状。于2022年11月至外院就诊,头部MRI检查无明显异常,结合临床症状,考虑帕金森病(PD),服用普拉克索0.375 mg/d并逐渐增量至0.375 mg/次、2次/d长期治疗,症状无明显改善。6个月前(2023年1月)出现左下肢不自主抖动,并逐渐出现动作迟缓,左侧肢体活动不灵活,体位变化或行走时偶有头晕,不伴视物旋转及恶心呕吐等,持续数分钟后头晕可自行好转,无嗅觉丧失、情绪低落,睡眠质量尚可,无多梦、呓语、乱喊乱叫、手舞足蹈等症状。

右美托咪定调节JAK2/STAT3信号通路对老年胸腔镜患者术后认知功能的影响

目的探讨右美托咪定调节蛋白络氨酸激酶2(JAK2)/信号转导子与激活子3(STAT3)信号通路对老年胸腔镜患者术后认知功能的影响。方法前瞻性选取2020年8月至2023年6月于邯郸市第一医院行胸腔镜手术的老年患者96例,按随机数字表法分为观察组和对照组,每组各48例。观察组患者在全身麻醉插管后持续泵注右美托咪定,对照组给予等量0.9%氯化钠溶液泵注,术毕前30 min停止泵注。比较两组患者术前及术后1、3、5 d时认知功能[简易精神状态检查量表(MMSE)],术前及术后1 d时JAK2/STAT3信号通路相关蛋白(JAK2、P-JAK2和P-STAT3)水平,麻醉诱导前(T 0)、诱导5 min时(T 1)、术毕(T 2)及拔管时(T 3)血流动力学[平均动脉压(MAP)、心率]变化和不良反应发生率。结果观察组术后1、3 d的MMSE评分分别为(26.70±1.24)、(27.24±1.53)分,均显著高于对照组[(25.15±1.16)、(26.71±1.46)分],差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组术后1 d的JAK2、P-JAK2、P-STAT3水平分别为0.31±0.07、0.43±0.08、0.37±0.07,均显著低于对照组(0.42±0.09、0.48±0.12、0.44±0.09),差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组T 3时心率、MAP水平分别为(82.31±8.43)次/min、(87.43±9.01)mmHg,均显著低于对照组[(86.03±8.74)次/min、(92.41±9.64)mmHg],差异均有统计学意义(P<0.05)。两组患者不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论右美托咪定可减少老年胸腔镜患者术后认知功能障碍的发生,这可能与JAK2/STAT3信号通路是氧化应激信号通路之一有关。

富含脯氨酸的酪氨酸蛋白激酶2在原发性大肠癌中的表达及其对预后的意义

目的研究富含脯氨酸的酪氨酸蛋白激酶2（proline-rich tyrosine kinase-2，Pyk2）在人原发性大肠癌组织中的表达及其对大肠癌患者预后判断的意义。方法应用免疫组织化学方法检测108例原发性大肠癌组织中Pyk2的表达水平，分析Pyk2表达差异与预后的相关性及与临床相关因素的关系。结果在原发性大肠癌组织中Pyk2低表达率为56．5％（61／108）；Pyk2表达水平与肿瘤组织学分级显著相关（P〈0．05），与TNM分期显著相关（P〈0．05），而与患者年龄、肿瘤大小等无关（P〉0．05）；Pyk2高表达组患者根治术后五年生存率（66．0％）明显高于低表达组（31．4％）；多因素分析显示，Pyk2表达水平、肿瘤组织学分级以及TNM分期是影响大肠癌预后的因素。结论Pyk2表达水平是影响原发性大肠癌预后的因素之一，可与其他因素联合作为判断大肠癌预后的参考指标。

扶正化瘀通络方对高血压脑出血恢复期(气虚血瘀证)患者MMP-9、S100-β、AKT及Th1/Th2平衡的影响

【目的】观察扶正化瘀通络方治疗高血压脑出血恢复期气虚血瘀证患者的临床疗效及对血清基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、S100-β蛋白(S100-βprotein,S100-β)、苏氨酸蛋白激酶(threonine protein kinase,AKT)和Th1/Th2平衡的影响。【方法】将130例高血压脑出血恢复期气虚血瘀证患者随机分为对照组和观察组,每组各65例。对照组给予西医常规治疗,观察组在对照组的基础上联合扶正化瘀通络方治疗,疗程为4周。观察2组患者治疗前后美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分、健康状况调查简表(SF-36)评分、中医证候积分(主要症状包括乏力、偏瘫、口眼歪斜,次要症状包括头部刺痛、气短)及血清MMP-9、S100-β、AKT和白细胞介素10(IL-10)、超敏C反应蛋白(Hs-CRP)、同型半胱氨酸(Hcy)、白细胞介素6(IL-6)水平的变化情况,并评价2组患者的临床疗效。【结果】(1)治疗4周后,观察组的总有效率为95.38%(62/65),对照组为78.46%(51/65),组间比较,观察组的疗效明显优于对照组(P<0.05)。(2)治疗后,2组患者的NIHSS评分和中医证候积分均较治疗前明显降低(P<0.05),SF-36评分均较治疗前明显升高(P<0.05),且观察组对NIHSS评分和中医证候积分的降低幅度及对SF-36评分的升高幅度均明显优于对照组(P<0.05)。(3)治疗后,2组患者的血清MMP-9、S100-β、AKT水平均较治疗前明显降低(P<0.05),且观察组对血清MMP-9、S100-β、AKT水平的降低幅度均明显优于对照组(P<0.05)。(4)治疗后,2组患者血清Hs-CRP、Hcy、IL-6水平均较治疗前明显降低(P<0.05),血清IL-10水平均较治疗前明显升高(P<0.05),且观察组对血清Hs-CRP、Hcy、IL-6水平的降低幅度及对血清IL-10水平的升高幅度均明显优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。【结论】对于高血压脑出血恢复期气虚血瘀证患者而言,在西医常规治疗基础上联合扶正化瘀通络方治疗,可有效促进Th1/Th2平衡恢复,减轻氧化应激失衡,提高临床疗效。

富含脯氨酸的酪氨酸激酶2在U251胶质瘤细胞侵袭迁移中的作用

目的 观察应用RNA干扰沉默U251人胶质瘤细胞中富含脯氨酸的酪氨酸激酶2（Pyk2）的表达对细胞侵袭迁移能力的影响.方法 将Pyk2短发夹RNA（shRNA）和对照shRNA分别转染U251细胞,并将细胞分为Pyk2 shRNA组、对照shRNA组及未处理组.采用Western blot检测转染前后U251细胞中Pyk2的蛋白表达及磷酸化水平.采用Transwell迁移及侵袭实验检测转染前后U251细胞的迁移及侵袭能力.应用免疫荧光染色观察转染前后细胞黏着斑的形态变化,应用Western blot检测侵袭相关基质金属蛋白酶（MMPs）的表达.结果 Pyk2 shRNA组U251细胞中Pyk2的蛋白表达及磷酸化水平明显下调.Pyk2沉默能显著抑制U251细胞的迁移及侵袭能力分别达72％及75％.未处理组细胞黏着斑面积较小,呈细丝状,而Pyk2 shRNA组细胞黏着斑面积增大,呈点状或斑片状.Pyk2 shRNA组细胞MMP-2和MMP-9的表达水平分别为0.24±0.07和0.18±0.06,显著低于未处理组（设定为1,P＜0.05）.结论 Pyk2沉默能够抑制U251胶质瘤细胞的迁移和侵袭能力,可能与其参与调控黏着斑的周转及MMPs的表达有关.

脊髓富亮氨酸重复激酶2在大鼠神经病理性痛中的作用

目的:评价脊髓富亮氨酸重复激酶2(LRRK2)在大鼠神经病理性痛中的作用。方法:SPF级健康雄性SD大鼠50只,6~7周龄,体质量210~245 g,采用随机数字表法分为5组(n=10):对照组(C组)、神经病理性痛组(NP组)、GNE-7915低剂量组、GNE-7915中剂量组和GNE-7915高剂量组。采用选择性坐骨神经损伤术建立神经病理性痛模型。建模后7 d时,GNE-7915低、中、高剂量组分别腹腔注射LRRK2抑制剂GNE-791512.5、25.0和50.0 mg/kg。于建模前、建模后7 d、注射抑制剂后4 h时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。痛阈测定结束后处死大鼠,取脊髓组织,采用免疫荧光染色法检测离子钙结合衔接分子1(Iba-1)阳性表达,采用ELISA法检测IL-1β、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和IL-18的含量,免疫荧光染色法检测磷酸化LRRK2(p-LRRK2)阳性表达,采用免疫印迹法检测LRRK2、IL-1β、MCP-1和IL-18的表达,计算p-LRRK2/LRRK2比值。结果:与C组相比,NP组MWT和TWL降低,脊髓组织Iba-1与p-LRRK2阳性细胞百分比、IL-1β、MCP-1与IL-18含量、p-LRRK2/LRRK2比值升高,IL-1β、MCP-1和IL-18表达上调(P<0.05);与NP组相比,GNE-7915低、中、高剂量组MWT和TWL升高,脊髓组织Iba-1与p-LRRK2阳性细胞百分比、IL-1β、MCP-1与IL-18含量、p-LRRK2/LRRK2比值降低,IL-1β、MCP-1和IL-18表达下调(P<0.05)。结论:脊髓LRRK2可能通过激活小胶质细胞,诱发炎症反应,参与大鼠神经病理性痛的病理生理机制。

姜黄素对MRL／lpr狼疮鼠肾组织富含脯氨酸的酪氨酸激酶2信号转导途径表达的影响

目的探讨富含脯氨酸的酪氨酸激酶2（PYK2）信号转导途径在MRL／lpr模型鼠狼疮。肾炎中所起的作用以及姜黄素对PYK2信号转导途径活化的影响。方法选用MRL／lpr转基因狼疮鼠为研究对象，给予姜黄素干预治疗后，采用免疫组化方法研究狼疮鼠肾脏磷酸化PYK2的组织分布情况，采用Westernblot方法研究磷酸化PYK2蛋白的定量表达。结果MRL／lpr狼疮鼠肾脏的磷酸化PYK2蛋白明显活化，给予姜黄素干预治疗后。肾脏的磷酸化PYK2蛋白表达降低。结论狼疮鼠肾脏PYK2信号转导途径的活化与狼疮。肾炎的发病密切相关，姜黄素可以降低PYK2信号转导途径的表达。

富含脯氨酸的酪氨酸激酶2在肿瘤中调控作用的研究进展

富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(proline-rich tyrsosine kinase 2,Pyk2)是一种非受体型酪氨酸激酶,与黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)共同组成黏着斑激酶家族。Pyk2在多种器官及组织中表达,受一系列因子激活,参与多条信号通路的信息传递,能够调节细胞的迁移、增殖、分化及凋亡等。在许多肿瘤中均发现Pyk2的异常表达,因此Pyk2可能成为肿瘤治疗的新靶点。本文就Pyk2的结构与分布、在多种肿瘤(骨髓瘤、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌)中的调控作用及其抑制剂的应用方面作一综述。

Pyk2在糖尿病小鼠的表达和肾小管上皮细胞的作用及ALM调控Pyk2延缓肾纤维化的研究

目的:探讨富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(proline-rich tyrosine kinase 2,Pyk2)在糖尿病(diabetes mellitus,DM)小鼠中的表达和在肾小管上皮细胞的作用,以及α-硫辛酰胺(alpha-lipoamide,ALM)是否通过调控Pyk2延缓糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)肾纤维化。方法:选取8周龄野生型(wild-type,WT)小鼠和db/db小鼠各5只,正常饮食饲养至16周,Western blot检测肾组织纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、III型胶原α1链(collagen type III alpha 1 chain,COL3A1)、Pyk2和p-Pyk2(Y402)的蛋白水平,免疫组织化学染色观察Pyk2和p-Pyk2(Y402)蛋白分布及表达情况,RT-qPCR检测Pyk2的mRNA水平。体外培养大鼠肾小管上皮细胞系NRK-52E,取对数生长期细胞予以高糖高脂(high glucose and high palmitic acid,HP)、Pyk2抑制剂PF-562271、ALM处理及转染Pyk2过表达质粒后,分为正常糖(normal glucose,NG)组、HP组、HP+PF-562271组、HP+vector组、HP+OE-Pyk2组、HP+ALM组和HP+ALM+OE-Pyk2组,每组重复3次。免疫荧光染色观察Pyk2蛋白定位及表达,Western blot检测FN、COL3A1、Pyk2和p-Pyk2(Y402)的蛋白水平,RT-qPCR检测Pyk2的mRNA水平。结果:与WT组相比,db/db组小鼠纤维化指标(FN和COL3A1)蛋白表达升高,Pyk2和p-Pyk2(Y402)主要在肾小管中表达且蛋白表达水平显著升高,Pyk2的mRNA水平显著升高(P<0.05)。与NG组比较,HP组中纤维化指标、Pyk2和p-Pyk2(Y402)蛋白水平显著升高,Pyk2的mRNA水平显著升高(P<0.05);予PF-562271处理后,与HP组比较,p-Pyk2(Y402)和纤维化指标蛋白水平显著降低,予转染Pyk2过表达质粒后,与HP+vector组比较,纤维化指标蛋白水平显著升高(P<0.05)。经ALM干预后,与HP组比较,Pyk2、p-Pyk2(Y402)及纤维化指标蛋白水平显著降低(P<0.05),与HP+ALM组比较,转染Pyk2过表达质粒后,纤维化指标的变化趋势被逆转(P<0.05)。结论:Pyk2在DM小鼠中表达升高,在肾小管上皮细胞表达可促进DKD肾纤维化进展;ALM可通过下调肾小管上皮细胞中Pyk2的表达及磷酸化延缓DKD肾纤维化进展。

缺氧后线粒体Drp1通过LRRK2-HK2诱导mPTP过度开放的机制研究

目的:探究缺氧后线粒体动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)对线粒体膜通透性转换通道(mitochondrial permeability transition pore,mPTP)开放的调控机制。方法:在血管平滑肌细胞中通过免疫荧光方法观察缺氧后mPTP开放情况;通过超速离心法分离线粒体和细胞质成分蛋白;使用Co-IP和Westernblot检测缺氧或者干预Drp1、干预己糖激酶-2(hexokinase-2,HK2)后Drp1的表达分布情况、HK2与电压依赖性阴离子通道蛋白(voltage dependent anion channel,VDAC)结合情况、Drp1与富含亮氨酸重复激酶2(leucine-rich repeat kinase 2,LRRK2)结合情况;使用蛋白分子对接和蛋白芯片方法筛选Drp1的潜在结合蛋白及结合位点;使用Drp1抑制剂和点突变法用于相应机制探究。结果:缺氧后Drp1发生线粒体转位促使mPTP过度开放(P<0.05)。使用Mdivi-1减少线粒体Drp1表达后可抑制mPTP开放,减少细胞色素C(cytochrome C,CytC)释放(P<0.05)。缺氧后HK2-Thr473磷酸化水平减低引起的HK2线粒体分离会导致mPTP结构破坏,通过HK2 T473D点突变恢复HK2活性后,HK2与线粒体结合情况及mPTP开放情况明显改善(P<0.05)。Drp1蛋白芯片结果发现缺氧后Drp1可以与LRRK2结合并封闭其活性位点,通过Drp1 T595A点突变破坏Drp1-LRRK2结合后,HK2活性及HK2线粒体分离情况明显改善(P<0.05),mPTP开放情况明显减少(P<0.05)。结论:缺氧后线粒体Drp1通过封闭激酶LRRK2活性位点导致HK2 Thr473磷酸化水平减低及其线粒体分离,最终诱导mPTP过度开放。

非受体酪氨酸激酶Pyk2在宫颈腺癌组织中的表达及意义

目的探究富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(proline-rich tyrosine kinase 2,Pyk2)在宫颈腺癌组织中的表达及意义。方法收集宫颈腺癌临床组织样本,用免疫组化法检测Pyk2的表达水平,分析Pyk2的表达与宫颈腺癌病理特点及患者预后的相关性。结果宫颈腺癌组织中Pyk2的表达水平显著高于对应的癌旁组织(P<0.05);宫颈腺癌患者的肿瘤大小、FIGO分期及淋巴脉管癌栓与Pyk2的表达水平具有显著相关性(P<0.05),而分化程度、淋巴结转移与Pyk2表达水平无显著相关性(P>0.05);Pyk2高表达组生存率显著高于低表达组(P<0.05)。结论Pyk2在宫颈腺癌组织中高表达,其表达水平与宫颈腺癌患者预后显著相关。