人纤维蛋白溶酶原中色氨酸残基的化学修饰

以N－溴代琥珀酰亚胺为修饰剂，对人纤维蛋白溶酶原（HPg）中色氨酸（Trp）残基的分布及其与酶活力的关系进行了研究，发现每个HPg分子有19个Trp残基，5个位于分子表面；有2个是快反应残基，其中1个是活性必需的氨基酸．酶被修饰后其荧光光谱及圆二色谱发生了变化．

色氨酸可以减少猪的攻击性

美国普渡大学的研究人员发现，在日粮中额外添加色氨酸（Trp）可以减少青年猪混群时的攻击性。由于攻击可以损害猪的健康和福利，成为养猪生产中的一个突出问题。增加Trp摄入量可以提高控制攻击性的大脑血清素（5-HT）水平。

色氨酸可以减少猪的攻击性

美国普渡大学的研究人员发现，在日粮中额外添加色氨酸（Trp）可以减少青年猪混群时的攻击性。由于攻击可以损害猪的健康和福利，成为养猪生产中的一个突出问题。增加Trp摄入量可以提高控制攻击性的大脑血清素（5-HT）水平。用48头青年母猪进行试验，其中一半猪饲喂高Trp日粮，一半猪饲喂对照日粮。

富含Trp/Arg六肽的抗菌作用研究

为了验证富含Trp/Arg六肽对临床分离菌的抗菌效果,试验采用肉汤稀释法和动物试验法测试了富含Trp/Arg六肽对兔致病菌大肠杆菌、支气管败血波氏杆菌、魏氏梭菌的体外抗菌活性。结果表明:该六肽对大肠杆菌和魏氏梭菌的抑菌作用好于支气管败血波氏杆菌,但该六肽不具有杀菌作用,对接种动物也无治疗效果。

二色补血草LbGRP基因的克隆及抗逆能力分析

富含甘氨酸RNA结合蛋白(Glycine-rich RNA-binding proteins,GRP)是植物中重要的转录后调控蛋白,在植物的生长发育及对胁迫的抗性调控等过程中起重要作用。文章从二色补血草(Limonium bicolor(Bunge)O.)cDNA文库中克隆出了富含甘氨酸RNA结合蛋白基因(LbGRP)的全长cDNA序列(GenBank登录号:GQ398238)。为了研究LbGRP的抗逆功能,将其构建到酵母表达载体pYES2中,转化到酿酒酵母INVSc1菌株中,获得重组酵母INVSc1(pYES2-LbGRP),同时将转空pYES2质粒的酵母INVSc1(pYES2)作为对照。对重组酵母INVSc1(pYES2-LbGRP)和对照INVSc1(pYES2)进行NaCl、KCl、NaHCO3、Na2CO3、干旱和冷冻胁迫,比较它们在不同胁迫下的存活率。结果表明,INVSc1(pYES2-LbGRP)在各种胁迫下的存活率明显高于对照INVSc1(pYES2),证明LbGRP基因具有抗NaCl、KCl、NaHCO3、Na2CO3、干旱和冷冻等胁迫的能力,推测该基因参与了二色补血草的抗逆调控过程。

大肠埃希菌trp operon的克隆与表达

色氨酸操纵子所表达酶的高效表达和酶活性的提高,从而构建高产色氨酸菌株。利用PCR的方法从大肠埃希菌基因组中直接克隆色氨酸操纵子,并将其连接到原核表达载体pBV220中,得到重组质粒pBV220-trp operon,转化大肠埃希菌DH5α,温度诱导重组蛋白表达,表达产物经SDS-PAGE分析并用比色法测定其活性。通过凝胶电泳观察PCR扩增产物大小约为7 kb,SDS-PAGE鉴定目的蛋白得到了高效表达,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的活性分别比对照提高了3.4倍和2.5倍。成功构建了重组质粒pBV220-trp operon,邻氨基苯甲酸合成酶和色氨酸合成酶的表达量和表达活性在大肠埃希菌中得到了提高,为高产色氨酸基因工程菌的构建奠定基础。

紫癜灵对慢性免疫性血小板减少症患者Trp代谢的影响

目的:观察紫癜灵对慢性免疫性血小板减少症(ITP)阴虚血热证患者吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)/色氨酰-t RNA合成酶(TTS)介导的色氨酸(Trp)代谢途径的影响。方法:选取健康志愿者(正常对照组)与慢性ITP阴虚血热证患者(患者组)各20例。正常对照组不做任何处理,慢性ITP阴虚血热证患者采用紫癜灵治疗。治疗前后分别采集患者的肝素抗凝血标本,检测CD4+及CD8+T淋巴细胞中IDO、TTS表达及血浆Trp、Kyn浓度。结果:完全反应10例,有效7例,无效3例,有效率85.0%。患者组治疗前CD4+、CD8+T淋巴细胞IDO的平均荧光强度低于正常对照组(P<0.05),TTS的平均荧光强度高于正常对照组(P<0.05)。治疗后,患者组CD4+、CD8+T淋巴细胞中IDO的平均荧光强度较治疗前上升(P<0.05),TTS的平均荧光强度较治疗前下降(P<0.05)。患者组治疗前血浆Trp及Kyn浓度均高于正常对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗后,患者组Trp浓度较治疗前降低,差异有统计学意义(P<0.05);Kyn浓度较治疗前升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:紫癜灵可能通过影响慢性ITP阴虚血热证患者体内IDO/TTS介导的Trp代谢途径发挥其治疗作用。

高产IAA绿色木霉工程菌株的构建及其应用

农药和化肥的滥用,对人类健康及生存环境构成极大威胁,研制出能够降低化肥用量新型肥料十分必要,符合农业可持续发展的新型肥料十分必要。木霉作为新型肥料的常用功能微生物,在农业领域有着广泛的用途。在众多的促生防病机制中,通过产生吲哚乙酸(indole-3-acetic acid, IAA)来促进植株生长是木霉发挥作用的重要方式。为了进一步增强木霉的促生抗病能力,在绿色木霉Tv-1511中鉴定并克隆了IAA生物合成途径关键酶色氨酸合成酶(tryptophan synthase, TRPS)的编码基因TvTRPS以及色氨酸脱羧酶(L-Tryptophan decarboxylase, TDC)的编码基因TvTDC,构建了TvTRPS基因和TvTDC基因过表达的绿色木霉工程菌,并研究了其对木霉耐胁迫能力,产IAA能力,植物促生能力等的影响。结果表明:过表达TvTRPS基因和TvTDC基因的木霉工程菌合成IAA的能力显著提高,并且具有更强的耐胁迫能力和促生能力,为绿色木霉在农业生产上的进一步应用奠定了基础。

慢性肾衰竭患者血清色氨酸和犬尿氨酸水平的改变

犬尿氨酸（KYN）是色氨酸（TRP）的一种主要代谢产物。本研究探讨慢性肾衰竭（CRF）患者血清KYN、TRP含量变化及与肾功能之间的关系。

用蛋白内源荧光考察溶液pH对PSⅡ两种外周蛋白构象的影响

借助278nm和295nm激发的内源荧光光谱分析,考察不同pH值缓冲液中23kD、17kD蛋白构象变化.结果表明:295nm波长光激发时,23kD蛋白具有326nm荧光发射峰和360nm副峰;17kD蛋白具有328nm荧光发射峰和355nm副峰;278nm波长光激发时,23kD和17kD蛋白的最大荧光发射峰均在306nm处.与中性条件下相比,酸性(pH3.0～4.0)或碱性(pH8.0～9.0)缓冲液中,23kD蛋白和17kD蛋白的内源荧光光谱都发生显著变化:最大荧光峰位置和强度均不相同,340nm～360nm荧光发射副峰的强度增加.反映溶液中两种蛋白的构象易发生改变,离子键和氢键是维系23kD、17kD蛋白构象的重要因素之一.

用蛋白内源荧光法考察盐溶液中两种外周蛋白构象的变化

作者借助由278nm和295nm光源激发的蛋白质内源荧光分析,考察了在几种盐溶液(甲醇和NaCl,NaCl,脲,三氯乙酸,CaCl2)中23kD,17kD蛋白构象的变化.结果表明,由295nm波长的光激发时,17kD蛋白荧光发射峰位于328nm处和360nm附近,这表明大部分17kD蛋白的Trp71处于分子内部;23kD蛋白具有326nm荧光发射峰,表明23kD蛋白所含2个色氨酸残基(Trp34和Trp168)处于其分子内部的疏水部位。CaCl2、脲、NaCl、三氯乙酸、甲醇和NaCl对17kD和23kD外周蛋白的内源荧光都有影响,其中CaCl2、甲醇和NaCl的影响较大,脲、NaCl的影响相对较小,这反映了两种蛋白在溶液中的构象易发生改变.

几种盐类对光系统Ⅱ33kD锰稳定蛋白溶液构象的影响

借助内源荧光和圆二色谱分析 ,考察了几种不同的盐溶液 (CaCl2 ,NaCl,脲 ,三氯乙酸、二硫苏糖醇 )对水溶液中 33kD蛋白构象的影响 .以 2 95nm波长的光激发时 ,33kD蛋白具有330nm的荧光发射峰 ,表明 33kD蛋白所含唯一的2 4 1Trp位于分子内部的疏水部位 .CaCl2 、脲、三氯乙酸或二硫苏糖醇的存在 ,均会改变 33kD蛋白的内源荧光的强度和位置 ,而NaCl几乎无影响 .脲、二硫苏糖醇对 33kD蛋白的二级结构的影响较大 .因此维系 33kD蛋白构象的主要因素包括 :二硫键、疏水作用、范得华力和氢键 ,而离子键的贡献较小 .

版纳微型猪近交系LRWD1基因克隆及功能生物信息学分析

LRWD1基因在精子形成过程中起重要作用。从Gen Bank下载猪及近缘物种的LRWD1 mRNA序列作为参考序列,设计特异引物扩增版纳微型猪近交系(BMI)LRWD1基因。对蛋白质序列进行功能生物信息学分析,构建多物种系统进化树。研究获得了BMI LRWD1 1 944 bp的编码区序列(Gen Bank登录号:KU705639,对应的氨基酸登录号:AOC89057),编码647个氨基酸,蛋白质分子量(Mw)为71.40 k D,等电点(p I)为7.52。功能生物信息学分析表明LRWD1蛋白质存在2个保守结构域,无跨膜结构,无信号肽序列;N末端和C末端均疏水;有6类功能活性位点,位于细胞质的概率是70.6%。系统进化分析表明,BMI与狗、大熊猫的亲缘关系最近。研究结果将为进一步研究LRWD1基因在猪精子发生方面的作用及功能奠定基础。

葛根芩连汤对小鼠血清及粪便代谢的影响

为了探索葛根芩连汤对小鼠血清色氨酸及主要代谢产物和粪便中部分短链脂肪酸的影响,试验通过葛根芩连汤灌胃小鼠,分别在干预7 d和14 d后采集样本,运用高效液相色谱-紫外检测器（HPLC-UVD）法测定小鼠血清中犬尿氨酸（Kyn）、色氨酸（Trp）与5-羟色胺（5-HT）浓度,气相色谱（GC）法测定小鼠粪便中乙酸、丙酸和丁酸含量。结果表明：与空白组相比,用药组小鼠血清Kyn和5-HT浓度明显升高（P〈0.05）,Trp无明显变化（P〉0.05）;给药7 d后粪便中丙酸浓度上升（P〈0.05）,用药14 d后乙酸、丙酸和丁酸浓度极显著升高（P〈0.01）。说明葛根芩连汤对小鼠血清Trp及主要代谢产物和粪便中部分短链脂肪酸存在一定的影响。

肠道菌群代谢产物在脓毒症中的研究进展

肠道菌群与脓毒症的发生、发展有着密切联系。肠道菌群代谢产物如短链脂肪酸(SCFAs)、胆汁酸(BAs)、色氨酸(Trp)等通过不同的分子机制调控脓毒症中炎症反应的发生及发展,这些代谢产物及相关调控分子有望成为脓毒症的临床治疗靶点。本文将对常见的肠道菌群代谢产物在脓毒症中的研究进展进行总结,以期为脓毒症的治疗提供新思路。

基于MAPK/NF-κB信号通路探讨甘麦大枣汤对乳腺癌相关抑郁症的治疗作用及机制

目的:观察甘麦大枣汤对乳腺癌相关抑郁的抗抑郁作用,并从丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/核转录因子-κB(NF-κB)通路探讨其调控免疫炎症及神经递质的作用机制。方法:BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、氟西汀组(氟西汀5 mg·kg^(-1)·d^(-1))、甘麦大枣汤低(20 g·kg^(-1))、高(40 g·kg^(-1))剂量组,每组10只。建立小鼠乳腺癌4T1原位移植瘤诱导小鼠抑郁样行为模型,通过悬尾实验和强迫游泳实验评价小鼠抑郁样行为;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大脑皮层中白细胞介素(IL)-17A、叉头框蛋白P3(FoxP3)、IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达;流式细胞术检测脾和胸腺免疫细胞亚群比例;液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)/MS检测大脑皮层内神经递质含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测MAPK和NF-κB通路活化。结果:与模型组比较,甘麦大枣汤40 g·kg^(-1)连续给药4周能明显降低乳腺癌荷瘤动物悬尾和强迫游泳不动时间(P<0.05);IL-1β、IL-17A、TNF-αmRNA表达水平明显降低(P<0.05);T细胞、CD4^(+)T细胞、B细胞、辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)比例升高,CD8^(+)T细胞比例下降(P<0.05);5-羟吲哚乙酸(5-HIAA)、犬尿氨酸(Kyn)含量与犬尿氨酸/色氨酸(Kyn/Trp)明显下降(P<0.05),5-羟色胺(5-HT)含量增加;磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、磷酸化NF-κB p65亚基(p-NF-κB p65)蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:甘麦大枣汤能够有效治疗肿瘤相关抑郁,其治疗机制与抑制大脑皮层p38 MAPK和ERK,MAPK途径介导的NF-κB信号通路的激活,抑制脑内IL-1β、IL-17A、TNF-α等炎性因子表达,调节脑内5-HT代谢和Kyn/Trp平衡,增加脑内5-HT含量,改善神经炎症有关。

慢病毒介导的 TACO-shRNA 通过促进吞噬体与溶酶体融合提高巨噬细胞清除结核分枝杆菌的能力

目的 构建以富含色氨酸天冬氨酸膜蛋白（ TACO）基因为靶点的短发夹状RNA（ shRNA）表达慢病毒载体,鉴定其下调TACO表达的效果,以及对巨噬细胞吞噬和杀伤胞内结核分枝杆菌（ M.tb）的影响及相关机制. 方法 设计3条靶向小鼠TACO基因的shRNA表达片段及1条随机序列对照片段,插入慢病毒表达载体pSicoR 后利用293 T细胞进行病毒包装. 采用包装成功的慢病毒颗粒感染RAW264 .7细胞,分别采用real-time RT-PCR和Western blot方法鉴定干扰效果. 选择沉默效果最佳的重组慢病毒感染RAW264.7细胞,48 h后再采用M.tb对这些巨噬细胞进行感染,倍比稀释培养法进行细胞内荷菌量的检测,免疫荧光结合激光共聚焦显微镜检测巨噬细胞内M.tb与溶酶体的共定位情况,cyto-ID细胞自噬检测试剂盒检测各组细胞的自噬水平,Western blot法检测自噬相关蛋白LC3的表达水平.结果 测序结果证实重组慢病毒表达载体均构建成功. 靶向TACO基因的3种重组慢病毒均可下调RAW264 .7细胞中TACO的表达,其中LV-pSRT1的效果最佳. LV-pSRT1感染组RAW264 .7细胞内的荷菌量在感染后0 h时即显著低于对照慢病毒（LV-pSRTc）感染组（5.50×104 vs 8.1×104, P〈0.05）. 以M.tb感染后0 h时间点的细胞内荷菌量为基准,M.tb感染后48 h和72 h时LV-pSRT1感染组RAW264.7细胞内M.tb 的存活率显著低于对照慢病毒感染组（48 h： 134.54% vs 213.58%, P〈0.05; 72 h：148.18%vs 262.96%, P〈0.05）. 与对照慢病毒感染组比较,LV-pSRT1感染组RAW264.7细胞内M.tb与溶酶体的共定位率显著上调（75.67%vs 10.66%, P〈0.05）,同时细胞的自噬水平显著上调（16.20%vs 8.50%, P〈0.05）,LC3Ⅱ的相对表达水平也显著提高（0.51 vs 0.34, P〈0.05）. 结论 TACO基因特异性RNAi慢病毒表达载体可有效抑制RAW264.7细胞中TACO的表达,抑制巨噬细胞对M.tb的吞噬能力,增强巨噬细胞对胞内M.tb的清除能力. 下调TACO表达对巨噬细胞杀伤胞内M.tb影响的机制与其通过自噬溶酶体途径提高M.tb吞噬体与溶酶体的融合有关.