反相高效液相色谱法测定小鼠中脑内D-天冬氨酸和D-谷氨酸

建立了测定生物样品中微量D-天冬氨酸、D-谷氨酸的高效液相色谱法。以邻苯二甲醛(OPA)-N-异丁酰基-L-半胱氨酸柱前衍生氨基酸对映体,醋酸钠-甲醇-乙腈混合液为流动相,在Shim-packVP-ODS柱上,采用梯度淋洗技术,2种氨基酸对映体在40min内完全分离。以荧光检测,D-天冬氨酸(D-Asp)、D-谷氨酸(D-Glu)的浓度在1.0×10-8～1.0×10-6mol/L时,其浓度与峰面积呈良好的线性关系。当信噪比为3(S/N=3)时,D-Asp和D-Glu的检出限分别为2.0×10-9mol/L和1.0×10-9mol/L。将方法运用于帕金森模型小鼠中脑中D-Asp和D-Glu含量的测定,对照组与模型组中脑D-Asp含量无显著性差异,D-Glu含量呈现显著性差异。推测在脑组织里,内源性的D-Asp的合成及转运不受神经毒素1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MTPT)的毒害仍保持原有的动态平衡;而D-Glu可能具备与L型对映体相似的兴奋毒性,参与帕金森疾病的发病机制。

手性柱前衍生高效液相色谱法拆分牙本质中天冬氨酸对映体

手性柱前衍生高效液相色谱法拆分牙本质中天冬氨酸对映体傅世江，范垂昌，张世鑫魏奉群赵婷（中国医科大学法医化学教研室沈阳１１０００１）（辽宁基础医学研究所沈阳ｌ１０００３）（辽宁省分析测试研究中心沈阳１１００１５ｊ１前言由于氨基酸消旋化理论￣［１］在考古...

牙本质中天冬氨酸消旋化程度的测定——手性毛细管气相色谱法与高效液相色谱法的比较

应用手性毛细管气相色谱法（酸性异丙醇、三氟乙酸酐为衍生试剂）、高效液相色谱法（邻苯二甲醛－Ｎ－乙酰－Ｌ－半胱氨酸为手性衍生试剂）同时测定人类第一磨牙牙本质中天冬氨酸的消旋化程度，结果表明，两者均可有效地用于天冬氨酸对映体的分离测定，但气相色谱检测限（０．２ｐｍｏｌ）低于高效液相色谱（１．０ｐｍｏｌ），而变异系数（７％）、总分析时间（１００ｍｉｎ）均高于高效液相色谱（分别对应为４％，３１ｍｉｎ）。

基于凝胶渗透色谱-激光光散射联用技术的聚天冬氨酸分子量测定方法的建立

目的建立利用凝胶渗透色谱-激光光散射联用技术(gel permeation chromatography-multi-angle light scattering,GPC-MALS)对聚天冬氨酸分子量及分子量分布进行测定的方法。方法以市售聚天冬氨酸产品为样品,研究凝胶色谱柱的类型和样品浓度对检测结果的影响,利用GPC-MALS同时测定聚天冬氨酸的数均分子量、重均分子量和分子量分布等参数。结果采用Shodex Protein KW-803凝胶色谱柱,样品浓度为18.5 mg/m L时,可以得到较好的实验结果,聚天冬氨酸分子量和分子量分布测定的相对标准偏差分别为1.8%和0.7%。结论该方法操作简单,精密度良好,适用于聚天冬氨酸分子量及分子量分布的测定。

RP-HPLC法测定可溶性CD95-Fc融合蛋白中异天冬氨酸的含量

目的测定可溶性CD95-Fc融合蛋白中异天冬氨酸(IsoAsp)含量。方法采用ISOQUANT誖异天冬氨酸检测试剂盒结合反相高效液相色谱法测定样品中IsoAsp含量,采用Phenomenex Synergi 4μm Hydro RP-80 C18色谱柱(150 mm×3 mm,4μm),以7.9 mmol/L磷酸二氢钾-1.1 mmol/L磷酸氢二钾-10%甲醇为流动相A,以甲醇为流动相B,梯度洗脱,流速为0.43 mL/min。结果对照品和3批原液中IsoAsp含量相近(0.30～0.32 mol/mol sCD95-Fc),3批成品中IsoAsp含量明显增高(0.51～0.53 mol/mol sCD95-Fc);25℃和37℃处理24 h后成品中IsoAsp含量无明显变化,60℃处理后明显增加。结论该法适用于可溶性CD95-Fc融合蛋白中IsoAsp含量检测,高温处理可加快样品中IsoAsp生成。

气相色谱法分离牙本质中天冬氨酸对映体方法的研究

本文应用国产手性毛细管柱气相色谱法,以酸性异丙醇、三氟乙酸酐为衍生化试剂,对人牙本质中天冬氨酸对映体进行了分离及鉴定。 本实验条件下,天冬氨酸对映体的分离度可达1.2,其他共存氨基酸不干扰测定。方法的最低检出限为0.2pmol,变异系数为D型,7.2％,L型:6.1％,方法的回收率为D型,104.0％,L型:106.0％。

L-半胱氨酸、L-色氨酸和L-天冬氨酸对浮萍愈伤组织再生影响的探索（英文）

以浮萍科浮萍属的L.minor为材料,研究了不同浓度(0、0.5、1.0、1.5及2.0 mmol/L)的L-半胱氨酸(L-Cys)、L-天冬氨酸(L-Asp)和L-色氨酸(L-Ser)对浮萍愈伤组织再生的影响,探究了外源L-Cys对愈伤内源L-Ser和L-Gly浓度的影响.结果表明,L-Asp对浮萍愈伤组织的生长具有抑制作用,L-Ser对愈伤组织的再生无明显影响,而L-Cys对浮萍愈伤组织的再生具有促进作用,促进作用最明显的浓度为1.5 mmol/L,再生率达88.33%.L-Cys处理浮萍愈伤组织后,内源丝氨酸含量从3.01 nmol/mg(鲜重)上升至5.50 nmol/mg(鲜重),较处理前上升明显.

基于天冬氨酸的固定化金属离子亲和色谱材料用于磷酸化肽选择性富集

采用点击化学的方法将自然界中的天冬氨酸(aspartic acid)键合到硅球上(命名为Click Asp),并将Fe3+配位到Click Asp上,合成固定金属离子亲和色谱(IMAC)材料(Fe3+-Click Asp);采用红外光谱、X射线电子能谱和扫描电镜等表征证明Fe3+-Click Asp成功合成。将此IMAC材料用于蛋白质酶解液和牛奶中的磷酸化肽的富集,实现了磷酸化肽的高选择性富集。本研究为磷酸化蛋白质组学提供了新材料和新方法。

纯化组氨酸标签蛋白金属螯合亲和色谱填料的制备与性能

以琼脂糖(agarose)凝胶的珠状产品SepharoseCl-6B为基质,以环氧氯丙烷为活化剂,将天冬氨酸固定在琼脂糖凝胶微球上,在经与溴乙酸修饰后,最终得到含有羧甲基天冬氨酸结构的琼脂糖凝胶微球.以凝胶微球负载的多羧基为配体分别与Co2+及Ni2+配位分别得到两种金属螯合亲和层析介质.依照上述方法制备了具有不同负载羧基含量的色谱介质.以六聚组氨酸融合蛋白为分离样品,研究了所制备的色谱分离介质的分离纯化性能,并与商品化色谱分离介质Agarose-NTA-Ni进行了比较.结果表明,目标介质蛋白结合容量大,与蛋白结合快、易洗脱、选择性高,金属离子不易脱落.

硅胶基质聚天冬氨酸固定相的合成及对多肽的分离

分别将不同分子量的聚琥珀酰亚胺(PSI)化学键合到氨丙基硅胶表面得到4种键合聚天冬氨酸(YCSiP)的固定相材料(即YCSiP-Ⅰ、-Ⅱ、-Ⅲ和-Ⅳ),采用红外光谱、热重分析、扫描电镜和Zeta电位测定等方法进行表征,研究硅胶孔径、PSI的相对分子质量、流动相pH和离子强度等因素对分离多肽的影响.结果表明,在红外光谱中3 072、1 720和1 030 cm^(-1)等处吸收峰对应于v_(N—H)、v_(C=O)和v_(Si—O—Si)的伸缩振动峰,说明聚琥珀酰亚胺结合到硅胶上;YCSiP分离多肽主要受底物与固定相之间的静电作用影响;由小孔径的硅胶和低相对分子质量的聚琥珀酰亚胺制备得到的固定相YCSi P对多肽表现更好的分离性能;随着流动相的离子强度增大,多肽在固定相上的保留均显著减弱,在离子强度为50 mmol/L的流动相中,6种多肽在固定相上的分离效果最好.该研究丰富了硅胶基质聚天冬氨酸固定相材料在多肽分离中的应用.

聚天冬氨酸的合成与表征

以L-天冬氨酸为原料,热缩合成聚天冬氨酸酐,水解得到聚天冬氨酸。采用凝胶色谱法(GPC)测定了聚天冬氨酸的分子量,并用核磁共振(NMR)对其进行了表征。

甘氨酸对淀粉酶产色链霉菌Cbγ4产ε-聚赖氨酸的影响

为了研究甘氨酸对淀粉酶产色链霉菌Cbγ4产ε-聚赖氨酸的影响,在种子培养阶段添加不同浓度的甘氨酸。结果表明,在种子培养初期添加3 g/L甘氨酸,天冬氨酸激酶活性会明显提高,ε-聚赖氨酸最高可积累0.51g/L,比对照组高27.5%。5L自控式发酵罐发酵ε-聚赖氨酸试验中,种子液中添加甘氨酸组比对照组明显提高了菌体耗糖速度,缩短了达到最高生物量的积累时间,ε-聚赖氨酸产量也提高至12.87g/L,糖酸转化率也比对照组提高了30.6%。因此甘氨酸可作为一种新型营养物质用于ε-聚赖氨酸的生产。

ε-聚赖氨酸高产菌株的诱变选育

ε-聚赖氨酸(ε-PL)是一种L-lysine同聚物,主要由链霉菌科和麦角真菌产生。但是,ε-PL野生菌株的生产能力较低,这一定程度上制约对它的进一步研究和利用。对于包括链霉菌在内的大多数细菌,ε-PL的前体物lysine一般是通过天冬氨酸途径合成的。这条途径中的第一个关键酶Ask活性会受到氨基酸终产物的调节。而且,天冬氨酸还可以反馈抑制上游磷酸烯醇式丙酮酸脱羧酶的活性。为了解除上述反馈调节,提高ε-PL产生菌的产量,我们利用(SG+Gly+L-lysine+AHV)复合抗性,筛选出一种高产菌株L9。最终,我们得到了一株淀粉酶产色链霉菌(Streptomyces diastatochromogenes)L9,其摇瓶产量为0.69g/L,比出发菌株高13%。经代传稳定性研究证明其产酸量和抗性标记均可稳定遗传。

谷氨酸系统相关药物在难治性强迫症治疗中的应用进展

目前,选择性5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRIs)是治疗强迫症的主要药物,但这些药物的疗效有限。经过两种或两种以上SSRIs足量足疗程治疗仍无效果的强迫症属于难治性强迫症,人们正在不断探索治疗难治性强迫症更有效的方法。谷氨酸系统失调与强迫症发病有关,参与强迫症的病理生理过程,且很多谷氨酸系统的调节药物被用于难治性强迫症的治疗,如N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)拮抗剂和NMDAR激动剂等,其中一些药物也显示出显著的效果,这为难治性强迫症提供了新的治疗选择。

谷氨酸转运抑制剂对器官型培养脊髓片的影响

观察谷氨酸转运体抑制剂苏-羟天冬氨酸(Threo-hydroxyaspartate,THA)对器官型培养的脊髓片的影响,探讨谷氨酸在运动神经元损伤中的作用。取出生后8天乳鼠的腰段脊髓组织切片做脊髓器官型培养,在培养液中加入不同浓度THA(50μmol/L、100μmol/L、500μmol/L),用神经元的特异性免疫组化染色剂SMI-32,非磷酸化神经丝标记物,对脊髓腹角α运动神经元进行鉴定,用单克隆抗钙网膜蛋白(calretinin)抗体对背角中间神经元进行记数,测定培养液中乳酸脱氨酶(LDH)的含量,并与对照组比较。结果显示对照组α运动神经元数目恒定,THA可以引起剂量依赖性的培养液中LDH含量增高和α运动神经元数目减少,而脊髓背角的中间神经元损伤相对较轻,其中THA100μmol/L组在体外培养4周后出现类似于肌萎缩侧索硬化(ALS)的病理改变:α运动神经元数目较对照组明显减少,而脊髓背角的中间神经元数目无显著变化。细胞外谷氨酸增高主要对运动神经元造成损伤,脊髓运动神经元较感觉神经元对谷氨酸的兴奋毒作用更加敏感。

氨基酸类及其衍生物类的酶抑制剂

从细菌、动物、植物体中分离得到240多种氨基酸,其中只有20种用于蛋白质合成,另外一些象乌氨酸、瓜氨酸、5羟基色氨酸、二羟基苯丙氨酸和高丝氨酸是代谢的中间产物,生物有自生的保护作用,防止其他生物的侵害,其主要机制是氨基酸及其衍生物产生了对酶的抑制。

植物色氨酸-天冬氨酸重复序列蛋白响应逆境胁迫的调控作用

干旱、盐渍、低温等逆境胁迫会严重影响植物的正常生长发育，导致植物的许多响应基因被诱导表达，其蛋白质产物能够保护植物免受胁迫的伤害。色氨酸一天冬氨酸重复序列蛋白（wD40蛋自）在植物中广泛存在，参与植物体内众多代谢反应的调控，如花的发育、开花、花青素的生物合成、激素响应、渗透胁迫等。WD40蛋白含有40-60个氨基酸的保守的wD重复序列，其c末端为色氨酸．天冬氨酸（Trp-Asp，WD），形成一个p螺旋桨（p—propeller）结构，通过调节多蛋白复合体的组装而影响蛋白质与蛋白质、蛋白质与DNA间的相互作用。本文综述植物WD40蛋白响应逆境胁迫的调控作用。

N-甲基-D-天冬氨酸受体在大鼠术后疲劳综合征的中枢发生机制研究

目的：探讨N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）受体在大鼠术后疲劳综合征（POFS）的中枢发生机制。方法将96只SD大鼠按体质量大小编号，完全随机分为对照组（开腹后仅翻动肠袢、腹腔注射1 ml／kg 0．9％氯化钠溶液1次）、POFS模型组（70％中段小肠切除、腹腔注射1 ml／kg 0．9％氯化钠溶液1次）和NMDA受体拮抗剂组（70％中段小肠切除、腹腔注射1 mg／kg MK801溶液），每组再按术后1、3、5及7 d 分为4小组，每小组8只。每小组大鼠在术后对应时间点进行旷场试验后对海马组织进行取材，实时荧光定量聚合酶链反应检测大鼠海马NMDA受体1及犬尿氨酸氨基转移酶Ⅲ（KATⅢ）的mRNA表达；Western blot检测NMDA受体1的蛋白表达；高效液相-荧光法检测色氨酸（TRP）、犬尿氨酸（KYN）及犬尿喹啉酸（KYNA）的浓度；电镜观察海马神经元超微结构变化。结果术后1 d和3 d，与对照组比较，模型组大鼠运动得分减少（P＜0．05），休息时间、中央格子停留时间及外周／中央格子比均增加（P＜0．05）；NMDA受体1 mRNA及蛋白表达增加（P＜0．05）， KATⅢ mRNA表达减少（P＜0．05）；KYN／TRP及KYN／KYNA比值增加（P＜0．05）；拮抗剂组与模型组比较，术后1 d大鼠中央格子停留时间以及外周／中央格子比均降低（P＜0．05）；术后1 d和3 d NMDA受体1mRNA及蛋白表达降低（均为P＜0．05）。电镜结果显示，模型组海马神经元超微结构受损，拮抗剂组得到相应改善。结论 POFS大鼠海马NMDA受体表达增加，神经元存在一定程度的损伤，NMDA受体拮抗剂能改善POFS的中枢疲劳。

天冬氨酸催化人参皂苷Re转化制备稀有人参皂苷的研究

目的建立一种新的环境友好型的高效制备稀有人参皂苷Rg6、F4、Rk3和Rh4的方法,为制备稀有人参皂苷提供理论依据。方法人参皂苷Re为原料,以天冬氨酸为催化剂,人参皂苷Re与天冬氨酸以10∶1混合,于120℃反应1 h,采用半制备型高效液相色谱分离产物中各稀有人参皂苷组分,通过HPLC和NMR进行定量分析和结构鉴定。结果人参皂苷Re的转化率为100%,稀有人参皂苷Rg6、F4、Rk3和Rh4的得率分别是11.2%、13.1%、20.6%和24.3%,且4种化合物的质量分数均>99%。结论该方法操作简单,成本低廉,对环境无污染,对开发绿色环保型稀有人参皂苷新药及保健食品具有重要的应用价值。