非小细胞肺癌中OGDHL、富含AU元件的RNA结合蛋白1的表达及其与预后的相关性

目的:探讨OGDHL、富含AU元件的RNA结合蛋白1(AUF1)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者中的表达,及其与患者预后的相关性。方法:回顾性分析2018年2月至2019年2月在广安市人民医院确诊并进行手术治疗的96例NSCLC患者的临床资料。取手术切除的NSCLC肿瘤组织及距肿瘤边缘4 cm处的癌旁组织,采用免疫组织化学法检测所有标本组织中OGDHL、AUF1蛋白表达情况。分析OGDHL、AUF1蛋白与NSCLC临床病理特征关系,采用Kaplan-Meier法比较不同OGDHL、AUF1蛋白表达患者的3年总生存(OS)率;采用多因素Cox比例风险模型分析NSCLC患者预后的影响因素。结果:NSCLC患者肿瘤组织OGDHL蛋白高表达率低于癌旁组织[32.3%(31/96)比62.5% (60/96), χ^(2)=45.21, P<0.001],AUF1蛋白高表达率高于癌旁组织[68.8%(66/96)比34.4%(33/96), χ^(2)=42.36, P<0.001]。TNM分期Ⅰ~Ⅱ期患者OGDHL蛋白高表达率高于Ⅲ~Ⅳ期[39.1%(25/64)比18.8%(6/32)],有淋巴结转移患者OGDHL蛋白高表达率低于无淋巴结转移[10.3%(3/29)比41.8%(28/67)](均 P<0.05);Ⅰ~Ⅱ期患者AUF1蛋白高表达率低于Ⅲ~Ⅳ期患者[59.4%(38/64)比87.5%(28/32)],有淋巴结转移患者AUF1蛋白高表达率高于无淋巴结转移患者[86.2%(25/29)比61.2% (41/67)](均 P<0.05)。所有NSCLC患者3年OS率为62.50%。其中OGDHL蛋白高表达组患者术后3年OS率高于低表达组(80.66%比53.33%, P<0.05),AUF1蛋白高表达组患者术后3年OS率低于低表达组(50.00%比76.52%, P<0.05)。不同TNM分期、是否淋巴结转移的NSCLC患者3年OS率差异均有统计学意义(均 P<0.05),且TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移患者3年OS率均分别低于Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移的患者(均 P<0.05)。OGDHL低表达( HR=3.78,95% CI 1.72~8.31)、AUF1高表达( HR=3.67,95% CI 1.73~7.80)均是影响NSCLC患者预后的独立危险因素(均 P<0.001)。 结论:NSCLC组织中OGDHL蛋白表达降低,AUF1蛋白表达升高,且二者表达水平与NSCLC患者预后相关。

miR-5688在三阴性乳腺癌细胞中下调固醇调节元件结合蛋白1的表达而抑制三阴性乳腺癌细胞增殖

目的:探讨miR-5688在患者来源三阴性乳腺癌(PD-TNBC)细胞中通过抑制固醇调节元件结合蛋白1(SREBP-1)的表达从而发挥抗肿瘤活性。方法:查询miRDB数据库,预测潜在作用于SREBP-1的miRNA;qPCR实验检测三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞系、PD-TNBC细胞及患者组织中SREBP-1与miR-5688的表达;Western印迹验证miR-5688下调SREBP-1的表达;构建miRNA-5688的过表达慢病毒颗粒,在上述细胞中过表达miR-5688,以MTT实验、Transwell实验、裸鼠皮下成瘤实验检测miRNA-5688对细胞增殖、转移与侵袭作用、裸鼠成瘤的影响。结果:在三阴性乳腺癌临床标本中,miR-5688与SREBP-1的表达呈负相关趋势,通过在PD-TNBC细胞中验证,miR-5688能够下调SREBP-1的表达;转染miR-5688抑制剂能够阻断miR-5688抑制SREBP-1表达的作用。体外细胞实验结果显示miR-5688能够抑制MDA-MB-231细胞系和PD-TNBC细胞的增殖、转移与侵袭作用,同样转染miR-5688抑制剂能够阻断其抑制作用。体内小鼠成瘤实验结果显示,miR-5688能够抑制PD-TNBC细胞在裸鼠皮下的成瘤作用。结论:miR-5688能够在PD-TNBC细胞中下调SREBP-1的表达,并抑制三阴性乳腺癌细胞增殖作用。

LncRNA FGD5-AS1靶向miR-16-5p/CREB1轴减轻缺氧/复氧诱导大鼠H9c2心肌细胞凋亡的机制研究

目的:探究长链非编码RNA(LncRNA)FGD5反义RNA1(FGD5-AS1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的影响以及对微小RNA-16-5p/cAMP响应元件结合蛋白1(miR-16-5p/CREB1)轴的调节机制。方法:将H9c2细胞分为对照组和H/R组(缺氧6 h,复氧6 h),然后将H/R组细胞分别进行转染,分为oe-NC组、oe-FGD5-AS1组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic-NC组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic组。实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测细胞中FGD5-AS1、miR-16-5p、CREB1的mRNA水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法测定裂解凋亡蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;CCK-8法测定细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶活性实验分别验证miR-16-5p和FGD5-AS1、CREB1的靶向关系。结果:与对照组比较,H/R组细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),miR-16-5p mRNA水平、细胞凋亡率及cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达升高(P<0.05);与H/R组和oe-NC组比较,转染过表达FGD5-AS1基因的H9c2细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达增高,凋亡率及miR-16-5p、cleaved Caspase-3、Bax水平下降(P<0.05)。双荧光素酶活性实验验证了FGD5-AS1、CREB1均与miR-16-5p有结合位点。结论:过表达FGD5-AS1可能通过靶向下调miR-16-5p表达,上调CREB1表达,抑制H/R诱导的H9c2心肌细胞凋亡。

远端上游元件结合蛋白1调节肝癌细胞中长链非编码RNA表达的实验研究

目的筛选肝癌细胞中受远端上游元件结合蛋白1(FUBP1)调节的长链非编码RNA(lncRNAs)。方法通过慢病毒介导不同肝癌细胞株中(MHCC97H、MHCC97L和Huh7)过表达FUBP1,利用定量PCR的方法鉴定过表达效率。利用芯片的方法筛选过表达FUBP1后肝癌细胞株中差异表达的lncRNAs,并利用定量PCR验证结果。利用生物信息学的方法确定差异表达的lncRNAs与mRNAs的共表达网络。结果以对照组中FUBP1的表达量为1,慢病毒感染的MHCC97H、MHCC97L和Huh7肝癌细胞株中FUBP1的mRNA水平分别为3.28±0.15、2.75±0.26和4.25±0.35,明显高于对照组(均P<0.01)。芯片结果显示,共有12个lncRNA在3种细胞株中具有一致的表达变化,包括3个上调和9个下调。定量PCR验证结果与芯片结果一致,其中lnc-ARF6-3下调最明显,lnc-BCAS2-1上调最明显。lnc-BCAS2-1、lnc-USP9X-3、lncLYZ-2和lnc-C14orf135-3与FUBP1具有共表达网络。结论 FUBP1诱导肝癌细胞中lncRNAs的表达紊乱,FUBP1-lncRNAs的表达网络可能与肝癌的发展和转移密切相关。

RNPS1通过Notch信号通路参与调控胰腺癌细胞的生存及进展

目的:探讨富含丝氨酸结构域1的RNA结合蛋白(RNA-binding protein with serine-rich domain 1,RNPS1)在胰腺癌进展中的作用及可能分子机制。方法:免疫组织化学与免疫荧光检测RNPS1与Notch3在胰腺癌组织及癌旁组织的表达;RTq PCR、免疫荧光检测RNPS1与Notch3在胰腺癌细胞中的表达情况;Hoechst与CCK-8实验检测胰腺癌细胞凋亡与增殖;划痕实验与transwell实验检测胰腺癌细胞迁移与侵袭能力;Western blot实验检测胰腺癌细胞中N-Cadherin和E-Cadherin的表达;Western blot与RT-q PCR实验检测胰腺癌细胞中Notch3与HEY1的表达。结果:与癌旁组织与正常细胞系相比较,RNPS1与Notch3在胰腺癌组织中及胰腺癌细胞的表达均增高(F=121.612、34.649,均P<0.05);与对照组相比较,敲低RNPS1抑制生物标志物N-Cadherin的表达(t=39.922,P<0.05),促进E-Cadherin的表达(t=8.281,P<0.05),敲低RNPS1可减弱癌细胞的生存、迁移侵袭的能力(t=2.017、4.874、19.747,均P<0.05,),促进了细胞凋亡(t=33.673,P<0.05);敲低RNPS1降低了癌细胞中Notch3与HEY1的表达(t=17.546、6.258,均P<0.05)。结论:RNPS1的表达与胰腺癌细胞生存、恶性表型有关,RNPS1可能通过调控Notch3/HEY1信号通路促进胰腺癌细胞的生存及肿瘤进展。

癌组织中GPC-3、AUF1表达水平对食管癌患者病理分期及预后评估的意义

目的探讨癌组织中磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC-3)、AU碱基富集元件RNA结合因子1(AUF1)表达水平对食管癌患者病理分期及预后评估的意义。方法选取2017年11月—2019年11月收治的118例食管癌作为研究对象,收集癌组织(食管癌组)及对应癌旁组织(癌旁组)。采用免疫组化法检测癌组织及癌旁组织中GPC-3、AUF1表达水平,分析GPC-3、AUF1表达与食管癌患者临床病理特征的关系;采用多因素Cox回归分析探讨影响食管癌患者预后的危险因素。结果食管癌组GPC-3、AUF1阳性表达率(76.27%、74.58%)均高于癌旁组(38.98%、41.53%)(P<0.01)。低分化、TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移食管癌患者GPC-3、AUF1阳性表达率分别高于中/高分化、TNM分期为Ⅰ~Ⅱ期、无淋巴结转移患者(P<0.05,P<0.01)。GPC-3阳性表达食管癌患者的3年生存率为63.33%,低于GPC-3阴性表达患者89.29%(P<0.01);AUF1阳性表达食管癌患者的3年生存率为62.50%,低于AUF1阴性表达患者90.00%(P<0.01)。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、有淋巴结转移、GPC-3阳性表达、AUF1阳性表达是影响食管癌患者预后的独立危险因素(P<0.01)。结论GPC-3、AUF1在食管癌组织中均呈高表达,且与临床病理特征及预后有关,可作为食管癌预后评估的生物学标志物。

长非编码RNA CASC15影响肝细胞SREBP1a表达及定位

长非编码RNA CASC15(long non-coding RNA CASC15,CASC15)被认为是一种与肿瘤相关的lncRNA,参与调控多种肿瘤的侵袭、增殖和迁移等生物学过程。然而CASC15在细胞内脂质代谢中的作用仍不明确。胆固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)是细胞内调控脂质代谢的关键转录因子,其成员SREBP1a主要调控脂肪合成中关键酶基因的表达。本文通过分子生物学实验及细胞功能学实验,研究CASC15对人肝细胞中脂质调控因子SREBP1a表达及定位的影响。研究结果显示,在肝细胞中,过表达CASC15(P<0.001)后细胞内的SREBP1a的mRNA和总蛋白质水平不变,前体蛋白质水平增加(P<0.05)且定位发生改变,即入核增加;SREBP1a调控脂肪酸合成相关产物游离脂肪酸(P<0.001)和甘油三酯(P<0.001)呈下调趋势。本文揭示了CASC15调控肝细胞脂代谢的一种可能机制,希望为脂代谢紊乱相关疾病的治疗和研究提供新思路。

多囊卵巢综合征患者血清、卵泡液固醇调节元件结合蛋白1c、富含亮氨酸的α-2-糖蛋白1水平的变化及与胰岛素抵抗的相关性研究

目的探究非卵巢病因不孕患者、多囊卵巢综合征(PCOS)伴或不伴胰岛素抵抗(IR)患者血清、卵泡液中固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP1c)、富含亮氨酸的α-2-糖蛋白1(LRG1)水平浓度及与IR的相关性。方法回顾性收集PCOS患者49例及同期非卵巢病因不孕患者66例,采用稳态模型评估的胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)评估IR程度,分为对照组(非PCOS及IR组,n=36)、IR组(n=30)、单纯PCOS组(PCOS未合并IR组,n=28)及PCOS-IR组(PCOS合并IR组,n=21)。比较各组血清、卵泡液LRG1、SREBP1c水平差异并分析其与相关激素、糖脂代谢指标的相关性。结果与对照组相比,IR组、单纯PCOS组及PCOS-IR组的血清、卵泡液LRG1、SREBP1c水平均明显升高;PCOS-IR组血清、卵泡液LRG1、SREBP1c水平升高更明显(P<0.05)。相关性分析显示,血清、卵泡液LRG1与体重指数、空腹血糖、空腹胰岛素、三酰甘油、HOMA-IR呈正相关(P<0.05);血清、卵泡液SREBP1c与体重指数、LH、总睾酮、硫酸脱氢表雄酮、游离雄激素指数、空腹血糖、空腹胰岛素、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、HOMA-IR呈正相关(P<0.05)。二元logistic回归分析显示,血清SREBP1c是PCOS的危险因素(P<0.05)。结论PCOS患者尤其是合并IR的PCOS患者的血清、卵泡液LRG1、SREBP1c水平均升高。血清、卵泡液LRG1、SREBP1c水平升高可能与PCOS患者IR及糖脂代谢异常相关。血清LRG1、SREBP1c水平可能作为预测PCOS患者IR,早期诊断及干预PCOS的新指标。

金芪降糖片对胰岛素抵抗大鼠肝脏SREBP-1c mRNA表达的影响

目的:探讨金芪降糖片干预胰岛素抵抗(IR)的疗效及分子机制。方法:将Wistar大鼠27只随机分为普通喂养(NC)组(9只)和模型(MG)组(18只),普通喂养组予普通饲料喂养,模型组予高脂饲料喂养建立IR模型。8周后将成模大鼠随机分成高脂饮食(HF)组和高脂饮食+金芪降糖(HF+JQ)组,各9只。HF+JQ组予金芪降糖(2.1g·kg-·1d-1)灌胃,NC组和HF组均予生理盐水灌胃,6周后取静脉血测定血糖、胰岛素、三酰甘油(TG)、游离脂肪酸(FFA)、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、瘦素等指标,计算胰岛素敏感指数(ISI)。取肝脏组织采用RT-PCR法检测SREBP-1c mRNA表达。结果:与NC组相比,HF组大鼠ISI降低,肝脏SREBP-1c mRNA表达增加(均P<0.01)。与HF组相比,HF+JQ组大鼠TG、FFA及血清瘦素、TNF-α均明显降低,ISI升高,肝脏SREBP-1c mRNA表达降低(均P<0.01)。结论:金芪降糖能抑制IR大鼠肝脏SREBP-1c的过度表达,有效改善IR。

子宫内膜癌SREBP1表达及SREBP1 shRNA对内膜癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨胆固醇调节元件结合蛋白质1(SREBP1)在子宫内膜癌中的表达情况及SREBP1 shRNA对子宫内膜癌细胞AN3-CA生物学行为的影响。方法:采用免疫组织化学染色、实时定量逆转录聚合酶链反应、蛋白免疫印迹、Transwell体外细胞侵袭试验等方法分析SREBP1在子宫内膜组织中的表达及其对细胞生物学行为的影响。结果:SREBP1在正常子宫内膜组织中低表达,在子宫内膜癌组织中高表达,且免疫组织化学染色H-Score评分在子宫内膜癌高分化组和中、低分化组之间具有统计学差异(P<0.001);SREBP1 shRNA可减慢子宫内膜癌细胞AN3-CA的增殖速度并降低AN3-CA细胞的侵袭能力,均具有统计学差异(P<0.001)。结论:SREBP1的表达与活化参与子宫内膜癌的进展;SREBP1 shRNA可降低子宫内膜癌细胞的增殖和侵袭能力,表明内源性SREBP1参与子宫内膜癌的进展与转移,为子宫内膜癌潜在的分子靶向治疗提供了一定的理论基础。

AUF1在病毒感染及相关炎症反应中的调控作用

富含AU元件的RNA结合蛋白1(AU-rich element binding factor 1,AUF1)具有剪接加工前体mRNA、转运和降解成熟mRNA的功能,同时调节带有富含AU元件(AU-rich element,ARE)的mRNA翻新。AUF1通过介导炎性细胞因子及其反应从而控制炎症进程。研究表明,AUF1与肠道病毒71型的内部核糖体进入位点(internal ribosome entry site,IRES)结合并与其交互负性调节病毒翻译与复制,它还可被募集到柯萨奇病毒B3型和肠道病毒71型诱导的应激颗粒中。

靶向抑制人SREBP-1基因对高糖刺激下人肾小管上皮细胞脂滴形成的影响

目的构建人SREBP-1基因的shRNA载体并转染人肾小管上皮细胞(HKC)明确是否沉默SREBP-1基因的表达可减轻高糖环境引起的细胞内脂滴形成。方法设计两对针对人SREBP-1基因的干扰靶序列及短链寡核苷酸和线性化的pGenesil-1质粒进行连接,筛选鉴定并最终命名为pGenesil-1-SREBP1-1和pGenesil-1-SREBP1-2。体外培养人肾小管上皮细胞并随机分组,采用阳离子脂质体法转染细胞后给予高糖刺激48h,在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,半定量RT-PCR和Westernblot分析目标基因表达丰度的变化,并采用油红O染色检测细胞内脂滴。结果经酶切及测序鉴定证明构建的重组载体pGenesil-1-SREBP1-1、pGenesil-1-SREBP1-2序列正确;转染HKC细胞后均可表达绿色荧光;RT-PCR和Westernblot显示pGenesil-1-SREBP1-1、pGenesil-1-SREBP1-2能够有效抑制高糖环境下HKC细胞SREBP-1的表达,与阴性质粒对照组相比,差异有统计学意义。进一步研究发现在HKC细胞内,SREBP-1基因表达沉默明显抑制了脂肪酸合成酶(FAS)的转录,细胞内脂滴明显减少。结论有效沉默高糖刺激下HKC细胞SREBP-1的基因表达可通过抑制FAS转录而减少细胞内脂滴形成。

猪SREBP-1c基因表达谱及其对肌内脂肪细胞脂质沉积的影响

为探究固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)基因对猪脂质沉积的作用机制,采集淮南猪不同育肥时期背最长肌和皮下脂肪组织,利用实时荧光定量(RT-qPCR)技术分析其表达变化趋势;在猪原代肌内脂肪细胞中进行SREBP-1c干扰试验,采用RT-qPCR检测SREBP-1c互作基因及脂质沉积相关基因的表达量,并通过油红O染色检测脂质沉积变化。结果显示,随着育肥进展,SREBP-1c在猪背最长肌和皮下脂肪组织的表达量持续极显著(P<0.01)和显著(P<0.05)上调,提示SREBP-1c可能对猪背最长肌脂质沉积的调控作用更强。在猪原代肌内脂肪细胞中干扰SREBP-1c,其互作基因PPARγ、C/EBPα及脂质沉积相关基因FAS、FABP4、CIDEC的表达量均极显著(P<0.01)下调。油红O染色结果显示,SREBP-1c表达量降低,肌内脂肪细胞脂质沉积明显减少。以上结果表明,SREBP-1c可通过调控脂质生成相关基因表达,影响肌内脂肪细胞的脂质沉积。

微小RNA-206对apoE^(-/-)动脉粥样硬化小鼠肝脏X受体α表达的影响

目的探讨微小RNA(mi R)-206对apo E-/-动脉粥样硬化小鼠肝脏X受体α(LXRα)表达的影响。方法取4周龄apo E-/-小鼠30只,喂以高脂饮食,14周后随机分成对照组、mi R-206 mimic组、mi R-206 inhibitor组,每组10只。尾静脉采血检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C),油红O染色观察主动脉粥样硬化程度,荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)测定LXRαm RNA表达量,蛋白印迹法测定LXRα蛋白表达量。结果 mi R-206 mimic组HDL-C较对照组升高;mi R-206 inhibitor组与对照组、mi R-206 mimic组相比,TC、LDL均显著升高,HDL明显下降。各组TG无明显不同。苏木精-伊红(HE)染色示对照组主动脉粥样硬化程度较轻,mi R-206 inhibitor组主动脉粥样硬化程度最重,mi R-206 mimic组主动脉粥样硬化病变极其微弱。mi R-206 mimic组肝LXRα表达增多,而mi R-206 inhibitor组表达减少。结论mi R-206可能与LXRα构成反馈环,共同调节胆固醇逆转运。

结肠癌组织SATB2、SIRT1、HOTAIR表达及与预后的相关性

目的研究结肠癌组织特定富含AT碱基DNA序列结合蛋白2(SATB2)、沉默信息调节因子1(SIRT1)和同源盒基因转录反义RNA(HOTAIR)表达水平及与预后的关系。方法选取2014年1月—2016年6月我院102例结肠癌,根据患者预后分为死亡组和存活组,检测2组肿瘤组织SATB2、SIRT1及HOTAIR表达水平,并分析其与患者预后的关系。结果本组中位随访时间为72个月,102例随访期间死亡67例(65.69%),中位总体生存期(OS)为63个月。死亡组肿瘤最大径和AJCC分期Ⅲ+Ⅳ期患者占比均大于存活组,肿瘤分化程度低于存活组,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。死亡组SATB2阳性率低于存活组,SIRT1阳性率和HOTAIR mRNA相对表达量高于存活组,差异有统计学意义(P<0.01)。多因素Cox回归分析显示,肿瘤低分化、AJCC分期Ⅲ+Ⅳ期、SIRT1阳性和HOTAIR mRNA为结肠癌患者死亡的危险因素,SATB2阳性为结肠癌患者死亡的保护因素(P<0.05,P<0.01)。SATB2阳性患者中位OS(69个月)长于SATB2阴性患者(54个月),SIRT1阳性患者中位OS(57个月)短于SIRT1阴性患者(78个月),HOTAIR mRNA≥47.85患者中位OS(57个月)短于HOTAIR mRNA<47.85患者(78个月),差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论结肠癌组织SATB2、SIRT1和HOTAIR表达均为影响患者预后的重要因素。

富含鸟嘌呤序列的RNA结合因子(GRSF1)研究进展

富含鸟嘌呤序列的RNA结合因子1(GRSF1)是RNA结合蛋白,属于异质核核糖核酸蛋白(hnRNP)F/H家族,该蛋白家族成员均含有两个以上类RNA识别基序(qRRMs)和至少一个辅助结构域。qRRM(类RNA识别基序)与RRM(RNA识别基序)相似但作用方式不同。在发育、衰老、肿瘤等领域,GRSF1发挥着重要作用。随着生物信息学和测序技术的发展,GRSF1的功能和作用机制被逐渐揭示,但并未得到充分解析。该文对GRSF1结构特点、表达调控和作用机制进行了概述,并总结了其在发育、细胞衰老、肿瘤发生等领域的研究进展,为深入探究GRSF1的作用机制及挖掘其生物功能奠定基础。

KH型剪切调控蛋白:星形胶质细胞炎性细胞因子生成检测点

中枢神经系统(CNS)慢性炎性反应是许多神经退行性疾病和自身免疫性疾病的主要病理特点之一。作为免疫活性细胞,星形胶质细胞(Ast)在CNS炎性反应过程中发挥了重要作用。它可表达许多细胞因子,如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)等,这些细胞因子可直接或通过募集免疫细胞等途径间接促进炎性反应。检测点的存在可保证这些细胞因子的生成受到严密控制。细胞因子mRNA3’-非翻译区的腺苷酸/尿苷酸富含元件(ARE)由于可调节mRNA稳定性和翻译效率而扮演着主要检测点的角色。KH型剪切调控蛋白(KSRP)是一种RNA结合蛋白,可通过与ARE结合降低mRNA的稳定性。本研究检测了KSRP对Ast细胞因子表达和旁分泌表型的影响。笔者发现了一个包括TNF-α和L-1β在内的炎性介质网络。与同窝出生的对照小鼠相比,KSRP-/-小鼠Ast上述炎性介质的表达在RNA水平增高了2～4倍。而这种KSRP-/-小鼠Ast激活后产生的TNF-α和IL-1β甚至能达到对照组的15倍以上。离体情况下,KSRP-/-Ast条件性培养液有趋化作用且能诱导神经元死亡。令人惊讶的是,笔者发现仅通过特定途径激活Ast后才能观察到部分mRNA半衰期延长。荧光素酶报告系统研究显示KSRP可在转录水平和转录后水平调节细胞因子基因的表达。本研究提示KSRP在促炎介质的调控方面发挥重要作用,因此在CNS炎性和自身免疫性疾病中有广泛意义。

siRNA特异性抑制犊牛原代肝细胞SREBP-1c基因的表达

固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)是脂肪合成基因的重要转录调节因子,又称脂肪细胞决定和分化因子1。SREBP-1c主要在动物肝脏和脂肪细胞中表达,是脂肪代谢中重要的核转录因子,它可以通过调节脂肪代谢相关酶基因的表达来调控动物体内的脂肪合成。本试验设计合成了SREBP-1c的siRNA,通过脂质体转染将siRNA转染进犊牛原代肝细胞,用实时荧光相对定量PCR检测siRNA对SREBP-1c基因表达量的影响。结果显示:siRNA通过脂质体成功转入犊牛原代肝细胞;与对照组相比,一组转染细胞在mRNA水平检测到较低的SREBP-1c基因表达量。这表明siRNA可以稳定地在犊牛原代肝细胞中表达,并且对靶基因呈现出抑制作用。该研究为在基因水平防治奶牛肝脂沉积提供了基础。