优化富浆法手工血小板制备技术提高血小板回收率方法的探讨

目的针对本地区无偿献血者血小板含量普遍偏低、浓缩血小板含量质量抽检不达标,优化手工血小板制备技术,主要提高血小板回收率,为临床提供高质量浓缩血小板。方法对来源于固定献血屋采集的400 m L全血120袋,随机分成2组,每组60袋,对照组采用原参数(离心时间、离心力)制备血小板;优化组采用自调参数(离心时间、离心力)制备血小板。对照组使用的参数来自上海血液中心和离心机使用说明书,优化组在对照组的基础上延长离心时间同时改变离心力,尤其是在手工分离血小板时改变分离管的半径,达到改变血小板分离流速。结果优化组血小板回收率为88%、对照组血小板回收率57%(t=2.46,P<0.05),同时优化组红细胞混入量低于对照组17%(t=2.26,P<0.05)。结论通过优化富浆法制备血小板的离心时间、离心力以及改变分离管的半径等方法,能做到显著提高血小板的回收率,同时能减少红细胞混入量,这种技术可以在其他血站推广使用。

全血及不同方式制备富血小板血浆对髓核细胞的干预效应

背景:目前椎间盘退变的富血小板血浆修复疗法受到越来越多的关注,临床应用中椎间盘修复的富血小板血浆常用的制备方法包括手工制备一次离心和套装制备二次离心法,不同制备方法的优劣证据不足。目的:通过手工制备、套装制备富血小板血浆以及全血干预猪的原代髓核细胞,对比其效应差异,探讨更适合椎间盘退变修复的富血小板血浆制备方式。方法:提取分离猪的静脉血,按照手工制备一次离心法及OSP套装制备二次离心法分别制备富血小板血浆,同时留取全血对比,并设立空白对照组PBS。检测制备富血小板血浆的血小板浓度、白细胞浓度,计算富集倍数。富血小板血浆激活后获得激活物并利用ELISA法检测其中转化生长因子β1、血小板源性生长因子BB、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β浓度。培养猪的髓核细胞至P3代,利用制备的富血小板血浆以及全血进行干预,CCK-8法检测富血小板血浆对髓核细胞的促增殖作用,Western-blot法检测富血小板血浆对髓核细胞Ⅱ型胶原、聚蛋白聚糖的促合成代谢作用。结果与结论:①OSP组的富血小板血浆在制备耗时、血小板浓度、白细胞浓度方面均显著高于手工组,OSP组与手工组血小板富集倍数分别为5.6倍、3.0倍,白细胞富集倍数分别为2.21倍、1.36倍;②转化生长因子β1浓度、血小板源性生长因子BB浓度、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β水平OSP组均高于手工组,差异有显著性意义(P<0.05);③CCK-8检测细胞增殖情况中,OSP组的A450 nm值高于其余各组,差异有显著性意义(P<0.0001);手工组的A450 nm值与全血组和对照组相比,差异无显著性意义(P=0.1927);④Western-blot检测Ⅱ型胶原合成情况,OSP组的相对表达量显著高于其他组(P<0.0001);聚蛋白聚糖的合成情况,手工组的相对表达量低于其余各组(P=0.0405);⑤结果说明,相对于手工制备方式,以OSP为代表的套装制备法制备耗时更长,所得富血小板血浆的白细胞浓度显著高于手工组,并且促炎因子浓度更高;但同时套装制备法能够获得更高浓度的血小板和生长因子,并且有更好的促细胞增殖效果和促细胞外基质合成效果。为取得更好的套装制备富血小板血浆疗效,应在套装制备操作中加强对白细胞的分离。

白膜回浆法和富血小板血浆法制备浓缩血小板的比较

输注血小板对白血病、DIC等疾病引起的出血有肯定的治疗作用。血小板浓缩液(PC)中血小板的数量和质量对于临床输注效果十分重要。传统上,由全血制备用于临床输注血小板的方法为富血小板血浆法(PRP-PC法);近年来欧洲以及国内一些单位采用了白膜回浆法(BC-PC法)。本文对这两种方法进行比较。

新白膜法与富浆法制备浓缩血小板的质量比较

目的分析新白膜法与富浆法制备浓缩血小板的质量差异。方法将采集的40袋400ml全血随机分为两组:新白膜法制备组和富浆法制备组,对分离出的浓缩血小板进行红细胞混入量、p H值、血小板计数检测比较。结果新白膜法制备组血小板计数显著高于富浆法制备组,二者存在统计学显著性差异(P<0.05),两种制备方法的红细胞混入量及p H值无显著性差异(P>0.05)。结论新白膜法分离出的浓缩血小板质量优于富浆法分离出的浓缩血小板。

富浆法制备浓缩血小板影响因素分析

目的:探讨手工制备浓缩血小板的影响因素,确保为临床提供高质量的血小板。方法:随机选择献血者新鲜全血,规格分别为200 ml和400 ml,要求在采血后6 h,无乳糜、无凝块、无溶血等;离心条件分别为2 000 r/min、时间7 min、温度22℃、降速7 r/min,和1 630 r/min、时间7 min、温度22℃、降速7 r/min;分离方法为分浆夹式和悬挂式,检测上文不同规格全血、不同离心条件及不同分离方法对血小板回收数量的影响。结果:利用400 ml全血制备的浓缩血小板,平均每袋计数优于200 ml全血;离心条件为速度2 000 r/min、时间7 min、温度22℃、降速7 r/min时所获得的血小板数量相对较高;分浆夹式分离获得的血小板数量显著高于悬挂式分离法(P<0.05),且分浆夹式分离获得血小板混入的红细胞、白细胞数量明显低于悬挂式分离法。结论:不同规格全血、不同离心条件及不同分离方法对血小板回收均有影响。

人富血小板血浆试管法人工制备及保存的研究进展

富血小板血浆(Platelet-rich Plasma,PRP)作为一种含高浓度血小板的浓缩物由来已久,其在促进细胞增殖、加快愈合等方面具有重要作用,近年来已在临床众多领域广泛应用。同时,PRP也作为一种面部年轻化的治疗手段,开始越来越多的应用到医疗美容领域。目前国内常用的PRP制备方法为试管手工法。但是在此法制备过程中多种因素影响其最终的质量和产量。同时,PRP在临床中多即采即用,目前缺少统一的储存标准,而组织修复通常需长期多次应用PRP。因此,本文就近年来PRP的试管手工制备法及保存进行综述,期望为其规范化制备及保存提供参考。

自体单采富血小板血浆治疗雄激素性脱发的临床研究

目的 分析单采富血小板血浆(Platelet-rich plasma,PRP)治疗雄激素性脱发的疗效。方法 选取收治的雄激素性脱发(Androgenic alopecia,AGA)患者40例,随机分为对照组和观察组各20例。观察组采用单采法制备的PRP治疗,对照组采用手工法制备的PRP治疗。比较两组制备的PRP血小板计数及治疗效果和不良反应发生情况。结果 观察组PRP血小板计数显著高于对照组(P<0.05);治疗后,两组毛发密度均高于治疗前,且观察组显著高于对照组(P<0.05);观察组总有效率显著高于对照组(P<0.05);两组治疗过程中未见严重不良反应。结论 单采法制备的PRP治疗雄激素性脱发,患者毛发密度增加明显,治疗有效率高,值得临床进一步探究。

用白膜回浆法制备浓缩血小板

目前制备浓缩血小板大多采用富含血小板血浆法(简称PRP)。这种工艺制备的浓缩血小板中含有较多的红细胞和大量的白细胞,制备后的浓缩血小板要经过再悬浮处理,得率也不稳定。国内有人作过这方面研究,发现全血离心后的白膜中含有90%以上的血小板,于是便以白膜作为浓缩血小板。以上两种方法制备的浓缩血小板在输注前都必须进行交叉配血试验。这不仅使输注过程繁琐,更为不利的是,大量白细胞的混入更易引起病人发生输血反应。

手工法和单采法浓缩血小板的制备及质控结果分析

随着输血技术的不断发展,成分输血比例越来越大,特别是浓缩血小板,用量在不断上升.由于浓缩血小板目前主要用富含血小板血浆法(以下简称手工法)和血细胞分离机单采血小板(以下简称单采法)两种方法制备,且价格较贵,所以其质量问题,一直受到人们的关注.本文着重把近期我站用上述两种方法制备的浓缩血小板进行了质控分析[1,2].

不同离心条件、血液规格对手工制备浓缩血小板的影响分析

目的探讨不同离心条件、血液规格对手工制备浓缩血小板的影响。方法选取2018年2月~2019年2月广州血液中心中符合条件的献血者的浓缩血小板,选择条件为采集顺畅且献血前3d献血者未曾应用阿司匹林类药品。按照不同离心条件将采集血液(两种规格)分为对照组(悬挂法分离,2106例)与观察组(分浆夹分离,2106例),并根据不同采集血液的规格于同一离心条件下将观察组与对照组分为两组(A组400mL及B组200mL),观察制备手工浓缩血小板后比较其红细胞混入量、白细胞混入量、血小板计数指标。结果制备结束,观察组红细胞混入量(0.69±0.58)×10^8/U、白细胞混入量(0.72±0.54)×10^8/U指标均低于对照组(1.87±0.95)×10^8/U、(1.03±0.79)×10^8/U且差异有统计学意义(t=248.359、14.762,P<0.05);观察组血小板计数指标(6.58±0.57)×10^10/U高于对照组(6.01±0.28)×10^10/U且差异有统计学意义(t=40.468,P<0.05);A组红细胞混入量(0.77±0.35)×10^8/U低于B组(1.79±0.76)×10^8/U且差异有统计学意义(t=55.726,P<0.05);A组白细胞混入量(1.09±0.54)×10^8/U、血小板计数(6.61±0.57)×10^10/U均高于B组(0.66±1.03)×10^8/U、(5.98±0.73)×10^10/U且差异有统计学意义(t=16.887、30.955,P<0.05)。结论手工制备浓缩血小板过程中,血液规格与离心条件的不同均会对其血小板收集造成影响,其中采用分浆夹分离与400mL全血效果最佳。

对比三种制备方法对血小板活化状态的影响

目的分析不同制备方法对血小板活化状态的影响。方法选择2010年12月符合无偿献血标准的献血者的血液45份,根据制备血小板方法的不同分为P组、B组、T组,三组分别采用富血小板血浆法、白膜回浆法、血细胞分离机单采法,对比三组血小板表面CD62P阳性表达率和血浆可溶性CD62P(sCD62P)的表达水平。结果 T组的CD62P阳性表达率和sCD62P表达水平明显低于B组和P组,P组的CD62P阳性表达率和sCD62P表达水平明显高于T组和B组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论血细胞分离机单采法制备的血小板活化状态最低,富血小板血浆法制备的血小板活化状态最高。

手工分离浓缩血小板的全过程质量控制

目的探讨如何对手工分离浓缩血小板实施全程质控,以保证产品质量。方法通过人员上岗资格确认、操作方法确认、材料的控制、过程的控制,以达到全程质控的目的。结果通过随机抽检手工分离浓缩血小板产品,其质量符合《全血及成分血质量要求》(GB18469-2001)。结论只要保证全程质量控制,就能够保证手工分离浓缩血小板产品的质量[1]。