刚毛柽柳富含甘氨酸RNA结合蛋白ThGRP1基因克隆与表达分析

在有机体的生长和发育过程中,基因表达在转录、转录后和翻译水平都受到严格地调控。转录调控是基因表达调控的第一步,曾被认为是基因表达的主要调控机制,但是随着对转录后调控机制越来越多的了解，发现转录后调控在基因表达调控中同样起着重要作用。转录后的调控决定着基因表达最终产物的种类和表达量。转录后水平的基因表达调控主要是通过RNA结合蛋白（RBPs）直接完成，或通过RBPs控制其它转录因子间接完成的。

大豆天冬氨酸蛋白酶基因启动子的克隆及其表达活性分析

【目的】克隆大豆天冬氨酸蛋白酶基因(soyAP1)启动子,并对其表达方式及活性进行分析。【方法】利用TAIL-PCR方法从大豆基因组DNA中克隆soyAP1基因启动子片段。利用启动子在线预测工具分析soyAP1基因启动子片段的启动子元件,并用克隆得到的SAP片段替换pCAMBIA1301中的CaMV35S启动子,构建表达载体pCAM-SAP。通过农杆菌介导法,使其在大豆各组织中进行瞬时表达,用GUS组织化学染色法分析SAP在各组织中的表达活性。【结果】克隆获得了大豆soyAP1基因的启动子片段,长1 650bp,并将之命名为SAP,其转录起始位点可能是553bp处的A;PLACE分析表明,SAP序列中含有多种典型的种子特异性表达元件;GUS组织化学染色显示,SAP驱动的GUS基因在大豆根、茎、叶中基本不表达,但在种子中有较高的表达活性,且表达强度与CaMV35S启动子相近。【结论】大豆SAP启动子可能具有种子特异表达特性。

α-突触核蛋白对酪氨酸羟化酶基因启动子的影响作用研究

目的：探讨α-突触核蛋白对多巴胺代谢的调节机制。方法：以人基因组DNA为模板，PCR法扩增酪氨酸羟化酶（Tyrosine Hydroxylase，TH）基因区部分DNA片段（＋25～-495bp），将其插入质粒pGL3-Basic，构建荧光素酶报告基因重组质粒pGIm—THprom，转染多巴胺能神经元细胞系MES23．5和MES23．5／hα-Syn^＋。结果：双荧光素酶活性分析表明，pGL3-basic、pGIm—THprom和pGL3-control在MES23．5细胞中表达的荧光素酶活性分别为5．60±0．67，26．80±4．11和32．90±4．75，而pGL3-THprom在MES23．5和MES23．5／hα-Syn＋中表达的荧光素酶活性分别为26．80±4．11和14．40±0．61。

植物富含甘氨酸蛋白的研究进展

植物富含甘氨酸蛋白(Glycine-rich proteins,GRPs)是由富含甘氨酸的高度重复序列组成的蛋白质。文章综述了近年来国内外对植物富含甘氨酸蛋白及其基因的研究进展,系统地介绍了GRPs的结构特点、GRP基因表达特性及GRP基因功能,旨在为今后的进一步研究提供参考。

喜盐芽孢杆菌D8基因文库的构建及甘氨酸甜菜碱转运蛋白betH基因的筛选

喜盐芽孢杆菌(Halobacillus)D8是一株产生芽孢的革兰氏阳性中度嗜盐菌,能够耐受2 5 %NaCl。以其总DNASau3AI部分酶切的片段为供体、pUC18为载体,构建了该菌株的基因文库,共获得约90 0 0个重组质粒。通过菌落原位杂交、菌落PCR检测及DNA序列测定,从该文库中筛选到含有完整的甘氨酸甜菜碱次级转运系统基因的重组质粒,将此基因命名为betH基因。序列分析发现,betH基因的大小为15 15bp ,编码由5 0 5个氨基酸组成的BetH蛋白,分子量为5 6 1kD。经蛋白疏水性分析,推测为含有12个跨膜区的跨膜蛋白,与Oceanobacillusiheyensis甘氨酸甜菜碱转运蛋白、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)OpuD、楚氏喜盐芽孢杆菌(Halobacillustrueperi)BetH、单核细胞增生利斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)BetL、嗜盐海球菌(Marinococcushalophilus)BetM和耐盐芽孢杆菌(Bacillushalodurans)甘氨酸甜菜碱转运蛋白的氨基酸同源性分别为6 4 %、5 1%、4 9%、4 8%、4 3%和4 4 %。

三个编码富含甘氨酸异构体的基因在棉花不同组织的差异表达

从棉花cDNA文库中分离了3个编码富含甘氨酸蛋白(glycine-rich proteins,GRPs)的基因,分别命名为GhGRP1、GhGRP2、GhGRP3.推断的编码蛋白质的氨基酸序列都富含甘氨酸,甘氨酸含量超过40%.而且GhGRP1和GhGRP2蛋白质序列同源性高达99%,仅在C末端有1个氨基酸残基(Arg/Pro)的差别.这3个蛋白在富含甘氨酸区相互显示较高的同源性,GhGRP1与GhGRP2达到100%,而GhGRP2与GhGRP3达到45·1%,但它们与基因数据库中其它蛋白质的同源性很低.根据结构域的组织特点,将GhGRP1和GhGRP2归为C端富含半胱氨酸结构域(C-cysteine-rich)类GRP,将GhGRP3归为N端有信号肽的GRP.GhGRP1和GhGRP2都含有12个GGX(此处X代表P/W/F)重复,GhGRP3含有22个GGX(此处X代表A/F/V/L/T/P)重复.此外,它们还含有不同数量GX,GGGX等的重复.实时RT-PCR分析表明,GhGRP1在花药中优势表达.GhGRP2在10dpa(day post anthesis)胚珠中表达最强,10dpa纤维和下胚轴次之,而在花药、根和花瓣中表达量相对较低.GhGRP3在花药,根和下胚轴中表达量较高,而在子叶,花瓣、纤维和胚珠中表达较低.上述结果表明,GhPRP基因家族的不同成员可能分别在棉花不同组织细胞的发育过程中发挥作用.

茶树硒营养代谢关键酶硒半胱氨酸甲基转移酶基因克隆及启动子结构分析

为探明茶树硒营养代谢关键酶基因硒半胱氨酸甲基转移酶(SMT,GenBank登录号:DQ480337)的表达调控规律,通过PCR和基因步移技术获得SMT的DNA全长和部分启动子序列,用PLACE、PlantCARE分析SMT内含子和启动子的序列,预测其顺式作用元件及功能。结果表明,SMT基因全长5473 bp,有7个外显子和6个内含子,内含子富含光响应元件、激素响应元件和抗逆性相关元件。通过基因步移法克隆得到的SMT启动子长375 bp,除了含核心启动子保守元件TATA-box和CAAT-box外,还有其他重要顺式作用元件,如光响应元件、低温响应元件和胚乳表达特异性元件等。植物硒营养代谢关键酶SMT启动子的克隆及结构分析为进一步揭示SMT基因的生物学功能和表达调控机制奠定了理论基础。

植物细胞壁中富含甘氨酸的蛋白质

在植物的某些组织中存在富含甘氨酸的蛋白质 (Glycine richproteins,GRPs) ,根据GRPs中甘氨酸的含量和氨基酸的种类、数目及排列顺序的差异 ,推测植物的GRPs存在 3种类型 ,这些GRPs在植物的生长发育及植物防御过程中起重要作用 ;已有大量的GRP基因被分离鉴定 ,并对一些GRP基因的启动子进行了分析 .GRPs基因的表达受植物发育的调节 ,具有组织或器官特异性 ,很多GRP基因的表达还受环境因素的影响 .

中国南方汉族人群血浆谷胱甘肽过氧化物酶基因启动子区-991C/T基因多态性与脑梗死的关系

目的研究南方汉族人群谷胱甘肽过氧化物酶(GPX-3)基因启动子区-991C/T基因多态性的分布及其与脑梗死的关系。方法检测佛山市南海区第二人民医院神经内科自2011年11月至2015年6月收治的南方地区汉族脑梗死患者112例(病例组)和同期南方地区汉族健康体检者112例(对照组)的GPX-3基因启动子区-991C/T基因多态性,比较两组的一般资料、卒中危险因素及-991C/T基因多态性的分布特点,分析影响脑梗死发生的危险因素。结果与对照组比较,病例组高血压病史、血脂、尿酸、血同型半胱氨酸、血糖水平有明显差异(P<0.01),-991C/T TT基因型频率及T等位基因频率均较高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论中国南方地区汉族人群GPX-3基因启动子区-991C/T位点存在多态性,TT基因型或为脑梗死的易感基因型。

银杏木质部特异定位表达基因启动子克隆

用PCR方法成功地从木本植物银杏基因组总DNA中扩增克隆得到木质部细胞特异性表达的富甘氨酸蛋白质基因 (GRP1.8)的启动子 ,并克隆到pUC18载体中 .与菜豆的序列比较发现 ,碱基同源性高达 98%以上 .除发现启动子特有的TATAbox序列外 。

电子克隆获取甜菜富亮氨酸类受体蛋白激酶基因BvLRR-RPK2;1完整编码区

针对前期获得的甜菜分子标记位点进行分析,以获得甜菜中该位点相关的基因。结合电子克隆与常规克隆,获取并验证目的基因片段,最后预测基因产物结构与功能。结果获得了一段长3467bp的片段,其中包含一个长3141bp的完整编码区,编码一个长1046aa的富亮氨酸类受体蛋白激酶。将基因命名为BvLRR-RPK2;1。基因编码区在基因组中连续存在,无内含子区域。基因翻译产物BvLRR-RPK2;1具有一个跨膜结构域,具有LRR-RPK家族的特征性结构域,与已知的LRR-RPK/RLK类蛋白序列相似性在85%以下,与甜菜本身的预测序列在编码区内部有5个碱基、2个氨基酸的差异。本文获得了一个甜菜中未经克隆的LRR-RPK2编码区,并预测了其产物功能。

银杏木质部特异定位表达基因启动子在转基因烟草中的功能研究

为了研究银杏GRP 1 8启动子在木本植物中的调控制特性 ,用从银杏细胞壁形成及纤维素生物合成密切相关的 ,并定位于形成层木质部维管组织细胞表达的富甘氨酸蛋白质基因 (GRP 1.8)的启动子与GUS报告基因构建的表达载体转化烟草 ,经过Southernblotting鉴定 ,得到一批转化再生植株 .经GUS组织化学检测 ,发现转基因烟草的茎木质部呈现GUS染色阳性 ,初步证明银杏GRP 1 8基因启动子确有韧皮部表达特性 。

农杆菌介导的转高赖氨酸蛋白基因(sb401)水稻T4代分析

通过农杆菌介导的方法用富赖氨酸蛋白基因（sb401）转化粳稻品种日本晴，获得了独立的10个转化株系，对转化株系进行连续自交，通过筛选得到9个纯合的T4代转化株系。Southern blotting分析发现，整合位点是随机的，并为低拷贝（1～3个）。TAIL-PCR扩增得到8个T—DNA侧翼序列，并定位于日本晴的7条染色体上。蛋白质和氨基酸测定分析发现，sb401基因对各株系的蛋白质、赖氨酸和其他氨基酸组分的提高起到了一定的作用。将杂交结果与T-DNA插入位置结合分析发现，在低拷贝的情况下，表达量的差异不明显。

富亮氨酸重复超家族新成员LRRC4的IgC2结构域蛋白的原核表达和纯化

富亮氨酸重复超家族新成员LRRC4基因是新克隆的脑瘤相关基因 ,采用多聚酶链式反应 (PCR)方法获得长约 5 0 0bp含IgC2结构域的DNA序列 ,扩增产物克隆至pGEX 4T 2质粒中 ,构建GST融合表达质粒 ,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白 ,经包涵体沉淀、溶解 ,Glutathione Sepharose亲和层析纯化获得融合蛋白 ,并以Westernblot鉴定证实 .通过IgC2结构域蛋白的纯化分离该结构域 ,为进一步研究该结构域及LRRC4基因的结构和功能奠定了基础 .

铜调节的细胞死亡相关基因与前列腺癌关系分析

目的基于美国癌症肿瘤基因图谱(the cancer genome atlas,TCGA)数据库分析铜调节的细胞死亡相关基因与前列腺癌患者预后和免疫细胞浸润的关系。方法从TCGA数据库下载所有前列腺癌患者的基因数据,其中包括前列腺癌组织501例,正常组织52例。运用R软件提取前列腺癌患者中铜调节的细胞死亡相关基因表达矩阵,进行差异分析、多因素回归分析筛选出预后基因,对预后基因进行生存分析,同时探讨预后相关基因与免疫细胞之间的相关性。结果甘氨酸裂解系统蛋白H(GCSH)与前列腺癌患者的预后显著相关,同时发现其与前列腺癌患者中的树突细胞、CD8^(+)T细胞、浆细胞也显著相关(P<0.05)。结论GCSH基因在前列腺癌的发生、发展中起重要作用,有望成为前列腺癌预后的标志物。

微藻富硒食品的研究现状与展望

硒在1973年被世界卫生组织确定为人体必需微量元素后,其与人类健康的关系成为了研究热点。在研究中发现,硒常以硒代半胱氨酸的形式插入到硒蛋白中形成谷胱甘肽过氧化物酶、硫氧还蛋白还原酶等硒酶发挥生理活性,表现出氧化还原酶的功能减少自由基对机体的毒害。此外,硒元素的抗癌、抗炎和抗病毒特性对维持人体健康必不可少。

HGTP基因与羊毛细度的相关性分析及其启动子活性研究

本研究旨在构建高甘氨酸-酪氨酸蛋白(HGTP)启动子荧光素酶报告基因载体并验证其活性,阐明HGTP基因在萨福克羊和中国美利奴羊皮肤毛囊组织中的表达差异与羊毛经济性状的关系。运用PCR方法扩增HGTP基因启动子序列片段,克隆至pGL3-Basic载体中构建重组质粒,并通过双酶切验证和测定核酸序列鉴定;转染皮肤成纤维细胞并检测报告基因的活性;测定羊毛的纤维直径、长度的数据,利用实时荧光定量PCR分析HGTP基因在不同品种绵羊的皮肤毛囊组织中的表达情况。结果显示,萨福克羊与中国美利奴羊的羊毛纤维直径及自然长度差异极显著(P<0.01),HGTP基因表达水平与羊毛纤维直径存在极显著的高度正相关(P<0.01),与羊毛自然长度呈现显著的中等负相关(P<0.05),而羊毛直径与自然长度之间存在极显著的高度负相关(P<0.01)。HGTP基因在萨福克羊和中国美利奴羊皮肤组织中的表达水平差异极显著(P<0.01)。启动子活性荧光素酶检测结果显示,KAP6.1、KAP7和KAP8.1启动子元件在绵羊皮肤成纤维细胞和3T3细胞中均有表达,且在绵羊成纤维细胞中的活性极显著高于在3T3细胞中的活性(P<0.01)。HGTP基因可以作为研究羊毛纤维直径、自然长度的候选基因。构建不同长度的表达载体,转染皮肤成纤维细胞,获得的2个启动子元件都能驱动外源基因在体外细胞水平表达。绵羊HGTP基因启动子的功能研究为调控羊毛发育提供了理论依据。