富硒长双歧杆菌DD98对X射线所致放射性肝损伤小鼠的保护作用

本研究旨在讨论富硒长双歧杆菌DD98(Selenium-enriched Bifidobacterium longum DD98,Se-DD98)对X射线所致发射性肝损伤小鼠的保护作用。雄性SPF级balb/c小鼠随机分为5组:正常对照组、辐射对照组、Se-DD98高剂量组、Se-DD98低剂量、DD98对照组,连续给药28 d并监测体重。第29 d采用X射线全身照射,实验结束后进行指标检测。与辐射对照组的体重(24.44 g)和肝脏指数(4.49%)比较,Se-DD98高剂量组体重(26.96 g)及肝脏指数(5.10%)显著改善、血清肝功能指标(ALT、AST)和体内氧化压力水平(MDA、LDH)显著降低,抗氧化酶活力(CAT、SOD、GSH-Px)显著升高。实时荧光定量PCR结果表明,Se-DD98高剂量组肝脏中Sod1(3.58)和Gpx1(7.14)表达显著上调,分别上调16.41、10.19倍,促炎因子IL-1β表达(2.16)显著下调1.61倍,抑炎因子IL-10(7.09)显著上调1.40倍。此外,Se-DD98高、低剂量组均能减轻X射线所致的肝脏损伤。最后,Se-DD98高剂量组各项指标与正常对照组相比差异不大,与辐射对照组差异显著。因此,富硒长双歧杆菌DD98可以通过减少氧化压力水平、增强抗氧化酶活力及抑制组织炎症来缓解X射线所致的小鼠放射性肝损伤。

富硒长双歧杆菌DD98菌株的黏附特性及黏附机制初步研究

利用Caco-2细胞作为体外黏附模型,通过细菌黏附率评价一株新的长双歧杆菌菌株DD98(Bifidobacterium longum DD98,DD98)富硒前后的黏附能力,测定细菌自动聚集能力与表面疏水性,采用荧光定量PCR技术检测细菌表面Tuf蛋白mRNA表达量差异。结果表明,与DD98相比,富硒DD98(Selenium-enriched Bifidobacterium longum DD98,Se-DD98)黏附于Caco-2细胞的数量从(39.12±17.57)CFU/100cells上升到(581.17±62.79)CFU/100cells,Se-DD98对Caco-2细胞的黏附能力极显著升高(p<0.01)。相比DD98,Se-DD98自动聚集能力略有上升,且其表面疏水性从5.12%±0.16%上升到20.25%±2.14%,极显著性升高(p<0.01);荧光定量PCR结果表明,与Caco-2细胞共孵育2h后,Se-DD98菌体表面Tuf黏附蛋白表达显著上调(p<0.05)。表明DD98经富硒培养后,黏附能力显著提升,其黏附能力的增强可能与细菌表面Tuf黏附蛋白的改变有关。

富硒长双歧杆菌DD98菌株对伊立替康所致小鼠腹泻及肠道菌群的影响

本研究建立伊立替康所致腹泻小鼠模型,通过长期灌胃富硒DD98(Selenium-enriched Bifidobacterium longum Se-DD98)菌株(一株新的长双歧杆菌菌株),评价其对伊立替康所致腹泻及肠道菌群的影响。正常对照组和伊立替康组小鼠每天灌胃无菌蒸馏水,实验组小鼠每天灌胃低剂量(活菌数1×108CFU/kg)、高剂量(活菌数1×109CFU/kg)Se-DD98菌液,除正常对照组外其他各组在第17 d腹腔注射伊立替康,实验周期为24 d。测定小鼠体重,小鼠腹泻等级,免疫指标,肠道菌群以及回肠组织结构。结果表明:与伊立替康组比较,Se-DD98低、高剂量组小鼠体重显著增加(P<0.05);腹泻等级显著降低(P<0.05);高剂量组白细胞数目显著增加(P<0.05),低、高剂量组脾脏指数和中性粒细胞数目均显著增加(P<0.05),说明Se-DD98具有调节免疫功能的作用。同时,低、高剂量组大肠杆菌、梭菌和拟杆菌含量均比正常组和伊立替康组显著减少(P<0.05),而双歧杆菌含量显著增加(P<0.01)。此外Se-DD98低、高剂量均能减轻伊立替康导致的肠道粘膜、细胞和腺体损伤。上述结果表明Se-DD98可能通过调节肠道菌群和保护肠道粘膜发挥缓解伊立替康导致的腹泻的作用。提示Se-DD98在辅助治疗伊立替康所致的腹泻等方面具有潜在应用前景。

富硒长双歧杆菌总蛋白对黑色素瘤细胞活性研究

以长双歧杆菌总蛋白为参考,比较富硒长双歧杆菌总蛋白对黑色素瘤细胞的抑制作用,结果表明当富硒长双歧杆菌总蛋白浓度达到100μg/m L时,对细胞的抑制作用显著强于长双歧杆菌总蛋白和阳性对照药物5-FU,而且富硒长双歧杆菌总蛋白与5-FU联用对黑色素瘤细胞具有协同抑制作用。此外,使用活性氧检测试剂盒测定黑色素瘤细胞内的ROS水平,结果显示,经富硒长双歧杆菌总蛋白作用后的黑色素瘤细胞可明显抑制Rosup引起的胞内ROS激增。

富硒长双歧杆菌优势菌株的高通量选育

运用96孔深孔板微型化培养和酶标仪快速检测,建立富硒长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)优势菌株的高通量筛选方法。通过高通量筛选获得的富硒长双歧杆菌优势菌株XBL-30,具有很好的硒蛋白转化能力。在7 L罐中添加一定浓度的亚硒酸钠,优势菌株XBL-30的硒蛋白转化率从原始菌株的60%提高至85.3%,菌株多次传代后,硒蛋白转化率均能稳定在85%。该研究建立的高通量筛选方法不仅简单,快速,成本低,而且对其他微生物菌株的高通量筛选具有一定的参考价值。

长双歧杆菌DD98体内外安全性评价

长双歧杆菌DD98分离于健康的成人粪便中,具有调节肠道菌群的作用。本文通过急性毒性实验、耐药性实验及有害代谢产物实验评价DD98菌株的安全性,为其工业化应用提供安全性保障。实验发现小鼠未发生不良反应,DD98不会引起急性毒性和异位现象,不产生有害代谢产物,对大部分常见抗生素没有耐药性,表明长双歧杆菌DD98具有较好的安全。

富硒长双歧杆菌水溶性蛋白保护脂多糖诱导的大鼠肠上皮细胞IEC6损伤

目的本研究用脂多糖诱导大鼠肠上皮细胞IEC6损伤模型,考察富硒长双歧杆菌制剂对IEC6的保护作用。方法实验分5组,分别为阴性对照组(磷酸平衡盐溶液处理)、模型组(脂多糖处理)、富硒长双歧杆菌水溶性蛋白低、中、高3个浓度组(脂多糖处理的同时分别加入10、30、100 mg·L^-1的富硒长双歧杆菌水溶性蛋白)。脂多糖处理24 h后,检测IEC6细胞活力、细胞凋亡、线粒体膜电位、细胞紧密连接蛋白1(zonula occludens 1,ZO-1)和闭合素(Occludin)的表达。结果脂多糖可导致大鼠肠上皮细胞IEC6损伤,表现为细胞活力下降,凋亡增加,线粒体膜电位倒塌,细胞紧密连接蛋白表达减少。富硒长双歧杆菌水溶性蛋白能够抑制脂多糖诱导的IEC6细胞损伤,减少细胞凋亡,增强细胞间紧密连接。结论富硒长双歧杆菌水溶性蛋白能够保护脂多糖诱导的IEC6细胞损伤。

富硒双歧杆菌缓解5-FU导致的化疗性肠粘膜炎的药效学研究

通过腹腔注射5-FU建立小鼠肠黏膜炎模型,探讨富硒长双歧杆菌(Selenium-enriched Bifidobacterium longum,Se-B.longum)能否改善5-FU所致的小鼠肠黏膜炎。将健康BALB/c小鼠随机分为对照组、5-FU组和Se-B.longum/5-FU组,分别灌胃生理盐水、生理盐水和Se-B.longum(Se0.3 mg/kg BW,1×106bacteria/只)6 d,然后5-FU组和Se-B.longum/5-FU组小鼠均腹腔注射5-FU(250 mg/kg),观察小鼠腹泻及死亡情况,5 d后处死小鼠,计算体重变化、脏器指数及考察肠道组织变化;将健康BALB/c小鼠随机分为对照组、5-FU组和Se-B.longum/5-FU组,分别灌胃生理盐水、生理盐水和Se-B.longum(Se 0.3 mg/kg BW,1×106bacteria/只)6 d,然后5-FU组和Se-B.longum/5-FU组小鼠均腹腔注射5-FU(300 mg/kg),观察小鼠死亡情况,绘制生存曲线。Se-B.longum能缓解5-FU导致的正常小鼠的肠粘膜炎、降低小鼠死亡率。

富硒长双歧杆菌抑制乙醇诱导的小鼠肝损伤

目的研究富硒长双歧杆菌对乙醇引起肝损伤的抑制作用及其机制。方法用体积分数20%乙醇造成雌性C57/BL6小鼠酒精性肝损伤模型,分别口服50,100 mg·kg^-1富硒长双歧杆菌治疗42 d。检测肝脏损伤;测定小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和γ-谷氨酰转肽酶(GGT)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;检测肝脏中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,以及SREBP-1c,AMPK和PPAR-α的mRNA水平。结果摄入100 mg·kg^-1富硒长双歧杆菌能明显抑制体积分数20%乙醇引起的小鼠肝脂肪变性,降低肝脏系数,减轻肝组织病理损伤,减少肝组织中炎症,抑制升高的血清ALT、AST、GGT以及TNF-α水平;降低肝组织中MDA含量,升高肝组织中SOD活性;抑制SREBP-1c的mRNA水平,升高AMPK和PPAR-α的mRNA水平。结论富硒长双歧杆菌能够抑制乙醇诱导的小鼠肝损伤,其机制可能与抗氧化应激、抑制炎症及恢复脂质代谢平衡有关。