两种方法检测富组蛋白Ⅱ诊断恶性疟的比较

在海南疟区门诊对检测ＨＲＰ－Ⅱ诊断恶性疟的ＰａｒａＳｉｇｈｔ－Ｆ及ＩＣＴ两种方法进行了比较。ＰａｒａＳｉｇｈｔ－Ｆ方法的敏感度和特异度分别为１００％和８７．１％，ＩＣＴ则为９４．７％和９０．３％；两种方法均比显微镜检查简单易学，快速方便。但ＨＲＰ－Ⅱ仅存在于恶性疟。

检测恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ的疟疾诊断免疫层析试条的研制与评价

目的建立一种快速、简便的诊断恶性疟的胶体金免疫层析试条方法，并对其进行评价。方法克隆、表达恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ基因，以表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠，制备单克隆抗体，筛选恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ特异的单克隆抗体．分别作为包被抗体和标记抗体．制备免疫层析试条。用该试条检测流行区非疟疾发热患者血样80份、内脏利什曼病患者血样20份和确诊的间日疟患者血样75份以评价其特异性：检测确诊的恶性疟患者血样89份．以评价其敏感性。结果成功克隆并表达了恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ．用重组蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体．采用杂交瘤技术共筛选出5株能高效分泌特异抗体的细胞株（效价为1：12800～1：102400），抗体亚类均为IgG1。所有抗体均能唯一识别恶性疟原虫虫源蛋白组分．而与疫区非疟疾发热患者的红细胞组分无交叉反应。以筛选到的单克隆抗体制备的免疫层析试条检测疫区非疟疾发热患者、内脏利什曼病患者和间日疟患者血样的特异度为97．7％（171／175），其中20份内脏利什曼病患者血样全部为阴性。检测恶性疟患者血样敏感度为95．5％（85／89）。结论制备了能识别天然恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ的特异性单克隆抗体，以此单抗为基础研制出的快速诊断恶性疟的胶体金免疫层析试条敏感度、特异度均较高。

恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ全编码区基因的真核克隆及表达

目的 探讨恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ (Histidine richproteinⅡ ,HRPⅡ )基因在真核细胞中的表达。方法 应用聚合酶链反应 (PCR)扩增HRPⅡ全编码区基因 ,经HindⅢ和BamHI双酶切后定向克隆入带CMV启动子的真核高效表达载体 pcDNA3,构建HRPⅡ /pcDNA3重组载体 ;用脂质体法将重组载体转染HepG2肝癌细胞 ,经G418加压筛选后 ,收集阳性克隆细胞培养上清 ,表达产物进行十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)和Western免疫印迹分析。结果 成功构建HRPⅡ / pcDNA3真核表达载体 ,SDS PAGE和Western免疫印迹分析表明 ,HRPⅡ表达产物相对分子质量约 35 0 0 0 ,呈分泌性表达 ,且表达产物能被抗HRPⅡ单克隆抗体特异识别。

恶性疟原虫体外药敏实验检测方法的比较研究

目的比较WHO微量测试法（WHO microtest）、疟原虫乳酸脱氢酶（Plasmodial lactate dehydrogenase,p LDH）ELISA测定法、富组蛋白Ⅱ（Histidine-rich proteinⅡ,HRPⅡ）ELISA测定法和SYBR GreenⅠ荧光测定法等4种恶性疟原虫体外药敏实验检测方法,确定一种较为稳定、简便快速且经济的体外药敏实验检测方法,用于后续疟原虫敏感性的监测及新型抗疟药的筛查。方法以恶性疟原虫虫株3D7、FCC、K1、Dd2为对象,分别采用WHO microtest法、p LDH法、HRPⅡ法和SYBR GreenⅠ法测定其对氯喹、哌喹和阿莫地喹的敏感性,并采用Friedman检验、偏相关分析、Pearson相关分析和Bland-Altman分析对4种药敏检测方法的IC50值进行分析。结果在初始密度为0.5%~1.0%时,4种方法的IC50值之间的差异无统计学意义（P〉0.05）,任意2种方法间均呈直线相关关系（P〈0.001）。WHO microtest法技术要求高、耗时长且结果判定受主观影响;HRPⅡ法的敏感性高于p LDH法和SYBR GreenⅠ法,但成本高;SYBR GreenⅠ法技术要求低、耗时短且成本低。结论 SYBR GreenⅠ法是一种较为便捷、经济的检测方法,适用于大规模监测疟原虫药物敏感性及研究新型抗疟药。