牛初乳中富脯氨酸多肽的纯化与鉴定

以牛初乳为原料,提取分离具有生物活性的富脯氨酸多肽(proline-rich polypeptides,PRP),并从氨基酸组成、分子质量大小和反相色谱方面对其进行测定和分析。结果表明:分离所得多肽脯氨酸含量高达20%;SDS-PAGE显示主成分分子质量分布范围在5～25kD;反相色谱主要谱峰在乙腈体积分数37%～45%处洗脱,在这一体积分数范围内可得到纯度高达96.7%的富脯氨酸多肽。

富脯氨酸多肽的功能及其研究进展

富脯氨酸多肽(PRPs)是一类在蛋白质序列上富含脯氨酸(约20%)的生物活性多肽,也称作“传输因子”,存在于动物的血液和哺乳动物的初乳之中,具有调控和平衡机体免疫系统的保健功效。近年来,随着研究的逐渐深入,PRPs强大的保健及药用功效得到了更广泛的重视与认可。

乳腺癌易感基因1核苷酸切除修复交叉互补基因1β微管蛋白Ⅲ和富脯氨酸多肽13基因mRNA的表达与原发性卵巢上皮癌临床化疗敏感性的关系

目的评价乳腺癌易感基因1（BRCAI）、核苷酸切除修复交叉互补基因1（ERCCl）、β微管蛋白Ⅲ（TUBB3）和富脯氨酸多肽13（PRRl3）mRNA的表达量与原发性卵巢上皮癌临床化疗敏感性的关系，以及联合BRCAl和ERCCl基因检测预测原发性卵巢上皮癌化疗敏感性的价值。方法收集46例接受肿瘤细胞减灭术的原发性卵巢上皮癌患者肿瘤标本，采用荧光定量PCR法检测BRCAl、ERCCl、TUBB3和PRRl3mRNA的相对表达量。统计分析检测结果与临床化疗疗效的关系以及联合BRCAI和ERCCl基因检测结果预测原发性卵巢上皮癌临床化疗敏感性的效率。结果在临床耐药和临床敏感的原发性卵巢上皮癌组织中，BRCAlmRNA相对表达量的对数值分别为0．673±2．143和-1．436±2．594，差异有统计学意义（P=0．008）；ERCClmRNA相对表达量的对数值分别为-0.529±1．982和-3．188±2．601，差异有统计学意义（P=0．001）；PRRl3mRNA相对表达量的对数值分别为0．828±2．123和-0．7094-2．969，差异无统计学意义（P：0．074）；TUBB3mRNA相对表达量的对数值分别为1．906±1．328和1．683±1．499，差异无统计学意义（P=0．619）。当BRCAlmRNA相对表达量的对数截点值为-0．6时，预测临床化疗敏感性的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为73．3％、75．0％、84．6％和60．0％，综合评价效果最优；当ERCClmRNA相对表达量的对数截点值为-1时，预测临床化疗敏感性的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为80．0％、68．8％、82．8％和64．7％，综合评价效果最优。联合检测BRCAl和ERCCI基因时，预测的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为86．7％、68．8％、83．9％和73．3％。结论BRCA1和ERCCImRNA的表达量与原发性卵巢上皮癌临床含铂化疗方案的敏感性呈负相关。联合BRCAl和ERCCl基因检测可以提高原发性卵巢上皮癌临床化疗敏感性的预测效果，以指导个体化治疗。

沉默PRR13基因对结直肠癌细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制

目的探讨沉默富脯氨酸多肽13(PRR13)基因对结直肠癌细胞增殖、凋亡的影响,并基于自噬相关蛋白、免疫细胞相关因子和Wnt/β⁃连环蛋白信号通路探讨其可能的作用机制。方法(1)检测正常人结直肠上皮细胞(FHC细胞)及人结直肠癌细胞(HCT116细胞、HT⁃29细胞、LS174T细胞、SW480细胞、SW620细胞、LoVo细胞和HR⁃8348细胞)的PRR13 mRNA表达水平,选择表达水平最高的人结直肠癌细胞进行后续实验。(2)将HR⁃8348细胞分为对照组、空载体组、PRR13⁃小干扰RNA(siRNA)组、IWR⁃1组、PRR13⁃siRNA+IWR⁃1组。不给予对照组任何干预,给予空载体组转染阴性对照siRNA,给予PRR13⁃siRNA组转染PRR13⁃siRNA,给予IWR⁃1组Wnt/β⁃连环蛋白信号通路抑制剂IWR⁃1干预,给予PRR13⁃siRNA+IWR⁃1组转染PRR13⁃siRNA并给予IWR⁃1干预。检测各组的PRR13 mRNA表达水平、细胞存活率、细胞凋亡率、γ⁃干扰素水平、白细胞介素(IL)⁃4水平,以及微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(MAP1LC3Ⅱ)、Beclin 1蛋白、β⁃连环蛋白、糖原合成酶激酶3β(GSK⁃3β)蛋白、Wnt11蛋白的表达水平。结果(1)除SW620细胞外,其他6种人结直肠癌细胞的PRR13 mRNA表达水平均高于人结直肠上皮FHC细胞,且HR⁃8348细胞中的PRR13 mRNA表达水平高于其他人结直肠癌细胞(P<0.05)。(2)与对照组及空载体组相比,其他3组的PRR13 mRNA表达水平、细胞存活率、IL⁃4水平降低,MAP1LC3Ⅱ蛋白、Beclin 1蛋白、β⁃连环蛋白、GSK⁃3β蛋白、Wnt11蛋白表达水平下调,细胞凋亡率及γ⁃干扰素表达水平升高(P<0.05)。与PRR13⁃siRNA组及IWR⁃1组相比,PRR13 siRNA+IWR⁃1组上述指标的改变更为明显(P<0.05),但PRR13⁃siRNA组及IWR⁃1组的上述指标差异并无统计学意义(P>0.05)。结论沉默PRR13基因可抑制结直肠癌细胞活性,促进其凋亡,其机制可能与调控Th分化、抑制自噬相关蛋白活性及Wnt/β⁃连环蛋白信号通路激活有关。联合沉默PRR13基因与抑制Wnt/β⁃连环蛋白信号通路,或许可更好地发挥抗结直肠癌的作用。

PRP13 mRNA在宫颈病变组织中的表达及临床意义

目的分析富脯氨酸多肽13(PRP13)mRNA在宫颈病变组织中的表达及其临床意义。方法将2015年1月—2017年9月在玉环市人民医院就诊且最终获得宫颈组织病理学诊断的高级病变、宫颈癌患者各50例分别纳入高级别宫颈鳞状上皮内病变(HSIL)组、宫颈癌组;另选取同期因子宫肌瘤或其他良性病变性全子宫切除术且留存有宫颈组织的患者50例作为正常对照组。应用RT-PCR法检测宫颈组织PRP13 mRNA表达,比较不同宫颈病变组织及不同临床特征的宫颈癌患者宫颈组织中的PRP13 mRNA表达;另宫颈癌患者在完成化疗后接受为期2年随访,统计疾病复发转移情况,比较不同临床特征的宫颈癌患者肿瘤复发转移情况,并绘制Kaplan-Meier生存曲线分析无进展生存率,COX回归分析宫颈癌肿瘤复发转移的相关影响因素。结果HSIL、宫颈癌组患者中的PRP13 mRNA显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05),但宫颈癌组织PRP13 mRNA表达与HSIL组差异无统计学意义(P>0.05)。不同癌组织分化程度、FIGO分期、淋巴结转移宫颈癌患者PRP13 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05);宫颈癌复发转移与未复发转移的宫颈癌患者癌组织分化程度、FIGO分期、淋巴结转移及PRP13 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示随着分化程度下降,无进展生存率呈逐渐下降趋势,且FIGO分期Ⅱ期、淋巴结转移阳性、PRP13 mRNA表达≥中位数的宫颈癌患者无进展生存率分别显著低于FIGO分期Ⅰ期、淋巴结转移阴性、PRP13 mRNA表达中位数患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。COX回归分析显示PRP13 mRNA表达与癌组织分化程度、FIGO分期、淋巴结转移均是宫颈癌复发转移的独立影响因素(P<0.05)。结论宫颈癌组织中PRP13 mRNA呈异常高表达,并与癌组织分化程度、FIGO分期、淋巴结转移存在密切关联,是宫颈癌复发转移的独立影响因素之一,值得临床高度重视。