用等位基因特异性寡核苷酸(ASO)-PCR快速检测抗多菌灵的油菜菌核病菌

通过3对兼并性引物扩增获得与S.sclerotiorum抗药性相关的β-微管蛋白基因,全长1 685 bp,包含4个内元,相应的编码447个氨基酸。该基因与其它6种线状真菌的β-微管蛋白基因相比,氨基酸序列同源性达95.78%～97.66%,但内元数目和大小不同。比较S.sclerotiorum敏感型和抗药性菌株的β-微管蛋白基因,发现该基因第198位氨基酸由谷氨酸突变为丙氨酸,从而导致田间抗药性的产生。为了快速、准确监测田间抗药性频率,根据S.sclerotiorumβ-微管蛋白基因的突变位点设计了2对等位基因特异性寡核苷酸(ASO),直接以菌核的基因组DNA为模板扩增,所需时间约为6 h,抗药性检出率为100%,与传统菌丝直径法的测定结果相比检测准确率为96%,而传统的检测方法至少需要1～2周。

反基因及反义寡核苷酸体外抗前列腺癌作用的研究

目的探讨三螺旋形成寡核苷酸(TFO)和反义寡核苷酸(ASO)对前列腺癌细胞雄激素受体(AR)表达和细胞增殖的影响。方法设计并合成针对AR基因的TFO和ASO,经脂质体介导转染前列腺癌细胞株LNCaP。MTT法检测细胞增殖活性,RTPCR检测AR基因表达,免疫组化法检测AR蛋白表达,放射免疫分析检测PSA表达。结果转染后24、48、72h,TFO组LNCaP细胞ARmRNA平均表达水平分别为0.25、0.33、0.46,显著低于ASO组的0.44、0.54、0.60,P<0.05;TFO对LNCaP细胞的生长抑制率(51.8%、65.8%、36.2%)显著高于ASO(28.8%、42.6%、17.5%),P<0.05。TFO对AR蛋白表达的抑制作用强于ASO。转染后24hPSA表达水平[(0.5±0.1)ng/ml]显著低于ASO组[(0.8±0.2)ng/ml],P<0.05。结论在LNCaP细胞TFO对AR表达和癌细胞增殖的抑制作用明显强于ASO,反基因策略对于前列腺癌的治疗具有重要研究价值。